שיטת הכנה מדגם יעיל לשיפור אותות יון פחמימות לייזר בסיוע מטריקס Desorption/יינון ספקטרומטריית

הליך הכנת דגימה פשוט פותח כדי לשפר את השיטה הקונבנציונלית בספקטרומטריית מסה של יינון לייזר בעזרת מטריצה על ידי רפורמה במורפולוגיה הפשוטה במהלך תהליך הייבוש. היתרון בטכניקה זו הוא שניתן לשפר ביעילות את עוצמת האות של דגימות פחמימות שהוכנו בשיטה אופטימלית זו. בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו יתקשו מכיוון ששלב הורדת לחץ המתנול הוא חיוני מאוד ויש לעשות זאת במכה אחת.

כל היסוס יפחית את איכות הנתונים. כדי להתחיל, תוך לבישת כפפות ניטריל, השתמש ב 100 מיליליטר תמיסת ניקוי כדי לשטוף ידנית את צלחת הדגימה. השתמש במים מזוקקים-דה-יוניים, או DD, כדי לשטוף את הצלחת ביד.

לאחר מכן, עם 30 מיליליטר מתנול, שטפו את פני השטח שלו. הכנס את צלחת הדגימה לכוס של 600 מיליליטר ומלא אותה במי DD עד שהצלחת שקועה במלואה. לאחר מכן הכניסו את הכוס לאמבטיה אולטרסאונד והפכו את הצלחת לסוניקציה למשך 15 דקות.

הסר את לוחית הדגימה מהכוס והשתמש בחנקן בלחץ כדי לפוצץ את טיפות המים. לאחר מכן הפקידו 0.2 מיקרוליטר מתנול על לוחית הדגימה כדי לבדוק אם הוא מתפשט למקומות אחרים. אם כן, חזור על הכביסה, הסוניקציה והטיפול בחנקן כפי שהודגם זה עתה.

לאחר הכנת תא הייבוש על פי פרוטוקול הטקסט, יש לערבב מראש 0.25 מיקרוליטר של תמיסת חומצה 2, 5-דיהידרוקסיבנזואית ו-0.25 מיקרוליטר של סיאליל-לואיס A, או תמיסת מלטוהפטאוז בצינור המיקרו צנטריפוגה. לאחר מכן מערבל את הצינור למשך שלוש שניות. סובב את התמיסה המעורבת בצנטריפוגה המיני ב-2000 פעמים G למשך שתי שניות.

ואז מיד פיפטה 0.1 מיקרוליטר מהתמיסה המעורבבת מראש על צלחת הדגימה. כאשר הדגימה התייבשה, תוך כדי עבודה מהירה כדי למנוע אידוי, פיפטה 0.2 מיקרוליטר מתנול ישירות על נקודת הדגימה. הדגימה תתמוסס מחדש ולאחר מכן תתייבש מיד.

שלב שקיעת המתנול הוא השלב הקשה ביותר הקובע את איכות הנתונים ויכולת השחזור. כדי להבטיח את הביצועים הטובים ביותר, אנו ממליצים למשתמש לסיים את התצהיר תוך שלוש עד חמש שניות כדי למנוע אובדן אידוי משמעותי של מתנול. ללבוש כפפות ניטריל ולהוציא בזהירות את לוחית הדגימה מתא הייבוש.

לאחר מכן, תחת מיקרוסקופ, בדוק את הדגימה. אם מורפולוגיות הגביש אינן כצפוי, חזור על ערבוב הדגימה ואיתור על לוחית הדגימה. כדי להבטיח שלגבישי הדגימה יש את המורפולוגיה האופטימלית לאחר התגבשות מחדש, השתמש תמיד במיקרוסקופ כדי לבחון אותם.

קשה לקבוע נכון את איכות המורפולוגיה הגבישית בעין בלתי. כדי לנתח דגימת מיקרוליטר אחת, יש לערבב מראש 2.5 מיקרוליטר של תמיסת חומצה 2, 5-דיהידרוקסיבנזואית ו-2.5 מיקרוליטר של תמיסת סיאליל-לואיס A או מלטוהפטאוז בצינור מיקרו צנטריפוגה. מערבולת את התמיסה המעורבבת מראש למשך חמש שניות.

סובב את התמיסה המעורבת ב -2000 פעמים G למשך שתי שניות, ואז מיד פיפטה מיקרוליטר אחד מהתמיסה המעורבת מראש על צלחת הדגימה. לאחר שהדגימה מתייבשת, פיפטה 1.5 מיקרוליטר מתנול ישירות על נקודת הדגימה המיובשת. הדגימה תתמוסס מחדש ותתייבש מיד.

הסר בזהירות את הדגימה מתא הייבוש. בדוק את הדגימה במיקרוסקופ. אם מורפולוגיות הגביש אינן כצפוי, חזור על הכנת התמיסה כפי שהודגם זה עתה.

כדי לבצע ספקטרומטריית מסה, פתח את תוכנת הבקרה של ספקטרומטר המסה והכנס את לוחית הדגימה למכונה. בחר את שיטת רכישת הנתונים המותאמת מראש בתוכנה, ולאחר מכן באמצעות תוכנת ההדמיה, רשום את כל אזור הדגימה להדמיית ספקטרומטריית מסה. התחל רכישת נתונים במצב אצווה של תוכנת הבקרה.

לאחר השלמת איסוף הנתונים, השתמש בתוכנת ההדמיה כדי לשרטט את תמונות היונים ולנתח את הנתונים בהתאם לפרוטוקול הטקסט. תמונות SEM מייצגות של סיאליל-לואיס A מעורבב עם 2, 5-חומצה דיהידרוקסיבנזואית שהוכנה בשיטות טיפות מיובשות והתגבשות מחדש מוצגות כאן. מורפולוגיה טיפוסית של חומצה 2, 5-דיהידרוקסיבנזואית היא גבישים גדולים בצורת מחט בשפה ומבנים גבישיים עדינים במרכז נקודות הדגימה.

לאחר התגבשות מחדש על ידי מתנול, לדגימה יש שטח גדול יותר המכוסה באופן שווה בגבישים עדינים דמויי פתיתים. איור זה מתאר תוצאות הדמיה של ספקטרומטריית מסה של סיאליל-לואיס A ומלטוהפטאוז עם ובלי התגבשות מחדש של מתנול. לאחר התגבשות מחדש, ההתפלגות של אותות סיאליל-לואיס A ו-maltohepaose תואמת היטב את תמונות השדה הבהיר של כתמי הדגימה.

עוצמות האות של דגימות הפחמימות שהתגבשו מחדש משופרות גם הן בהשוואה לדגימות טיפות יבשות קונבנציונליות. גרף זה משווה את עוצמת האות של מצב יונים סודיאט או חיובי ופחמימות במצב יונים דה-פרוטונים או שליליים של דגימות שהתגבשו מחדש ביחס לזו של דגימות טיפות מיובשות. בממוצע, התגבשות מחדש של דגימות סיאליל-לואיס A ומלטוהפטאוז הגדילה את האותות הסודיים בגורמים של 3.9 ו-3.3.

אותות יונים של סיאליל-לואיס A נטולי פרוטונים שופרו בפקטור של 4.7 לאחר התגבשות מחדש. לאחר השליטה, ניתן להכין דגימות תוך 10 דקות בטכניקה זו אם היא מבוצעת כראוי. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב שטיפות המתנול יופקדו באופן מיידי ומדויק על נקודת הדגימה.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לשלוט ביעילות במורפולוגיה הגבישית של דגימות מרובות כדי להשיג את אותות היונים הטובים ביותר לניתוח שגרתי.