Name: הערכת הבריאות מבוסס necropsy דגים פראי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: למדו הערכת בריאות דגים מבוססת נקרופסיה לניטור מערכות אקולוגיות מימיות באמצעות דגי בר. שיטה זו מאפשרת איסוף רקמות להיסטופתולוגיה וניתוח ביטוי גנים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומן על ידי מערכות אקולוגיות הגיאולוגי של ארה של (סביבות מפרץ צ'ספיק, חלוצת) ואת תוכניות בריאות וסביבה (מזהמים בביולוגיה) מערב וירג'יניה מחלקת משאבים טבעיים. השימוש שמות מסחריים למטרות זיהוי בלבד, מעיד על ידי ממשלת ארה ב.

השיטות המתוארות כאן אושרו על-ידי של מרכז מדע Leetown אכפת לי חיה המוסדית והוועדה שימוש.
1. אוסף דגים
<ol><li>לאסוף את הדגים בשידור חי עם מינימום של מתח. השתמש electrofishing סירה או תיק גב, הוק, קו או רשתות.</li>
	<li>להחזיק דג בארות בשידור חי או מכולות קצף עד הדגימה. הערה: האגודה האמריקנית חלוצת פרסם מספר מדריכים עבור אוסף דגים, טיפול, הרדמה/המתת חסד26,27,28. ללבוש כפפות בעת טיפול דגים.</li>
</ol>2. דגים Necropsy
<ol><li>
המתת חסד דג.
	<ol>
<li>מקום דגים ההרדמה עד התנועה opercular מפסיק ואת הדג מאבד שיווי משקל. אחרי עוד 2 – 10 דקות המתה הדג; עם זאת, זה יכול גם להשתנות על ידי מינים. הערה: דגים יכול להרדימם עם מספר רב של חומרי הרדמה (ראה טבלה של חומרים עבור הנפוץ ביותר). השיטה של המתת חסד תלויות המידה מעבדה ייערך על רקמות שנאספו29.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
למדוד המאפיינים הביומטרים.
	<ol>
<li>שוקלים את הדגים גרם הקרוב.</li>
		<li>למדוד את אורך דג מילימטר הקרוב.<ol>
<li>למדוד את האורך הכולל מהקצה של החוטם בפה סגור עד הסוף של הזנב כאשר צבט ביחד.</li>
			<li>למדוד מזלג אורך של המזלג הזנב עד הקצה החוטם, ואת האורך הסטנדרטי מהקצה של האף עד הסוף של הגוף (תחילת הזנב).</li>
		</ol>
</li>
		<li>לחשב את גורם תנאי שימוש בנוסחה הבאה: המצב גורם = (משקל הגוף הכולל - משקל בלוטת המין) / סה כ אורך3. הערה: בלוטת המין משקל יופחת ממשקל הגוף הכולל מאז בלוטות המין יכול לתרום באופן משמעותי משקל הגוף הכולל, בעיקר בדגים הנשי prespawn.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
להשיג דגימת דם. הערה: הדם נלקח בדרך כלל הווריד סימטרית אבל יכול גם להיות מופנמים של העורקים הגבי או על ידי לב לנקב30.<ol>
<li>לחלץ דגימת דם היקפיים הווריד סימטרית עם מחט G 22 או 23 על מזרק 1 ל 5 מ"ל, תלוי בגודל הדג. הכנס את המחט והשתרשה עמוק בלבה האזור סימטרית מתחת לקו לרוחב (איור 1A ו 1B). זווית כלפי מעלה עד מפגיעה בעמוד השדרה, ואז לסגת מעט. הווריד הוא הגחון לעמוד השדרה שמעליה. הערה: אם יבוצעו בדיקות דם או סרום הוא נדרש, אין קרישה. ברוב המקרים, פלזמה ייאספו, לפיכך, נוגדת קרישה כגון הפארין נתרן, EDTA או ליתיום משמש כדי להרגיע את מחט, מזרק, והוא גם בצינור איסוף דם (למשל, האגירה).</li>
		<li>הסר את המחט ולמקם לתוך מכולה סילוק שרפ לפני שמוציאים את הדם לתוך הצינור אוסף. הערה: דם יכולים להיות מוחזקים על קרח, אך בהתאם ניתוחים הבאים צריכים להיות centrifuged בהקדם האפשרי30.</li>
		<li>אם הגרעין ליקויים או ספירת דם מבדלת יוערך, מיד במקום טיפה של דם על שקופיות מיקרוסקופ זכוכית נקי כפולים. חזרה שנייה החלק בזווית של 45 מעלות לתוך הטיפה, אשר לאחר מכן נמשך על פני השטח על ידי נימיות. מאפשרים מילה נהדרת.31.</li>
		<li>Centrifuge דם ב x 1,500 – 2,500 g למשך 15 דקות כדי משקעים התאים. הסר פלזמה/סרום עם העברת עקר pipet, aliquot לתוך מבחנות הקפאה, ולאחסן ב-80 מעלות צלזיוס.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig1.jpg"> איור 1 : קבלת דגימת דם דגים. (א) א לאחרונה מורדמים דגים מונח בצד שלה ואת הקו לרוחב ממוקם. (B) A המחט הוא שנוסף הגחוני / לאלתר קו (חץ), בזווית כלפי מעלה עד נוגע המחט את עמוד השדרה. זה ואז נסוגה מעט, שאיבה יזם לסגת דם. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<ol start="4"><li>
התנהגות הערכה מבוססת-necropsy הבריאות על כל דג. הערה: מספר פרסומים הממחישות המתארת נגעים ואת העיוותים הם זמינים32,33,34,35.<ol>
<li>המסמך מומים חיצוניים כולל נגעים על פני הגוף, סנפירים (איור 2), העיניים זימים (איור 3), טפילים חיצוניים כמו עלוקות (איור דו-ממדי), זחלים או ציסטות trematode metacercarial (איור דו-ממדי, 3B), גיל טפילים (דמות תלת-ממד). המסמך סוג, מיקום וגודל חריגות שנצפו על גליונות נתונים, כמו גם כמו בתצלום, במידת האפשר.</li>
		<li>פתח את חלל הבטן (איור 4A) באמצעות מספריים על-ידי גזירה מן האזור אנאלי operculum ולאחר מכן להסיר את מדף שריר לחשוף את האיברים הפנימיים. הערה: אם הכליה הקדמי ייאספו עבור החיסונית לתפקד (ראה שלב 5 להלן) או הדגימות שנאספו עבור בדיקות או וירולוגיה, פני גוף חיצוני צריכים להיות נקיים עם אלכוהול 70% הדגימות צריכה להתקבל לפני לבצע necropsy. אם רקמות רק בשימוש עבור תצפיות חזותיות, פלזמה ניתוחים סטרילי טכניקה histopathology אינה נחוצה.</li>
		<li>מסמך פנימי חריגות (איור 4) כולל כתמי כללי או מוקד של האברים השונים (איור 4B-4D), נוכחות של הרים באזורים (איור 4E), ציסטות, טפילים, ושנה את גודלה (מומים מוגדלים, מתנוונים).</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig2.jpg"> איור 2 : דוגמאות של נגעים גלוי שנצפו על פני הגוף וסנפירים של דגים. (א) A קטן, מעט שחוק הנגע (חץ) על פני הגוף לרוחב. (B) A גדול אדומות באזור (חץ) המערבים את פני השטח של הגוף סימטרית. (ג) מוגבהת, נגעים שחור (חיצים) על פני הגוף, סנפירים. עלוקות (D) (חץ לבן), כתמים שחורים קטנים (חיצים שחורים) על הפרק. סרגל קנה מידה = 3 מ מ. (E) A מורמות, multilobed, חיוור הנגע (חץ) על פני הגוף. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig3.jpg"> איור 3 : דוגמאות של נגעים גלוי של הזימים ועיניים של דגים. (א) A חיוור שטח (חץ) בתוך העדשה של העין. סרגל קנה מידה = 5 מ מ. (B) לבן ציסטות (החצים הלבנים), כתמים שחורים קטנים (חיצים שחורים) הנגרמת על ידי טפילים trematode על operculum מכסה הזימים (א). סרגל קנה מידה = 1 ס מ. (ג) A חיוור, בירוא אזור (חץ) גיל (א). סרגל קנה מידה = 5 מ מ. (D) גיל זה הוסר מציג טפילים (חיצים) המצורפת חוטים גיל. סרגל קנה מידה = 2 מ מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig4.jpg"> איור 4: דוגמאות necropsy של מומים פנימיים של דגים. (א) במהלך necropsy הדג נחתך פתוח (לאורך החץ הלבן) והוסרו דש של השריר (חץ שחור) לחשוף את בלוטת המין (א) והטחול, מוחזק על ידי מלקחיים ומספריים. (B) מנומרים הכבד (א), האשכים (b), המעי מוקף אדיפוז ושומן (ג) הקיבה (ד). סרגל קנה מידה = 5 מ מ. (ג) בכבד (א) עם אזור אדום כהה (חץ), שחלה (b), המעיים (c). סרגל קנה מידה = 5 מ מ. (D) כבד עם אזורים ירקרק דהוי (חיצים). סרגל קנה מידה = 1 ס מ. (E) דוגמה רגיל (א) ועל האשכים (ב) לא נורמלי עם הרים גושים. סרגל קנה מידה = 1 ס מ. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<ol start="5"><li>
להשיג hepatosomatic אינדקס (מצב HSI).
	<ol>
<li>להסיר את הכבד על ידי ניתוק עורק הכבד ואת רקמת החיבור של הקצה הקדמי. הרם בעדינות החוצה תוך כדי חיתוך הדבקויות וחיבורים אחרים כדי המעי ושומן אדיפוז. לטפל כדי לא לנקב את כיס המרה. שוקלים את הכבד. הערה: דגים מסוימים, כגון cyprinids, לא יש בכבד דיסקרטית אבל מעדיף הכבד הרקמה העוטפת את המעיים ואיברים אחרים. עבור מינים אלה, לא ייתכן ניתן לקבל משקל כבד.</li>
		<li>לחשב מדד hepatosomatic (מצב HSI) תוך שימוש בנוסחה: מצב HSI = משקל הגוף כבד משקל/סה כ</li>
	</ol>
</li>
	<li>
חישוב מדד gonadosomatic.
	<ol>
<li>הסר את בלוטות המין, שוקל אותה.</li>
		<li>לחשב מדד gonadosomatic (GSI) תוך שימוש בנוסחה: GSI = בלוטת המין משקל/סה כ משקל הגוף</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. לשמר את רקמות עבור מחלה מיקרוסקופית
הערה: מספר כתות ומייצבים כולל פורמלין במאגר נייטרלי 10% ו- Z-fix, מקבע מבוססי פורמלין עם אבץ, ניתן להשתמש לשימור רקמות בשטח. האחרון הוא המועדף אם ייעשה שימוש בשיטות כגון בחיי עיר הכלאה או נוגדן פלורסנט מכתים.
<ol><li>בזהירות לחתוך אבל אין למשוך דגימות רקמה. להשאיר חתיכות רקמה בודדים &lt; 2 ס מ גודל ו- &lt; 5 מ מ עבה עבור קיבוע נאות. כלל אצבע, השתמש בערך 10 x לשבועיים נוספים לפי נפח מאשר הרקמה לשימור נאותה. מקם כל דגימות רקמה של דג אחד באותה אריזה עמיד בפני נזילה בגודל המתאים, בהתאם לגודל הדגים להיות שנדגמו.</li>
	<li>המקום פיסות של חריגות חיצוני בתוך המיכל מקבע. בנוסף, כוללים המניח פיסת רקמה נורמלית סמוכים. הערה: טיפול כגון דחיסה או נזק מכני אחר, חשיפה ארוכה אויר או אור השמש, פסולים ובלתי קפוא יכול לגרום חפצים.</li>
	<li>לחתוך חמש לפחות 3-4 מ מ עבה חתיכות הכבד מאזורים שונים ולמקם לתוך המיכל מקבע. כוללים אזורים תקינה ולא תקינה, אם שנצפו.</li>
	<li>בהתאם לגודל, למקם בלוטה כולו או חלקים מרובים לאורך בלוטת המין אחד לתוך המיכל מקבע.</li>
	<li>מקם כל האיברים, אם קטן או חתיכות של כל שאר האיברים (טחול, כליות anterior ואת אחורי, זימים, הלב, המעי, בטן) בתוך המיכל מקבע. אם נוצרת רקמה נורמלית, לשמר המניח פיסת רקמה נורמלית כמו גם סמוכים.</li>
</ol>4. להסיר את Otoliths עבור ניתוחים גיל
הערה: גיל יכול להיות משתנה חשוב בלימודי בריאות מחלה/דגים דגים. בעוד מספר מבנים, כולל סולמות, קוצים, שימשו לקביעת גיל, רוב המחקרים השוואת מבני גילו את otoliths לתת את הטוב ביותר תוצאות36,37. הדגים teleost יש שלושה זוגות של otoliths - lapillus, אקסלסיור, כוכב. באופן כללי, otoliths הווריד או lapillus נאספים להזדקנות למרות שזה עשוי להשתנות על ידי מינים. טכניקות להסרת והזדקנות כבר שתואר לעיל38.
<ol><li>לחתוך דרך המצר גיל, לכופף את הראש בחזרה. רצועת משם חיבור ושרירי הרקמה סביב פרשת נחות neurocranium לאתר prootic ריהוט יוקרתי שרוף, אזור מוגבה גרמית.</li>
	<li>ניקוד או לחתוך עם עצם חותכני ולהיסדק לחשוף את otoliths. הם ניתן לראות בעין בלתי מזוינת.</li>
	<li>מקום otoliths בקבוקון עם תוויות ברורות או מטבע המעטפה וחנות בטמפרטורת החדר עד ניתח גיל על ידי ספירת טבעות או התוספות הקבועות הנובעות38. אם הנחת בקבוקון, פתח את הכובע פעם חזר למעבדה וגם תאפשר ביסודיות יבש לפני האחסון.</li>
</ol><img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig5.jpg"> איור 5 : הסרה של otoliths. (א) המצר נחתך ומשך רקמת חיבור, שרירים כדי לחשוף את בסיס עמוד השדרה ואזור neurospinal. (B) העצם נסדקה לחשוף את otoliths. Otoliths Lapillar (ג) יוסרו. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
5. לקבל את רקמות עבור מבחני תפקוד מערכת החיסון
הערה: הכליה הקדמי הוא האיבר hematopoietic הגדולות, המקור של לימפוציטים ו מקרופאגים עבור מבחני פונקציונלי, ויש להסירו גילוח ורחיצה כירורגית אם התאים תרבותי עבור מבחני פונקציונליות, כגון mitogenesis, phagocytic ויכולת הריגה של מקרופאגים39,40.
<ol><li>תרסיס על המשטח החיצוני של הדג עם 70% אתנול. להשתמש במספריים סטרילי, אזמל, מלקחיים פתיחת חלל הבטן ולהסיר את רקמת הכליה הקדמי, אשר הוא איבר אדום כהה ממוקם והשתרשה עמוק בלבה השלפוחית.</li>
	<li>מקום המדגם כליות הקדמי מדיה (L-15למשל, של ליבוביץ) כדי לשמור את התאים בחיים. Homogenize כליה דגימות עם מטחנה רקמת כף יד סטרילי (למשל, Tenbroeck רקמות grinder) לתוך תא בודד המתלים. החזק על קרח רטוב עד חזר למעבדה.</li>
</ol>6. לשמר את רקמות עבור ניתוחים חומצות גרעין
הערה: אם מטה אנליזה מולקולרית יבוצעו, כגון גנים באמצעות פרוטוקול שפע41 או ה-PCR כמותי42 (תגובת שרשרת של פולימראז), מקם את פיסות רקמה לפנות לבדיקה של חומר משמר המתאים ( למשל, RNAlater מייצב פתרון) בהקדם האפשרי.
<ol><li>לשימור RNA, מקום 2-3 חתיכות קטנות (2-3 מ מ) משמר המתאים בבית 10:1 יחס של שימור נפח לרקמה. הערה: צריך להיות מוגן מאור השמש או חום עודף ודוגמאות מועבר על קרח רטוב.</li>
	<li>לשימור דנ א, למקם 2-3 חתיכות קטנות של רקמות 95% אתנול (10:1 אתנול לרקמות לפי נפח). אז תחזיק את הדגימות קרח רטוב ולאחר מכן אחסן ב-20 ° C.</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

המבדק מבוסס necropsy של בריאות דגים יכול להיות מנוצל על כל מיני דגים עבורו החוקר יש הבנה של הופעה רגילה של מבנים חיצוניות ופנימיות. שימוש בגישה מתוקננת מאפשרת השוואות בין אתרים, מינים, כמו גם שינויים עונתיים, זמני באוכלוסיה. הממצאים ניתן לזהות תופעות הקשורות נקודת ומקורות nonpoint של מזהמים, ליידע את פעולות ניהול. זה יכול לשמש גם כדי לעקוב אחר שיפורים לאחר פעולות ניהול מבוצעים. ניתן לשנות את המתודולוגיה להעצמת תיעוד חזותי מומים חיצוניים במגוון דרכים. הערכות, בהתבסס רק על תצפיות חזותיות, יכולים להיות קטלניים, זול יחסית, ניתן להפיק נתונים במהירות עבור מספר גדול של אנשים. כתוצאה מכך, הם עשויים להיות שימושיים עבור הערכות גישוש או הראשונית, לעקוב אחר שינוי לאורך זמן או בשילוב עם סממנים אחרים. אם המשקל של דגים לאורכה נמדדים במהלך תצפיות חזותיות, הגורם תנאי גם ניתן לחשב. למרות הערכות מבוסס רק על התצפית הויזואלית אינם מספקים מידע על הגורם או גורמי סיכון הקשורים, מגמות לטווח ארוך של ליקויים מסוימים העור45 ו פרמטרים ביומטרי46 הראו שיפור באזורים מסוימים הקשורים שיפורים באיכות המים.
המבדק מבוסס-necropsy מספק מידע נוסף כמו איברים פנימיים נבדקים גם גורמים אחרים למצב כמו hepatosomatic אינדקס ואינדקס gonadosomatic יכול להיות מחושב. Goede ו ברטון22 פיתח שיטה necropsy השדה לכלול פרמטרים דם, גורמים ביומטרי, את אחוז חריגות, ואת ערכי אינדקס עבור ליקויים ספציפיים. עידון של השיטה כללה דירוג סיכון עבור משתנים מסוימים שמותר עבור חישוב של אינדקס הערכת בריאות זה יכול להיות מבחינה סטטיסטית לעומת23. אינדקס הערכת בריאות זה שימש האתר האזורי השוואות23,47,48 , בשילוב עם אינדיקטורים ביולוגיים אחרים לרבות פלזמה וניתוחים histopathological הגיאולוגי ארה ב הסקר אפידמיולוגיה סביבתית של מצב סביבתי, מגמות תוכנית הערכת ההשפעות האפשריות של מזהם חשיפה בנהרות גדולים בפריסה ארצית49,50,51. אינדקס מחלות דגים בהתבסס על מחלות חיצוני, טפילים, גלוי neoplasms הכבד ושאר histopathologically זוהה נגעים בכבד פותחה, שימוש נרחב ב ים הצפוני, הים הבלטי, ומחוץ איסלנד. אינדקס זה נמצאה להיות כלי חשוב כמו מחוון בריאות52המערכת האקולוגית.
ישנם כמה גורמים קריטיים בביצוע המבדק מבוסס necropsy על דגים. ראשית, הערכות להתבצע על דגים מיד לאחר המוות. שינויים בצבע איברים, עקביות יכול להתרחש די במהירות לאחר המוות. בנוסף, כמה טפילים עשויים להשאיר את המחשב המארח זמן קצר לאחר המוות. שנית, חשוב לדעת מה זה נורמלי עבור המינים של ריבית. למשל, כמה דגים בדרך כלל יש שומן, כתוצאה מכך, חיוור כבדים, בעוד רוב כבד חיוור יהיה חריג. זה חשוב גם לזהות שינויים עונתיים המתרחשים באופן טבעי. דגים מסוימים שינויי צבע או לפתח גידול tubercles במהלך עונת ההשרצה.
המגבלות של המבדק מבוסס-necropsy כמו שיטה להערכת בריאות דגים כוללים חוסר היכולת בעקביות 1) לזהות את "הגורם" נגעים ספציפיים, 2) לזהות תופעות יהיה בלתי נראה לעין בלתי מזוינת. מחסרונות אלה ניתן להתגבר עם התוספת של histopathology, זיהוי מולקולרי או תרבותית של פתוגנים טפילים, ואת ביטוי גנים. למשל, "גידול" או מוגבה הנגע (נפיחות) ייתכן neoplasia בפועל או ייתכן טפיל, דלקת, בצקת או היפרפלזיה (עלייה במספר תאים נורמליים), שנגרמה עקב החשיפה כימיים, מדבקים או חומרים מגרים אחרים. כפי שניתן לראות את התוצאות נציג, גידול סופי או אבחון neoplasia דורש פתולוגיה מיקרוסקופיים כדי לזהות את סוג הנגע והחומרה (קרי, שפיר או ממאיר). הערכה של מוצץ לבן חיצוני "גידולים" מאת התצפית הויזואלית הפרזתי השכיחות, במיוחד באתר התייחסות. רבים של נגעים מוגבה היו לא neoplasms אבל מעדיף hyperplastic נגעים. כרגע לא ידוע אם הפצעים hyperplastic הם אמצעים מראש. לעומת זאת, התבוננות מוגבה גושים בכבד המעיט באופן משמעותי השכיחות של neoplasms הכבד. לפיכך, אוסף של רקמות פתולוגיה מיקרוסקופיים היה הכרחי להתייחס בצורה הולמת את פוטנציאל מחיקה.

פעילות אנושית יש השפעות שליליות רבות על סביבות הימית. דגים המאכלסים גופי המים השונים אוכלוסיית בני האדם משחזר ב ומשתמש לעתים קרובות כמקור מים לשתייה, ולכן הן אינדיקטורים חשוב לבריאות הסביבה התת-מימית. דג בר חיים מתרבים בבית גידול מסוים נחשפים לאורך כל חייהם לחצים שונים לרבות פתוגנים, טפילים, איכות המים המסכן, מזהמים כימיים. אלפי חומרים כימיים הזן נתיבי המים שלנו דרך שפכים תעשייתיים ואנושי, משקעים הפרברים/עירוני, נגר חקלאי. אלה תערובות מורכבים של כימיקלים ניתן מוספים, סינרגיסטי או אפקטים אויבת חשוף אורגניזמים1,2,3. בנוסף, לחצים סביבתיים אחרים כגון גבוהות חומרים מזינים, טמפרטורות גבוהות, נמוך חמצן מומס או pH המשתנות יכול להחריף את ההשפעות של מזהמים כימיים4,5. לחצים סביבתיים יכולים להשפיע גם על מחלה זיהומית תוצאות ישירות על-ידי הגדלת מספר מדבקים6, הגדלת את התקפה אלימה של פתוגנים אופורטוניסטים7 או לדכא את התגובה החיסונית ומחלות ההתנגדות של המארח8,9,10. מסיבות אלו, גוברת ההתעניינות תופעות לוואי או הביולוגי ניטור11,12,13,14, ניצול דגים ואורגניזמים ימיים אחרים כדי לזהות אוכלוסיות, מערכות אקולוגיות בסיכון.
תופעות לוואי ניטור מנצל סמנים ביולוגיים ברמות שונות של הארגון, של organismal subcellular או מולקולרית, לזהות תופעות לא קטלני, אשר עשויים להשפיע על אוכלוסיות ולהיות מעידה על חשיפה לחצים שונים. אינדיקטורים ברמת האורגניזם כוללים ליקויים גלוי ותנאים. תנאי במדדים המבוססים על אורך ומשקל מחושבים כדי להעריך את כושר של אוכלוסיות דגים או בביטחונו. הנפוצה שבהן היא גורמים מצבו של מר פולטון (K) = (משקל/אורך3) 15. סימן נוסף הוא הנוכחות של ליקויים גלוי. מגוון שיטות שימשו מחקרים בודדים ותוכניות ניטור להעריך, מסמך, ולהעריך חריגות גלוי. הערכה מבוססת רק על מומים חיצוניים, קרי, היחס של אנשים עם מחלות, נזק סנפיר, גידולים, חריגות השלד, נמנה המדדים עבור האינדקס של שלמות ביוטיים (אי) המוערכת בריאות הקהילה16. הערכה דומה כינה הפי-דלתא (מומים, ארוזיות, נגעים, גידולים) שימש גם להערכת התקינות של דגים קהילות17. עם זאת, שיטות אלה להעריך רק חריגות חזותי חיצוני ו נגעים פנימיים לא או מוקדם מחוונים לא קטלני.
הערכות מבוססות necropsy לכלול תצפיות חיצוניים ופנימיים ולאפשר המדידה של מדדים נוספים. אינדקס Hepatosomatic (משקל הגוף כבד משקל/סה כ) שימש גם בתור מדד של כושר או עתודות אנרגיה15 עבורו ערך אינדקס גבוה יותר מציין דגים בריאים יותר. עם זאת, מספר מחקרים הראו כי היפרטרופיה או עלייה גודל הכבד מתרחשת עקב חשיפה לחה מטבוליזם על ידי הכבד18,19,20. במקרה זה יהיה אינדקס גדול מעידה על חשיפה שיעורים כימיים מסוימים. מדד gonadosomatic (בלוטת המין משקל/סה כ משקל גוף) הוא עוד אינדקס תנאי המופנה כלפי פוריות21. תצפיות שנעשו במהלך המבדק מבוסס necropsy יכול לשמש כדי להשוות השכיחות של סוגי הנגע בודדים או אחוז של אנשים בריאים. עם זאת, הם יכולים גם לשמש כמותיים יותר בריאות הערכת22,23.
המבדק מבוסס necropsy מתוקננת המתוארים כאן ניתן להגדיל את ההערכה בגסות לעין במספר דרכים שונות בהתאם את ות ייענו, מומחיות ומשאבים זמינים נוספים. הגישה שגרתית שלנו היא כדי לאסוף נתונים ביומטרים (אורך, משקל, משקל כבד, בלוטת המין משקל), דם עבור פלזמה/סרום ניתוחים, מסמך פנימי וחיצוני גלוי חריגות, לשמר את חתיכות של איברים עבור ניתוח מיקרוסקופי ולאסוף otoliths עבור ניתוחים לגיל. הערכה המבוססת על necropsy פלוס ניתוח גיל ואת histopathology של איברים שונים, מאפשר חישוב, השוואה של מדדי מצב שונים, השכיחות של מומים גלוי, כמו גם שינויים מיקרוסקופיים ברקמות, לפי מין, גיל, אתר, תקופת הדגימה. יכול להיות עשוי רקמות נוספות קולקציות עבור ניתוחים רבים אחרים כולל מיקרוסקופ אלקטרונים, בקטריולוגיה, וירולוגיה, פרזיטולוגיה ריכוזים כימי. שיטות אלה ניתן גם חלק ניתוחים מעמיקים יותר לאבחן את סיבת הורג דגים24 או25דגים בהירושימה של השבוי. שיטות עבור אוסף של רקמות שני ניתוחים נוספים, ביטוי גנים וניתוחים המערכת החיסונית פונקציונלי מומחשים.

<table><tbody><tr><td>שולחנות מתקפלים</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כיסאות מתקפלים</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>לוחות חיתוך</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>לוח מדידה (מ"מ)</td> <td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>משקל המופעל על ידי סוללה (g) למשקל דגים</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>משקל המופעל על ידי סוללה (מ"ג) למשקל איברים</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ניתוח מלקחיים</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חותכי עצמות</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>אזמל ולהבים</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>כפפות חד פעמיות</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>דליים</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>בקבוקי Nalgene חסיני דליפות (250 מ"ל)</td> <td>ThermoFischer Scientific</td><td>02-924-5C</td><td></td></tr><tr><td>צינורות ואקטיינר עם נתרן הפרין</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>02-689-6</td><td>לאיסוף דם</td></tr><tr><td>חד פעמי&nbsp; מזרקים 3 מ"ל עם מחט 23 גרם</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>14-826-11</td><td></td></tr><tr><td>1 &ndash; 2 מ"ל cryovials</td><td>כל</td><td></td><td>משמש לדגימות פלזמה ו-RNAlater</td></tr><tr><td>Invitrogen RNAתמיסת ייצוב מאוחרת יותר</td><td>ThermoFischer Scientific</td><td>AM7021</td><td></td></tr><tr><td>Z-Fix פורמלדהיד אבץ מקבע</td><td>Anatech LTD</td><td>מק"ט-174</td><td></td></tr><tr><td>Tricaine-S (MS-222)</td> <td>Syndel ארה"ב</td><td></td><td>הרדמת דגים</td></tr><tr><td>מטבעות מעטפות</td><td>כל</td><td></td><td>עבור otoliths</td></tr><tr><td>עפרונות ועטים</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>70% אלכוהול</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr><tr><td>גיליונות נתונים</td><td>כל</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

הערכת הבריאות מבוסס necropsy דגים פראי

Necropsy-based Wild Fish Health Assessment

אנתרופוגניים השפעות של חומרים מזינים מוגברת של מזהמים כימיים, בית גידול שינויים, שינויי אקלים, יכול להיות השפעות משמעותיות על אוכלוסיות דגים. ניצול סמנים ביולוגיים של organismal לרמה מולקולרית, תופעות לוואי, ניטור, ניתן להעריך את ההשפעה המצטברת על דגים ואורגניזמים אחרים. כבר בשימוש ברחבי העולם כמחוון של המערכת האקולוגית הימית בריאות בריאות דגים. ההערכה בריאות דגים מבוסס-necropsy מספק נתונים על גלוי חריגות נגעים, טפילים, מצב organosomatic ומדד. אלה ניתן להשוות על ידי האתר, העונה, סקס, כמו גם במשמורת, מהמסמך משתנים לאורך זמן. דירוגי סיכון ניתן להקצות תצפיות שונות לחישוב של אינדקס בריאות דגים עבור יותר הערכה כמותית. חיסרון המבדק מבוסס-necropsy היא כי הוא מבוסס על תצפיות חזותיות וגורמים תנאי, אשר אינם רגישה כמו רקמות, סמנים ביולוגיים subcellular עבור אפקטים לא קטלני. בנוסף, זה לעתים רחוקות ניתן לזהות גורם או גורמי סיכון הקשורים עם מומים שנצפו. כך, למשל הנגע מוגבה או "גידול" סנפירים, השפתיים או משטח הגוף עשוי להיות גידול. עם זאת, זה יכול להיות גם תגובה טפיל, דלקת כרונית או היפרפלזיה של תאים נורמליים בתגובה מכשלה. לעומת זאת, neoplasms, מסוימים של טפילי, מדבקים אחרים, שינויים ברקמות רבים אינם גלויים, אז יכול לזלזל. עם זאת, במהלך ההערכה מבוססת על necropsy, הדם (פלסמה), רקמות עבור histopathology (מחלה מיקרוסקופית), גנומיקה אחרים ניתוחים מולקולרית ו otoliths עבור הזדקנות ניתן לאסוף. ניתוחים אלה במורד הזרם, יחד עם תמיכה גאו-מרחבית ניתוחים, הערכות בית גידול, ניתוחים מזהם ואיכות מים יכולים להיות חשוב במערכת האקולוגית מקיפה הערכות.

האגמים הגדולים של דאגה (AOC) הם אזורים גיאוגרפיים אשר נקבעו בשל מגבלות של שימושים מועילים שונים. אחד ליקויי זיקת הנאה (בואה)-AOC רבים הוא דג גידולים או מומים אחרים. היית להשקיע מיליוני דולרים עבור תיקונים ושחזור של כל אחד מאזורים אלה על מנת delist את בואה שונים ובסופו של דבר את AOC43. הקריטריונים עבור מחיקה לגידול דגים ש-BUI שונה ממדינה למדינה (ראה epa.ohio.gov/portals/35/lakeerie/ohio_AOC_delisting_guidance.pdf, dnr.wi.gov/topic/GreatLakes/documents/SheboyganRiverFinalReport2008.pdf); עם זאת, כפי שמצוין במסמכים delisting, יש דרישה כדי לקבוע את השכיחות של גידולים בכבד, בגידולים העור כמה מקרים. במקרים רבים, השכיחות היא לעומת אתר הפניה הלא-AOC.
הגידול דגים BUI הוערך ב 3 AOCs (סנט לואי הנהר, מילווקי נהר ונהר שבשבוייגן) ואתר ההתייחסות ללא-AOC (נהר Kewaunee) על אגמים סופריור ומישיגן, ניצול הערכה המבוססת על necropsy של לבן מוצץ (Catostomus commersonii ), ואחריו מיקרוסקופיים פתולוגיות של העור, רקמת הכבד. הדגים היו שנאספו מן הנהרות מילווקי, שבשבוייגן ו Kewaunee ב 2012 ו 201344 ומן הנהר סנט לואיס בשנת 2015 (נתונים שלא פורסמו). מאתיים פראיירים לבנים היו העריכו מילווקי, Kewaunee, סנט לואיס, 193 מ שבשבוייגן.
לפי ההגדרה, גידול יכול להיות בכל תחום נפיחות או מוגבה, למרות זאת נחשבת בדרך כלל זה נפיחות הנגרמת על ידי גדילה לא תקינה של רקמות עם תאים חריגים או גידול שפיר או ממאיר. לבן מוצץ שנאספו מכל אתרי הציג מגוון חיצוני נגעים מוגבהים לרבות כתמים לבנים קטנים, דיסקרטית, אזורים לבנים גדולים, מוגבהת מעט נגעים mucoid multilobed אזורים מוגבהים על פני הגוף ועל השפתיים (איור 6). דגים היו שקל, נמדדת להשיג גורם תנאי מומים חיצוניים ופנימיים תועדו, רקמת העור ומסייעים הכבד נאסף עבור histopathology.
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57946/57946fig6.jpg"> איור 6 : נגעים בעור מוגבה מובחנים מוצץ לבן מן האגמים הגדולים- (א) דיסקרטית כתם לבן על פני הגוף. סרגל קנה מידה = 5 מ מ. (B) A מורמת מעט mucoid (חיצים) נגעים multilobed (א) על פני הגוף האחורי. סרגל קנה מידה = 1 ס מ. (ג) A גדול, multilobed הנגע על פני הגוף. סרגל קנה מידה = 1 ס מ. (D) נגעים מרובי אונות רבות על השפתיים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57946/57946fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
אחוז של דגים עם גידולים חיצוני או מוגבה דהוי אזורים נע מ- 15.5%-AOC סנט לואיס אל 58.0% AOC מילווקי. באופן כללי, כתמים לבנים דיסקרטית היו הנגע חזותי נפוצה לפחות בעוד multilobed שפתיים של נגעים משטח הגוף היה נפוץ במיוחד. המספר של דג עם גושים בכבד הנצפה היה נמוך, ועד 1.5% Kewaunee, סנט לואיס 2.5% ב מילווקי (טבלה 1).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="4">נהרות והשנה שנדגם</td>
		</tr>
<tr>
<td>פצעים גלויים</td>
			<td>Kewaunee 2013</td>
			<td>סנט לואיס 2015</td>
			<td>2012 שבשבוייגן</td>
			<td>מילווקי 2013</td>
		</tr>
<tr>
<td>כתמים לבנים דיסקרטית</td>
			<td>16</td>
			<td>3</td>
			<td>3.1</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>Mucoid</td>
			<td>20</td>
			<td>9.5</td>
			<td>9.8</td>
			<td>30.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>Multilobed</td>
			<td>22.5</td>
			<td>3</td>
			<td>29.5</td>
			<td>40</td>
		</tr>
<tr>
<td>סה כ העלה עור ליקויים
</td>
			<td>46</td>
			<td>15.5</td>
			<td>38.3</td>
			<td>58</td>
		</tr>
<tr>
<td>גושים בכבד גלוי</td>
			<td>1.5</td>
			<td>1.5</td>
			<td>1.6</td>
			<td>2.5</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="5">
. המספר הכולל של דג עם נגעים מוגבה. דגים מסוימים היו מספר סוגים של מומים.</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1: תצפיות המבוסס על Necropsy של מוצץ לבן הנאספים אזורי האגמים הגדולים של דאגה, אתר הפניה (נהר Kewaunee), מוצג כאחוזים. בדיקה ויזואלית ניתן לתעד את האחוזים של דג עם מומים שונים. עם זאת, כדי לאבחן בוודאות את הנוכחות ואת סוג neoplasia, רקמות חייב להיבדק ברמה המיקרוסקופית (histopathology). בעת בדיקה מיקרוסקופית, התברר כי לא כל של נגעים מוגבה היו אמצעים. הרבה של כתמים לבנים דיסקרטית, נגעים mucoid, במיוחד ב- Kewaunee, היו נגעים hyperplastic ולא neoplasia (טבלה 2). בנוסף, Kewaunee, סנט לואיס, כל הגידולים העור שנצפו היו papillomas שפיר. ב שבשבוייגן ומילווקי papillomas והן קרצינומה תאים קשקשיים, גידולים ממאירים בעור, נצפו (טבלה 2).
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="4">נהרות שנדגם</td>
		</tr>
<tr>
<td>ניאופלזיה סוג</td>
			<td>Kewaunee 2013</td>
			<td>סנט לואיס 2015</td>
			<td>2012 שבשבוייגן</td>
			<td>מילווקי 2013</td>
		</tr>
<tr>
<td>פפילומה</td>
			<td>21</td>
			<td>5.2</td>
			<td>30.5</td>
			<td>37.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>קרצינומה של תאים קשקשיים</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
			<td>2.1</td>
			<td>10.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>עור הכולל neoplasms</td>
			<td>21</td>
			<td>5.2</td>
			<td>32.6</td>
			<td>48</td>
		</tr>
<tr>
<td>צינור המרה neoplasms
</td>
			<td>2.5</td>
			<td>4</td>
			<td>6.2</td>
			<td>9.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>תאי הכבד neoplasmsb
</td>
			<td>1</td>
			<td>0</td>
			<td>2.1</td>
			<td>8</td>
		</tr>
<tr>
<td>Neoplasms סה כ כבד</td>
			<td>3.5</td>
			<td>4</td>
			<td>8.3</td>
			<td>15.0c
</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">
. כולל cholangioma, cholangiocarcinoma</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">
b כולל תא הכבד אדנומה קרצינומה של הכבד</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="3">
c דגים מסוימים היה צינור המרה והן neoplasms הכבד</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 2: אימות ברמה המיקרוסקופית נגעים אמצעים של מוצץ לבן שייאסף אזורי האגמים הגדולים של דאגה, אתר הפניה (נהר Kewaunee), מוצג כאחוזים. הניתוח histopathological זיהה גם גידולים בכבד לא זוהו על ידי התצפית הויזואלית. בעוד רק 1.5% של הדג שנאסף Kewaunee על סנט לואיס היה גלוי גושים בכבד (טבלה 1), 3.5% ו- 4.0%, בהתאמה, ברמה המיקרוסקופית זיהה neoplasms (טבלה 2). הבדל גדול נראתה שבשבוייגן (1.6% גלוי מול 8.3% מיקרוסקופיים), מילווקי (2.5% גלוי מול 15.0% מיקרוסקופיים). בבדיקה מיקרוסקופית מספק גם הבחנה של neoplasms של צינור המרה לעומת המקור לתא הכבד (טבלה 2) שפירים נגד גידולים ממאירים.

בריאות הדגים פראי יכול לשמש כמחוון של בריאות המערכת האקולוגית הימית. הערכות בריאות דגים מבוסס-necropsy לספק תיעוד של פצעים גלויים או מומים, הנתונים המשמשים לחישוב מדדי מצב, כמו גם את ההזדמנות כדי לאסוף את רקמות מיקרוסקופיים, ביטוי גנים והערכת אחרים מעמיק יותר ניתוחים.

Anthropogenic influences from increased nutrients and chemical contaminants, to habitat alterations and climate change, can have significant effects on ...

הערכת בריאות הדגים המבוססת על נקרופסיה משמשת להערכת בריאותם של דגי בר לניטור שגרתי, מחקרים ספציפיים המשווים אתרים וכבסיס לאיסוף רקמות לניתוח מעמיק יותר. דגים חשופים כל הזמן לשילוב של גורמי לחץ כמו תערובות מורכבות של כימיקלים, פתוגנים וטפילים. שילובים אלה של גורמי לחץ עלולים להוביל להשפעות שליליות כגון עמידות מופחתת למחלות, סרטן וכשל רבייה.הטכניקות שהודגמו מאפשרות הערכה סטנדרטית של חריגות גלויות ואיסוף דם ורקמות להיסטופתולוגיה, אוטוליטים לגיל ורקמות לניתוחים אחרים במורד הזרם. ראשית נדגים את ההערכה השגרתית המבוססת על נתיחה עם איסוף דם, אוטוליט ורקמות להיסטופתולוגיה באמצעות דג אחד. איסוף כליה קדמית לבדיקות תפקוד חיסוני וכבד או רקמה אחרת לביטוי גנים הם תוספות לשיטה זו שגם נדגים.חשוב לאסוף רקמות במהירות האפשרית כדי למנוע שינויים לאחר המוות. אז בדרך כלל יש לנו תהליך פס ייצור עם שניים או שלושה אנשים שאוספים רקמות ומישהו רושם את הנתונים. הת'ר וולש ושאיין סמית', דוקטורנטים מאוניברסיטת מערב וירג'יניה וריאן ברהאם, בוגר דוקטורט טרי, ידגימו את השלבים השונים בתהליך.לאחר איסוף והמתת חסד של דגים על פי הנחיות מוסדיות, שקלו ומדדו את הדגים וקבלו דגימת דם. לאחר מכן מדוד את האורך הכולל של הדג מקצה החוטם ועד קצה הזנב. הכנס מזרק של שלושה סמ"ק עם מחט בגודל 22 או 23, שצופה בעבר בהפרין, קדמית לאזור הזנב מתחת לקו הרוחבי.כוון את הצורך כלפי מעלה עד שהוא פוגע בעמוד השדרה ומשוך אותו מעט כדי לקבל דגימת דם. לפני העברת דגימת הדם לצינור איסוף, הסר את המחט והנח אותה בפח חד. בטיולי יום, ניתן להחזיק דם על קרח רטוב עד להחזרה למעבדה.לאחר מכן הוא צנטריפוגה כדי להסיר את הפלזמה שאוחסנה במינוס 80 מעלות צלזיוס עד לניתוח. אם לא חוזרים למעבדה כל יום, יש צורך בצנטריפוגה ואחסון קרח יבש. לאחר מכן, תעד כל חריגה או נגע חיצוני בגוף, בסנפירים, בעיניים ובזימים של הדג.בדוק את הדגים לאיתור טפילים חיצוניים כגון עלוקות, זחלים, ציסטות טרמטודות וטפילי זימים. לאחר מכן השתמש במספריים כדי לפתוח את חלל הבטן מאזור פי הטבעת לאופרקולום. הסר את דש השריר כדי לחשוף את האיברים הפנימיים.לבחון את האיברים הפנימיים ולתעד שינויי צבע כלליים ומוקדיים, נוכחות של אזורים מוגבהים, ציסטות, טפילים וחריגות בגודל. לאחר מכן, כדי להסיר את הכבד, חתכו את עורק הכבד ואת רקמת החיבור של הקצה הקדמי. הרם בעדינות את הכבד מהפגר וחתוך כל הידבקויות וחיבורים למעיים ושומן שומני תוך הקפדה לא לנקב את כיס המרה.שקלו את הכבד. לאחר מכן השג את האינדקס ההפטוסומטי כמתואר בפרוטוקול הטקסט. לאחר מכן הסר את בלוטות המין ושקול אותן.בזהירות, מבלי למשוך, גזרו דגימות רקמה קטנות. הניחו את דגימות הרקמה מדג אחד באותו מיכל. לאחר מכן, חותכים לפחות חמש, שלושה עד ארבעה חתיכות בעובי מילימטר מאזורים שונים בכבד ומניחים אותם במיכל הקיבוע.בהתאם לגודל, הניחו בלוטת מין שלמה או חתיכות בלוטת מין במיכל הקיבוע. לאחר מכן הניחו איברים שלמים קטנים יותר וחתיכות של איברים גדולים אחרים במיכל הקיבוע. אם נצפות רקמות חריגות כלשהן, שמור על פיסה סמוכה נוספת של רקמה תקינה.מבנים רבים כגון קשקשים, קרני סנפיר ואוטוליטים עשויים לשמש ליישון דגים. כאן אנו משתמשים באוטוליטים מכיוון שהם המדויקים ביותר. ראשית, חותכים את מצר הזימים וכופפים את הראש לאחור.לאחר מכן, כדי לאתר את הבולה הפרוטית, הסירו את רקמות החיבור והשרירים סביב החלקים הנחותים של הנוירוקרניום. השתמש בחותך עצמות כדי לפצח את הבולה הפרוטית ולחשוף את האוטוליטים. האוטוליטים צריכים להיות גלויים לעין בלתי.מניחים את האוטוליטים בבקבוקון מסומן ולא מכוסה ומאחסנים אותם בטמפרטורת החדר עד שניתן יהיה לבצע ניתוח גיל. חשיפה לכימיקלים רבים וגורמי לחץ סביבתיים אחרים עלולה לגרום לדיכוי חיסוני. ניתן לבודד לימפוציטים, מקרופאגים וגרנולוציטים מרקמה זו ובמעבדה ניתן למדוד את יכולתם להרוג פתוגנים, לייצר נוגדנים, להגיב לתאי גידול ותפקודים אחרים.בעזרת מספריים סטריליים, אזמל ומלקחיים מסירים את רקמת הכליה הקדמית. הנח את דגימת הכליה הקדמית במדיה המתאימה כדי לשמור על התאים בחיים. השתמש במטחנת רקמות כף יד סטרילית כדי להומוגניזציה של הדגימה לתרחיפים של תאים בודדים.ולהחזיק את הדגימות על קרח רטוב. לשימור RNA, יש להניח שתיים עד שלוש חתיכות קטנות של כבד בחומר המשמר המתאים ביחס של 10 לאחד של חומר משמר לרקמה. במחקר זה, פראיירים לבנים נאספו משלושה אזורי דאגה באגמים הגדולים, או AOCs, ואתר הייחוס נהר קוואני.אחוז הדגים עם גידולים חיצוניים נע בין 15.5% בסנט לואיס AOC ל-58% ב-AOC של מילווקי. נצפו מספר סוגים של נגעים חיצוניים כולל כתמים לבנים דיסקרטיים, נגעים ריריים מוגבהים מעט ונגעים פפילומטים גדולים. רבים מהכתמים הלבנים הבדידים והנגעים הריריים שנצפו במחקר זה, במיוחד באתר הייחוס של קוואני, היו נגעים היפרפלסטיים בניגוד לניאופלזיה.ניתוח היסטופתולוגי זיהה גם גידולי כבד שלא ניתן היה לזהותם בתצפית חזותית. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך 15 עד 20 דקות לכל דג אם היא מבוצעת כראוי. בזמן ניסיון הליך זה, חשוב לדעת מה נורמלי עבור המין הספציפי שלך ולהיות עקבי ומדויק ככל האפשר בתיאור חריגות.כלול גודל, צבע, מרקם ומיקום. תיעוד תמונות שימושי. טכניקה זו יכולה לשמש עבור כל מין דגים והיא שימושית לתיעוד בריאות הדגים הן מבחינה מרחבית והן מבחינה זמנית כדי להבין טוב יותר את ההשפעות השליליות של גורמי לחץ סביבתיים ולזהות מחלות פולשניות.

necropsy-based-wild-fish-health-assessment

Research

JoVE Journal

Environment

סביבה

חייהם של רוב הדגים מבוססת על שחייה. פרוטוקול זה מתאר שיטות לכידת מגוון של מצבי שחייה זמין דגים בודדים לימוד, והוא כולל מדדים הקשורים לפיזיולוגיה שחייה התנהגות.

הערכת ביצועים שחייה דגים

תרכובות לשבש האנדוקרינית (EDC) להוות סיכון ממשי של הסביבה המימית. מתקני טיהור שפכים עירוניים הם תורמים עיקריים העצמה אסטרוגניים של מים עיליים. המתודולוגיה הניתן במאמר זה מאפשר הערכה של היעילות וההתאמה של תהליכי טיפול בשפכים ביחס להסרת EDC.

שימוש בסוללה של שיטות כימיות Ecotoxicological עבור הערכת היעילות של תהליכי טיפול בשפכים להסיר אסטרוגניים און

פרוטוקול זה מתאר את השימוש sump מטליות וניתוח בוצה של דג זברה מערכות, מה שמוביל גילוי מוגברת בהשוואה לשימוש הבלעדי של זקיפים לזהות פתוגנים כגון Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp.  Pseudocapillaria tomentosa. מערכת לפקח tomentosa פ ביצים בהסגר גם מוצע.

הקרנת איכות הסביבה של Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. Pseudocapillaria tomentosa במערכות דג זברה

בעבודה זו, אנו מתארים של bioassay אקוטית, כרונית, multigenerational ללמוד את ההשפעות של לחצים יחיד ומשולבים על דגים גמבוזיים טורקיז Nothobranchius furzeri. פרוטוקול זה תוכנן כדי ללמוד היסטוריה-החיים תכונות (התמותה, צמיחה, פוריות, משקל) ומקסימום תרמי קריטי.

פרוטוקול עבור סימן ובדיקות כרונית Ecotoxicity של דגים גמבוזיים טורקיז Nothobranchius furzeri

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבחון פעילויות זחל דג זברה, פאטהד מינו גינקולוגיות ותגובות photomotor (PMR) באמצעות תוכנת מעקב אוטומטי אנטי. כאשר שולבו במשותף הרעלים bioassays, ניתוחים של התנהגויות אלו מספקים כלי אבחון לבחון אתריים כימי. פרוטוקול זה מתואר באמצעות קפאין, neurostimulant מודל.

נסיוני לבחינת תגובה התנהגותית פרופילים בדגים זחל: ליישום הקפאין נוירו-ממריץ

כאן, אנו מציגים שיטות למחקר תפוקה גבוהה של סדרת cavefish מקסיקני התנהגויות, צביעת חיוני של מערכת mechanosensory. שיטות אלה להשתמש בקבצי script התוכנה-החופשית, מחוייט, מתן שיטה מעשית וחסכונית עבור המחקרים של התנהגויות.

מעקב אחר התנהגות והדימות Neuromast של Cavefish מקסיקני

זהו פרוטוקול לדגם את ספקטרום הגודל (שינוי קנה מידה בין המסה האישית צפיפות האוכלוסייה) עבור דגים משולבים ונתונים חסרי חוליות מנחלים ומנהרות. השיטות כוללות: טכניקות שדה לאיסוף דגים כמותיים ודגימות חסרי חוליות; שיטות מעבדה לתקנן את נתוני השדה; וניתוח נתונים סטטיסטיים.

מידול ספקטרום הגודל של מאקרוחסרי חוליות ודגים בזרם מערכות אקולוגיות

כאן, אנו מציגים סוללת בדיקות התנהגותית מקיפה, כולל מיכל חדשני, Shoaling ומבחני העדפה חברתית, כדי לקבוע ביעילות את ההשפעות הנוירוטוקסיות האפשריות של כימיקלים (למשל, מתאמפטמין וגלייפוסט) על דגי זברה בוגרים באמצעות מכל יחיד. שיטה זו רלוונטית לנוירוטוקסיות ולמחקר סביבתי.

הערכת רעילות עצבית אצל מבוגרים Danio rerio באמצעות סוללה של מבחנים התנהגותיים במיכל יחיד

כתב יד זה מתאר את הבידוד והקיבוע של לויקוציטים המופקים מכליות הראש של דניס הזהב ואת הערכת כדאיותם על ידי זרימה ציטומטרית. עבודה זו תורמת לסטנדרטיזציה של פרוטוקולים וממנפת עיבוד של מספר גבוה יותר של דגימות מבלי לפגוע באיכות הדגימה, ומקדמת התקדמות בידע על אימונולוגיה של דגים.

בידוד, קיבוע ואפיון של לויקוציטים של ראש דניס צעיר על ידי ציטומטריית זרימה

המבדק זה מעסיק דגים טורפים מודל כדי להעריך את הנוכחות של מטבוליטים האכלה-הרתעה מתמציות אורגניות של הרקמות של יצורים ימיים בריכוזים טבעיים באמצעות מטריצת מזון דומה מבחינה תזונתית.

מעבדה מבדק-האכלת דגים לבחינת פעילות Antipredatory של משני מטבוליטים מהרקמות של אורגניזמים ימיים

למדו הערכת בריאות דגים מבוססת נקרופסיה לניטור מערכות אקולוגיות מימיות באמצעות דגי בר. שיטה זו מאפשרת איסוף רקמות להיסטופתולוגיה וניתוח ביטוי גנים.

הערכת הבריאות מבוסס necropsy דגים פראי

גלה סרטונים נוספים