An <em>In Vitro</em> Assay to Detect tRNA-Isopentenyl Transferase Activity

Antonio E. Chambers; Adam E. Richardson; David F. Read; Thomas J. Waller; Douglas A. Bernstein; Philip J. Smaldino

doi:10.3791/58100

Assay ב Vitro לגילוי פעילות טרנספראז tRNA-Isopentenyl

JoVE Journal
Biochemistry

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biochemistry

An In Vitro Assay to Detect tRNA-Isopentenyl Transferase Activity

Assay ב Vitro לגילוי פעילות טרנספראז tRNA-Isopentenyl

Full Text

7,460 Views

07:46 min

October 8, 2018

DOI: 10.3791/58100-v

Antonio E. Chambers*¹, Adam E. Richardson*¹, David F. Read², Thomas J. Waller³, Douglas A. Bernstein¹, Philip J. Smaldino¹

¹Department of Biology,Ball State University, ²Department of Genome Sciences,University of Washington, ³Department of Molecular, Cellular, and Developmental Biology,University of Michigan

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

כאן, אנו מתארים את פרוטוקול עבור האפיון הביוכימי של שמרים שינוי RNA האנזים, Mod5, ונדון כיצד פרוטוקול זה יכול לחול על אנזימים אחרים שינוי RNA.

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לאפיין ביוכימית tRNA-Isopentenyl Transferase פעילות במבחנה. שיטה זו שימושית עבור זיהוי ואפיון במבחנה של פעילות tRNA-isopentenyl transferase של אנזימים רקומביננטיים מטוהרים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שזה חקירה פשוטה וישירה המשמשת לגילוי שינוי RNA קווולנטי.

למרות שיטה זו מספקת תובנה לפעילות tRNA-isopentenyl transferase, זה פוטנציאל הסתגלות לאפיון ביוכימי של מגוון רחב או RNA שינוי אנזימים. הצעד הראשון בהליך זה הוא לנקות ביסודיות את צלחות הזכוכית שישמשו ליציקת הג'ל. לשטוף את הצלחות עם מים וסבון, לשטוף היטב עם מים deionized, ולאחר מכן לנקות את הצלחות עם isopropanol ומגבונים ללא מוך.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos