ניתוח שתל שבלולי והקלטות תגובה חשמלית עורר גזע המוח בעכברים C57BL/6

מודלים חייתיים של שתלי שבלול יכול לקדם את הידע בסיסי טכנולוגיים לטיפול אובדן שמיעה sensorineural קבוע עם גירוי חשמלי. מחקר זה מציג פרוטוקול כירורגי מחריש אוזניים חריפה, שבלול השרשה של מערך אלקטרודה עכברים, כמו גם את הערכת תפקודי עם גזע המוח השמיעתית תגובה.

מודלים של שתלי שבלול בעלי חיים יכולים לקדם את הידע שלנו על הבסיס הטכנולוגי לטיפול באובדן שמיעה עצבי חושי קבוע עם גירוי חשמלי. פרוטוקול זה מדגים השתלה חריפה מחרישת אוזניים ושרוך בעכבר. וההערכה התפקודית של גירוי שתל שבלול עם תגובת גזע מוח שמיעתית.

כמה אתגרים עיקריים של ביצוע ניתוח שתל שבלול בעכברים הם גודל קטן של שבלול ואת הנוכחות של עורק stapedial גדול ליד נישה החלון העגול. כדי למדוד את מצב השמיעה הרגיל, לטעון קצף אקוסטי לתוך מזרק אחד מיליליטר ולהזריק 100 כדי 200 microliters של קצף לתוך תעלת האוזן contralateral של עכבר C57 שחור בן שמונה עד שתים עשרה שבועות כדי לבודד את תגובת גזע המוח השמיעתי מן האוזן ipsilateral, דואג כי אטמי מזרק קרוב לאוזן למסירה של הקצף כל הדרך לתוך האוזן. לאחר מכן, מניחים רמקול 10 ס"מ מהאוזן ipsilateral ולנקות את אלקטרודות AVR עם 70% אתנול.

מניחים את אלקטרודה התייחסות מתחת לעור מתחת הפינה של האוזן ipsilateral ואת האלקטרודה הפעילה מתחת לעור של הקודקוד. הניחו את האלקטרודה הקרקעית מתחת לעור הרגל האחורית. חבר את כיסוי הראש ואת preamplifier למעבד השמיעה באמצעות יציאת סיבים אופטיים.

ותבדוק את ההימנעות של האלקטרודות הפעילות והמתייחסות. כאשר האלקטרודות מציגות את אותו מכשול, סגור את התא אטום לרעש והצג את גירוי הקליק. הקלטת ה- AVR בתנאי שדה חופשי עם מעבד שמיעתי ותוכנה מורכבים מתאימים.

תקנן את גירוי הקליק ל- 0.1 אלפיות שניה של קליקים מונופאזיים בערוץ יחיד המוצגים ב- 21 הרץ עם רמת לחיצה יורדת מ- 90 דציבלים של רמת לחץ קול ל- 10 דציבלים של רמת לחץ קול ב- 10 שלבי דציבלים בחלון הקלטה של 10 אלפיות השנייה. לאחר מכן קבע את סף ה- AVR כרמה הדציבלים הנמוכה ביותר עם תגובת גל AVR הניתנת לזיהוי. כדי לגרום מחריש אוזניים, מניחים את העכבר בצד ימין שלה דואג לשמור על הגוף ישר כך דרכי הנשימה להישאר פתוח.

הסר את הפרווה מאחורי האוזן ipsilateral ולחטא את העור החשוף עם פתרון אתנול רציף 70%ו Povidone-יוד פתרון סקראבס. להזיז את החיה תחת מיקרוסקופ ניתוח ולהשתמש המטרה 16 פעמים אזמל לעשות חתך אחד עד סנטימטר וחצי לאחר ניתוח. תחת הגדלה של 25 עד 40x, השתמש במלקחיים כדי לנתח בוטה דרך שכבת השומן התת עורית החשופה ולחזור על שריר עצם החזה כדי לחשוף את פריוסטאום בולה טימפני.

עצב הפנים עוטף את הקצה הגבי האחורי של שריר החזה ורץ לאורך תעלת האוזן לכיוון הפינה. שימוש בעצב הפנים כציון דרך לזיהוי הבולה השמיעתית מניח בעדינות כלי נשלף ששומר על עצמו לתוך החתך לגישה לבולה. הסר את הרקמה overlying את אזור mediodorsal של בולה כדי לאפשר הדמיה ברורה של הרכס בין הבולה ואת תהליך mastoid בעדינות לסובב מחט 30 guage לתוך בולה כדי ליצור חור בצד העליון האחורי של הרכס.

קוצץ חתיכות עצם קטנות עם מדחפים עדין הטה להרחיב את bullastomy עד חלל האוזן התיכונה נחשפת. ולהרחיב את החור dorsally לכיוון תהליך mastoid עד נישה החלון העגול ברור של עצם overlying. הצעד הקריטי ביותר הוא הכנת נישה החלון.

הקפד לקחת את הזמן שלך כדי לא לפגוע עורק stapedial. לדאוג לא לפגוע עורק stapedial, להאריך את bullastomy בכיוון העליון הקדמי לדמיין את stapes, עצם האוזן התיכונה מחובר לחלון הסגלגל. לאחר מכן הסר את stapes לחשוף את החלון הסגלגל.

כדי ליישם את הסוכן ototoxic, להשתמש במחט guage קהה 30 כדי לניקוב בעדינות את קרום החלון העגול הסגלגל, המאשר כי perilymph אוזל. ולהשתמש מזרק מיליליטר אחד מצויד מחט 30 מד לאט לבלבל 0.2 מיליליטר של 5% משקל על ידי נפח neomycin מומס PBS דרך החלון הסגלגל. כאשר כל נפח הסוכן נמסר בשפע הפתרון לתוך החלון העגול דואג לא לפגוע במבני עצם החלון.

ומקום חתיכות מילימטר מרובע אחד של ספוג ספוג neomycin בתוך החלון העגול וגומחת החלון הסגלגל. לאחר מכן להסיר את המפשק ולסגור את החתך, הקלטת aVR אקוסטי לאחר מחריש אוזניים כפי שהוכח לאחר 30 דקות. כדי להכניס את מערך האלקטרודה של שתל שבלול, מקם את כלי המפשק בחזרה לתוך החתך כדי לגשת מחדש לבולה ולהכניס את מערך האלקטרודה לתוך סקאלה טימפני בעומק כך טבעת הפלטינה הרביעית של המערך ממוקם ממש בתוך החלון העגול.

החדרת מערך האלקטרודה יכולה להיות גם מסובכת. אז קח את הזמן שלך כדי למצוא זווית הכנסה טובה באמצעות כלי כף אחד להוביל חוט ועוד כדי להכניס את המערך. סליל חוט העופרת בתוך הבולה ולהדביק את החוט לרקמה מעל הבולה.

לאחר הסרת בזהירות את המפשק וסגירת הכניסה עם דבק רקמה, להשתמש scalepel לעשות חתך 0.5 מילימטר בצוואר, בניצב לקו שבין איפה אלקטרודות aVR פעיל התייחסות יהיה. מניחים את כדור הקרקע בהכנסה ולחבר את לוח מערך האלקטרודה לפלטפורמת ממריצים בעלי חיים. כדי לבצע aVR חשמלי, למקם את האלקטרודות כפי שהודגם בעבר ולפתוח את התוכנה פלטפורמת ממריצים בעלי חיים.

לאחר מכן הגדירו את פרדיגמת גירוי הדופק החשמלית והציגו את רכבות הדופק החשמליות המתעדות את תגובות ה- AVR החשמליות המעוררים ברציפות דרך ה- TBT Headstage, preamplifier ומעבד השמיעה. סף שמיעה לפני ולאחר ניתוח לשמש קריאה תפקודית של הליך מחריש אוזניים. יישום אקטואלי של 5%neomycin לחלונות הסגלגלים ועגולים מגדיל באופן משמעותי את סף השמיעה עורר לחץ.

גירוי חשמלי של אלקטרודה תוך-חשמלית לאחר מחריש אוזניים יכול ליצור באופן אמין פעילות AVR חשמלית. במקרים מסוימים, גירוי שתל שבלול מפעיל את עצב הפנים ומייצר גל משרעת גבוה עם או תפליט קצר המאופיין בהגברה מהירה של גל III סביב שלוש אלפיות השניה וכנראה תגובה ישירה של עצב הפנים, או רוחב ארוך המופיע בסביבות חמש עד שש אלפיות שנייה וצפוי להיות תגובה מיוגנית לא שמיעתית מופעל בעקיפין על ידי עצב הפנים. במחקר זה הוכחנו כי מודל העכבר שתל שבלול הוא ריאלי גם שתל שבלול הוא קטן הניתוח:מאתגר.

בעת ניסיון הליך זה, חשוב לשקול פרוטוקול מחריש אוזניים כדי לחסל את כל התגובות האלקטרופוניות בהקלטות aVR ולחקות את נשירת תא השיער נמצא ברוב משתמשי C.I.. לסיכום, המספר ההולך וגדל של מודלים גנטיים של חירשות אנושית וכלים ביו-רפואיים הזמינים בעכברים הופכים אותנו למודל חייתי אטרקטיבי למחקר הכלים כולל עבור שתלי שבלול.