Name: שיטות המחקר של התחדשות ב- Stentor (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 48 s
Description: למד שיטות לגידול וחקירת התחדשות תאית ב-Stentor coeruleus באמצעות טיפול בסוכרוז וניתוח תאים. פרוטוקול זה מספק מסגרת מחקרית לביולוגיית תאים ברמת התא הבודד.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענק-NIH R01 GM113602 (WFM) ואת ה-NSF 1144247 (אי אל). אנו להכיר מארק Slabodnick, נטלי קירקלנד לפיתוח הגירסאות הראשונית של כמה מהפרוטוקולים האלה, לדיונים אינפורמטיבי. אנו מודים קארינה Perlaza ולואיס גריסון על קריאה ביקורתית של כתב היד.

<ol><li>Kirschner, M., Gerhart, J., Mitchison, T. <a target="_blank" href="http://www.cell.com/cell/abstract/S0092-8674(00)81685-2">Molecular "vitalism".</a> Cell. 100 (1), 79-88 (2000).</li>
<li>Shulman, J. M., St Johnston, D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10611685">Pattern formation in single cells.</a> Trends in Cell Biology. 9 (12), M60-M64 (1999).</li>
<li>Wloga, D., Frankel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+molecules+to+morphology%3A+cellular+organization+of+Tetrahymena+thermophila%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">From molecules to morphology: cellular organization of Tetrahymena thermophila.</a> Methods in Cell Biology. 109, 83-140 (2012).</li>
<li>Frankel, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFrankel%2C+J+%22Pattern+Formation%3A+Ciliate+Studies+and+Models%22">Pattern Formation: Ciliate Studies and Models</a>. , Oxford University Press. Oxford. (1989).</li>
<li>Tartar, V. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jez.1401310105/full">Grafting experiments concerning primordium formation in Stentor coeruleus.</a> Journal of Experimental Zoology Part A. 131 (1), 75-121 (1956).</li>
<li>Lillie, F. R. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jmor.1050120105/abstract">On the smallest parts of Stentor capable of regeneration; a contribution on the limits of divisibility of living matter.</a> Journal of Morphology. 12 (1), 239-249 (1896).</li>
<li>Morgan, T. H. <a target="_blank" href="https://www.jstor.org/stable/1535709">Regeneration of proportionate structures in Stentor.</a> The Biological Bulletin. 2 (6), 311-328 (1901).</li>
<li>Slabodnick, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+macronuclear+genome+of+Stentor+coeruleus+reveals+tiny+introns+in+a+giant+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Biology%22%5BJournal%5D)">The macronuclear genome of Stentor coeruleus reveals tiny introns in a giant cell.</a> Current Biology. 27 (4), 569-575 (2017).</li>
<li>Tang, S. K. Y., Marshall, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-repairing+cells%3A+How+single+cells+heal+membrane+ruptures+and+restore+lost+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Self-repairing cells: How single cells heal membrane ruptures and restore lost structures.</a> Science. 356 (6342), 1022-1025 (2017).</li>
<li>Slabodnick, M., Prevo, B., Gross, P., Sheung, J., Marshall, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+cytoplasmic+flow+during+single-cell+wound+healing+in+Stentor+coeruleus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Visualizing cytoplasmic flow during single-cell wound healing in Stentor coeruleus.</a> Journal of Visualized Experiments. 82 (82), 50848(2013).</li>
<li>Tartar, V. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTartar%2C+V+%22Biology+of+Stentor%22">Biology of Stentor</a>. , Pergammon Press. Oxford. (1961).</li>
<li>Slabodnick, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+kinase+regulator+mob1+acts+as+a+patterning+protein+for+stentor+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Biology%22%5BJournal%5D)">The kinase regulator mob1 acts as a patterning protein for stentor morphogenesis.</a> PLOS Biology. 12 (5), e1001861(2014).</li>
<li>Harris, E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarris%2C+E+%22The+Chlamydomonas+sourcebook%3A+Introduction+to+Chlamydomonas+and+its+laboratory+use%22">The Chlamydomonas sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and its laboratory use</a>. 1, Academic Press. Cambridge. (2009).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

Culturing Stentor מציג מספר אתגרים. ראשית, כדי לבצע ניסויים הדורשים מספר גדול של תאים, אחד צריך לשמור על מספר רב של תרבויות Stentor , כמו תרבויות להיות לא בריא כאשר ריכוז Stentor עולה 20 תאים למ"ל. שנית, המיקרואורגניזמים יכול לזהם Stentor תרבויות קרובות לחלק מהר יותר Stentor , להציף את התרבות (מזהם נפוץ הוא rotifers). לפיכך, יש צורך לבחון את התרבות תחת מיקרוסקופ מעת לעת ולהסיר את המזהמים. לעיתים, תרבות חדשה צריכה להיות החל ממספר קטן של תאים ניצלה באופן ידני מתרבות מזוהמים. פעולה זו מגדילה את הזמן הנדרש כדי לשמור על תרבויות Stentor בריאים. שלישית, הרחבת תא בודד לתוך תרבות 400 מ ל דורש לפחות חודש אחד, כי מחזור התא Stentor הוא 3-5 ימים. רביעית, בניגוד מודל אחר ciliates, Stentor לעיתים רחוקות ללכת לתוך ציסטה טופס, הם לא יכולים להיות קפוא.
היבט חשוב של culturing Stentor הוא הבחירה של אורגניזם מזון המתאים. שיטות שונות עבור culturing Stentor שתוארו קודם לכן. אחד מהם מציע להשתמש חלב רזה התרבות חיידקים אשר מאכילים Stentor. כזה טכניקה יעילה culturing Stentor; עם זאת, יישום של טכניקות גנומית דורש דוגמאות טהור כדי למנוע בלבול הנובע קריאות גנומית של אורגניזמים מזון לא מוגדר. משתמש בפרוטוקול הנוכחי, ניתן לגדל Stentor במסה, כי את האוכל שלהם, Chlamydomonas, יש כבר וסודרו, הנוכחות של זיהום גנומית של האורגניזם המזון ועוזרת מבוקר על. מסיבות לא ידועות, טרטר נאלץ לחדש את המלאי שלו על-ידי החזרת עד היכן הוא מצא Stentor לפני. עם הפרוטוקול הנוכחי, הצלחנו לשמור על Stentor במשך שנים.
התחדשות ניסויים עם Stentor הם בדרך כלל פשוטה, אבל יש כמה פרטים קריטיים שכדאי לזכור. לגבי סעיף 2, חיתוך Stentor תאים לחצי יכול להיות מומחה תוך דקות. מאסטרינג כירורגיים מתקדמים יותר של Stentor עשויים לדרוש שבוע של תרגול. בזמן ביצוע טיפול סוכרוז או אוריאה (סעיף 3), אם בתחילת הדמיה רוב התאים עדיין יש להקות membranellar שלהם, להגביר את זמן הדגירה על ידי 10-30 s עבור מתי סוכרוז הטיפול מבוצע הבא. לא להאריך את זמן הטיפול סוכרוז מעבר 3 דקות הדגירה מכיוון שהתוצאה תהיה מוות של תאים.
הדמיה של Stentor התחדשות דורש שיטות לתאים גדולים התמונה לאורך פרקי זמן ארוכים. שיטת הדמיה מפורטת בסעיף 4 יכול לשמש רק עם מיקרוסקופ זקוף. אם במיקרוסקופ הפוכה זמין במקום, ואז התאים ניתן להניח בשקופית או coverslip בתאי קטן. שיטה אחת היא ליצור תא מחוץ וזלין ולכסות עם coverslip אחר כדי למנוע אידוי. לחלופין, תא עבור תא בודד יכול להתבצע על ידי עושה חור עם אגרופים חור בגודל הרצוי 1 x 1 ס מ2 מרובע של סיליקון מרווח (טבלה של חומרים), הצבת את מרווח coverslip, שם תאים בבית הבליעה , מכסה את התא עם coverslip אחרת. כאשר הדמיה, אם Stentor אינם לכיוון הנכון כדי לבחון את התכונות האופייניות של כל שלב של התחדשות, הקש על לוח בחוזקה כדי להפוך את החוזה תא. לצפות את התא להרחיב כדי לזהות את השלב של התחדשות (למיתוח לוקח בערך 45 s). אם התא נמצא עדיין הכיוון הלא נכון, חזור הנקישות. הדימויים המוצגים באיור 1 , איור 6 צולמו על ידי מיקרוסקופ זום סטריאו; עם זאת, כל הניסויים מפורט ניתן לבצע באמצעות 5 X לנתח סטריאו מיקרוסקופ.
אתגר נוסף מלבד culturing והדמיה Stentor הוא המעקב של התחדשות, במיוחד את כמות הזמן הדרוש כדי לזהות בשלבים. אם התא ההתחדשות מכוון בצורה מושלמת עם האזור של ראשית הפה נראה בבירור, זיהוי של הבמה לוקח כמה שניות. לפעמים, אולם, התא Stentor היא בכיוון מניעת הקצאה ברורות של שלב התחדשות, ובכך לקחת יותר זמן כדי לזהות. משך הזמן הנדרש כדי שלב ההתחדשות תאים בודדים עשוי לעכב את כימות של כל התאים ההתחדשות, ובכך להקטין את הדיוק הטמפורלי של היערכות ודרישה המתבונן לחכות, להתקין מחדש התא אחריו עברה משמעותית כיוון חדש. כתוצאה מכך, הניסוי הזה הוא גם זמן וגם עבודה אינטנסיבית. מסיבות אלו, רצוי מאוד לפתח בשיטות אוטומטיות עבור Stentor התאים ולהתאושש הקצאת בשלבים של התחדשות בנתוני מיקרוסקופ וידאו. אלה יאפשרו גם לניסויים לשחזור יותר, מגדילה גודל המדגם, הסרת הטיה אנושית.
הופעתה של שיטות רגישה מאוד גנומית פרוטיאומיה מבנית החלה להכניס יד מחקרים של תאים בודדים. עבור ניתוחים תא בודד כזה, בגודל ענק של תא Stentor הופך נושא הבדיקה רצוי עבור ניסויים הוכחה הרעיון. לניסויים כזה בלתי אפשרי, culturing Stentor הוא מהותי, אז בשיטות המתוארות כאן צריך לשחק תפקיד להמשך פיתוח של טכניקות מתקדמות יותר מתא בודד.

התאים אינם תיקים פשוטים של אנזימים, אבל מאוד מורכבת למדי מכונות שהרכיבים בקפידה לשינוי הגודל הנכון, לארגן תפקידים מוגדרים היטב. מורפוגנזה של תאים בודדים מייצג תהליך מפתח התא וביולוגיה התפתחותית, אך המנגנון המולקולרי שלה לא ידוע1,2. בעוד כמה תאים בתרבית דומות כתמים, אורגניזמים חד־תאיות יכול מאוד סיבכו ארכיטקטורות, ומעוררות את דפוסי בקליפת המוח מורכבת ראיתי3,ciliates4.
אולי הדוגמה הקיצונית ביותר של תא מאוד מובנית הוא Stentor coeruleus, heterotrichous ענק ciliate קשור Tetrahymena ו- סנדלית. Stentor הוא באורך של 1 מ מ, והוא מכוסה עם יותר מ-100 פסים אורכיים של פיגמנט כחול לסירוגין עם שורות של cilia מאורגנים בערימות מקבילים של סרטים microtubule להפעיל את משך כל התא. התא הוא חצוצרה בצורת (איור 1), עם תזמורת membranellar מכשירים דרך הפה (OA) לסיומה הקדמי, ואת holdfast שמתחבר התא המצע בקצה האחורי שלו. בנוסף הקוטביות ברור הקדמי, האחורי, התא גם מראה המתבנת כיראלי, ייחודי כך ריווח בין שורות ciliary בהדרגה גדל עם כיוון השעון. התוצאה רציפות שם השורה הצר פוגש את השורה הרחב ביותר, ואת אזור זה של פני השטח של התא, המכונה מיקומה של פס ניגודיות, יכולים לגרום להיווצרות הסט השני של מבנים הקצה הקדמי כאשר הושתל אל תא אחר5, . עושה את זה באופן רשמי המקביל לסדרן של Spemann. לפיכך, כל תהליכי מפתח ביולוגיה התפתחותית יש תחליפי שלהם ב- Stentor: axiation, תבניות ו אינדוקציה. העובר, תהליכים אלה מונעים על ידי הגורל ההבדלים בין תאים שונים, אבל ב- Stentor, הם חייבים להיות מונע על ידי הגורל הבדלים בין אזורים שונים בתוך תא בודד. מה שמגדיר את ההבדלים בין האזורים בתוך Stentor היא בגדר תעלומה.
אם חלק כלשהו של Stentor נחתך, החתיכה החסרה של התא יכול להתחדש להניב תאים נורמליים תוך מספר שעות. אם תא לחתוך לחצי, או אפילו לחלקים קטנים הרבה יותר, כל קטע מארגנת מחדש ויהיו לתוך תא שנראה נורמלי אבל קטנים יותר ומשחזרת את המידתיות נכונה בין תא חלקים6,7. אפילו שברירי, 1/64th לגודל התא המקורי, מסוגלים להתחדש בתוך תא קטן, אך בדרך כלל פרופורציות ולאחר מכן לגדול בגודל מלא6. Stentor ובכך מציגה הזדמנות ייחודית ללמוד את המנגנונים של אברון גודל שינוי גודל של תאים צמיחה תקנה בשיטות כירורגיות המוחלות בדרך כלל ברמה של רקמות או אורגניזם שלם.
אחד המאפיינים של Stentor ומאפשרת לו להתחדש מתוך מגוון רחב של ניתוחים כירורגיים הוא שהוא מכיל macronucleus nodulated יחיד (איור 1) עם בערך 50,000 עותקים של כל הגנים8. כל עוד קטע התא מכילה צומת macronuclear אחד לפחות, הוא בעל יכולת להתחדש באופן מלא. מאפיין נוסף המשמש כבסיס יכולת התחדשות של Stentor, היא יכולתה ריפוי פצע עצום. סוגי תאים רבים אמנם מסוגל ריפוי הפצעים שלהם9, Stentor הוא מסוגל להתאושש במגוון יוצא דופן של לפליטת הפיזי. דוגמה Stentor ההתאוששות מן ההפרעות דרסטית, יחד עם השיטות להמחשת זרימה cytoplasmic Stentor10 דווחו בעבר. שיטות אלה מאפשרות לימוד משפיעים על התחדשות איך ופצעו ובעקבות המצב הפיסי של הציטופלסמה.
גודל עצום של stentor, יכולת התחדשות יוצאת דופן, והעובדה כי זה בא לידי ביטוי, תופעות התפתחותיות אצל העוברים multicellular (כגון המארגנים, axiation והמתבנת) רבות נמשך ביולוגים התפתחותיים רבים במהלך הפנייה של המאה הקודמת, לרבות תומאס הנט מורגן7. במהלך החמישים והשישים, גישות המיקרוכירורגית הדגים מערך מדהים של תהליכים morphogenetic ולעירור החד-תאי הזה11. עם זאת, Stentor פותחה כמערכת מודל בביולוגיה מולקולרית רק לאחרונה. במהלך השנים האחרונות, הגנום של Stentor היה וסודרו והתכנסו8, ואת השיטה perturb ביטוי גנים באמצעות RNAi מאכילים היה מפותח12.
אחת הסיבות Stentor פותחה לתוך אורגניזם מודל הביולוגיה המולקולרית המודרנית רק לאחרונה היה הקושי של גידול גדול התרבויות בגלל מחזור התא ארוכה שלה (3 עד 5 ימים). עם זאת, שיטות מודרניות גנומית פרוטיאומיה מבנית לדרוש פחות חומר מאשר הם נהגו, הנפח של תא בודד Stentor היא מספקת שיטות אלה, אפילו בלי להזדקק העדינה שיטות שפותחו עבור הניתוח של יחיד תאים קטנים בהרבה Stentor. בסעיף 1 של הפרוטוקול מפרט את ההליך עבור יצירת תרבות גדול מתא Stentor בודד. אותה גישה יכול לשמש כדי ליצור תרבות גדול מרסיס תא שהושג על ידי חיתוך תא. בסעיף 1 מספק גם ההנחיות לשמירה על תרבויות Stentor בריאים לאורך פרקי זמן ארוכים. סעיף 2 של הפרוטוקול מספקת את המתודולוגיה להשראת התחדשות התאים על ידי גזירה את התאים באופן ידני עם מחט זכוכית. סעיף 3 של הפרוטוקול מוקדש שתי שיטות של גרימת לרגנרציה של תא מסוים מבנים (membranellar band ואוראלי-המנגנון): טיפול תאי עם סוכרוז או אוריאה שמוביל שפיכת של מבנים אלה, ואחריו שלהם התחדשות. סעיף 4 של הפרוטוקול פירוט שיטת ההדמיה של תאים בודדים ההתחדשות במשך פרקי זמן ארוכים. סעיף 4 מסתיים התיאור של השלבים של התחדשות וטיפים על הניתוח של התחדשות דינמיקה.

<table><tbody><tr><td>Stentor coeruleus תרבית חיה</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>131598</td><td></td></tr><tr><td>Chlamydomonas reinhardtii on agar</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>152040</td><td></td></tr><tr><td>מי מעיין מפוסטרים, בקבוק 1 ליטר</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>132458</td><td></td></tr><tr><td>מתיל תאית, 1500 cP</td><td>Millipore Sigma</td><td>M0387</td><td></td></tr><tr><td>Pyrex צלחת ספוט מזכוכית</td><td>Fisher Scientific</td><td>13748B</td><td></td></tr><tr><td>צנצנת זכוכית רחבה עם מכסה בורג, 60 מ"ל</td><td>Carolina Biological Supply</td><td>715740</td><td></td></tr><tr><td>מיכל זכוכית 2 כוסות עם מכסה זכוכית</td><td>Pyrex</td><td>1095600</td><td></td></tr><tr><td>CultureWell חומר יריעות סיליקון Grace</td><td>Bio Labs</td><td>664475</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimberly Clark</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>Posi-Click 1.7 מ"ל צינור מיקרוצנטריפוגה</td><td>Denville</td><td>C2170</td><td></td></tr><tr><td>כיסוי זכוכית</td><td>פישר המשובח ביותר</td><td>12-548-B</td><td></td></tr><tr><td>TAP Growth Media, מותאם לתרבית Chlamydomonas</td> תרבית <td>ThermoFisher</td><td>A1379801</td><td></td></tr><tr><td>מרווח סיליקון, יריעת סיליקון CultureWell, עובי 0.25 מ"מ/13 ס"מ x 18 ס"מ</td><td>מעבדות גרייס ביו</td><td>664475</td><td></td></tr><tr><td>פטרולטום, ג'לי נפט,</td><td>ספקטרום</td> לבן <td>P1037</td><td></td></tr><tr><td>צינורות נימי זכוכית בורוסיליקט. OD: 1.2 מ"מ, ID: 0.9 מ"מ, אורך: 10 ס"מ.</td><td>Sutter Instrument</td><td>B120-90-10</td><td></td></tr><tr><td>חולץ מחט P-87</td><td>Sutter Instrument</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stemi 2000 מיקרוסקופ סטריאו</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axiozoom V16, מיקרוסקופ זום סטריאו</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

שיטות המחקר של התחדשות ב- stentor

Methods for the Study of Regeneration in Stentor

התאים צריכים להיות מסוגלים לחדש את החלקים שלהם להתאושש לפליטת חיצוניים. Ciliate חד־תאיות Stentor coeruleus הוא אורגניזם מודל מצויין ללמוד ריפוי הפצע התחדשות התאים הבאים. הגנום Stentor הפכו לזמינות לאחרונה, יחד עם שיטות בביולוגיה מולקולרית מודרניים, כגון RNAi. כלים אלה מאפשרים ללמוד תא בודד התחדשות ברמה המולקולרית. המקטע הראשון של הפרוטוקול מכסה הקמת Stentor תרביות תאים תאים בודדים או שברי תאים, ביחד עם הנחיות כלליות לשמירה על תרבויות Stentor . Culturing Stentor בכמויות גדולות מאפשרת שימוש בכלים יקר כמו ביוכימיה, רצף ספקטרומטר מסה. המקטעים הבאים של הפרוטוקול לכסות גישות שונות כדי גרימת התחדשות ב- Stentor. חיתוך באופן ידני תאים עם מחט זכוכית מאפשרת ללמוד לרגנרציה של חלקי תאים גדולים, כאשר מתייחסים תאים עם סוכרוז או אוריאה מאפשר ללמוד לרגנרציה של מבנים ספציפיים ממוקם בקצה הקדמי של התא. שיטת הדמיה תאים בודדים ההתחדשות מסופק, יחד עם טבלת עזר להערכת הישגים היערכות וניתוח את הדינמיקה של התחדשות. התהליך כולו של התחדשות מחולק בשלושה שלבים. דמיין את הדינמיקה של ההתקדמות של אוכלוסיה של תאים דרך השלבים, הוא הפגין את הטרוגניות בתזמון התחדשות.

Stentor תרבויות אמינה שהוקמו והותאמו מתוחזק תאים בודדים או שברי תאים באמצעות בסעיף 1 של הפרוטוקול. דוגמה מייצגת של תרבות בריא גדול מוצג 1 וידאו.
הקורס זמן של התחדשות נמדדה ב Stentor באמצעות שיטת טיפול סוכרוז לאתחול של התחדשות המתוארים שלב 3.1, בשילוב עם הדמיה ושיטת ניתוח שנדונו בסעיף 4 (איור 7). מגרש זה מציין כי כפולה אחת באורך שעה מהזמן נלקח על ידי אוכלוסיית תאים כדי להגיע בכל שלב מסוים. סוג זה של ניתוח מאפשר חקר הטרוגניות טמפורלית בתהליך התחדשות אוכלוסיה של התחדשות תאים.
לפניכם סיכום של תזמון התחדשות זה נצפתה עד כה לאחר עשרות טיפולים סוכרוז (איור 4 , איור 6). שלב ראשון הוא כאשר התאים Stentor נראים כמו דמעות בלי שום להקה membranellar (בשלב זה מתחיל מיד לאחר שטיפה סוכרוז). שלב זה נמשך 3-6 ח' שלב 2 הוא כאשר מופיעה להקה membranellar גדל (3-6 שעות לאחר הטיפול סוכרוז). שלב זה נמשך 3-4 ח' בשלב 3 הוא כאשר ראשית דרך הפה מופיע בקצה האחורי של הלהקה membranellar (6-8 שעות לאחר הטיפול סוכרוז), שני מבנים מועברים לקראת סוף התא הקדמי. שלב זה נמשך 1-2 h. הלהקה membranellar והן את המנגנון אוראלי הגיע לקצה הקדמי של התא, זה הצביעו על השלמתו של התחדשות. התא אימצה צורה אופיינית בחצוצרה Stentor . התאים היו לגמרי מחדש 8-9 שעות לאחר הטיפול סוכרוז.
<img alt="דיאגרמת פרמציום עם פס ממברנה, מכשיר אוראלי, ואקואול מזון, מקרוגרעין מסומן." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> איור 1. תמונת מצב של Stentor. הלהקה membranellar את המנגנון אוראלי מוצגים בקצה הקדמי של התא. Holdfast נמצאת בקצה האחורי של התא. Stentor macronucleus הוא nodulated. מוזן היטב Stentor יש ירוק וקואלות מזון המכיל בעיקר Chlamydomonas. סולם בר הוא 0.5 מ מ. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="ניתוח הגדרת מיקרוסקופ; מגלשת זכוכית עם דגימת סטנטור לתצפית במחקר ביולוגיה." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> באיור 2. הגדרת חיתוך stentor . תא חיתוך מתבצע על ידי באופן ידני מניפולציה מחט זכוכית בזמן שאני מסתכל על התא באמצעות מיקרוסקופ סטריאו ויבתר זמינים מסחרית. מטרת העיתון רקמות היא לספק הרקע הלבן כדי לראות את התאים יותר טוב. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="רצף מיקרוסקופיה של תאים מתחלקים, המסומן A-F, המראה שלבים בתהליך המיטוטי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> איור 3. תמונות של 3 וידאו המדגימה כיצד לחתוך את Stentor עם מחט זכוכית- (א) א Stentor מיד לפני זה נוגע המחט. (B) A Stentor סחוט בעדינות בין שקופית מחט וזכוכית. (ג) א מתכווץ Stentor מגיב בכוח המחט. (ד) A Stentor שהוא נחתך על ידי בעדינות לחיצה על התא עם הצד של המחט. (E) A Stentor עכשיו לחתוך לשניים אבל לא מופרדים. (F) שני קטעים Stentor . סולם בר הוא 0.25 מ"מ. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="דיאגרמת תהליך התחדשות סטנטור עם שלבי הלם סוכרוז/אוריאה, צינורות צנטריפוגה, שלבי תאים." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig4v2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> באיור 4. ויזואליזציה סכמטי של סעיף 3, סעיף 4 של הפרוטוקול. זהו פרוטוקול מאויר לביצוע סוכרוז או אוריאה טיפול והתבוננות של התחדשות התאים. הזמן שצוין בחלונית התחתונה נמדד מתחילת לשטוף את 1. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig4v2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="ניתוח הגדרת מיקרוסקופ, לוחית ספוט 9 בארות, ניתוח תגובת מיקרו-טיפות, מחקר אופטי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig5.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> איור 5. הגדרת להשגחה הדמיה ו/או ישיר של התחדשות עם מיקרוסקופ זקוף. רביב כל-µL 4 תלוי coverslip, יש תא אחד בתהליך התחדשות. מים הבארות של לוח הזכוכית ספוט מגביל אידוי טיפות. התקנה זו מאפשרת בעקבות ההתחדשות של תאים מרובים במקביל. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="ניתוח מבנה תאי צמחים; תמונות מיקרוסקופ A-E; הדגש וריאציות מורפולוגיה של תאים." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig6.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> איור 6. תמונות של Stentor בכל שלב ושלב של הלהקה membranellar והתחדשות המנגנון אוראלי. (א) שלב ראשון מאופיין על-ידי צורה דמוית דמעה תא ואת העדר הלהקה membranellar. (B) שלב 2 מתאפיינת במראה של הלהקה membranellar, מבנה מבוסס-cilia שמרביץ ללא הרף. להקות Membranellar מסומנים באמצעות קווים מקווקווים לבן פאנלים B - ד (C ו- D) שלב 3 מתאפיינת במראה של ראשית דרך הפה (מסומן בחץ). ראשית דרך הפה נראה כמו invagination בקצה האחורי של הלהקה membranellar. ראשית דרך הפה ואז לעלות כלפי החלק הפנימי של התא להפוך המנגנון אוראלי. התחדשות (E) הושלמה כאשר התא אימצה האופיינית Stentor חצוצרה צורה, המנגנון אוראלי (מסומן בחץ) הרחיב בקצה הקדמי של התא. סולם בר הוא 0.25 מ"מ. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="תרשים עמודות התפלגות שלב תא, הלם זמן-פוסט-סוכרוז, המציג ארבעה שלבים במשך 9 שעות." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57759/57759fig7.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> איור 7. מוערמים תיבת מגרש מראה איך הפרופורציות של תאים בכל שלבי חידוש לאחר טיפול סוכרוז את השינויים לאורך זמן. העלילה מציגה הטרוגניות בתזמון של התחדשות שלבים בתוך אוכלוסייה של תאים ההתחדשות. "רג סיום" מצביע על השלמתו של התחדשות. מספר התאים: 28. <a href="/files/ftp_upload/57759/57759fig7large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="עם תרבית אצות ירוקות למחקר פוטוסינתזה בניסוי מעבדה." src="/files/ftp_upload/57759/57759video1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Movie 1"> וידאו 1. דוגמה של תרבות Stentor בריא. באופן כללי, אם תרבות זה מרוכז, פיצול התרבות מומלץ. <a href="/files/ftp_upload/57759/Video1.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון. (לחיצה ימנית כדי להוריד.)</a>
<img alt="ירידה מתחת למיקרוסקופ; מחקר מתח פנים נוזלי; שיטת מיקרוסקופיה; ניתוח חינוכי." src="/files/ftp_upload/57759/57759video2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Movie 2"> וידאו 2. מאט Stentor עם methylcellulose. <a href="/files/ftp_upload/57759/Video2.mov" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון. (לחיצה ימנית כדי להוריד.)</a>
<img alt="תמונה מיקרוסקופית של מערך מיקרופלואידי, המדגישה את מיקום הטיפות על חוט דק." src="/files/ftp_upload/57759/57759video3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Movie 3"> וידאו 3. חיתוך Stentor. תאים בודדים ניתן לחתוך באופן ידני לחלקים מרובים תחת מערכת סטריאו לנתח מיקרוסקופ על ידי לחיצה על מחט זכוכית דרך התא. <a href="/files/ftp_upload/57759/Video3.mov" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון. (לחיצה ימנית כדי להוריד.)</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>בעיה עם תרבות</td>
			<td>פתרון אפשרי</td>
			<td>מניעה אפשרי</td>
		</tr>
<tr>
<td>תרבות היא מוצפת rotifers או אורגניזמים גדולים אחרים.</td>
			<td>להסיר כמה שיותר Stentor ככל האפשר לתוך תבשיל תרבות חדשה. לאחר מכן לשטוף את התאים שלוש פעמים.</td>
			<td>לשטוף ביסודיות Stentor בעת קבלת אותם, אפילו בעת רכישת אותם מן הספק מסחרי.</td>
		</tr>
<tr>
<td>תרבות היא מוצפת פטריה או אורגניזמים קטנים אחרים.</td>
			<td>לזהות לפינה שם יש לפחות Stentor. באזור הזה, להסיר כמה שיותר מדיה ככל האפשר מבלי להסיר רבים Stentor ולהוסיף ב PSW חדש. מערבבים בעדינות אך ביסודיות כדי distrubute אורגניזמים הפולשים. דלג על ההזנה הבא, Stentor יאכלו אותם.</td>
			<td>לבחון את התרבות באופן קבוע ולהסיר לכלוך קטן על ידי החלפת מדיה עבור PSW טריים.</td>
		</tr>
<tr>
<td>
Stentor שוכבים אחד על השני.</td>
			<td>לפצל את התרבות הריכוז הוא תאים למ"ל פחות מ-20.</td>
			<td>פיצול תרבויות לעתים קרובות יותר.</td>
		</tr>
<tr>
<td>
Stentor תאים ההזדווגות.</td>
			<td>להאכיל מדי 4 ימים במקום כל 5 ימים.</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>תרבות יש הרבה חומר פסולת כהה.</td>
			<td>הסר כל כך הרבה של החומר האפל, Stentor פסולת ככל האפשר מבלי להסיר את התאים. אם Stentor מחוברים לחומר האפל, פיפטה למעלה ולמטה כדי לשחרר את התאים Stentor מפסולת שלהם ולאחר מכן להסיר את התקשורת עם הפסולת מבלי להסיר את התאים. או, להסיר את Stentor ולהאכיל בהתאם פחות.</td>
			<td>הזנה Stentor 1 מ"ל פחות מזון לכל 100 מ של תרבות.</td>
		</tr>
<tr>
<td>למראה בריא (vacuolated/נפוח או מעוגל) Stentor.
</td>
			<td>להסיר כמה שיותר מדיה ככל האפשר מבלי להסיר תאים Stentor רבים ולהוסיף PSW חדש.</td>
			<td>חילופי המדיה באופן קבוע.</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1. מדריך לפתרון בעיות עבור culturing Stentor.

Ciliate ענק, Stentor coeruleus, היא מערכת מצויינת ללמוד התחדשות ואף ריפוי פצעים. אנו מציגים את הליכי הקמת Stentor תרביות תאים תאים בודדים או שברי תאים, גרימת התחדשות על ידי חיתוך תאים, מבחינה כימית גרימת לרגנרציה של להקת membranellar, המנגנון אוראלי, הדמיה, וניתוח של תא התחדשות.

שיטות המחקר של התחדשות ב- Stentor

Cells need to be able to regenerate their parts to recover from external perturbations. The unicellular ciliate Stentor coeruleus is an excellent model ...

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לגדל סטנטור לשימושם כאורגניזם מודל לחקר התחדשות ברמת התא הבודד. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הביולוגיה של התא כגון כיצד תאים בונים מבנים מחלקים בדידים. היתרונות העיקריים של סטנטור הם שהם תאים בודדים שיכולים להתחדש ושהם גדולים מספיק כדי לבצע עליהם ניתוח.באופן כללי, החלק המאתגר בפרוטוקול זה הוא שאנשים רגילים לעבוד עם תאים כתרביות ולא כאינדיבידואלים. התחל בחיפוש אחר צלחת פטרי המכילה דגימת סטנטור תחת מיקרוסקופ סטריאו באמצעות אור אלכסוני בהגדלה פי 5. שימו לב שתאי סטנטור מציגים צורה דמוית חצוצרה כאשר הם מחוברים למצע.בעוד שהם לא מחוברים, תאי סטנטור שוחים הם פחות מורחבים במראה. בעזרת פיפטה של מיליליטר אחד, העבירו תאי סטנטור בודדים לבאר של צלחת זכוכית המכילה לפחות 100 מיקרוליטר של מי מעיין מפוסטרים זמינים מסחרית. לאחר מכן הסר כ-90% מהמים בבאר מבלי להסיר את תאי הסטנטור והוסף לבאר 500 מיקרוליטר מי מעיין טריים ומפוסטרים לבאר שלוש פעמים כדי לשטוף את התאים.כדי להזין את התאים, העבירו תחילה אליקוט של מיליליטר אחד מתרבית כלמידומונס לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מיליליטר לצנטריפוגה ב-2,095 גרם למשך שלוש דקות בטמפרטורת החדר. השעו מחדש את הגלולה במיליליטר אחד של מי מעיין מפוסטרים לצנטריפוגה שנייה, ולאחר מכן השעיה מחדש ב-500 מיקרוליטר מי מעיין מפוסטרים. אם יש צורך בתרבית סטנטור משובטת, העבירו 500 מיקרוליטר של מדיום מותנה לכל תרבית לבארות בודדות של צלחת ספוט זכוכית והעבירו תא סטנטור אחד לכל באר של מדיום.האכילו כל תרבית סטנטור בחמישה מיקרוליטרים של הכלמידומונס המוכנים כל 48 שעות ושמרו את התרבויות באזור מוצל. ספרו את מספר תאי הסטנטור החדשים לפני כל האכלה והתאימו את נפח הכלמידומונס המועבר בהתאם. כל 96 שעות, פיפטה בעדינות את מדיום התרבית כמה פעמים כדי לנתק את הסטנטור מהמניסקוס של כל באר והשתמש בפיפטה של מיליליטר אחד כדי לשאוב בזהירות את המדיה מהבארות מבלי להסיר תאים.לאחר מכן הוסף 500 מיקרוליטר של מדיה ממוזגת טרייה לכל באר. כאשר מספר התאים בבאר אחת לפחות עולה על 20, הוסיפו 20 מיליליטר מי מעיין מפוסטרים לצנצנת זכוכית מעוקרת עם פה רחב וניתקו בזהירות את תאי הסטנטור מתחתית כל באר כפי שהודגם. אוספים את כל תאי הסטנטור בעזרת פיפטה של מיליליטר אחד ומעבירים בעדינות את התאים לצנצנת הזכוכית.הוסף מי מעיין מפוסטרים טריים לצנצנת כל 48 שעות כדי לשמור על צפיפות הסטנטור לכ-20 תאים למיליליטר והזין את תאי הסטנטור ב-200 עד 1,000 מיקרוליטר של כלמידומונס מוכנים. כאשר נפח התרבית מגיע לכ-90% מקיבולת הצנצנת, העבירו את כל תכולת הצנצנת למיכל זכוכית של שתי כוסות המזינים את תרביות הסטנטור בנפח גבוה שני מיליליטר של כלמידומונס מוכנים לכל 100 מיליליטר תרבית ומוסיפים מי מעיין מפוסטרים לתרבית כל ארבעה עד חמישה ימים כדי לשמור על צפיפות הסטנטור בכ-20 תאים למיליליטר. פעם בשבוע, בדוק את התרביות תחת מיקרוסקופ מנתח פי 5 לאיתור רוטיפרים, פטריות וגידולים אחרים באמצעות פיפטה של מיליליטר אחד כדי להסיר מיקרואורגניזמים מזהמים יחד עם כל תאי סטנטור בעלי צורה חריגה וחסרי צבע.פיצול התרבית כאשר מיכל הזכוכית מלא בכ-90%, הוספת 25 מיליליטר מי מעיין מפוסטרים לתרבית ושימוש בפיפטה של 50 מיליליטר כדי לנתק את הסטנטור מהזכוכית כפי שהודגם. לאחר מכן העבירו כ -50% מהתרבית למיכל זכוכית חדש של שתי כוסות. כדי לגרום להתחדשות על ידי פיצול תאים, השתמש תחילה במושך מחט כדי ליצור מספר מחטים מצינורות נימיים.לאחר מכן, אספו סטנטור בריא אחד עם צורת חצוצרה מוגדרת, צבע כחול-ירוק תוסס וללא ואקואולים גדולים בטיפה של שני מיקרוליטר. הניחו את הטיפה על שקופית והאטו את תנועת הסטנטור עם שני מיקרוליטרים של 4% מתיל צלולוז. הנח את הטיפה מתחת למיקרוסקופ מנתח והחזק את מחט הזכוכית במקביל ככל האפשר למשטח החיתוך כדי למנוע שבירת מחט.לחץ בעדינות על הסטנטור המכווץ עם צד המחט כדי לפצל את הקצה הקדמי של התא מהקצה האחורי של התא. ודא שלשני השברים יש לפחות צומת מקרו-גרעיני אחד והעביר את השברים לבארות בודדות של לוחית ספוט זכוכית. כדי לגרום להתחדשות פס הממברנה ומנגנון הפה, העבירו 30 עד 60 תאי סטנטור במיליליטר אחד של מדיום תרבית לתוך צינור מיקרוצנטריפוגה והשתמשו בפיפטה של 200 מיקרוליטר כדי לאסוף את כל התאים מהצינור במשיכת נפח אחת של 125 מיקרוליטר.הוציאו את התאים לתוך שפופרת המכילה 500 מיקרוליטר של סוכרוז טרי של 25% והפעילו שעון עצר. לאחר סיבוב התאים בצינור במדף למשך דקה אחת, אסוף את כל התאים במשיכה אחת של 200 מיקרוליטר והחזק את התאים בקצה הפיפטה עד ששעון העצר יציג שתי דקות של טיפול בסוכרוז. לאחר מכן הוציאו את הסטנטור לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה המכיל מיליליטר אחד של מי מעיין מפוסטרים לשלוש שטיפות סיבוב.כדי לדמות את ההתחדשות, הוסף 100 מיקרוליטר של מי מעיין מפוסטרים לבאר אחת של צלחת ספוט מזכוכית והשתמש בקצה פיפטה של 20 מיקרוליטר כדי לאסוף תא סטנטור אחד בארבעה מיקרוליטרים של מצע תרבית. הפקידו את הטיפה באמצע כיסוי בגודל 22 על 22 מילימטר רבוע והניחו ארבע טיפות נוספות סביב הטיפה הקודמת. הפוך את הכיסוי והניח אותו בעדינות מעל הבאר עם מי מעיין מפוסטרים.לאחר מכן דמיין את התאים המתחדשים תחת מיקרוסקופ אור ברזולוציית הזמן המתאימה. במהלך השלב הראשון של ההתחדשות, המתרחש מיד לאחר שטיפת הסוכרוז, תאי הסטנטור נראים כמו טיפות דמעות ללא כל פס ממברנה. לאחר שלוש עד שש שעות מופיעה רצועת ממברנה.שלב זה, שלב שני, נמשך עוד שלוש עד ארבע שעות. שלב שלישי מתרחש כאשר פרימורדיום אוראלי מופיע בקצה האחורי של רצועת הממברנה ושני המבנים מתחילים לנוע לכיוון הקצה הקדמי של התא. שלב זה נמשך שעה עד שעתיים.כאשר גם רצועת הממברנה וגם המנגנון האוראלי מגיעים לקצה הקדמי של התא, ההתחדשות הושלמה והתא יאמץ את הצורה האופיינית דמוית חצוצרה של סטנטור. התווה את אחוז התאים בכל שלבי התחדשות בכל נקודת זמן בתרשים קופסה מוערמת. מדידת זמן ההתחדשות לאחר חיתוך תאים וטיפול בסוכרוז מגלה התפשטות של שעה בזמן שלוקח לאוכלוסיית התאים להגיע לשלב מסוים כלשהו, מה שמדגים את ההטרוגניות הזמנית של תהליך ההתחדשות בתוך אוכלוסייה נתונה של תאים מתחדשים.לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד לתרבת את סטנטור וליזום את התחדשותם ולכמת אותה. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להתאזר בסבלנות. לסטנטור לוקח שלושה עד חמישה ימים לחלק את התרבות וזיהוי שלבי ההתחדשות של סטנטור דורש תרגול.טכניקה זו תסלול את הדרך לחוקרי ביולוגיה של התא לחקור את ההתחדשות בסטנטור.

methods-for-the-study-of-regeneration-in-stentor

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

מודל אטרקטיבי עבור הלומדים תא גזע בידול בתוך החי הוא התולעת השטוחה planarian. התחדשות הוא למד על ידי ניסויים פשוטים קטיעה מבוצעים בקלות במעבדה בסיסי הנוחות (תרופתי ו...

מבחני גנטית תרופתי ו פונקציונלית לתפעל התחדשות של Planarian Japonica Dugesia</em

השיטה יעילה השתלת רקמות בגודל מוגדרת ועקבית בין planaria מתואר. היא כללה גם תיאור של איך להשתמש בטכניקה immobilization להשתלה ניתן להתאים, בשיתוף עם מגן עופרת, הקרנה חלקית של בעלי חיים.

Immobilization Planarian, הקרנה חלקית, השתלת רקמות

מודל של השתלת תומכן בעורק התרדמה עכבר מתואר. בהשוואה לשיטות אחרות דומות, הליך זה הוא מהיר מאוד, פשוט ונגיש, ומציע את האפשרות ללמוד בדרך נוחה תגובת קיר כלי דם לסטנטים משחררי תרופות שונים והמנגנונים המולקולריים של restenosis.

דגם Murine של השתלת תומכן בעורק הראשי לחקר restenosis

הריסנית הענקית Stentor coeruleus היא מערכת קלאסית לחקר התחדשות וריפוי פצעים בתאים בודדים. על ידי הדמיית תאי סטנטור בו זמנית בהגדלה נמוכה וגבוהה ניתן למדוד זרימות ציטופלזמיות לפני, במהלך ואחרי פציעה.

הדמיה של זרימה ציטופלזמית במהלך ריפוי פצע של תא בודד ב-Stentor coeruleus

מכיוון שרבי דגמי דג הזברה של מחלות נוירולוגיות ושאינן נוירולוגיות נלמדים בדגים הבוגרים ולא את העובר / זחלים, פיתחנו assay כמותיים לרוחב שורת משובי שניתן ליישם מודלים מחלה דג הזברה מבוגרים. Assay מעורב רזולוציה בneuromast 1) ו 2) רמות תא שיער בודד.

Assay עבור התחדשות קו לרוחב בדג הזברה למבוגר

כאן אנו מציגים פרוטוקול המבוסס על פרוסות חוט השדרה בתרבית על מערכים רב-אלקטרודה ללמוד התחדשות פונקציונלית של קשרי propriospinal במבחנה.

חוקר התחדשות פונקציונלית בחוט השדרה שיתוף תרבויות Organotypic גדלו על מערכים רב-אלקטרודה

פרוטוקול וידאו שלב אחר שלב של כריתה אפיקלית מודגם במחקר זה. כריתה אפיקלית היא גישה כירורגית שהודגשה לאחרונה במחקר התחדשות לב של יונקים. מחקר זה עשוי לקדם את היישום של כריתה אפיקלית כמתודולוגיה סטנדרטית במחקר על המנגנון העומד בבסיס התחדשות הלב.

דגם פסגת כריתת עכבר כדי ללמוד התחדשות לב יונקים מוקדמת

כאן אנו מדגימים כיצד לגרום ולנטר התחדשות בשושנת ים הכוכב Nematostella vectensis, מודל אנתוזואן קנידרי.  אנו מדגימים כיצד לקטוע ולסווג התחדשות באמצעות מערכת בימוי מורפולוגית, ואנו משתמשים במערכת זו כדי לחשוף דרישה לאוטופגיה בהתחדשות מבני פוליפ.

התרמת התחדשות פוליפ שלמה מן Aboral Physa של שושנת ים הכוכבת Nematostella vectensis

אנו מציגים פרוטוקול לאפיון תנועתיות והתנהגות של אוכלוסייה של תאים בגודל של מאה מיקרון עד מילימטר באמצעות מיקרוסקופיית שדה בהיר ומעקב אחר תאים. בדיקה זו מגלה כי Stentor coeruleus עובר דרך ארבעה שלבים שונים מבחינה התנהגותית כאשר הוא מחדש מנגנון אוראלי אבוד.

ניתוח דפוסי תנועתיות של סטנטור במהלך ואחרי התחדשות מנגנון הפה באמצעות מעקב אחר תאים

כאן אנו מתארים את זרימת העבודה לשימוש במערכת TetON להשגת ביטוי גנים ספציפי לרקמה בסנפיר הזנב המתחדש של דג הזברה הבוגר.

שימוש במערכת טיטון לחקר מולקולרי מנגנוני התחדשות דג הזברה

למד שיטות לגידול וחקירת התחדשות תאית ב-Stentor coeruleus באמצעות טיפול בסוכרוז וניתוח תאים. פרוטוקול זה מספק מסגרת מחקרית לביולוגיית תאים ברמת התא הבודד.

שיטות המחקר של התחדשות ב- Stentor

גלה סרטונים נוספים