Name: הזיהוי של פרומונים ים עגולי הפה באמצעות מונחה Bioassay Fractionation (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: חקור זיהוי פרומונים בדגי צמד ימיים באמצעות חילוף יונים ואידוי רוטרי. שיטה זו מקשרת תרכובות חדשות לפונקציית פרומון ומסייעת להבנת אקולוגיה כימית ותקשורת בין פרטים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים U.S. גיאולוגי סקר האמונד מפרץ ביולוגי תחנת עבור שימוש במתקני המחקר שלהם ואת הצוות של ארה ב דגים, שירות חיות הבר והדיג וקנדה האוקיינוסים למתן lampreys ים. מחקר זה נתמך על ידי מענקים של הנציבות דוגה הימות הגדולות Weiming Li ו- Ke Li.

<ol><li>Wyatt, T. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWyatt%2C+TD+%22Pheromones+and+Animal+Behavior%3A+Chemical+Signals+and+Signatures%22">Pheromones and Animal Behavior: Chemical Signals and Signatures</a>. , Cambridge University Press. Cambridge, UK. (2014).</li>
<li>El-Sayed, A. M. The pherobase: database of insect pheromones and semiochemicals. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.pherobase.com">http://www.pherobase.com</a> (2009).</li>
<li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+chemical+ecology%3A+Olfactory+proteins+from+the+giant+panda+and+their+interactions+with+putative+pheromones+and+bamboo+volatiles%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Reverse chemical ecology: Olfactory proteins from the giant panda and their interactions with putative pheromones and bamboo volatiles.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 114 (46), E9802-E9810 (2017).</li>
<li>Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+chemical+ecology+at+the+service+of+conservation+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Reverse chemical ecology at the service of conservation biology.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 114 (46), 12094-12096 (2017).</li>
<li>Carde, R. T., Minks, A. K. <a target="_blank" href="https://www.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.en.40.010195.003015">Control of moth pests by mating disruption: successes and constraints.</a> Annual Review of Entomology. 40 (1), 559-585 (1995).</li>
<li>Witzgall, P., Kirsch, P., Cork, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+pheromones+and+their+impact+on+pest+management%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+chemical+ecology%22%5BJournal%5D)">Sex pheromones and their impact on pest management.</a> Journal of chemical ecology. 36, (2010).</li>
<li>Cheng, Y. -n, Wen, P., Dong, S. -h, Tan, K., Nieh, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Poison+and+alarm%3A+the+Asian+hornet+Vespa+velutina+uses+sting+venom+volatiles+as+an+alarm+pheromone%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Poison and alarm: the Asian hornet Vespa velutina uses sting venom volatiles as an alarm pheromone.</a> Journal of Experimental Biology. 220 (4), 645-651 (2017).</li>
<li>Howse, P., Stevens, J., Jones, O. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHowse%2C+P+%22Insect+Pheromones+and+Their+Use+in+Pest+Management%22">Insect Pheromones and Their Use in Pest Management</a>. , Springer Science & Business Media. (2013).</li>
<li>Pizzolon, M., et al. <a target="_blank" href="https://besjournals.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/j.1365-2435.2009.01608.x">When fathers make the difference: efficacy of male sexually selected antimicrobial glands in enhancing fish hatching success.</a> Functional Ecology. 24 (1), 141-148 (2010).</li>
<li>Stacey, N., Sorensen, P. <a target="_blank" href="https://experts.umn.edu/en/publications/hormones-in-communication-hormonal-pheromones">Hormones in communication | Hormonal Pheromones Encyclopedia of Fish Physiology</a>. , Elsevier Inc. (2011).</li>
<li>Kobayashi, M., Sorensen, P. W., Stacey, N. E. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1023/A:1023375931734">Hormonal and pheromonal control of spawning behavior in the goldfish.</a> Fish Physiology and Biochemistry. 26 (1), 71-84 (2002).</li>
<li>Stacey, N. <a target="_blank" href="https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/9781118794739.ch3">Hormonally-derived pheromones in teleost fishes.</a> Fish Pheromones and Related Cues. , 33-88 (2015).</li>
<li>Kuhlisch, C., Pohnert, G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25926134">Metabolomics in chemical ecology.</a> Natural Product Reports. 32 (7), 937-955 (2015).</li>
<li>Prince, E. K., Pohnert, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Searching+for+signals+in+the+noise%3A+metabolomics+in+chemical+ecology%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Searching for signals in the noise: metabolomics in chemical ecology.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 396 (1), 193-197 (2010).</li>
<li>Teeter, J. <a target="_blank" href="https://www.nrcresearchpress.com/doi/abs/10.1139/f80-254">Pheromone communication in sea lampreys (Petromyzon marinus): implications for population management.</a> Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 37 (11), 2123-2132 (1980).</li>
<li>Moore, H., Schleen, L. <a target="_blank" href="http://www.nrcresearchpress.com/doi/abs/10.1139/f80-227">Changes in spawning runs of sea lamprey (Petromyzon marinus) in selected streams of Lake Superior after chemical control.</a> Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 37 (11), 1851-1860 (1980).</li>
<li>Vrieze, L. A., Bergstedt, R. A., Sorensen, P. W. <a target="_blank" href="http://www.nrcresearchpress.com/doi/abs/10.1139/F10-169">Olfactory-mediated stream-finding behavior of migratory adult sea lamprey (Petromyzon marinus).</a> Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 68, (2011).</li>
<li>Wagner, C. M., Jones, M. L., Twohey, M. B., Sorensen, P. W. <a target="_blank" href="http://www.nrcresearchpress.com/doi/abs/10.1139/f06-008">A field test verifies that pheromones can be useful for sea lamprey (Petromyzon marinus) control in the Great Lakes.</a> Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 63 (3), 475-479 (2006).</li>
<li>Wagner, C. M., Twohey, M. B., Fine, J. M. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0003347209002346">Conspecific cueing in the sea lamprey: do reproductive migrations consistently follow the most intense larval odour?</a> Animal Behaviour. 78, (2009).</li>
<li>Siefkes, M. J., Winterstein, S. R., Li, W. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0003347205002538">Evidence that 3-keto petromyzonol sulphate specifically attracts ovulating female sea lamprey Petromyzon marinus.</a> Animal Behaviour. 70, (2005).</li>
<li>Siefkes, M. J., Steeves, T. B., Sullivan, W. P., Twohey, M. B., Li, W. Sea lamprey control: past, present, and future. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSiefkes%2C+MJ+%22Great+Lakes+Fisheries+Policy+and+Management%22">Great Lakes Fisheries Policy and Management</a>. , Michigan State University Press. East Lansing, MI. 651-704 (2013).</li>
<li>Li, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three+Novel+Bile+Alcohols+of+Mature+Male+Sea+Lamprey+%28Petromyzon+marinus%29+Act+as+Chemical+Cues+for+Conspecifics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">Three Novel Bile Alcohols of Mature Male Sea Lamprey (Petromyzon marinus) Act as Chemical Cues for Conspecifics.</a> Journal of Chemical Ecology. 43 (6), 543-549 (2017).</li>
<li>Hird, S. J., Lau, B. P. -Y., Schuhmacher, R., Krska, R. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0165993614000971">Liquid chromatography-mass spectrometry for the determination of chemical contaminants in food.</a> TRAC Trends in Analytical Chemistry. 59, 59-72 (2014).</li>
<li>Little, J. L., Williams, A. J., Pshenichnov, A., Tkachenko, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+%26%2334%3Bknown+unknowns%26%2334%3B+utilizing+accurate+mass+data+and+ChemSpider%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+for+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Identification of &#34;known unknowns&#34; utilizing accurate mass data and ChemSpider.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 23 (1), 179-185 (2012).</li>
<li>Beckonert, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+profiling%2C+metabolomic+and+metabonomic+procedures+for+NMR+spectroscopy+of+urine%2C+plasma%2C+serum+and+tissue+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Metabolic profiling, metabolomic and metabonomic procedures for NMR spectroscopy of urine, plasma, serum and tissue extracts.</a> Nature Protocols. 2 (11), 2692(2007).</li>
<li>Kaiser, B., Wright, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKaiser%2C+B+%22Draft+Bruker+XRF+Spectroscopy+User+Guide%3A+Spectral+Interpretation+and+Sources+of+Interference%22">Draft Bruker XRF Spectroscopy User Guide: Spectral Interpretation and Sources of Interference</a>. , BRUKER. Madison, WI. (2008).</li>
<li>Breitmaier, E., Sinnema, A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBreitmaier%2C+E+%22Structure+Elucidation+by+NMR+in+Organic+Chemistry%3A+A+Practical+Guide%22">Structure Elucidation by NMR in Organic Chemistry: A Practical Guide</a>. , Wiley. Chichester, New York, Brisbane, Toronto, Singapore. (1993).</li>
<li>Seco, J. M., Quinoá, E., Riguera, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+assignment+of+absolute+configuration+by+NMR%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">The assignment of absolute configuration by NMR.</a> Chemical Reviews. 104 (1), 17-118 (2004).</li>
<li>Li, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bile+Salt-like+Dienones+Having+a+Novel+Skeleton+or+a+Rare+Substitution+Pattern+Function+as+Chemical+Cues+in+Adult+Sea+Lamprey%5BTitle%5D)+AND+%22Organic+Letters%22%5BJournal%5D)">Bile Salt-like Dienones Having a Novel Skeleton or a Rare Substitution Pattern Function as Chemical Cues in Adult Sea Lamprey.</a> Organic Letters. , (2017).</li>
<li>Li, K., Buchinger, T. J., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery+and+characterization+of+natural+products+that+act+as+pheromones+in+fish%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Reports%22%5BJournal%5D)">Discovery and characterization of natural products that act as pheromones in fish.</a> Natural Product Reports. , In press (2018).</li>
<li>Yambe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L-Kynurenine%2C+an+amino+acid+identified+as+a+sex+pheromone+in+the+urine+of+ovulated+female+masu+salmon%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">L-Kynurenine, an amino acid identified as a sex pheromone in the urine of ovulated female masu salmon.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 103 (42), 15370-15374 (2006).</li>
<li>Rasmussen, L., Lee, T. D., Zhang, A., Roelofs, W. L., Daves, G. D. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification%2C+identification%2C+concentration+and+bioactivity+of+%28Z%29-7-dodecen-1-yl+acetate%3A+sex+pheromone+of+the+female+Asian+elephant%2C+Elephas+maximus%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Senses%22%5BJournal%5D)">Purification, identification, concentration and bioactivity of (Z)-7-dodecen-1-yl acetate: sex pheromone of the female Asian elephant, Elephas maximus.</a> Chemical Senses. 22 (4), 417-437 (1997).</li>
<li>Sorensen, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mixture+of+new+sulfated+steroids+functions+as+a+migratory+pheromone+in+the+sea+lamprey%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Mixture of new sulfated steroids functions as a migratory pheromone in the sea lamprey.</a> Nature Chemical Biology. 1 (6), 324-328 (2005).</li>
<li>Hoye, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Details+of+the+structure+determination+of+the+sulfated+steroids+PSDS+and+PADS%3A+New+components+of+the+sea+lamprey+%28Petromyzon+marinus%29+migratory+pheromone%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+organic+chemistry%22%5BJournal%5D)">Details of the structure determination of the sulfated steroids PSDS and PADS: New components of the sea lamprey (Petromyzon marinus) migratory pheromone.</a> The Journal of organic chemistry. 72 (20), 7544-7550 (2007).</li>
<li>Fine, J. M., Sorensen, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+biological+activity+of+the+multi-component+sea+lamprey+migratory+pheromone%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">Isolation and biological activity of the multi-component sea lamprey migratory pheromone.</a> Journal of Chemical Ecology. 34 (10), 1259-1267 (2008).</li>
<li>De Buchinger, T. J., Wang, H., Li, W., Johnson, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+a+receiver+bias+underlying+female+preference+for+a+male+mating+pheromone+in+sea+lamprey%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+of+London+B%3A+Biological+Sciences%22%5BJournal%5D)">Evidence for a receiver bias underlying female preference for a male mating pheromone in sea lamprey.</a> Proceedings of the Royal Society of London B: Biological Sciences. 280, (2013).</li>
<li>De Bruyne, M., Baker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+detection+in+insects%3A+volatile+codes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">Odor detection in insects: volatile codes.</a> Journal of Chemical Ecology. 34 (7), 882-897 (2008).</li>
<li>Bradshaw, J., Baker, R., Lisk, J. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/articles/304265a0">Separate orientation and releaser components in a sex pheromone.</a> Nature. 304 (5923), 265-267 (1983).</li>
<li>Linn, C., Campbell, M., Roelofs, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pheromone+components+and+active+spaces%3A+what+do+moths+smell+and+where+do+they+smell+it%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Pheromone components and active spaces: what do moths smell and where do they smell it.</a> Science. 237 (4815), 650-652 (1987).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

דגים חיים בעולם כימי מלא של תרכובות, ובכל זאת להיות מזוהה. Fractionation מונחה bioassay הוכיחו חיוניים כדי לזהות ולאפיין מולקולות ביו המתווכות אינטראקציות כימיות רבות, כגון אלה הנהוגות סלמון masu ב31פילים אסיאתיים32, ים lampreys33, 34,35. Fractionation מונחה bioassay היא גישה יעילה במדויק לאתר ולחלץ לאתר במדויק תרכובות ביו מן ההתחלה אל המתחם פעיל מטוהרים. באמצעות גישה זו, תרכובות ...

פרומונים הם אותות כימיים מסוימים שפורסמו על ידי יחידים שמסייע להם באיתור מקורות המזון, זיהוי טורפים, מתווכים אינטראקציות חברתיות של בני מינו1. פרומון בתקשורת חרקים כבר למד היטב2; עם זאת, זיהוי כימי והתפקוד הביולוגי של פרומונים חוליות ימיים לא נחקרו בהרחבה. ניתן להחיל זהות וידע תפקוד הפרומונים שוחרר כדי להקל על ההתאוששות של מינים מאוימים3,4 או בקרת מזיקים מינים5,6. היישום של טכניקות אלה מחייבת את בידוד ואפיון של רכיבי ביואקטיביות פרומון.
זיהוי פרומון הוא ענף הכימיה מוצר טבעי. התקדמות במחקר פרומון הוגבלה חלקית בשל אופיו של מולקולות פרומון עצמם. פרומונים הן לעיתים קרובות לא יציב, המשוחררים בכמויות קטנות, רק כמה טכניקות דגימה קיימת כדי לזהות כמויות זעירות של נדיפות7,8 או תרכובות מסיסים במים9. גישות לזיהוי פרומונים כוללים 1) הקרנה יישוב של תרכובות ידועות, גליקומיקס 2) ו- fractionation 3) bioassay מונחה. הקרנה יישוב תרכובות ידועות בדיקות תוצרי חילוף החומרים זמינים מסחרית של תהליכים פיזיולוגיים המשוערות לתפקד כמו פרומונים. גישה זו היא הגבלת כי החוקרים בודק רק תרכובות ידוע וזמין. עם זאת, זה הביא זיהוי מוצלח של הורמוני מין אצל דגי זהב שהפונקציה כמו פרומונים10,11,12. גליקומיקס היא גישה זיהוי פרומון השני המבדיל מוצרים מטבולית פוטנציאלי של מולקולה קטנה בתוך המערכת הביולוגית13. השוואה של פרופילים מטבולית של שתי קבוצות (כלומר, פעיל נגד תמצית לא פעילים) מאפשר זיהוי פרופיל מטבולי הפוטנציאלי מ אשר מטבוליט מטוהרים, הובהר המבנה, ואת bioactivity הוא אישר14. אפקטים מוספים או סינרגטי של ניסוחים מורכבים של תערובות מסוים נוטים יותר להיות מזוהה עם גליקומיקס מכיוון מטבוליטים נחשבים ביחד ולא כסדרה של שברים13. ובכל זאת, המימוש של מטבולומיקס מסתמך על הזמינות של הפניות סינתטי כי הנתונים המתקבלים לא להקל על הבהרה של מבנים חדשניים.
Fractionation מונחה bioassay היא גישה משולבת, איטרטיבי המתפרס על שני שדות: כימיה וביולוגיה. גישה זו משתמשת בתוצאות של bioassays פיזיולוגיים והתנהגותיים להנחות את בידוד וזיהוי של תרכובת פרומון פעיל. תמצית גולמי fractionated באמצעות מאפיין כימי (כלומר, גודל מולקולרי, קוטביות, וכו '), נבדק עם הקלטות אלקטרו-olfactogram (EOG) ו/או של bioassay. Bioactive הרכיבים מוקרנים מאת לחזור על השלבים של fractionation ו- EOGs ו/או bioassays. המבנים של חומרים פעילים טהורים הם הובהר על ידי שיטות ספקטרוסקופיות ו spectrometric, אשר מספקים את משקל מולקולרי ומידע המבנית לייצר תבנית של המתחם להיות מסונתז. Fractionation מונחה bioassay יכולות להניב מטבוליטים מגוונים, פרומונים שעשויות להיות הרומן עם שלדים כימי ייחודי כי צפויים להיות החזוי של המסלולים biosynthetic הוחלף נגזר.
כאן, אנו מתארים את פרוטוקול fractionation מונחה bioassay נהגו לבודד לאפיין את bioactivity של תרכובות פרומון מין זכר עגולי הפה לים. הצלופח ים (Petromyzon מרינוס) הוא מודל חוליות אידיאלי ללמוד תקשורת פרומון כי דגים אלו יסתמכו על חוש הריח זיהוי סימנים כימיים לתווך ההיסטוריה החיים anadromous שלהם מורכבת משלושה שלבים ברורים: הזחלים, לנוער, למבוגרים. עגולי הפה ים הזחלים מתחפרים סחף בגדות נחלים, לעבור שינוי דרסטי של, להפוך קטינים זה להגר לאגם או אוקיינוס שבו הם הדורות דגים גדולים המארח. לאחר ניתוק מן הדגים המארח, המבוגרים נודדים בחזרה אל נחלים ההשרצה, בהדרכת את הפרומונים נודדות שפורסמו על ידי זרם תושב הזחלים15,16,17,18,19 . זכרים בוגרים ascend לשטח ההשרצה, שחרור של פרומון המין רב רכיבים כדי למשוך חברים, להשריץ לסירוגין במשך כשבוע, זיווה,15,20. הזיהוי של פרומונים עגולי הפה ים חשוב כי אפנון של מערכת תקשורת פרומון הוא בין האפשרויות נחשב כדי לשלוט על lampreys ים פולשנית האגמים הגדולים רודכב21.

<table><tbody><tr><td>נימי בורוסיליקט קיר סטנדרטיים פרימיום עם נימה&nbsp;</td>אלקטרודת הקלטה וייחוס <td>של וורנר אינסטרומנטס</td><td>G150F-4</td><td>(OD 1.5 מ"מ, קוטר פנימי 0.86 מ"מ)</td></tr><tr><td>מכשיר מושך פיפטה</td><td>Narishige</td><td>PC-10</td><td>מושך אלקטרודות עבור EOGs</td></tr><tr><td>חותך זכוכית עם קצה יהלום</td> קצה <td>חיתוך גנרי</td><td></td><td>של אלקטרודות עבור נימי</td></tr><tr><td>זכוכית בורוסיליקט</td><td>EOG World Precision Instruments</td><td>1B150-4</td><td>צינור אספקת ריח עבור EOG</td></tr><tr><td>מחזיק אלקטרודה הקלטה גוף ישר מסדרת E עם גלולה Ag / AgCl עבור נימי זכוכית OD 1.5 מ"מ</td><td>Warner Instruments</td><td>ESP-M15N</td><td>מחזיק אלקטרודה הקלטה</td></tr><tr><td>מחזיק אלקטרודה התייחסות סדרת E עם ידית עם&nbsp; Ag/AgCl גלולה&nbsp; עבור נימי זכוכית OD 1.5 מ"מ</td><td>וורנר אינסטרומנטס</td><td>E45P-F15NH</td><td>מחזיק אלקטרודות ייחוס</td></tr><tr><td>1 מ"מ סיכה</td><td>וורנר אינסטרומנטס</td><td>WC1-10</td><td>לגשר מחזיקי אלקטרודות ייחוס והקלטה</td></tr><tr><td>2 מ"מ</td><td>פינים וורנר אינסטרומנטס</td><td>WC2-5</td><td>לגשר על מחזיקי אלקטרודות ייחוס והקלטה</td></tr><tr>אגר מותך<td>Agar</td><td>Sigma</td><td>A1296</td><td>למילוי אלקטרודות</td></tr><tr><td>אשלגן כלורי (KCl)</td> <td>Sigma</td><td>P9333</td><td>3M KCl למילוי אלקטרודות ומחזיקי אלקטרודות</td></tr><tr><td>מיקרופיל מיקרופיפטה</td><td>World Precision Instruments</td><td>MF28G-5</td><td>למילוי אלקטרודות ומחזיקי אלקטרודות</td></tr><tr><td>L-Arginine</td><td>Sigma</td><td>A5006</td><td>ריח בקרה חיובי עבור EOG</td></tr><tr><td>מתנול</td><td>Sigma</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>אמבט מים</td><td>בהתאמה אישית</td><td>N/A</td><td>מחזיק ריחות עבור EOG</td></tr><tr><td>3-aminobenzoic acid ethyl ester (MS222)</td> <td>Syndel USA</td><td>Tricaine1G</td><td>EOG חומר הרדמה</td></tr><tr><td>גלמין טריאתיודיד</td><td>Sigma</td><td>G8134-5G</td><td>EOG</td></tr><tr><td>משתק 1 מ"ל מזרק</td><td>BD Biosciences</td><td>301025</td> למתן מחט תת <td>עורית משותקת</td></tr><tr><td>26G 5/8</td><td>BD Biosciences</td><td>305115</td><td>למתן</td></tr><tr><td>מהדק רולר</td> משותק <td>דיוק עולמי מכשירים</td><td>14043-20</td><td>התאמת קצב הזרימה של חומר הרדמה לתוך פיו של הצמד</td></tr><tr><td>נתרן כלורי (NaCl)</td> <td>J.T. Baker</td><td>3624-05</td><td>להכנת מעמד פלסטיק בצורת V 0.9% מלח</td></tr><tr><td>כשלב דגימה</td><td>בהתאמה אישית</td><td>N/A</td><td>מחזיק צמדים במהלך</td></tr><tr><td>שוקת פלסטיק</td><td>EOG N</td><td>/A</td><td>בהתאמה אישית מחזיק מעמד פלסטיק בצורת V במהלך</td></tr><tr><td>להבי אזמל EOG - #11</td><td>Fine Science Tools</td><td>10011-00</td><td>לדיסקציה EOG</td></tr><tr><td>ידית אזמל - #3</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td>לדיסקציה EOG</td></tr><tr><td>מלקחיים ישרים עדינים במיוחד</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td>לדיסקציה EOG, Dumont #5SF מלקחיים</td></tr><tr><td>מעוקלים עדינים במיוחד</td><td>Fine Science Tools</td><td>11370-42</td><td>לדיסקציה EOG, Moria MC40B</td></tr><tr><td>מספריים</td> <td>ישריםFine Science Tools</td><td>15003-08</td><td>לדיסקציה EOG</td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>Zeiss</td><td>Discovery V8</td><td>לדיסקציה</td></tr><tr><td>EOG אור תאורה</td><td>Zeiss</td><td>CL 1500 ECO</td><td>לדיסקציה EOG</td></tr><tr><td>צינורות פלסטיק</td><td>גנרי</td><td></td><td>לחיבור הגדרת EOG במחזור מחדש ואמבטיות מים</td></tr> צינורות <tr><td>אספקת ריח</td><td>בהתאמה אישית</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>In מסנן קו וסט אטמים</td> של <td>חברת Lee</td><td>TCFA1201035A</td><td></td></tr><tr><td>מיקרומניפולטורים</td><td>Narishige</td><td>MM-3</td><td>למיקום אלקטרודות וצינור נימי אספקת ריח</td></tr><tr><td>התקני אחיזה מגנטיים</td><td>Kanetec</td><td>MB-K</td><td></td></tr><tr><td>נהג שסתום</td><td>Arduino</td><td>בהתאמה אישית</td><td>לשליטה על פתיחת השסתום לגירוי ריח</td></tr><tr><td>שסתום אלקטרומגנטי</td><td>לי שסתום</td><td>LFAA1201618H</td><td>של החברה לגירוי ריחות</td></tr><tr><td>מגבר NeuroLog AC/DC</td><td>Digitimer Ltd.</td><td>NL106</td><td>להגדלת המשרעת של האות האליקטרי</td></tr><tr><td>NeuroLog DC קדם-מגבר עם</td><td>Digitimer Ltd.</td><td>NL102G</td><td>להגדלת המשרעת של האות האליקטרי</td></tr><tr><td>מסנן 60 הרץ נמוכים</td><td>Digitimer Ltd.</td><td>NL125</td><td></td></tr><tr><td>Digitizer</td><td>Molecular Devices LLC</td><td>Axon Digidata 1440A</td><td></td></tr><tr><td>מחשב Dell (OptiPlex 745) מריץ תוכנת רכישת נתונים Axoscope</td><td>Molecular Devices LLC</td><td>AxoScope גרסה 10.4</td><td></td></tr><tr><td>כלוב פאראדיי</td><td>בהתאמה אישית</td><td>N/A</td><td>מיגון רעש אלקטרומגנטי</td></tr><tr><td>מבוך דו-ברירה</td><td>מותאם אישית</td><td>N/A</td><td>דיקט ימי עמיד למים מכוסה תוחם פלסטיק</td></tr><tr><td>משאבת אשפה</td><td>הונדה</td><td>WT30XK4A</td><td>ממלא מבוך במים מהנהר הסמוך</td></tr><tr><td>משאבה פריסטלטית עם צינורות</td><td>קול פארמר</td><td>Masterflex 07557-00</td><td>לניהול ריחות במבוך</td></tr><tr><td>מחולל אינוורטר</td><td>הונדה</td><td>EU1000i</td><td>מפעיל משאבה פרסטלטית</td></tr><tr><td>כלוב שחרור</td><td>בהתאמה אישית</td><td>N / A</td><td>משמש לאקלום צמדים במבוך</td></tr><tr><td>רשת</td><td>גנרית</td><td></td><td>שימשה להכיל את ממדי המבוך ולמזער מערבולות מים עם גלילי רשת</td></tr><tr><td>דליים (5 ליטר)</td> <td>גנרי</td><td></td><td>לערבוב ריחות</td></tr><tr><td>מד זרימה</td><td>Marsh-McBirney</td><td>Flo-Mate 2000</td><td>למדידת פריקה</td></tr><tr><td>XAD 7 שרף HP</td><td>Dow כימי</td><td>37380-43-1</td><td>למיצוי מים ממוזגים&nbsp;</td></tr><tr><td>מתנול</td><td>סיגמא</td><td>34860</td><td>למיצוי מים ממוזגים&nbsp;</td></tr><tr><td>אמבט מים</td><td>Yamato</td><td>BM 200</td><td>לשאיבת מים ממוזגים&nbsp;</td></tr><tr><td>מייבש הקפאה</td><td>Labconco</td><td>CentriVap Concentrator</td><td>למיצוי מים ממוזגים</td></tr><tr><td>כלורופורם</td><td>Sigma</td><td>CX1050</td><td>לבידוד בריכות שברים</td></tr><tr><td>סיליקה ג'ל 70-230 רשת</td><td>Sigma</td><td>112926-00-8</td><td>לבידוד בריכות שברים</td></tr><tr><td>סיליקה ג'ל 230-400 רשת</td><td>Sigma</td><td>112926-00-8</td><td>לבידוד בריכות שברים</td></tr><tr><td>סיליקה מצופה מראש ג'ל TLC צלחות</td><td>Sigma</td><td>99571</td><td>לבידוד מאגרי שברים</td></tr><tr><td>אניסלדהיד</td><td>Sigma</td><td>A88107</td><td>לבידוד מאגרי שברים</td></tr><tr><td>Sephadex LH-20</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0090-01</td><td>לבידוד בריכות שברים</td></tr><tr><td>Amberlite XAD 7 שרף HP</td><td>Sigma</td><td>XAD7HP</td><td>למיצוי מים ממוזגים&nbsp;</td></tr><tr><td>4, עמודי זכוכית בקיבולת 2.5 ליטר</td><td>אייס זכוכית בע"מ.</td><td>5820</td><td>לשאיבת מים ממוזגים&nbsp;</td></tr><tr><td>אצטון</td><td>סיגמא</td><td>650501</td><td>למיצוי מים ממוזגים&nbsp;</td></tr><tr><td>TQ-S TOF LC ספקטרומטר מסה (או שווה ערך)</td> <td>Waters Co.</td><td>N/A</td><td>להבהרת מבנה</td></tr><tr><td>משאבת HPLC בינארית</td><td>Waters Co.</td><td>1525</td><td>לבידוד של בריכות/תרכובות שברים</td></tr><tr><td>ספקטרומטר NMR זריז, 900MHz (או שווה ערך)</td> <td>Agilent</td><td>N/A</td><td>להבהרת מבנה</td></tr><tr><td>מערכת ייבוש Rotovap</td><td>Buchi</td><td>RII</td><td>למיצוי מים ממוזגים&nbsp;</td></tr><tr><td>מנורת UV (254 ננומטר)</td><td>ספקטרוניקס ושות'</td><td>ENF-240C</td><td>לכרומטוגרפיה בשכבה דקה&nbsp;</td></tr></tbody></table>

הזיהוי של פרומונים ים עגולי הפה באמצעות מונחה bioassay fractionation

The Identification of Sea Lamprey Pheromones Using Bioassay-Guided Fractionation

Fractionation מונחה bioassay היא גישת איטרטיבי העושה את התוצאות של bioassays פיזיולוגיים והתנהגותיים להנחות את בידוד וזיהוי של תרכובת פרומון פעיל. שיטה זו הובילה אפיון אותות כימיים מוצלחת שהפונקציה כמו פרומונים במגוון רחב של מיני בעלי חיים. Lampreys ים מסתמכים על חוש הריח לזיהוי פרומונים המתווכות תגובות התנהגותיות או פיזיולוגיים. אנו משתמשים בידע הזה לביולוגיה דגים להניח פונקציות של פרומונים בשם להנחות את בידוד וזיהוי מרכיבים פעילים פרומון. כרומטוגרפיה משמש כדי לחלץ, לרכז, ולהפריד בין תרכובות מהמים ממוזגים. הקלטות אלקטרו-olfactogram (EOG) נערכים כדי לקבוע אילו שברים להפיק תגובות חוש הריח. מבחני התנהגות שני-בחירה מבוך משמשות לאחר מכן לקבוע אם כל אחד השברים מדיף גם פעילים בהתנהגותו, זירוז העדפה. שיטות ספקטרוסקופיות spectrometric לספק את משקל מולקולרי ואת המידע המבני כדי לסייע עם מבנה הבהרה. Bioactivity של תרכובות טהור הוא אישר עם EOG, מבחני התנהגות. התגובות ההתנהגות שנצפתה במבוך בסופו של דבר לאמת באווירה שדה כדי לאשר את תפקידם בסביבה טבעית זרם. אלה bioassays לשחק תפקיד כפול 1) להנחות את התהליך fractionation, 2) לאשר ולהגדיר עוד יותר את bioactivity של רכיבים מבודדים. כאן, אנחנו מדווחים התוצאות נציג של מזהה פרומון ים עגולי הפה המדגימים את התועלת של הגישה מונחה bioassay fractionation. הזיהוי של פרומונים עגולי הפה ים חשוב במיוחד כי אפנון של מערכת התקשורת שלו פרומון הוא בין האפשרויות נחשב לשלוט הצלופח ים פולשנית של האגמים הגדולים רודכב. בשיטה זו ניתן להתאים בקלות לאפיין את התקשורת הכימית במגוון רחב של taxa, לשפוך אור על waterborne. אקולוגיה כימית.

דיאגרמה סיכום השלבים המתוארים הפרוטוקול של fractionation מונחה bioassay מוצג באיור1. הפרוטוקול כרוכה בצעדים כדי לבודד ולאפיין את המבנה, את חוש הריח, והכוחות הפעילות התנהגותית של עגולי הפה ים בשם 5 פרומונים (איור 2). שימוש המוני spectrometric ו- NMR נתונים (איור 3 ו- 4 באיור), מבנה petromyzene A-B petromyzone A-C היו מבואר מן המים ממוזגים עם22...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לבודד ולאפיין את המבנה, חוש הריח, והכוחות תגובה התנהגותית של תרכובות פרומון בשם של הים lampreys.

הזיהוי של פרומונים ים עגולי הפה באמצעות מונחה Bioassay Fractionation

Bioassay-guided fractionation is an iterative approach that uses the results of physiological and behavioral bioassays to guide the isolation and ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האקולוגיה הכימית, כגון זיהוי פרומונים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא מקשרת תרכובות חדשות לתפקוד הפרומונים. כדי להתחיל בהליך זה, הניחו 15-30 צמדי ים זכרים בוגרים מינית במיכל המסופק עם 250 ליטר מי אגם הורון מוגזים, הנשמרים בטמפרטורה של 16-18 מעלות צלזיוס.כדי לחלץ את המים הממוזגים על ידי מיצוי בשלב מוצק, העבירו אותם מהמיכל דרך מערכת השאיבה לראש העמוד. המים עוברים דרך מצע של שני קילוגרמים של שרף חילופי יונים פולימרי קוטבי בינוני הכלול בסדרה של ארבעה עמודי זכוכית בקיבולת ליטר אחד. לאחר מכן, הסר את הממס האורגני וקצור את התמצית על ידי אידוי סיבובי במשך חמש שעות בלחץ מופחת ב-40 מעלות צלזיוס.כדי לבודד את בריכות השברים, יש להשרות את ג'ל הסיליקה בשלב הנייד הראשוני למשך 30 דקות. העבירו את הג'ל עם הממס לעמוד זכוכית ופתחו את השסתום שלו כדי לאפשר לשלב הנייד לעבור. לאחר מכן, מערבבים היטב את התמציות עם סיליקה ג'ל ומעמיסים אותן לתוך עמוד הכרומטוגרפיה הנוזלית מעל מצע הסיליקה ג'ל.יש לסלק אותם עם שיפוע מ-95% כלורופורם למתנול ל-100% מתנול, וכתוצאה מכך בסך הכל 2.5 ליטר, ואז לאסוף את חומר הניקוי בבקבוקונים בודדים של 10 מיליליטר. לאחר מכן, בצע את ניסוי TLC על צלחות סיליקה ג'ל מצופות מראש על ידי מריחת הדגימה על קו ההתחלה וטבילת קו ההתחלה של הצלחת בממס המתפתח במיכל זכוכית אטום. לאחר שהממס המתפתח מגיע לקו הסיום, הוציאו את הצלחת מהמיכל והמתינו 10 דקות עד שהממס יתאדה.דמיינו את הכתמים, תחילה תחת אור UV ב-254 ננומטר, ולאחר מכן צבעו את הצלחת על ידי ריסוס בתמיסת מתנול חומצית של 5% אניסלדהיד באמצעות מרסס כרומטוגרפיה וחימום ב-85 מעלות צלזיוס למשך שלוש דקות. לאחר מכן, רכזו את השבר לשאריות על ידי אידוי סיבובי בלחץ מופחת ב-40 מעלות צלזיוס למשך כ-30 דקות. כדי לבצע הקלטת EOG, מלאו את האלקטרודות הנימים ואת מחזיקי האלקטרודות במצב מוצק, שהוכנו מראש עם כדורי כלוריד כסף-כסף, באשלגן כלורי תלת מולארי באמצעות מיקרופיפטה.לאחר מכן, הכנס את האלקטרודות המוטות למחזיקי האלקטרודות. לאחר מכן, הכינו 100 מיליליטר של 10 עד מינוס 5 מולארי L-ארגינין במים מסוננים בפחם מ-10 עד מינוס שתי מוחנות L-ארגינין במים נטולי יונים בבקבוק נפחי. עבור עקומת תגובת הריכוז, הכינו 10 מיליליטר של דילולים פי 10 של בריכות השברים.כעת, כוונו צמד מורדם במעמד בצורת V ועטפו אותו במגבת נייר רטובה כדי למנוע התייבשות. הכנס צינור של מים מוגזים במחזור המכיל 50 מיליגרם לליטר MS222 לחלל הבוקאלי. התאם את קצב הזרימה וודא שהמים יוצאים דרך פתחי הזימים כדי להשקות את הזימים באופן רציף.שטפו את צינור אספקת הריח במים מסוננים וחברו אותו לשסתום המותקן על מיקרומניפולטור. לאחר מכן, הנח את צינור הנימים של אספקת הריח לתוך חלל אפיתל הריח כדי להעביר מים מסוננים לאפיתל הריח כדי למנוע התייבשות כאשר לא נותנים ריחות. לאחר מכן, הרכיב את אלקטרודות ההקלטה והייחוס על המיקרומניפולטורים.הורד את אלקטרודת הייחוס על העור החיצוני ליד הנארס. בעזרת המיקרוסקופ הסטריאוסקופי, הורד את אלקטרודת ההקלטה כדי לגעת בקושי במשטח אפיתל הריח. לאחר מכן, העבירו את ספיגת צינור אספקת הריח מהמים המסוננים ברקע לתמיסת L-ארגינין 10 למינוס חמש מולריות.הפעל את המחשב, המגבר, המסנן והדיגיטייזר. באמצעות תוכנת מנהל התקן השסתומים, תכנת את ההליך למתן פעימה בודדת של ארבע שניות של ריח על ידי סימון התיבה של T1, הגדרת T לארבע שניות וסימון התיבה של T2.In תוכנת רכישת הנתונים, הגדר את מצב הרכישה לאוסילוסקופ במהירות גבוהה. לחץ על סמל ההפעלה ולאחר מכן לחץ על התחל במנהל התקן השסתום כדי להפעיל את דופק הריח.התחל להקליט את הבקרה הריקה, L-ארגינין, ולאחר מכן את הריחות מריכוזים נמוכים לגבוהים עם שטיפה של שתי דקות של מים מסוננים בין יישומים. כדי לזהות שברים פעילים מבחינה התנהגותית, אקלמו את נקבת צמד הים הבוגרת מינית בכלוב השחרור במבוך למשך חמש דקות. שחררו את צמדי הים ותעדו את משך הזמן המצטבר שהצמדים מבלים בערוץ הניסוי והבקרה, שכל אחד מהם מכיל מי נהר, למשך 10 דקות.לאחר מכן, החל את גירוי הבדיקה על ערוץ הניסוי שהוקצה באופן אקראי ברכב לערוץ הבקרה באמצעות משאבות פריסטלטיות בקצב קבוע של 200 מיליליטר לדקה למשך חמש דקות, ולאחר מכן החל את גירוי הבדיקה ברכב למשך 10 דקות נוספות ורשום את משך הזמן המצטבר שהצמד מבלה בערוצי הניסוי והבקרה. בהליך זה, יש לטהר עוד יותר את השברים הפעילים לתרכובות עם כרומטוגרפיה של אי הכללת גודל באמצעות עמודת LH-20 ספאדקס. הכן את הדגימה ב-0.5 מיליליטר מהשלב הנייד הראשוני, טען אותה לעמודת הכלורופורם למתנול ולאחר מכן לעמודת המתנול, והוציא את השברים הפעילים כדי להניב את התרכובת.ממיסים ומדללים את התרכובת המטוהרת בשלב הנייד הראשוני של HPLC ליצירת תמיסה של 10 מיקרוליטר של כמיקרוגרם אחד למיליליטר. לאחר מכן, העבר את תמיסת הדגימה לבקבוקוני HPLC והכנס אותם לדגימה האוטומטית של HPLC. הזרקו את הדגימה לספקטרומטריית המסה של יינון אלקטרוספריי והקליטו את ספקטרומטריית המסה של יינון אלקטרוספריי ברזולוציה גבוהה באמצעות ספקטרומטר מסה כרומטוגרפיה.ממיסים לחלוטין את הדגימה בממיסים המנופחים שנבחרו ליצירת תמיסה בריכוז שנע בין 0.1 ל -10 מיליגרם למיליליטר. העבירו את תמיסת הדגימה לתוך צינור NMR כדי להקליט את ספקטרום התמ"ג החד-ממדי והדו-ממדי על ספקטרומטר תמ"ג של 900 מגה-הרץ. מוצג כאן ספקטרומטר NMR של 600 מגה-הרץ.זוהו חמישה פרומונים משוערים חדשים של צמדי ים והמבנים שלהם הובהרו בשיטות ספקטרומטריות וספקטרוסקופיות. פרומונים משוערים אלה היו מגרים לאפיתל הריח של צמד הים הבוגר והיו בעלי סף זיהוי נמוך ברישומי אלקטרו-אולפקטוגרמה. במבחני ההתנהגות של מבוך שתי האפשרויות, נקבות צמדי ים מיויצים נמשכו לפטרומיזון A, פטרומיזן A ופטרומיזן B, ונדחו מפטרומיזון C. תוך כדי ניסיון הליך בין-תחומי זה, חשוב לזכור לתאם את הניסויים הכימיים והביולוגיים לביצוע פרוטוקול איטרטיבי זה.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו קריסטלוגרפיה של קרני רנטגן ותגובות נגזרות על מנת לענות על שאלות נוספות כמו הסטריאוכימיה של התרכובות. לאחר פיתוחה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום המוצרים הטבעיים והנוירואתולוגיה לחקור את הביוסינתזה הסבירה ואת התפקוד הביולוגי של הפרומונים באורגניזמים ימיים כמו צמדי ים. אל תשכח שעבודה עם כלורופורם עלולה להיות מסוכנת ביותר ותמיד יש לנקוט באמצעי זהירות, כגון עבודה במכסה המנוע הכימי, לבישת כפפות ומשקפי מגן, בזמן הטיפול במגיב זה.

the-identification-sea-lamprey-pheromones-using-bioassay-guided

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

השיטה במהירות המארחות נדיפים מסך צמחים ידי מדידת התגובה של אלקטרו orangeworm הטבור מבוגר...

המבדק Electroantennographic ככלי מיון עבור נדיפים צמחים מארח

בסרטון זה אנו מדגימים בדיקה לביסוס נוכחות פוספוליפאז בתמצית ארס גולמי מאנתופלורה דובי – שושנת ים ימית. הבדיקה משתמשת בטכניקת דיפוזיה של ג'ל אגרוז, שבה האנזים פוספוליפאז מפזר ומפרק פוספוליפידים המשולבים במדיה המוצקה באופן רדיאלי.

בדיקת פעילות פוספוליפאז: בדיקת דיפוזיה בג'ל לקביעת פעילות פוספוליפאז בתמצית ארס גולמי מ - Anthopleura dowii

צמד ים הים לאבד את כיס מרה ודרכי מרה במטמורפוזה, תהליך דומה לatresia מרה האנושי. קיבעון חדש ושיטת הבהרה (CLARITY) שונה כדי להמחיש את עץ המרה כולו באמצעות מיקרוסקופיה confocal סריקת לייזר. שיטה זו מספקת כלי רב עוצמה כדי לחקור ניוון מרה.

הבהרת שיטה חדשה למדמיין המרה ניוון בכבד מטמורפוזה בים צמד הים ( Petromyzon מרינוס)

המבדק זה מעסיק דגים טורפים מודל כדי להעריך את הנוכחות של מטבוליטים האכלה-הרתעה מתמציות אורגניות של הרקמות של יצורים ימיים בריכוזים טבעיים באמצעות מטריצת מזון דומה מבחינה תזונתית.

מעבדה מבדק-האכלת דגים לבחינת פעילות Antipredatory של משני מטבוליטים מהרקמות של אורגניזמים ימיים

ב זוחלים, ליפידים העור של בני מינו הינן קריטיות לצורך איתות מינית, עם פוטנציאל השימוש בניהול מין פולש. כאן, אנו מתארים את הפרוטוקולים עבור חילוץ העור ליפידים מן המחסן עור או כל בעלי החיים, קביעת ניתוח המסה סה כ שומנים בדם ואת המפריד בין ליפידים באמצעות כרומטוגרפיה fractionation באמצעות העמודה.

בידוד כימי, כימות, הפרדת שומנים בעור של זוחלים

הקלטה רב-יחידה חוץ-תאית מעצב הריח היא שיטה רגישה, איתנה ותו לאופתית להערכת רגישות חוש הריח בדגים ימיים. הוא מתעד קלט חושי ראשי והוא אינו תלוי במליתיות חיצונית.

הקלטה רב-יחידה חוץ-תאית מעצב הריח של טאוסט

אפיון ספקטרומטרי של מסה של נוירופפטידים מספק מידע על רצף, כמות ולוקליזציה. זרימת עבודה אופטימלית זו שימושית לא רק למחקרי נוירופפטידים, אלא גם לפפטידים אנדוגניים אחרים. הפרוטוקולים המובאים כאן מתארים הכנת דגימות, רכישת טרשת נפוצה, ניתוח טרשת נפוצה ויצירת מסדי נתונים של נוירופפטידים באמצעות LC-ESI-MS, איתור MALDI-MS והדמיית MALDI-MS.

חקירה ספקטרומטרית מסה רבת פנים של נוירופפטידים בקלינקטס ספידוס

כאן נתאר פרוטוקול להשגת תמצית ארס גולמית משכת ים וזיהוי פעילותה ההמוליטית והפוספוליפאזית.

זיהוי פעילות המוליטית ופוספוליפאזה בתמציות גולמיות מתוך שושנות ים על ידי מאמרים ביו-אסים פשוטים

עבודה זו נועדה להעריך ולסקור את הליך הבדיקה הביולוגית של Artemia salina קטלניות, המזוהה גם כבדיקת קטלניות של שרימפס מלח. שיטה פשוטה וזולה זו נותנת מידע על הרעילות הכללית (הנחשבת להערכת רעילות ראשונית) של דגימות, כלומר, מוצרים טבעיים.

קטלניות ביואסאי באמצעות ארטמיה סלינה L.

פרוטוקול זה קובע שיטות לחילוץ וכימות תגובות לפרומון המין הנדיף ב- C. elegans, ומספק כלים לחקר תקשורת כימית ומסלול ניווט.

מיצוי פרומון מין נדיף ובדיקת כימותרפיה ב- Caenorhabditis elegans

פרוטוקול זה מציג זרימת עבודה אוטומטית לחלוטין למיצוי גאוסמין ו-2-מתילאיזובורנול מרקמות דגים עשירות במים ושומנים השיטה מאפשרת זיהוי מוקדם של מולקולות אלו לפני שהן מגיעות לסף הריח. נתונים מייצגים מסביבת חקלאות ימית מסופקים.

מיצוי וזיהוי של גאוסמין ו-2-מתילאיזובורנול במים ובדגים באמצעות בדיקות מיצוי סופגות בעלות קיבולת גבוהה ו-GC-MS

חקור זיהוי פרומונים בדגי צמד ימיים באמצעות חילוף יונים ואידוי רוטרי. שיטה זו מקשרת תרכובות חדשות לפונקציית פרומון ומסייעת להבנת אקולוגיה כימית ותקשורת בין פרטים.

הזיהוי של פרומונים ים עגולי הפה באמצעות מונחה Bioassay Fractionation

גלה סרטונים נוספים