עם מודאלים מרובים נפח הרשתית הדמיה על ידי עקיפה סריקת לייזר Ophthalmoscopy (אוסלו) ו טומוגרפיה אופטית קוהרנטית (אוקטובר)

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לקבל תצוגה של שדה גדול (FOV) תלת מימדי (3D) זריחה התמונה ברשתית OCT באמצעות פלטפורמה הרומן עם מודאלים מרובים הדמיה. אנחנו תציג בהגדרת המערכת, השיטה של יישור ו הפרוטוקולים מבצעית. דימות in vivo תודגמנה, התוצאות נציג יסופק.

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום רפואת העיניים והדמיית הרשתית. כגון הדמיה וכימות של הפרעה במחסום הדם-רשתית ותפקודי נימי הרשתית. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא יכולה להשיג שדה ראייה גדול, הדמיית רשתית תלת מימדית ורב-ניגודיות באמצעות לייזר סריקה אלכסוני בסריקת רסטר אחת בודדת.

ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על אבחון רטינופתיה סוכרתית ומחלות טרום רשתית אחרות. מכיוון ש-oSLO יכול לקבל תמונות בעלות ניגודיות גבוהה של מיקרו-כלי דם ברשתית, עד לנימים בודדים בתלת מימד. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי הדמיית רשתית, ניתן ליישם אותה גם על מערכות הדמיה אחרות באמצעות עדשות אובייקטיביות קונבנציונליות.

כגון הדמיה in vivo של קליפת העכבר. מקור לייזר סופר-רציף משמש כמקור לייזר המערכת עבור אופטלמוסקופיית לייזר סריקה אלכסונית, או הגדרת oSLO. תחום האור הנראה מופרד מתחום אורכי הגל הגבוה יותר על ידי המראה הדיכרואית הראשונה.

ספקטרום האור מורחב עם זוג מנסרות פיזור, לאחר שהקרן עוברת דרך מפצל קרן קיטוב. חריץ משמש לבחירת טווח אורכי הגל של העירור. ומראה רפלקטיבית מחזירה את האלומה המסוננת בחזרה לזוג המנסרות כדי לחבר את האור לסיב חד-מצבי.

ספקטרומטר משמש לאישור בחירת אורך הגל בפלט של סיב המצב היחיד. הסיב במצב יחיד מחובר לשני מצמדי סיבים אופטיים מדורגים. אחת מיציאות פלט הסיבים ממצמד הסיבים השני מספקת את האור למערכת ה-oSLO.

כדי לכוונן את הלייזר במערכת ה-oSLO, הלייזר מוסט על ידי מראה גלוונומטר. מערכת טלסקופ אחד לאחד מעבירה את הלייזר למראה גלוונומטר שנייה, ומערכת טלסקופ של שלושה לאחד מעבירה את הלייזר לאישון העין. מראה דיכרואית בתוך מערכת הטלסקופ של שלושה לאחד משקפת את האותות הפלואורסצנטיים.

מערכת הטלסקופ של שלושה לאחד והמראה הדיכרואית מותקנות על מחוון זנב יונה מותאם אישית כדי לקזז את הציר האופטי וליצור את תאורת הסריקה האלכסונית. התאורה האלכסונית מאפשרת הדמיה פלואורסצנטית נפחית ללא צורך בחיתוך. על ידי קיזוז הלייזר, קרן אלכסונית ממוקדת ברשתית, ואז הזיהוי האלכסוני יכול ללכוד תמונה פלואורסצנטית טומוגרפית לאורך נתיב האלומה האלכסונית.

כדי ליצור את הנתיב האופטי של הדמיית הקרינה, הקרינה משתקפת על ידי המראה הדיכרואית ומועברת למראה הגלוונומטר השלישית. לאחר מכן, האור הפלואורסצנטי מועבר לעדשת אובייקט הדמיה על ידי מערכת טלסקופ אחרת אחד לאחד. שני שלבי תרגום נוספים מותקנים מתחת למראה הגלוונומטר השלישית כדי לספק יתירות בדרגות החופש לאופטימיזציה של התמונה.

מערכת ההדמיה הסופית מותקנת על במה בעלת שלוש דרגות חופש. סיבוב, ושני צירי תרגום. מצלמה מישורית משמשת לצילום תמונות הקרינה בחתך.

מראה דיכרואית נוספת מפרידה בין תחום האינפרא אדום האחורי לבין האור שנותר. מסנן מעבר ארוך משמש כדי להגביל עוד יותר את רוחב הפס ל-800 עד 900 ננומטר. חבר את הקורה לסיב במצב יחיד.

הסיב במצב יחיד מחובר ליציאת הכניסה השנייה של שני מצמדי הסיבים האופטיים המדורגים כדי לשלב עם עירור ה-oSLO הכחול. האור מיציאת הפלט השנייה של מצמד הסיבים השני מופנה לזרוע הייחוס של OCT. שיש לו לוחות פיצוי פיזור, מסנן צפיפות ניטרלית משתנה ומראה רפלקטיבית.

האור המוחזר מזרוע הייחוס והעין מתחבר מחדש במצמד הסיבים האופטיים השני, ומועבר לספקטרומטר OCT כדי לאסוף את האות. השתמש בתוכנת מערכת איסוף נתונים שנכתבה ב-Labview ושונתה מפרוטוקול הסריקה OCTA. עבור כל סריקת b, שן מסור במחזור עבודה של 80% עם 500 שלבים מופקת על ידי לוח פלט אנלוגי כדי לשלוט במראה הסריקה המהירה x-prime.

הפעל את מצלמת סריקת הקו בכל שלב כדי להשיג נתונים עבור ה-OCT, רק כאשר המראה נמצאת בכיוון הסריקה קדימה. הגדר את זמן החשיפה של מצלמת סריקת הקו ל-17 מיקרו-שניות. כדי לרכוש את אות ה-OCTA, חזור על המדידה חמש פעמים באותו מיקום סריקת b.

הגדר את קצב הפלט של AO ל-100 קילו-הרץ, ואת קצב ה-OCT A-line ל-50 קילו-הרץ. שלוט במראה הסריקה האיטית של y-prime, GM1, על ידי צורת גל משתוללת. סנכרן את מראה הסריקה, GM3, עם GM1 כדי לסרוק את הסריקה האיטית.

הפעל את המצלמה המישורית על ידי לוח פלט אנלוגי אחר כדי לצלם תמונה פלואורסצנטית אחת בכל מיקום y-prime. חתוך את גודל ההדמיה או סל את הפיקסלים השכנים כדי להגביר את המהירות והרגישות כרצונך. התחל באישור רמת הרדמה מתאימה בחולדה על ידי היעדר רפלקס נסיגה במהלך צביטה תוך דיגיטלית.

לאחר השראת הרדמה, הנח את החולדה על מחזיק. התקן חרוט אף כדי לשמור על ההרדמה במהלך שארית הניסוי. יש למרוח תמיסת עיניים 5 טטרקאין הידרוכלוריד על עין החולדה להרדמה מקומית.

לאחר מכן יש להרחיב את האישון עם תמיסת עיניים טרופיקמיד 1%. לאחר שתי דקות של הרחבה, השתמש במזרק של מיליליטר אחד ובמחט בגודל 29 כדי להזריק 10% פלואורסצאין או 10% FITC מדולל במי מלח דרך וריד הזנב. לאחר מכן הפעל את מקור הלייזר, והנח מסנן צפיפות ניטרלית כדי להחליש את עירור האור הכחול במהלך היישור.

מדוד את עוצמת האור הכחול, וודא שהוא פחות מ-10 מיקרו-וואט. לאחר מכן עבור לנורת טומוגרפיה קוהרנטית אופטית, וודא שהוא קרוב ל-8 מילי-וואט. הפעל את ספק הכוח למראה הגלוונומטר, המשמשת לשליטה בכיוון הלייזר.

התאם את גובה גלגל העין כדי ליצור נקודת לייזר נייחת על הקרנית. כוונן את מיקום העין כדי להפוך את שפת האישון לניצב בערך ללייזר. וקיזז את הלייזר לכ-1.5 מילימטרים מהמרכז האפיקלי של העין.

כוונן עוד יותר את מחזיק החיה עד שתמונות הטומוגרפיה הקוהרנטיות האופטית יגיעו לאיכות אופטימלית. בכיוון הסריקה המהירה של x-prime, ודא שתמונת סריקת ה-b-scan בחתך נראית שטוחה. בעת מעבר לכיוון הסריקה האיטית של y-prime, ודא שתמונת סריקת ה-b-scan בחתך הרוחב נראית מוטה עקב הסריקה האלכסונית.

הסר את מסנן הצפיפות הנייטרלית לעירור האור הכחול. ולעקוב אחר ההזנה בזמן אמת מהמצלמה. אמורה להופיע תמונה פלואורסצנטית בחתך המציגה כלי דם בעומקים שונים.

כוונן את המיקוד של מערכת ההדמיה הקרינה הסופית כדי להגיע למיקוד האופטימלי. ובצע התאמות עדינות של מיקום העין במישור הצדדי כדי להגיע לאיכות תמונה אופטימלית של אופטלמוסקופיה בלייזר סריקה אלכסונית. לאחר היישור, התחל לרכוש בו זמנית טומוגרפיה קוהרנטית אופטית ואנגיוגרפיה פלואורסצאין נפחית.

תמונה זו מציגה תמונת טומוגרפיה קוהרנטית אופטית חתך של רשתית חולדה. זוהי אנגיוגרפיה של טומוגרפיה קוהרנטית אופטית, או תמונת OCTA, של אותו אזור. ואופטלמוסקופיה לייזר סריקה אלכסונית ואנגיוגרפיה פלואורסצאין נפחית אנגיוגרפיה פלואורסצאין חתך אנגיוגרפיה, או oSLO-VFA.

אנלוגי לטומוגרפיה קוהרנטית אופטית b-scan. בהשוואה ל-OCTA, תמונת החתך של לייזר סריקה אלכסונית ותמונת חתך פלואורסצאין נפחית מזהה בבירור את הנימים בשכבת הפרספקס החיצונית. השכבה השטחית של הרשתית מוצגת כאן בתמונת OCTA.

חפצים בצורת פסים אנכיים נראים בתמונה. oSLO-VFA נמנע מחפצי התנועה על ידי שימוש בניגודיות פליטת פלואורסצנטיות. בתוך שכבת הביניים של הרשתית, כלי הצלילה האנכית מוצגים בבירור בתמונת oSLO FA.

אבל לא ניכר ב-OCTA. בעת ניסיון הליך זה, חשוב להימנע מחשיפת לייזר מתמשכת לעין למשך יותר משתי דקות. הימנע מייבוש הקרנית, ואפשר לעין לנוח לפחות 30 שניות בין קטעי ההדמיה על ידי חסימת האור.

בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו הדמיית עכברים מהונדסים גנטית כדי לבטא חלבונים פלואורסצנטיים על מנת לענות על שאלות נוספות. כמו האופן שבו סוגי תאי רשתית ספציפיים יכולים להשתנות, והמשתנים הנראים בעבר עם מחלות ידועות.