ספקטרומטר מסה של ספריי עלה: טכניקה מהירה יינון אמביינט להעריך ישירות מטבוליטים רקמות הצמח

תרסיס עלים MS היא שיטה מהירה לניתוח איכותי וחצי כמותי של רקמות צמחים שלמות שיש לה מגוון רחב של יישומים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן לנתח רקמת צמח ישירות ללא הכנת דגימה. למרות ששיטה זו מספקת תובנות טובות לגבי אלקלואידים מסמברין מסקלטיום, היא יכולה לשמש גם לניתוח של מיני צמחים שונים אחרים וכימיקלים אקסוגניים כגון חומרי הדברה.

אנשים חדשים בשיטה זו עשויים למצוא אותה מאתגרת מכיוון שיש צורך לייעל את הפרוטוקול עבור כל מין צמחים, סוג רקמה ותרכובת מעניינת. השתמש במקור ריסוס ננו שונה לריסוס עלים MS.As אין צורך ברכיבים נוזליים לריסוס עלים MS, שנה את המקור על ידי הסרת בדיקת הכרומטוגרפיה הנוזלית מהמקור. לחוט ספקטרומטריית המסה של ריסוס העלים שיפעיל מתח על רקמת הצמח יש סיכה שהולחמה לחוט בקצה אחד ומהדק שהולחם בקצה השני.

אם המערכת הייתה בשימוש לאחרונה, אפשר לה להתקרר למגע לפני הסרת כל מקור חלופי בקונוס הטאטא. לאחר מכן חבר את מקור MS של תרסיס עלי ריסוס ננו. לבסוף, צור קובץ מנגינה וקובץ שיטה כמתואר בפרוטוקול הטקסט.

ללבוש תמיד כפפות ואל תשתמש ברקמת צמחים שטופלה בידיים חשופות. אחרת, יונים מזהמים כגון פוליאתילן גליקול ישלטו בספקטרום. הביאו את רקמות הצמח לניתוח לאותו חדר כמו מערכת ספקטרומטריית המסה כדי לאפשר דגימה מהירה.

עבור רקמת צמחים שאין לה קצה מחודד באופן טבעי, השתמש בסכין גילוח על מגלשת זכוכית כדי לחתוך נקודה מחודדת. חותכים את עלי Sceletium tortuosum 10 שבועות לאחר הנביטה לרצועות דקות כל אחת עם קצה מחודד ליצירת נקודה. השתמש במלקחיים כדי לבחור בעדינות את רקמת הצמח בקצה שתהדק.

אוחזים את הרקמה בעזרת מלקחיים, מעבירים אותה בזהירות למהדק. כוונן את הזרוע הגמישה ואת החוט עם המהדק כדי למקם את הרקמה בקו אחד עם כניסת MS. עיין בטקסט למרחק האופטימלי מכניסת היונים עבור כל ספקטרומטר מסה ספציפי.

אם הניסיונות הראשונים מייצרים עוצמת אות נמוכה, ניתן לקרב את רקמת הצמח לכניסת היונים. טען את קובץ השיטה. תן שם לקובץ הנתונים והגדר את מיקום אחסון הקבצים.

לאחר מכן הפעל את מערכת MS על ידי לחיצה על הפעל ולחץ על התחל כדי להתחיל ברכישת נתונים. מרחו ממס באמצעות פיפטה עם קצה טעינת ג'ל כדי למקסם את המרחק בין המתח הגבוה לידי המשתמש להגנה. רכוש נתונים כל עוד האות נמשך או עד שנאסף הספקטרום המתאים, בדרך כלל 30 עד 60 שניות.

הפסק את רכישת הנתונים והשהה את מערכת MS. לאחר הרכישה, הסר את הרקמה ושטוף את המהדק עם 100% מתנול במגבון נטול מוך. פתח את קובץ הנתונים ובדוק חזותית את כרונוגרמת שיא המסה הבסיסית.

בדוק שעוצמת האות היא כ-10 מיליון עד 500 מיליון. צור קובץ שיטה חדש עם רשימת הכללה של M על Z לארבעה מקומות עשרוניים. לחץ על רשימות גלובליות והכללה.

תחת מאפיינים של PRM, בחר את אנרגיית הפיצול ופרמטרים אחרים של MS טנדם. כדי להשיג את נתוני MS הטנדם עבור אלקלואידים מסמברין, פצלו את היונים ב-276.1583 M על Z, 290.1742 M על Z ו-292.1897 M על Z באנרגיית התנגשות מנורמלת של 35. לאחר מכן, טען את קובץ שיטת הטנדם MS וקובץ נתונים בעל שם.

הפעל את מערכת MS והתחל לאסוף נתונים ולהוסיף ממס במידת הצורך. כאשר נאסף ספקטרום מתאים, בדרך כלל לאחר 30 עד 60 שניות, עצור את הרכישה. בצע ניתוח נתונים כמתואר בפרוטוקול הטקסט.

תוצאות מייצגות של פרופיל מטבולי של Sceletium tortuosum על ידי תרסיס עלים MS ויינון חיובי מוצגות כאשר הכניסה מציגה 260 עד 295 M במהלך Z.In מחקר זה, בסך הכל זוהו תשעה אלקלואידים מסמברין על ידי תרסיס עלים MS ובוצעו זיהויים מפוקפקים. כרונוגרמת המסה הכוללת של ריסוס העלים MS מייצגת ניסוי MS מוצלח של ריסוס עלים שבו נשמר אות יציב למשך כל הרכישה. עבור כל פסגה, המספר העליון הוא הזמן בדקות והתחתון הוא M מעל Z.ספקטרום מסה טנדם נאספו ביינון חיובי שנעשה מעלה חתוך Sceletium tortuosum עם תרסיס עלים MS. זיהויים ראשוניים של האלקלואידים נעשו מפיצול מדויק של מסה ומסה עבור איזומרים מסמברין M ומסמברנון M, מסמברין ומסמברין M דיהידרו.

לאחר צפייה בסרטון זה, אתם אמורים להבין היטב כיצד להשתמש בתרסיס עלים MS כדי לזהות מטבוליטים של צמחים. תרסיס עלים MS שימש לאיתור תרכובות אנדוגניות כמו גם תרכובות אקסוגניות כגון חומרי הדברה.