עקיבה ביטוי גנים דרך זיהוי של β-galactosidase פעילות ב עכבר כל העוברים
June 26th, 2018
כאן נתאר הפרוטוקול הסטנדרטי איתור פעילות β-galactosidase מוקדם העכבר כל העוברים ואת שיטת העבודה פרפין חלוקתה ולא counterstaining. . זה הליך קלה ומהירה כדי לפקח על ביטוי גנים במהלך פיתוח שניתן להחילם גם על מקטעים של רקמות, איברים או תאים בתרבית.
שיטה זו יכולה לענות על שאלות מפתח בתחום הביולוגיה ההתפתחותית כגון חקר דפוסי ביטוי גנים במהלך ההתפתחות העוברית. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא רגישה ביותר, קלה ומהירה לביצוע ומאפשרת הדמיה ישירה של הצביעה בכל רקמת ההרכבה או ברזולוציה גבוהה יותר לאחר חיתוך פרפין של הדגימה. ידגימו את ההליך ד"ר מריה חוזה בלנקו, ד"ר אנבל ליארטה, ד"ר אמה מוניוז וד"ר מיגל מרצ'נה. התחל בדגירת עוברים טרנסגניים קבועים בגלוטראלדהיד המבטאים גלקטוזידאז במאגר שטיפה X-gal טרי שהוכן למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. השתמש בעוברים מסוג בר כבקרות שליליות לתגובה האנזימטית. לאחר מכן, החלף את מאגר השטיפה בתמיסת צביעה X-gal ב-pH 8-9.הגן מפני אור ודגר למשך שעתיים עד לילה ב-37
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
סקירה
מאמר זה מתאר פרוטוקול סטנדרטי לזיהוי פעילות β-galactosidase בעובר עכבר שלם מוקדם. השיטה היא ישרה וניתן ליישמה על דגימות ביולוגיות שונות, כולל חתכי רקמות ותאים מתורבתים.
מרכיבי מחקר עיקריים
תחום המדע
- נוירומדעים
- ביולוגיה התפתחותית
- ביטוי גנים
רקע
- β-galactosidase הוא גן דיווח נפוץ.
- מעקב אחר ביטוי גנים הוא קריטי במהלך התפתחות עוברית.
- הפרוטוקול מאפשר ויזואליזציה קלה של פעילות גנים.
- ניתן להתאים לתחומים ביולוגיים שונים.
מטרת המחקר
- לספק שיטה אמינה לזיהוי ביטוי גנים.
- לסייע במחקר בביולוגיה התפתחותית.
- להעצים את ההבנה של תהליכי התפתחות עוברית.
שיטות ששימשו
- זיהוי פעילות β-galactosidase.
- חתך פרפין של עוברים.
- טכניקות צביעה נגדית לצורך ויזואליזציה.
- יישום על סוגי רקמות שונים.
תוצאות עיקריות
- זיהוי מוצלח של β-galactosidase בעובר עכבר.
- הוכחה ליישומיות לדגימות ביולוגיות שונות.
- מספק פרוטוקול מהיר ויעיל לחוקרים.
- שיפור מעקב אחר ביטוי גנים במהלך התפתחות.
מסקנות
- הפרוטוקול יעיל לחקר ביטוי גנים.
- ניתן להשתמש בו במגוון סביבות מחקר.
- תורם לפיתוחים במחקר בביולוגיה התפתחותית.
שאלות נפוצות
Chapters in this video
0:04
Title
0:49
β-galactosidase Histochemistry of Whole Mount Mouse Embryos
2:23
Paraffin Embedding of X-gal Stained Embryos
4:37
Paraffin Sectioning
5:44
Deparaffinization and Counterstaining
6:56
Results: X-gal Staining of E9.5 WT and Mt4-mmpLacZ/ Whole-mount Embryos and Tissue Sections
7:52
Conclusion
