Name: העשרה ואפיון של Microenvironments המערכת החיסונית והחיסון של הגידול הוקמה גידולים מאתר תת עורית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-07T14:45:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: למדו שיטה להעשרת מרכיבי המיקרואנבירון החיסוני והלא-חיסוני בגידולים תת-עוריים. הטכניקה מאפשרת אפיון מקיף של מצב הגידול החיסוני וזיהוי שינויים הנגרמים על ידי טיפול.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

JMN מאשר תמיכה כספית מ הלאומית המכון של כללי למדעי הרפואה (T32GM088129), נבחרת המכון של שיניים ותחקיר ואסטתיים (F31DE026682) של מכוני הבריאות הלאומיים. התוכן הוא אך ורק באחריות המחברים, ואינם מייצגים בהכרח את הנופים הרשמי של מכוני הבריאות הלאומיים. פרויקט זה גם נתמך על ידי Cytometry התא מיון הליבה ביילור לרפואה במימון NIH (P30 AI036211 P30 CA125123, S10 RR024574) ואת הסיוע מומחה של ג'ואל מ Sederstrom.

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC) של ביילור לרפואה.
1. הגידול הקציר ועיכול
הערה: הזמן הדרוש הקציר הוא ~ 3-5 דקות/גידול, ואת הזמן הדרוש לעיבוד הוא ~ 1 h + 2-3 דקות/גידול.
<ol><li>המתת חסד עכברים על ידי שאיפת פחמן דו-חמצני, לרסס כל העכבר למטה עם אתנול 70% לפני הקציר כדי למנוע זיהום שיער. בניתוח להסיר גידולים תת עורית של העכברים ולהבטיח כי הגידולים הם ללא כל רקמות מזהמים (קרי, שיער, עור, הצפק, וכו '). מקם כל הגידול 1.8 מ של מדיה RPMI-1640 הבסיס ללא סרום שור עוברית (FBS) לתוך צלחת 24-. טוב. לאסיפים גדול יותר, לשמור על צלחות קר על קרח כדי לשמר את הכדאיות הסלולר. הערה: אם נדרשת עקרות, כל הגידול והניתוחים תצטרך להתבצע באבטחה ארון עם כלי ניתוח סטרילי (קרי, מספריים, מלקחיים, וכו '), וכן צעדים נוספים. גידולים בקוטר הארוך בין 0.5 - 1 ס מ אופטימלית, גידולים גדולים יותר או קטנים יותר ידרוש שינוי קנה מידה של ריאגנטים.</li>
	<li>להשתמש במספריים לחתוך הגידולים בתוך פחות מ 1 מ"מ3 חתיכות בתוך כל טוב.</li>
	<li>הכינו 10 x קוקטייל לעיכול על ידי המסת collagenase אני ב- 10 מ"ג/מ"ל, collagenase הרביעי 2,500 U/mL, ו DNase. אני ב- U/mL 200 בתקשורת RPMI-1640 בסיס (ללא FBS). הערה: קוקטייל העיכול ניתן להכין יום מראש, המאוחסנים ב-20 ° C; עם זאת, אחסון ממושך לא מומלץ כי אנזימים תאבד את הפעילות לאורך זמן פעם התפרקה.</li>
	<li>להוסיף 200 µL של 10 x דיסוציאציה קוקטייל המכיל collagenase, collagenase הרביעי ואני DNase I כל טוב עם החלקים3 1 מ מ.</li>
	<li>לאפשר את הדגימות לעיכול עבור h 1 ב 37 מעלות צלזיוס תוך רועדת קלות במהירות של 60-100 סל ד באמצעות של שייקר צלחת מסלולית. הערה: העלאת טמפרטורה ל- 37 ° C במהלך עיכול אנזימטי עלול לגרום להפעלת תא החיסון.</li>
	<li>לאחר 1 h, לנטרל את התגובה על-ידי הוספת 1 מ"ל של התקשורת RPMI-1640 בתוספת EDTA FBS ו- 2 מ מ 5% על כל טוב.</li>
	<li>Pipette העיכול הגידול ואת החלקים הנותרים של הגידול לתוך מסננת תא 40 µm יושב על גבי שפופרת צנטרפוגה 50 מ. הערה: חותכים את הטיפ ממני טיפ פיפטה 1 מ"ל להעברה קלה של עיכול הגידול כדי מסננת.</li>
	<li>להשתמש מכנית disaggregate החלקים הגידול דרך מסננת פומפה מזרק 10 מ"ל. מעת לעת לשטוף את מסננת עם 2 מ"ל של התקשורת RPMI-1640 שהושלם (המכילה 5% FBS) וחזור עד מסננת התא היא ברורה של הגידול. הערה: כ- 4-10 מ"ל של מדיה סה כ צריך להיות מספיק כדי שלמאחה לשטוף את מסננת של הגידול. הערה: במקום דוגמאות על הקרח עד להשלמת שלב זה עבור כל הדגימות לשמר את הכדאיות הסלולר.</li>
	<li>התאם כל שפופרת צנטריפוגה 50 מ ל אותו אמצעי אחסון באמצעות התקשורת RPMI-1640 שהושלם. הערה: ההתאמה של אמצעי חיוני לאיזון צנטריפוגה. דילוג על שלב זה יכול לגרום נזק צנטריפוגה או פציעה אישית.</li>
	<li>Centrifuge את המתלים תא (5 דקות, 805 x g, 4 ° C), למחוק את supernatants, וכן להשעות מחדש ב- 2 מ"ל של התקשורת RPMI-1640 שהושלם. הערה: צבירה תא שעלול להיווצר בעקבות צנטריפוגה שקשה resuspend. שימוש בסיסמה פיפטה 5 מ"ל סרולוגית לערבב במהירות לשבור אותה. לפני שתמשיך.</li>
</ol>2. הפרדה בין שברים התאית החיסונית ואת הגידול
הערה: הזמן הנדרש עבור שלב זה הוא כ 1 h.
<ol><li>להוסיף 3 מ"ל של צפיפות בינונית מעבר הצבע התחתון של שפופרת צנטרפוגה 15 מ"ל. להכין, תווית מספיק צינורות עבור כל גידול.</li>
	<li>שכבת mL 2 של גידול התא השעיה על המדיום הדרגתיות צפיפות מאת pipetting לאט לאט במורד צינור כדי למנוע ערבוב של שתי השכבות.</li>
	<li>בזהירות המקום הצינורות בשכבות צנטריפוגה, ספין בשביל 20 דקות ב 805 x g, 20 ° C, עם בלי בלמים. הערה: חשוב מאוד לוודא איזון נאות ולהבטיח כי בלי בלמים משמש במהלך צנטריפוגה. כל הפרעה של תהליך זה יביא שכבת ערבוב, התאוששות מלאה מדגם יהיה קשה.</li>
	<li>להעביר בזהירות את הגידול שחדר ליקוציט (TIL) שכבה של השכבה העליונה מדיה לרכבת התחתית 15 mL החדש באמצעות פיפטה של העברת. למחוק את כל שאר צפיפות בינונית הדרגתיות, resuspend בגדר גידול בתחתית הצינורית ב 2 מ של RPMI-1640 שהושלם. הערה: לאחר צנטריפוגה יהיו ארבע השכבות הגלויות מלמעלה למטה המקבילים בהתאמה: מדיה, הפדגוגי, צפיפות בינונית הדרגתיות, גידול התא גלולה. ראה איור 2א לקבלת דוגמה של הרבדים השונים.</li>
	<li>Centrifuge TIL את שניהם, דגימות הגידול ב להפריד בין צינורות (5 דקות, g x 805, 4 ° C) ולמחוק את תגובת שיקוע.</li>
	<li>Resuspend המדגם TIL ב- 200 µL, בגדר גידול ב- 2 מ"ל של התקשורת RPMI-1640 שהושלם. לשמור על הקרח כדי לשמר את יכולת הקיום.</li>
</ol>3. ציפוי ולא מכתים
הערה: הזמן הדרוש ציפוי הוא s 30/גידול; הזמן הנדרש עבור צביעת משטח הוא 1 h; הזמן הנדרש עבור צביעת תאיים הוא 40 דקות; הזמן הנדרש עבור ניתוח cytometry זרימה הוא 1 - 4 דקות/גידול.
<ol><li>להכין וסופרת לוחית התווית 96-ובכן U-תחתון עבור כל החיסון צביעת לוח, צלחת נוספת עבור תא. הערה: בדרך כלל, שלושה לוחות מוכנים סה כ: צלחת לוח ממוקדות לימפוציט צלחת מיאלואידית ממוקד לוח, צלחת ספירת תאים.</li>
	<li>Aliquot המתלים תא בודד לתוך כל ההכתמה פאנל צלחות ונפח קבועים המשקולת ספירה. הערה: הצלחת לספור משמש כדי לחשב את המספר הכולל של תאים יתווספו כל לוח מוכתמים, ובכך לאפשר מדויק של האוכלוסייה ספירת. Cytometer זרימה עם יכולות דיגום וניתוח volumetric צלחת 96-ובכן יכול לספק את מספר התאים לכל µL בכל מדגם, לכן, לחשב את מספר התאים שיתווספו כל לוח מכתימים. לוחות ספירת ניתן לרכוש למחרת לאחר קיבוע בין לילה ב 4 ° C, שטיפה עם FACs מאגר (buffered פוספט תמיסת מלח (PBS) עם 2% FBS), ו resuspending בנפח קבוע של מאגר FACs.</li>
	<li>לשטוף את התאים פעמיים עם µL 200 תמיסת פוספט באגירה של Dulbecco (DPBS) עבור דגימה על-ידי צריך שתוציאו (5 דקות, 805 x g, 4 ° C) ומחיקת את תגובת שיקוע בין כל שטיפה להסרת כל FBS חינם.</li>
	<li>להוסיף 50 µL של גוש Fc, לערבב את הדגימות באמצעות פיפטה רב ערוצית ולאחר תקופת דגירה של 20 דקות ב 4 º C.</li>
	<li>להוסיף 50 µL של 2 x מרוכז נוגדן מיקוד חוץ-תאית, תערובת הכתם הכדאיות ניתן לתיקון, לערבב בעזרת פיפטה רב ערוצית ולאחר תקופת דגירה של 30 דקות בחושך RT או 4 ° C. הערה: התנאים מכתימים המדויק הנוגדן תלויים להוראות היצרן. דילולים צביעת כל חייב להיות DPBS, עם אין FBS נוספה כדי למנוע הרוויה של לצבוע הכדאיות ניתן לתיקון. נא עיין טבלה של חומרים/ציוד דילולים אופטימלית של הפאנל מכתימים בשימוש כתב היד הזה. נוגדן ואת הכדאיות שניתן לתקן צביעת פתרון מוכן-ריכוז 2 x כדי לספק 1 הסופי x מכתים ריכוז ב 100 µL הנפח הכולל צביעת כאשר הוסיף את הבלוק Fc.</li>
	<li>לשטוף את הדגימות פעמיים עם FACs מאגר מאת צריך שתוציאו (5 דקות, 805 x g, 4 ° C) ומחיקת את supernatants בין כל שטיפה.</li>
	<li>Resuspend ב µL 200 1 x פיקסציה/permeabilization פתרון, דגירה בין לילה ב 4 ° C מוגן מפני אור. הערה: הניסוי ניתן להשהות למשך הלילה בנקודה זו: לשמור דגימות ב 4 ° C מוגן מפני אור.</li>
	<li>למחרת, centrifuge הלוחות (5 דקות, 805 x g, 4 ° C) וזורקים את תגובת שיקוע.</li>
	<li>לשטוף פעם עם µL 200 1 x permeabilization מאגר, צנטריפוגה (5 דקות, g x 805, 4 ° C), ולמחוק את תגובת שיקוע.</li>
	<li>להוסיף 100 µL 1 x נוגדן תאיים מרוכז מכתימים ' בחלונית ' מוכן במאגר permeabilization 1 x, תקופת דגירה של 30 דקות בחושך RT או 4 ° C (זה תלוי המלצות מכתימים מהיצרן).</li>
	<li>שטיפה פעם עם 1 x permeabilization מאגר (5 דקות, 805 x g, 4 ° C), למחוק את תגובת שיקוע ולאחר שטיפה פעם שניה עם FACs מאגר (PBS עם 2% FBS).</li>
	<li>Resuspend את הדגימות ב µL 300 FACs מאגר (PBS עם 2% FBS), להעביר את הדגימות צינורות cytometry זרימה, ולבצע ניתוח cytometry זרימה.</li>
</ol>

<ol><li>Fouad, Y. A., Aanei, C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5446472/">Revisiting the hallmarks of cancer.</a> American Journal of Cancer Research. 7 (5), 1016-1036 (2017).</li>
<li>Gajewski, T. F., Schreiber, H., Fu, Y. -X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+and+adaptive+immune+cells+in+the+tumor+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Innate and adaptive immune cells in the tumor microenvironment.</a> Nature Immunology. 14 (10), 1014-1022 (2013).</li>
<li>Whiteside, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tumor+microenvironment+and+its+role+in+promoting+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">The tumor microenvironment and its role in promoting tumor growth.</a> Oncogene. 27 (45), 5904-5912 (2008).</li>
<li>Chiou, V. L., Burotto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudoprogression+and+Immune-Related+Response+in+Solid+Tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Pseudoprogression and Immune-Related Response in Solid Tumors.</a> Journal of Clinical Oncology. 33 (31), 3541-3543 (2015).</li>
<li>Menon, S., Shin, S., Dy, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+Cancer+Immunotherapy+in+Solid+Tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Advances in Cancer Immunotherapy in Solid Tumors.</a> Cancers. 8 (12), 106(2016).</li>
<li>Denkert, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-Associated+Lymphocytes+As+an+Independent+Predictor+of+Response+to+Neoadjuvant+Chemotherapy+in+Breast+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumor-Associated Lymphocytes As an Independent Predictor of Response to Neoadjuvant Chemotherapy in Breast Cancer.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (1), 105-113 (2010).</li>
<li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+effects+of+ablative+radiation+on+local+tumor+require+CD8%2B+T+cells%3A+changing+strategies+for+cancer+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Therapeutic effects of ablative radiation on local tumor require CD8+ T cells: changing strategies for cancer treatment.</a> Blood. 114 (3), 589-595 (2009).</li>
<li>Stakheyeva, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+immune+component+of+tumor+microenvironment+in+the+efficiency+of+cancer+treatment%3A+perspectives+for+the+personalized+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pharmaceutical+Design%22%5BJournal%5D)">Role of the immune component of tumor microenvironment in the efficiency of cancer treatment: perspectives for the personalized therapy.</a> Current Pharmaceutical Design. 23, (2017).</li>
<li>Gerner, M. Y., Kastenmuller, W., Ifrim, I., Kabat, J., Germain, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histo-Cytometry%3A+A+Method+for+Highly+Multiplex+Quantitative+Tissue+Imaging+Analysis+Applied+to+Dendritic+Cell+Subset+Microanatomy+in+Lymph+Nodes%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Histo-Cytometry: A Method for Highly Multiplex Quantitative Tissue Imaging Analysis Applied to Dendritic Cell Subset Microanatomy in Lymph Nodes.</a> Immunity. 37 (2), 364-376 (2012).</li>
<li>Bayne, L. J., Vonderheide, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicolor+Flow+Cytometric+Analysis+of+Immune+Cell+Subsets+in+Tumor-Bearing+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Multicolor Flow Cytometric Analysis of Immune Cell Subsets in Tumor-Bearing Mice.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2013 (10), (2013).</li>
<li>Goodyear, A. W., Kumar, A., Dow, S., Ryan, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+murine+small+intestine+leukocyte+isolation+for+global+immune+phenotype+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of murine small intestine leukocyte isolation for global immune phenotype analysis.</a> Journal of Immunological Methods. 405, 97-108 (2014).</li>
<li>Casadevall, A., Fang, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rigorous+Science%3A+A+How-To+Guide%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Rigorous Science: A How-To Guide.</a> mBio. 7 (6), 01902-01916 (2016).</li>
<li>Yao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CyTOF+supports+efficient+detection+of+immune+cell+subsets+from+small+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">CyTOF supports efficient detection of immune cell subsets from small samples.</a> Journal of Immunological Methods. 415, 1-5 (2014).</li>
<li>Kay, A. W., Strauss-Albee, D. M., Blish, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+Mass+Cytometry+%28CyTOF%29+for+Functional+and+Phenotypic+Analysis+of+Natural+Killer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Application of Mass Cytometry (CyTOF) for Functional and Phenotypic Analysis of Natural Killer Cells.</a> Methods Mol. Biol. 1441, 13-26 (2016).</li>
<li>Pachynski, R. K., Scholz, A., Monnier, J., Butcher, E. C., Zabel, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+Tumor-infiltrating+Leukocyte+Subsets+in+a+Subcutaneous+Tumor+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model.</a> Journal of Visualized Experiments. (98), (2015).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

הזמן מורכב מרכיבי התא מגוונות ומורכבות ומולקולות. ממצאים אחרונים מעידים כי אפיון מדויק של סביבה זו יכולה לספק הבנה טובה יותר של הטיפול הצלחה או כישלון, יכול אפילו לעזור לזהות את מנגנוני ההתנגדות טיפולית. לדוגמה, הגדלת רמות intratumoral של תאים שונים לדיכוי המערכת החיסונית (קרי, MDSCs, תאי T רגולטוריים, וכו ') ניתן להמתיק את תגובות מערכת החיסון אפקטור, ביטל תופעות immunotherapeutic. מצד שני, נוכחות intratumoral הגוברת של אפקטור אוכלוסיות מערכת החיסון (למשל, גידול ספציפי CD8 + T תאים, תאים רוצח ט...

הזמן מדכאים לאחרונה הוכר סימן היכר של סרטן, וידוע לשחק תפקיד משמעותי התפתחות, התקדמות והגנה של גידולים מוצקים סרטן, כמו גם להמתיק את הרגישות חיסוני1. הזמן מורכב של מספר קבוצות משנה הסלולר של הפנוטיפים, אשר כולם לספק תובנות קריטי למדינה אוטואימונית של הגידול. אלה קבוצות משנה אוטואימונית יכול להיות מרובדת יותר לתוך תאים של לימפוציטים או מיאלואידית המוצא, אשר יחד מהווים את הרוב של תגובות חיסוניות מולדת, גמישים,2,3. ההתקדמות בתחום חיסוני סרטן הראו כי אסטרטגיות immunotherapeutic (קרי, מעכבי המערכת החיסונית במחסום, chimeric אנטיגן קולטן תאי-T, וכו ') יש פוטנציאל לגרום סרטן עמיד regressions; עם זאת, הם נשארים יעיל יחסית גידולים מוצקים-סרטן-4,-5. קבוצות רבות הראו המשוכה קריטי כי הזמן יכול לשחק על טיפול הצלחה6,7, לפיכך, נותר צורך להעריך במדויק את immunotherapies החדש בהגדרת קליניים במיוחד התמקדות שלהם היכולת לווסת או להתגבר על הזמן8.
המאמצים הנוכחיים כדי לאפיין את הזמן בדרך כלל לנצל או מיקרוסקופ או לזרום cytometry יחד עם נוגדן תיוג אסטרטגיות כדי לזהות קבוצות משנה התאית החיסונית שלהם תכונות9,10. אלה שתי אסטרטגיות לספק מידע שונים ייחודי, כמו מיקרוסקופ מאפשר הערכה המרחבי של קבוצות משנה הסלולר cytometry זרימה מספק תפוקה גבוהה, כימות רחבה של שינויים סלולריים. למרות השיפורים בפלורסנט אימונוהיסטוכימיה מולטיפלקס אופטימיזציה של מערכות הדמיה ספקטרלי, אשר כעת יכול לתמוך עד 7 פרמטרים, גודל לוח מוגבל מקשה רחבה רמת החיסון פרופיל, ובכך טכניקה זו היא לעתים קרובות שמורות יותר ממוקד ניתוחים. כתוצאה מכך, cytometry זרימה נשאר באחת החיסון הנפוצה ביותר. פרופילים טכניקות. למרות השימוש הנרחב שלה באפיון זמן, השיטות המשמש לעיבוד של צביעת הן משתנה מאוד. בדרך כלל פרוטוקולים לנצל את גידול בריא אנזים (קרי, collagenases, DNase, וכו) שיטות דיסוציאציה ידנית כדי להשיג את המתלים מתא בודד, ואחריו נוגדן מכתים וניתוח7. למרות היתרונות של כל אחת מהשיטות, קבוצות רבות הראו ההשתנות נרחב זה יכול להיגרם באמצעות טכניקות אלה11. זה עושה השוואות קרוס-מחקר של גידול microenvironment פרופיל קשה מאוד, גם כאשר הערכת המודל מאתר הגידול באותו. יתר על כן, שיטות אלה מספקים פוטנציאל מוגבל כדי להעריך את תאי הגידול, הגידול החיסון לחדור רכיבים באופן עצמאי, שכן שני הרכיבים הם וביניהם לאחר עיכול. כמות הדגימה מגביל ואז רב הפאנל מכתים וניתוח, אשר הופך להיות נושא מרכזי כאשר מנסים לאפיין קבוצות משנה אוטואימונית נדירה (קרי, הגידול הספציפי תאי-T)12. טכניקות מאוחרים יותר כגון cytometry המונית או cytometry מאת שעת הטיסה (CyTOF), מאפשרים ניתוח פנוטיפי גבוהה-ממדי הסלולר קבוצות משנה עם כמה מערכות תמיכה לוח עיצובים של יותר מ 42 פרמטרים עצמאיים13. למרות הכוח העצום של טכנולוגיה CyTOF פרופיל החיסונית, נותר מוגבל בשל ההוצאות, ניתוח מומחיות, גישה לציוד. בנוסף, פרוטוקולים CyTOF רבים ממליצים על טיהור של קבוצות משנה המערכת החיסונית כדי לשפר את יחס אות לרעש14, ועל כן אנו מציעים כי שיטת העשרה שלנו יכול לשמש הזרם של CyTOF ניתוח לשיפור איכות הנתונים.
במסמך זה אנו מתארים של גידול microenvironment לעיכול, ניתוח בשיטה המשלבת הגידול החיסון לחדור ההפרדה. מטרת שיטה זו היא לאפשר תפוקה גבוהה עצמאית פרופיל של הגידול לחדור המערכת החיסונית ואת הגידול שברים הסלולר עבור אפיון רחבה יותר של microenvironment הגידול. באמצעות שיטה זו, רחוק נדגים את החשיבות של ביצוע ניתוח כל הגידול, כמו דוגמנית גידולים מוצקים תת עורית נמצאה משמעותי הטרוגניות אוטואימונית מרחבית. בסך הכל, שיטה זו באפשרותך יותר מדויק ועקבי להשוות בין מדגמים כי זה מעשיר את מערכת החיסון התאית קבוצות משנה בתוך הגידול ומאפשר בניית פרופיל עצמאית של גידול תאים ושברים המערכת החיסונית של הגידול.

<table><tbody><tr><td>זכר בן 6 עד 12 שבועות C57BL/6 עכברים</td><td>מעבדת ג'קסון&nbsp;</td><td></td><td>עכברים המשמשים במחקרי הגידול שלנו</td></tr><tr><td>קו תאי סרטן סינגני של עכברים MEER</td><td>נרכש ממשתף פעולה&nbsp;</td><td>N/A</td><td>E6/E7 אנטיגן HPV המבטא קו תאי אפיתל סרטן שקדים עכבריים&nbsp;</td></tr><tr><td>70% אלכוהול איזופרופיל&nbsp;</td><td>EMD Milipore&nbsp;</td><td>PX1840</td><td></td></tr><tr><td>ערכת כלים כירורגיים לעכברים</td><td>World Precision Instruments</td><td>MOUSEKIT</td><td>בעיקר צריך מספריים, פינצטה ואזמל.&nbsp;</td></tr><tr><td>צלחת 24 בארות&nbsp;</td><td>דנוויל סיינטיפיק בע"מ</td><td>T1024</td><td>או כל צלחת תחתונה שטוחה עם 24 בארות.&nbsp;</td></tr><tr><td>RPMI-1640 מדיה</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R0883</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז I&nbsp;</td><td>EMD Milipore</td><td>234153</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase IV</td><td>Worthington Biochemical Corporation</td><td>LS004189</td><td></td></tr><tr><td>DNase I&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11284932001</td><td></td></tr><tr><td>שייקר מסלולי במהירות נמוכה</td><td>BioExpress (ספק: Genemate)&nbsp;</td><td>S-3200-LS</td><td>או כל שייקר מסלולי.&nbsp;</td></tr><tr><td>חממה מווסתת חום</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>13-255-27</td><td>או כל חממה אחרת מווסתת תרמית</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F8192</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>AMRESCO</td><td>E177</td><td></td></tr><tr><td>1 מ"ל פיפטה וטיפים</td><td>Eppendorf</td><td>13-690-032</td><td>או כל פיפטה וטיפים אחרים</td></tr><tr><td>40 um מסנני תאים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>22363547</td><td></td></tr><tr><td>צינורות צנטריפוגה 50 מ"ל</td><td>דנוויל סיינטיפיק בע"מ</td><td>C1062-P</td><td></td></tr><tr><td>15 מ"ל צינורות חרוטיים</td><td>דנוויל סיינטיפיק בע"מ</td><td>C1012</td><td></td></tr><tr><td>10 מ"ל מזרק Luer-Lok ללא מחטים</td><td>BD</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>שיפוע צפיפות לימפורפ בינוני</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>7811</td><td></td></tr><tr><td>העברת פיפטות</td><td>דנוויל סיינטיפיק בע"מ.</td><td>P7212</td><td></td></tr><tr><td>96 בארות U-bottom לוחות</td><td>דנוויל סיינטיפיק בע"מ.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>סיגמא אולדריץ'&nbsp;</td><td>D8573</td><td></td></tr><tr><td>FoxP3 סט מאגר צביעה של גורם שעתוק&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>00-5523-00</td><td>מאגר תיקון/פרמביליזציה ומאגר פרמביליזציה</td></tr><tr><td>צנטריפוגה מווסתת חום</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td>5810 R</td><td></td></tr><tr><td>Attune NxT זרימה ציטומטר</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>N/A</td><td>לספירת נפח תאים 96 באר&nbsp;</td></tr><tr><td>עכברוש מטוהר נגד עכבר CD16/CD32 (בלוק BD FC של עכבר)&nbsp; שיבוט 2.4G2&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>553141</td><td>Fc Block</td></tr><tr><td>LIVE/DEAD ערכת כתמי תאים מתים כחולים לתיקון, לעירור UV</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>L34962</td><td>כתם כדאיות ניתן לתיקון</td></tr><tr><td>CD45 נוגדן חד שבטי (30-F11), APC-eFluor 780 ThermoFisher</td><td>Scientific</td><td>47-0451-80</td><td></td></tr><tr><td>TCR בטא נוגדן חד שבטי (H57-597), APC</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17-5961-82</td><td></td></tr><tr><td>CD8 ואלפא; נוגדן (KT15), PE</td><td>סנטה קרוז ביוטכנולוגיה</td><td>sc-53473&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>נוגדן חד-שבטי CD4 (GK1.5), PE-ציאנין5</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15-0041-81</td><td></td></tr><tr><td>MHC Class II (I-A/I-E) נוגדן חד-שבטי (M5/114.15.2), Alexa Fluor 700</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>56-5321-82</td><td></td></tr><tr><td>CD11c נוגדן חד-שבטי (N418), PE-Cyanine5</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>15-0114-82</td><td></td></tr><tr><td>F4/80 נוגדן חד-שבטי (BM8), eFluor 450</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>48-4801-80</td><td></td></tr><tr><td>CD11b נוגדן חד שבטי (M1/70), APC</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17-0112-81</td><td></td></tr><tr><td>Ly-6G (Gr-1) נוגדן חד שבטי (RB6-8C5), PE</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>12-5931-82</td><td></td></tr><tr><td>CD274 (PD-L1, B7-H1) נוגדן חד שבטי (MIH5), PE-Cyanine7</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25-5982-80</td><td></td></tr><tr><td>CD273 (B7-DC) נוגדן חד שבטי (122), PerCP-eFluor 710</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>46-9972-82</td><td></td></tr><tr><td>Ki-67 נוגדן חד שבטי (B56), BV711</td><td>BD Biosciences</td><td>563755</td><td></td></tr></tbody></table>

העשרה ואפיון של microenvironments המערכת החיסונית והחיסון של הגידול הוקמה גידולים מאתר תת עורית

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

הגידול חסין microenvironment (זמן) לאחרונה הוכר כמתווך קריטי של תגובה לטיפול בגידולים מוצקים, במיוחד עבור immunotherapies. התפתחויות אחרונות קליניים חיסוני מדגישות את הצורך שיטות לשחזור לאפיין במדויק וביסודיות הגידול, שלה לחדור המערכת החיסונית המשויך. עיכול אנזימטי הגידול וניתוח cytometric זרימה מאפשרים אפיון רחבה של קבוצות משנה תא החיסון הרבות פנוטיפים; עם זאת, וניתוח מעמיק לעיתים קרובות מוגבל fluorophore הגבלות על לוח עיצוב את הצורך לרכוש דגימות הגידול גדול להתבונן אוכלוסיות החיסון נדירים של ריבית. לכן, פיתחנו שיטה תפוקה גבוהה ויעילה עבור הפרדת ומעשירה הגידול לחדור המערכת החיסונית של הרכיבים הלא-החיסון הגידול. הגידול שתואר לעיכול, הפרדה צנטריפוגלית המבוסס על צפיפות הטכניקה מאפשרת אפיון נפרדים של הגידול, הגידול לחדור המערכת החיסונית שברים המשמרת את הכדאיות הסלולר ואני לפיכך, מספק אפיון רחבה של הגידול מצב אוטואימונית. בשיטה זו נעשה שימוש כדי לאפיין את מקיף המרחבי המערכת החיסונית הטרוגניות בגידולים מוצקים, אשר בהמשך מדגים את הצורך טכניקות פרופיל אוטואימונית עקבי כל הגידול. בסך הכל, שיטה זו מספקת טכניקה יעילה וישימה עבור אפיון אוטואימונית תת עורית מאתר גידולים מוצקים; ככזה, כלי זה יכול לשמש כדי לאפיין טוב יותר את התכונות tumoral אוטואימונית, בהערכה פרה של הרומן אסטרטגיות immunotherapeutic.

התוצאות שלנו להפגין היתרון המשמעותי של TIL ההפרדה של רכיבים שאינם-החיסון הגידול, כפי שהוסבר בפרוטוקול. בנוסף, באמצעות השיטה המתוארת נדגים את הטרוגניות אוטואימונית משמעותית של גידולים מוצקים הוקמה.
בעיה משמעותית עם טכניקות רבות של דיסוציאציה הגידול הוא אובדן יכולת הקיום לדוגמה, לרוב כתוצאה תנאים קשים לעיכול (קרי, מוגבה טמפרטורות, אספקת מזונם לקוי, וכו '). שימוש בשיטת עיכול המתואר, עם או בלי צפיפות העשרה בינוני ה...

כאן אנו מתארים שיטה כדי להפריד ולהעשיר את מרכיבי microenvironment המערכת החיסונית והחיסון של הגידול גידולים הוקמה תת עורית. טכניקה זו מאפשרת ניתוח נפרד של הגידול לחדור המערכת החיסונית ושברים -החיסון הגידול אשר יכולים להרשות אפיון מקיף של microenvironment מערכת החיסון הגידול.

העשרה ואפיון של Microenvironments המערכת החיסונית והחיסון של הגידול הוקמה גידולים מאתר תת עורית

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

המטרה הכוללת של טכניקה זו היא לספק שיטה לפרופיל בו-זמני של חלקי התאים החיסוניים והסרטניים התורמים למיקרו-סביבה החיסונית של גידולים מוצקים. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחומי האונקולוגיה החיסונית, כגון אילו שינויים סדרתיים חיסוניים ולא חיסוניים מתרחשים בתוך הגידול לאחר טיפול נתון. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא מאפשרת העשרה יעילה של רכיבים חיסוניים ולא חיסוניים של הגידול, ומאפשרת פרופיל יסודי של המצב החיסוני של הגידול.המטרה הכוללת של שיטה זו היא ליצור פרופיל יעיל של המיקרו-סביבה החיסונית של הגידול ולזהות שינויים הנגרמים על ידי הטיפול. לאחר ריסוס העכבר באתנול 70% למניעת זיהום שיער, הסר בניתוח את הגידולים התת עוריים, תוך הקפדה על כך שהגידולים יהיו נקיים מכל רקמה מזהמת. לאחר מכן, הנח כל גידול ב-1.8 מיליליטר של מדיום בסיס RPMI 1640 ללא סרום בקר עוברי בבארות בודדות של צלחת של 24 בארות על קרח.לאחר איסוף כל הגידולים, השתמש במספריים כדי לחתוך את הדגימות לחתיכות של פחות ממילימטר מעוקב אחד ולהוסיף 200 מיקרוליטר של קוקטייל דיסוציאציה טרי 10X שהוכן המכיל קולגנאז-1, קולגנאז-4 ו-DNase אחד לכל באר. לאחר שעה אחת ב-37 מעלות צלזיוס, בשייקר צלחת אורביטלי ב-60 עד 100 סל"ד, נטרל את התגובה עם מיליליטר אחד של מדיום RPMI 1640 בתוספת 5% FBS ושני מילי-מולרי EDTA, והשתמש בקצה פיפטה של מיליליטר אחד כדי להעביר כל דגימת תמיסת גידול לצינורות חרוטיים בודדים של 50 מיליליטר ומעליהם מסננות בודדות של 40 מיקרומטר. בעזרת בוכנת מזרק של 10 מיליליטר, יש לפרק מכנית את חלקי הגידול דרך המסננות, ולשטוף מעת לעת כל מסננת בשני מיליליטר RPMI 1640 בינוני פלוס 5% FBS עד שהמסננות נקיות מהגידול.כאשר כל הגידולים התפרקו, הוסף מדיום לכל צינור לפי הצורך כדי להביא את כל הדגימות לאותו נפח ולגלול את התאים על ידי צנטריפוגה. לאחר מכן, השתמש בפיפטה סרולוגית של חמישה מיליליטר כדי להשעות את הכדורים בשני מיליליטר של מדיום בתוספת FBS לכל צינור. כדי להפריד בין חלקי תאי החיסון והגידול, הוסף שלושה מיליליטר של מדיום שיפוע צפיפות לתחתית צינור חרוטי אחד של 15 מיליליטר לכל דגימה ושכבה איטית של שני מיליליטר של תרחיף תאי גידול לאורך הצד של כל צינור על כל שיפוע.הקפד לוודא כי תרחיפי תאי הגידול מעורבבים היטב לפני השכבות, שמתלי התאים מוזרמים לאט במורד צד הצינורות, וכי הצינורות מטופלים בזהירות כדי למנוע ערבוב של השכבות. הפרד את התאים על ידי צנטריפוגה של שיפוע צפיפות ואסוף בזהירות את המדיום העליון ואת שכבות הלויקוציטים החודרים לגידול לצינור חדש אחד של 15 מיליליטר לכל דגימה. השלך את אמצעי שיפוע הצפיפות הנותרים והשהה מחדש את כדורי הגידול בשני מיליליטר של מדיום בתוספת FBS לכל צינור.לאחר מכן, יש לצנטריפוגה של כל הדגימות ולהשעות מחדש את הגידול החודר לויקוציטים ב-200 מיקרוליטר ואת תאי הגידול בשני מיליליטר של מדיום בתוספת FBS לכל צינור על קרח. כדי לצלחת את התאים, סמן צלחת U תחתונה אחת של 96 בארות לכל לוח צביעה חיסוני בתוספת צלחת נוספת לספירת תאים וחלק את מתלי התאים הבודדים לכל אחת מלוחות לוח הצביעה וצלחת החיד. שטפו את התאים פעמיים עם 200 מיקרוליטר PBS של Dulbecco לכל דגימה וחסמו את התאים עם 50 מיקרוליטר של בלוק FC לבאר למשך 20 דקות בארבע מעלות צלזיוס.בתום הדגירה החוסמת, הוסף 50 מיקרוליטר של נוגדנים ממוקדים חוץ-תאיים מרוכזים פי 2 ותערובת כתמי כדאיות ניתנת לתיקון לכל באר למשך 30 דקות בחושך. בתום הדגירה יש לשטוף את הדגימות פעמיים עם מאגר FACS ולהשעות את הכדורים ב-200 מיקרוליטר של תמיסת קיבוע וחדירה למשך הלילה בארבע מעלות צלזיוס, מוגנים מפני אור. למחרת, אספו את התאים על ידי צנטריפוגה, ואחריה שטיפה עם 200 מיקרוליטר של מאגר חדירות לבאר.סמן את התאים עם 100 מיקרוליטר של לוח צביעת נוגדנים תוך תאיים במאגר חדירות למשך 30 דקות דגירה בחושך, ולאחר מכן שטיפת חיץ חדירה נוספת. לאחר מכן, שטפו את התאים שוב עם מאגר FACS והשעו מחדש את הדגימות ב-300 מיקרוליטר של מאגר FACS טרי לניתוחם על ידי ציטומטריית זרימה. עיכול הגידול, כפי שהודגם, עם או בלי העשרה בינונית של שיפוע צפיפות, מביא לאוכלוסיית תאי גידול שלמה בת קיימא של כ-70 עד 90% כפי שהוערך על ידי ציטומטריית זרימה.העשרה בינונית של שיפוע צפיפות מקדמת עלייה גדולה מפי שניים במקטע הלויקוציטים החודר לגידול חיובי CD45, בהשוואה לעיכול גידול לא מועשר, כמו גם תת-קבוצות רבות של תאים חיסוניים שנצפו בדרך כלל במחקרי מיקרו-סביבה חיסונית. ניתן לאפיין את מקטע תאי הגידול השלילי CD45 גם עבור תכונות גידול רבות, כגון כדאיות הגידול הכוללת או אפופטוזיס, יכולת התפשטות וביטוי של סמנים מדכאי חיסון שונים. כדי לקבוע כיצד תת-קבוצות אימונולוגיות מיאלואידיות ולימפוציטים משתנות לאורך גידול מוצק יחיד, ניתן לחלק את הגידול לארבעה חלקים שווים באופן שכל חלק מכיל אזורים תוך-גידוליים שווים בערך, כמו גם חלקים עוריים וצפק שווים.לאחר מכן ניתן לעכל כל חתיכה בנפרד ולנתח, כפי שהודגם, לנוכחות של אוכלוסיות שונות של תאי חיסון. לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך ארבע עד 8 שעות, תלוי בכמה דוגמאות יש לך. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לעבוד במהירות אך ביעילות כדי לשמר את כדאיות התאים.הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, שכן שלבי הדיסוציאציה וההפרדה כוללים טכניקות שקשה ללמוד על ידי טקסט כתוב בלבד. לאחר הליך זה, ניתן לבצע ציטומטריית זרימה כדי לענות על שאלות נוספות לגבי האופן שבו אוכלוסיות תאים משתנות בתוך גידול, הן מבחינת שפע והן מבחינת פנוטיפ. לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להפריד ולנתח את המרכיבים החיסוניים והלא חיסוניים של גידול עכברי תת עורי מבוסס באמצעות טכניקות העיכול והפרדת שיפוע הצפיפות המוכחות.

enrichment-characterization-tumor-immune-non-immune-microenvironments

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

בדו"ח זה, אנו מתארים פרוטוקול בידוד אוכלוסיות מטוהרים מאוד של leukocytes כי החודרים גידולים. פרוטוקול זה הוא עיבוד ביוטק Miltenyi בפרוטוקול כדי לשפר את התשואה וטוהר לבידוד תאים של רקמת הגידול מורכב.

בידוד של תאים חיסוניים של גידולים ראשוניים

סרטון זה מדגים בדיקה של טיפול אדג'ובנטי או נוסף במודל עכבר עם גידולים תת עוריים שנכרתו באופן חלקי. העכבר שעבר כריתה חלקית של הגידול מטופל בנוגדן המכוון לחלבון האנטי-ציטוטוקסי של תאי בקרת T, מה שעשוי להפחית את הצמיחה המחודשת של הגידול ומציע טיפול אדג'ובנטי יעיל.

טיפול אדג'ובנטי במודל עכבר עם גידול תת עורי שעבר כריתה חלקית

פרוטוקול זה מתאר שיטה להערכה מפורטת של תת-קבוצות לויקוציטים בתוך המיקרו-סביבה של הגידול במודל גידול עכבר. תאי מלנומה B16 המבטאים כימרין הושתלו תת עורית בעכברים סינגניים. לאחר מכן נצבעו תאים ממיקרו-סביבת הגידול ונותחו על ידי ציטומטריית זרימה, מה שמאפשר ניתוחים מפורטים של תת-קבוצות לויקוציטים.

הערכה של תת-יקוציט חדירת גידול בדגם גידול תת עורי

התאמנו תוספת ממברנה מיקרו-נקבובית חדירה כדי לחקות את המיקרו-סביבה של הגידול (TME). המודל מורכב מתרבית תאים מעורבת, מאפשר יצירה פשוטה של אוכלוסיות תאים בודדות מועשרות מאוד ללא שימוש בתיוג פלואורסצנטי או מיון תאים, ומאפשר לחקור תקשורת בין-תאית בתוך ה-TME בתנאים רגילים או בתנאי עקה.

חקיין של microenvironment הגידול: שיטה פשוטה ליצירת אוכלוסיות תאים מועשרות חוקרים אינטר תקשורת

כאן אנו מציגים שיטה ישימה לפיתוח מודל מאתר orthotopic של הראש והצוואר קרצינומה של תאים קשקשיים. גידולים מדגימים הרלוונטית קלינית תכונות histopathological של המחלה, לרבות נמק, בידול המסכן, גרורות קטרי הסתננות המערכת החיסונית. עכברים נושאות לפתח תסמינים הרלוונטית קלינית כולל בבליעה, הלסת הזחה של ירידה במשקל.

חיסון intramucosal של תאי קרצינומה של תאים קשקשיים עכברים עבור פרופיל החיסונית הגידול והערכת התגובה לטיפול

פרוטוקול זה מתאר את הדור כירורגי של גידולים הלבלב אורתודפית ואת העיכול המהיר של גידולים מבודדים מבודד מורטין הלבלב. לאחר העיכול, אוכלוסיות קיימא תאים החיסונית יכול לשמש ניתוח נוסף במורד הזרם, כולל לשעבר גירוי vivo של תאים T לאיתור ציטוקינים תאיים ידי הזרימה cy, try.

הדור של הלבלב אורתוטואט גידולים ואפיון Vivo Ex של תאים הסתננות של הגידול תא T

כאן אנו מציגים פרוטוקול השתלת גידול לאפיון לימפוציטים חודרים לגידולים שמקורם בגידול ובפריפריה במודל גידול בעכבר. מעקב ספציפי אחר זרם תאי מערכת החיסון שמקורם במקבל עם ציטומטריה של זרימה חושף את הדינמיקה של השינויים הפנוטיפיים והתפקודיים של תאים אלה במהלך תגובות חיסוניות אנטי-סרטניות.

השתלת גידול להערכת הדינמיקה של תאי T המסתננים לגידולים CD8+ בעכברים

פרוטוקול סטנדרטי מתואר כדי לחקור את הפעילות האנטי-סרטנית ואת הרעילות הנלווית של IL-1α במודל עכבר סינגני של HNSCC.

הערכת הפעילות האנטי-סרטנית In vivo של ננו-חלקיקים פוליאנהידריד IL-1α

הפרוטוקול מציג מודל אימונותרפיה לסרטן באמצעות חיסון מבוסס תאים עם מלנומה B16-F10 המבטאת Flt3L. פרוטוקול זה מדגים את ההליכים, כולל הכנת תאי גידול בתרבית, השתלת גידול, הקרנת תאים, מדידת צמיחת הגידול, בידוד תאי חיסון תוך-גופיים וניתוח ציטומטריה של זרימה.

מודל אימונותרפיה ניסיוני למלנומה באמצעות חיסון לגידול עם ציטוקין המטופויאטי

פרוטוקול זה מתאר את הדור של עכברי מערכת החיסון האנושית (HIS) עבור מחקרים אימונו-אונקולוגיים. הוראות ושיקולים בשימוש במודל זה לבדיקת אימונותרפיה אנושית על גידולים אנושיים המושתלים במודל זה מוצגים בדגש על אפיון התגובה של מערכת החיסון האנושית לגידול.

בדיקת אימונותרפיה לסרטן במודל עכבר אנושי הנושא גידולים אנושיים

עם העניין הגובר באימונותרפיה תוך-גידולית, בחירת מודלים נגישים ומעשיים היא חיונית. גידולים תת-עוריים קלים לזיהוי אך קשה לדמיין ולמניפולציה. בפרוטוקול זה אנו מתארים שיטות ליצירת גידולים תוך-עוריים המספקות נראות ונגישות משופרת.

השתלת גידול תוך-עורי כמודל חזק למחקרי אימונותרפיה תוך-גידולית בסרטן עכברים

למדו שיטה להעשרת מרכיבי המיקרואנבירון החיסוני והלא-חיסוני בגידולים תת-עוריים. הטכניקה מאפשרת אפיון מקיף של מצב הגידול החיסוני וזיהוי שינויים הנגרמים על ידי טיפול.

העשרה ואפיון של Microenvironments המערכת החיסונית והחיסון של הגידול הוקמה גידולים מאתר תת עורית

גלה סרטונים נוספים