חילוץ מהיר, בטוח, ופשוט ידנית המיטה חומצת גרעין איתור וירוס בדגימות דם מלא

שיטה זו יכולה לסייע בעת ביצוע אבחון נקודתי, של חולים עם סימני זיהומים ויראליים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן לבצע אותה ללא ציוד מעבדה וחשמל, ומכאן שניתן לבצע אותה במחלקה בבית חולים. ידגימו את הליך איסוף הדם, הרופא אנדרס פומסגארד והמדען מורטן רסמוסן, שניהם מהמעבדה שלי.

התחל בהכנת צינורות איסוף הדם. השתמש במחט בגודל 25 אינץ' המחוברת למזרק 3 מ"ל, כדי להזריק 1.6 מ"ל של מאגר ליזה מסחרי לתוך צינור ואקום 4 מ"ל EDTA. זה קריטי לשמור על הוואקום בצינור איסוף הדם לאיסוף דם.

לפיכך, השתמש תמיד במחט כדי להזריק את מאגר הליזיס לתוך צינור איסוף הדם. לאחר מכן השעו מחדש לחלוטין נפח של 960 מיקרו ליטר של חלקיקי זכוכית מגנטיים, או MGPs, והעבירו לצינור מסומן של 1.8 מ"ל. לאחר מכן, צינור 4 מ"ל של מאגר כביסה אחד לתוך צינור 4.5 מ"ל שכותרתו WB-1.1.5ML של מאגר כביסה, שניים לתוך צינור 3.6 מ"ל שכותרתו WB-2, ו-3 מ"ל של מאגר כביסה שלושה לתוך צינור 4.5 מ"ל שכותרתו WB-3.

לבסוף הוסף 100 מיקרו-ליטר של מאגר פליטה לצינור של 1.8 מ"ל המסומן EB, והשאיר את הצינורות בטמפרטורת החדר עד לשימוש. כדי לאסוף דם מלא תוך ורידי מהמטופל, השתמש במחט פרפר עם צינור הארכת קדח קטן, ובאחד מצינורות הוואקום לאיסוף הדם שהוכנו בעבר המכילים מאגר ליזה. הנח את זרוע המטופל במצב כלפי מטה.

הכנס את מחט הפרפר לווריד של המטופל, והצמד את צינור הוואקום לאיסוף הדם להארכת הקדח הקטנה. לאחר איסוף הדם מערבבים את תכולת הצינור, על ידי היפוך הצינור חמש עד עשר פעמים. חיטוי החלק החיצוני של הצינור באמצעות אתנול 70%.

לאחר מכן דגרו את הצינורות למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר לצורך השבתת הנגיף. כדי לטהר חומצות גרעין מהדם שנאסף, ערבבו שוב את תוכן הצינור על ידי היפוך צינור הוואקום ביד חמש עד עשר פעמים. יוצקים את האליקוט המוכן של MGP ישירות לתוך צינור איסוף הדם.

הנח מכסה חדש מצינור איסוף דם שאינו בשימוש על הצינור המכיל את הדגימה. הנח אצבע על המכסה כדי לוודא שהצינור סגור היטב, וערבב את תכולת הצינור על ידי היפוך חמש עד עשר פעמים. הנח את הצינור במחזיק המגנטי ושמור אצבע על המכסה, כדי להבטיח שהצינור סגור היטב.

לאחר מכן הפוך את המחזיק המגנטי עם הצינור כמה פעמים כדי לפזר את ה-MGP לפני שהם נאספים בצד הצינור עם המגנט. הסר את מכסה הצינור, והשליך את תכולת הצינור לצינור איסוף של 50 מ"ל, באמצעות פיפט חד פעמי. שפכו את המנה המוכנה של WB-1 ישירות לתוך צינור איסוף הדם וסגרו את המכסה על הצינור.

מערבבים את התוכן ביד חמש עד עשר פעמים. לאחר מכן אוספים את החרוזים בצד הצינור, בעזרת המגנט ומסירים את הנוזל כמו קודם. השעו מחדש את החרוזים במנה המוכנה של WB-2, ואז השליכו את התמיסה, וחזרו על ההליך עם מינוי מוכן של WB-3.

לבסוף, הסר את הצינור מהמחזיק המגנטי ושפך את המנה המוכנה של EB ישירות לתוך צינור איסוף הדם. הנח את המכסה על הצינור, והשהה מחדש את ה-MGP על ידי הקשה חמש עד עשר פעמים באצבע. לבסוף, השתמש בפיפט חד פעמי של 1.5 מ"ל כדי להעביר טיפה אחת של ה-MGP המושעה מחדש לתערובת תגובת ההגברה של חומצות הגרעין במורד הזרם.

הקפד להשעות מחדש את ה-MGP באופן מלא לפני העברת טיפה אחת בלבד לתגובת ה-PCR. כדי להדגים את הוכחת הרעיון, דם מלא שלילי הועלה עם דילול של פי 10 מתקן נגיף האבולה, שהוכן מההתפרצות האחרונה בדרום גינאה, או שלושה ריכוזים שונים של נגיף אפשטיין בר. חומצות הגרעין שחולצו נותחו על ידי R2 qPCR או qPCR ספציפי לנגיף הפנימי.

ככל שסף החצייה, או CT, נמוך יותר, כך מספר עותק הגנום הנגיפי גבוה יותר. כאן, דם מלא עם ריכוזים שונים של נגיף האבולה זוהה על ידי מנורה ספציפית לנגיף האבולה. הריכוז הסופי של הנגיף בדגימת הדם המלאה נראה על ציר ה-X, והדקות לחיובי נראות על ציר ה-Y.

כאן, דם מלא הודבק בדילול פי 10 של דגימת סרום סטנדרטית של הפטיטיס C של ארגון הבריאות העולמי, עם זיהוי על ידי RT qPCR ספציפי ל-HCV. לבסוף, תמונה זו מציגה את התוצאות של תגובת מנורה ספציפית לנגיף אפשטיין בר, על דם מלא חיובי לנגיף אפשטיין בר. בעת ניסיון הליך זה, חשוב להשתמש במאגר קשירת הליזיס שצוין.

זהו שלב מכריע, וסוכן מחדש מכריע לשיטה. מאגר קשירת ליזה זה ישבית את הנגיף בדגימה. בעקבות טכניקה זו תוכלו לבצע שיטות זיהוי מולקולאריות שונות כמו lamp ו-PCR, ומכאן שתוכלו לבצע אבחנה מבדלת.