אפיתל שחיקה הקרנית עם עינית Burr כמודל עבור קרנית ריפוי פצעים

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח הנוגעות למנגנונים התאיים והמולקולריים המעורבים במהלך ריפוי פצעי הקרנית. יתרונה של טכניקה זו הוא בכך שהיא משקפת את המצבים בחדר המיון במקרה של החדרת קרנית, כלומר שחיקה או שריטה על פני העין. הרעיון לשיטה זו עלה לי לראשונה כשחקרתי תאי אב אפיתל בקרנית, והתנהגותם במצב שמאתגר את התחזוקה ההומאוסטטית של הקרנית.

הדגמה חזותית של שיטה זו היא קריטית, מכיוון שביצוע שחיקת הקרנית קשה, והיא דורשת תרגול. ראשית, הכינו תמיסת פלורצין של 0.1% להדמיית השחיקה באור כחול קובלט על ידי מדידת 10 מיליגרם מלח פלורצין בקנה מידה עדין. לאחר מכן, הוסיפו את המלח ל-10 מיליליטר של תמיסת מלח חוצצת Fosfate.

יש להגן על תמיסת פלורסין מפני אור ולנער במשך חמש דקות. יש לסנן את התמיסה באופן סטרילי לבקבוק טפטפת, ולהגן מפני אור. ניתן לאחסן את תמיסת פלורסין בארבע מעלות צלזיוס למשך יומיים-שלושה.

נקה את קצה העין לפני ואחרי השימוש. ראשית, עם PBS, ולאחר מכן, עם 70% אתנול. התחל בהנחת העכבר המורדם על מגבת נייר על צלחת חימום שחוממה ל-37 מעלות צלזיוס.

בדוק את רמת ההרדמה על ידי מתן צביטה בזנב וצביטה בבוהן. רמת ההרדמה טובה אם רפלקס הזנב נעדר אך רפלקס הבוהן קיים. סובב את בסיס הבור כדי להפעיל את הרטט.

פתח את העין כדי להישחק על ידי החזקת העפעפיים זה מזה באצבעות. לאחר מכן, גע בחוזקה בקוצים בקרנית, והזיז את המכשיר קדימה ואחורה ולצדדים על משטח העין מבלי להרים את הקוצה. רטט הקוצים יבצע את השריטה.

אין ללחוץ, לנער או לקרוע את הקרנית. בקרנית המרכזית, 20 תנועות שחיקה על פני השטח מספיקות כדי לגרום לפצע. ביצוע שחיקת הקרנית הוא מאתגר ודורש תרגול.

הקפידו לשים לב ללחץ נכון, ונסו לבצע את השחיקה בניסיון אחד בלבד. יש לתת טיפה אחת של תמיסת פלורצין לעין השחוקה מבקבוק הטפטפת. לאחר מכן, שטפו את העין פעם אחת עם 0.9% אחוז מלח כדי להפחית את הרקע של פלורסין.

יש לספוג את עודפי הנוזלים במגבון רך, ולנקות את הריסים במידת הצורך. כדי לדמות את השחיקה, מקם מנורת שולחן עם נורת עט כחול קובלט מחוברת ממש מעל עין העכבר. ניתן להדביק את הכפתור של נורית העט כדי לשמור על האור דולק בעת עבודה לבד.

מקד מצלמת SLR על העין באור החדר, ולאחר מכן כבה את כל האורות האחרים מלבד אור העט הכחול קובלט. כאשר הוא מואר באור העט הכחול קובלט, האזור השחוק זוהר בירוק עקב מולקולות פלורסין הכלואות במשטח הלא אחיד. השתמש במצלמת SLR כדי לצלם תמונות של העין.

לאחר הדמיית העין, החזר את העכבר לצלחת המחוממת. יש להניח טיפה של משחת עיניים אנטיבקטריאלית Fucidin לעיניים שחוקות ולא שחוקות כדי להעניק לחות ולשמור על משטח העין נקי מחיידקים לאחר ההרדמה. התבונן בעכבר על הצלחת המחוממת למשך תקופת ההתעוררות של חמש עד 20 דקות, לאחר ההרדמה.

כאשר הוא הופך לנייד, שכן את העכבר בכלוב נקי. לאחר המתת חסד של בעל החיים בשיטה מאושרת, אסוף את גלגל העין על ידי חיתוך ופתיחה תחילה בעור לצד העין בעזרת מספריים לדיסקציה. לאחר מכן, הניחו את המספריים מתחת לגלגל העין, וחתכו את עצב העין כדי לשאוב את גלגל העין החוצה מהמסלול.

יש להניח את העין בכלי המכיל PBS. השתמש במחט 26 מד כדי ליצור חור בחלק האחורי של העין בצד הרשתית, כדי לאפשר חדירה חופשית של תמיסות לתוך העין. העבירו את העין לשפופרת של שני מיליליטר המכילה PBS.

לאחר מכן, הסר את ה-PBS, הוסף ארבעה אחוז פרפורמלדהיד וקבע את העין בארבע מעלות צלזיוס למשך ארבע עד חמש שעות. תמונה זו מציגה עין עכבר מיד לאחר שחיקה. אות פלורסין מסמן את האזור השחוק בירוק בוהק, כאשר כמו כל שאר האזורים באפיתל נשארים כהים.

הקו המקווקו מסמן את גבולות הפצע. התמונה מציגה את העין הדו-צדדית הלא פגועה המשמשת כבקרה. הכתם הלבן הוא ההשתקפות מהמצלמה.

18 שעות לאחר השחיקה, אפיתל הקרנית נסגר ברובו מעל האזור החשוף ונותר רק שחיקה קטנה. ב-72 שעות לאחר השחיקה, לא נראה אות ירוק. זה מצביע על כך שאפיתל הקרנית עבר אפיתל מחדש במלואו עד 72 שעות לאחר השחיקה.

השחיקה מתמקדת באפיתל הקרנית, המוצג כאן בעין השלמה, כך שהשכבות העמוקות יותר של הקרנית נותרו שלמות. מיד לאחר השחיקה, צביעת H ו-E חושפת את קצה השחיקה, המסומן על ידי אסטריקס זה כמדף צר וא-תאי, הרציף מאפיתל קרנית רגיל בעובי של ארבעה עד חמישה תאים. 18 שעות לאחר הפציעה, תהליך הריפוי פעיל, והאפיתל מחדש נמשך.

זה מוצע על ידי הופעת קצה מוביל של שכבת תאי אפיתל אחת עד שתיים המכסה את האזור החשוף. פני השטח נראים אפיתל מחדש במלואם לאחר 72 שעות, כאשר החזיתות הנודדות מכסות את הפצע, וכל שכבות האפיתל שוב נוכחות. לאחר שליטה, ניתן לבצע טכניקה זו תוך שעתיים אם היא מבוצעת כראוי על ידי שני חוקרים.

בעת תכנון וניסיון הליך זה, חשוב לזכור לעקוב אחר הנחיות רווחת בעלי החיים המקומיות שלך, ולשמור על נוהל מעבדה טוב וסטרילי. בעקבות פרוטוקול זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו מעקב אחר ליניס כדי לענות על שאלות נוספות על ריפוי פצעי קרנית, אפיתל מחדש והתאוששות הומאוסטזיס רקמות בקרנית.