Name: ממברנה בעיות ורידים-Veno חמצון בעכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-24T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: למדו את פרוטוקול ECMO ונו-ונוס בעכברים נושמים באופן ספונטני ללא אינטובציה. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנונים מולקולריים ופתולוגיים של נזק רב-איברי במחלות ריאה חריפות וכרוניות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

פרויקט זה נתמך על ידי מענק 311 KFO פתוח.

הניסויים בוצעו על זכר עכברים C57BL/6, בגיל 12 שבועות. מחקר זה נערך בהתאם להנחיות של החוק הגרמני חיה תחת פרוטוקול TSA 16/2250.
1. חומרי הכנה
הערה: כל הפעולות מבוצעות בתנאים נקי, שאינו סטרילי. בתנאים סטריליים ידרש אם החיה היא כדי להיות שרד במשככי.
<ol><li>להציג את 3 fenestrations לתוך צינור פוליאוריתן 2-Fr באמצעות סכין כירורגית תחת מיקרוסקופ עם 16 X הגדלה. הערה: כל fenestrations חייבת להיות ממוקמת בשליש הדיסטלי של הצינורית כדי להבטיח ניקוז דם אופטימלי.</li>
	<li>להכין את הפתרון לקרקע (טבלת חומרים). כוללים 30 IU/mL הפארין ו 2.5% v/v של פתרון 8.4% של NaHCO3. להכניס למקרר פתרון זה ב 4 ° C עד שזה מוכן לשימוש. פריים המעגל עם 500 uL של פתרון לקרקע.</li>
	<li>למקם את הצינורית יצוא הפתרון לקרקע ולמלא את מכונת לאקמו על ידי מיתוג את משאבת סחרור. ממשיכים לזרום הפתרון לקרקע דרך המחשב עבור הבא 30 דקות בקצב הזרימה של 1 מ"ל לדקה.</li>
	<li>לתת חצי ליטר/דקה של חמצן 100% oxygenator.</li>
</ol>2. הרדמה
<ol><li>המקום בעל החיים תא אינדוקציה ממולא בתערובת איזופלוריין/חמצן 2.5% v/v. מספקים חצי ליטר/דקה של חמצן 100% מכשיר אידוי. לפני הניתוח, בדוק שכי הרדמה מלאה מושגת על ידי בדיקות רפלקסים נסיגה וכאב פדלים. החל ג'ל לאזור העיניים כדי למנוע נזק ייבוש.</li>
	<li>השתמש כרית חימום לשמירה על טמפרטורת הגוף ב 37 º C.</li>
	<li>לבצע הרדמה מסיכת אינהלציה באמצעות מכשיר אידוי של איזופלוריין, להזריק 5 מ"ג/ק"ג carprofen subcutaneously.</li>
	<li>באופן קבוע להתבונן נשימה ספונטנית ולהתאים את הריכוז של איזופלוריין כך שיהיה בין 1.3 ל- 2.5%.</li>
</ol>3. ניתוח
<ol><li>לחשוף ומוחלף על שמאל באמצעות חתך לרוחב העור של 4 מ מ בעזרת מספריים בסדר בצד שמאל של הצוואר. יחד עם הכנה בוטה וחד באמצעות מטליות מיקרו-מלקחיים וכותנה, השתמש קרישה דו קוטבי של כלי קטן.</li>
	<li>ברגע ומוחלף על שמאל חשוף, מאתרים ומפסיקים את החלק הדיסטלי באמצעות תפרים משי של 8-0 עם העזרה של מיקרו-מלקחיים.</li>
	<li>המקום קשר slip, בסוף הווריד הפרוקסימלית. פצעים וחתכים בקיר הקדמי של בעזרת מיקרו-מספריים.</li>
	<li>כדי להשיג heparinization מלאה, להזריק הפארין 2.5 IU/g לתוך ומוחלף על דרך braunula 26 גרם.</li>
	<li>להעלות בצידי הראש בלוח בעלי חיים על ידי 30° כדי למנוע איבוד דם מוגברת מן הווריד של במהלך החדרת הצינורית.</li>
	<li>הכנס בצינורית (פו) פוליאורתן 2-Fr לתוך החלק הפרוקסימלית של ומוחלף על, סיבוב מעט תוך כדי לדחוף את זה עד לעומק של 4 ס מ; תוך כדי כך, ניתן להגיע ההסתעפות iliac של הכלילי (IVC).</li>
	<li>אבטח את הצינורית עם 8-0 קשרים משי באמצעות microforceps.</li>
	<li>לחשוף ומוחלף על נכון באמצעות השלבים המתוארים בפרק 3.1, 3.2, ו- 3.3.</li>
	<li>נקרר ומוחלף על נכון. עם בצינורית PU 1-Fr והעברתו בעדינות 5 מ מ לעבר הכיוון של העלייה הימנית.</li>
	<li>חזור על שלב 3.7.</li>
	<li>Catheterize עורק הירך השמאלי עם עוד 1-Fr פו בצינורית ולהשתמש בו עבור ניטור כמו גם לקיחת דמים עבור בדיקות גזים בדם (הבי) לחץ פולשני.</li>
	<li>הכנס מחטים רל (א) מחובר התקן רכישת נתונים subcutaneously שתי forelimbs וכן בית החזה הקיר השמאלי.</li>
	<li>הוספת מד חום לרקטום מחובר התקן רכישת נתונים.</li>
</ol>4. Veno-ורידים ממברנה בעיות חמצון וניתוח גז דם
הערה: לקבלת תיאור סכמטי של המעגל לאקמו מלאה, ראה איור 1.
<ol><li>ליזום לאקמו על החיה על-ידי הפעלת המשאבה עם שיעור זרימת הראשונית של 0.1 מ"ל לדקה התאמת קצב הזרימה של המשאבה בתוך הבא 2 דקות ל 3-5 mL/min.</li>
	<li>במקרה של יניקה אוויר ב הצינורית יצוא דרך האתר תעלות, יצמצמו את הזרם ולהוסיף 0.1 מ"ל של פתרון לקרקע המעגל באמצעות מאגר אוויר-השמנה.</li>
	<li>תחת זרם יציב, נמשיך לעקוב בזמן אמת במצב של כל הפרמטרים החיוניים דרך המכשיר רכישת נתונים.</li>
	<li>כל הזמן להתבונן זרם אחורי מ ניקוז ורידי ונטר לרמת הדם בתוך המאגר אוויר-הצייד.</li>
	<li>לאסוף דם מדליף מפצעי לתוך מזרק 1 סמ ק עם קצה andreturn branula 24 G המעגל לאקמו באמצעות המאגר אוויר-השמנה.</li>
	<li>והבי, השתמש מחסנית דגימה דם כדי לאסוף כ 75 µL של דם עורקי בנקודות בפעם הבאה ולא מהמיקומים הבאים:<ol>
<li>10 דקות לאחר אתחול של לאקמו, לאסוף דם של IVC דרך צינור נוסף שנבנה בשנת לפני oxygenator, דרך צינור נוסף דומה לאחר oxygenator (בקרה), ומן ישירות עורק הירך.</li>
		<li>30 דקות לאחר אתחול של לאקמו, לאסוף דם בעורק הירך.</li>
	</ol>
</li>
	<li>תן אוטם 0.1 נוסף של פתרון לקרקע כדי לפצות על אובדן נוזלים intravasal כל 45 min דרך האוויר-הצייד או הצנתר בעורק הירך או על-ידי מציצת בועות אוויר דרך הצינורית המנקזים הדם.</li>
	<li>והבי, השתמש מחסנית דגימה דם כדי לאסוף כ 75 µL של דם עורקים:<ol>
<li>h 1 לאחר אתחול של לאקמו של עורק הירך.</li>
		<li>שעתיים אחרי אתחול של לאקמו, לאסוף דם של IVC דרך צינור נוסף שנבנה בשנת לפני oxygenator, דרך צינור נוסף דומה לאחר oxygenator (בקרה), ומן ישירות עורק הירך.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאחר 2 h, להפחית את קצב הזרימה על המשאבה בהדרגה (במשך 5 דקות), ובכך לעצור לאקמו.</li>
	<li>להמשיך להקליט פרמטרים חיוניים עבור עוד 10 דקות.</li>
	<li>לסיים את הניסוי על-ידי exsanguinating החיה קצירת את הדם ואת האיברים.</li>
</ol>

<ol><li>Hill, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prolonged+Extracorporeal+Oxygenation+for+Acute+Post-Traumatic+Respiratory+Failure+%28Shock-Lung+Syndrome%29%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Prolonged Extracorporeal Oxygenation for Acute Post-Traumatic Respiratory Failure (Shock-Lung Syndrome).</a> New England Journal of Medicine. 286 (12), 629-634 (1972).</li>
<li>Noah, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Referral+to+an+Extracorporeal+Membrane+Oxygenation+Center+and+Mortality+Among+Patients+With+Severe+2009+Influenza+A%28H1N1%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Medical+Association%22%5BJournal%5D)">Referral to an Extracorporeal Membrane Oxygenation Center and Mortality Among Patients With Severe 2009 Influenza A(H1N1).</a> Journal of the American Medical Association. 306 (15), 1659(2011).</li>
<li>Maslach-Hubbard, A., Bratton, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracorporeal+membrane+oxygenation+for+pediatric+respiratory+failure%3A+History%2C+development+and+current+status%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Critical.+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Extracorporeal membrane oxygenation for pediatric respiratory failure: History, development and current status.</a> World Journal of Critical. Care Medicine. 2 (4), 29-39 (2013).</li>
<li>Langer, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22Awake%22+extracorporeal+membrane+oxygenation+%28ECMO%29%3A+pathophysiology%2C+technical+considerations%2C+and+clinical+pioneering%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care%22%5BJournal%5D)">"Awake" extracorporeal membrane oxygenation (ECMO): pathophysiology, technical considerations, and clinical pioneering.</a> Critical Care. 20 (1), 150(2016).</li>
<li>Esper, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracorporeal+Membrane+Oxygenation%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Anesthesia%22%5BJournal%5D)">Extracorporeal Membrane Oxygenation.</a> Advances in Anesthesia. 35 (1), 119-143 (2017).</li>
<li>Millar, J. E., Fanning, J. P., McDonald, C. I., McAuley, D. F., Fraser, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+inflammatory+response+to+extracorporeal+membrane+oxygenation+%28ECMO%29%3A+a+review+of+the+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care%22%5BJournal%5D)">The inflammatory response to extracorporeal membrane oxygenation (ECMO): a review of the pathophysiology.</a> Critical Care. 20 (1), 387(2016).</li>
<li>Lubnow, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Technical+complications+during+veno-venous+extracorporeal+membrane+oxygenation+and+their+relevance+predicting+a+system-exchange--retrospective+analysis+of+265+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+One%22%5BJournal%5D)">Technical complications during veno-venous extracorporeal membrane oxygenation and their relevance predicting a system-exchange--retrospective analysis of 265 cases.</a> Public Library of Science One. 9 (12), e112316(2014).</li>
<li>Passmore, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+lung+injury+in+an+ovine+model+of+extracorporeal+membrane+oxygenation+support%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Inflammation and lung injury in an ovine model of extracorporeal membrane oxygenation support.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 311 (6), L1202-L1212 (2016).</li>
<li>Vaquer, S., de Haro, C., Peruga, P., Oliva, J. C., Artigas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+review+and+meta-analysis+of+complications+and+mortality+of+veno-venous+extracorporeal+membrane+oxygenation+for+refractory+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Intensive+Care%22%5BJournal%5D)">Systematic review and meta-analysis of complications and mortality of veno-venous extracorporeal membrane oxygenation for refractory acute respiratory distress syndrome.</a> Annals of Intensive Care. 7 (1), 51(2017).</li>
<li>Houser, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+Models+of+Heart+Failure+A+Scientific+Statement+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Animal Models of Heart Failure A Scientific Statement From the American Heart Association.</a> Circulation Research. 111 (1), 131-150 (2012).</li>
<li>Russell, J. C., Proctor, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+models+of+cardiovascular+disease%3A+tools+for+the+study+of+the+roles+of+metabolic+syndrome%2C+dyslipidemia%2C+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Pathology%22%5BJournal%5D)">Small animal models of cardiovascular disease: tools for the study of the roles of metabolic syndrome, dyslipidemia, and atherosclerosis.</a> Cardiovascular Pathology. 15 (6), 318-330 (2006).</li>
<li>Madrahimov, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+mouse+model+of+cardiopulmonary+bypass%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cardio-thoracic+Surgery%22%5BJournal%5D)">Novel mouse model of cardiopulmonary bypass.</a> European Journal of Cardio-thoracic Surgery. 53 (1), 186-193 (2017).</li>
<li>Madrahimov, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiopulmonary+Bypass+in+a+Mouse+Model%3A+A+Novel+Approach%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Cardiopulmonary Bypass in a Mouse Model: A Novel Approach.</a> J. Journal of Visualized Experiments. (127), (2017).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

בעבר, אנחנו תיאר דגם מוצלח של משטרת שיקאגו12,העכבר13. כדי ליישם מודל כזה חריפה או הפרעות ריאות בשלב הסופי פיתחנו מעגל לאקמו veno-ורידית קלה לשימוש עבור עכברים. שונה למודל של משטרת שיקאגו, veno-ורידים לאקמו אינו מחייב ניתוחים מסובכים כגון sternotomy ומחבר חובק למעקה של אבי העורקים, ובכך להקטין את הסיכון של הפצע מדמם בחיה heparinized באופן מלא. כדי להימנע אמבוליזציה של oxygenator עם קרישי דם, 2.5 IU של הפארין לק"ג ניתנת כל בעל חיים. מינון זה היה מבוסס על מדידות הקו...

ממברנה בעיות חמצון (לאקמו) היא מערכת תמיכת החיים הזמניים משתלט על הפונקציות של הריאות ועל הלב כדי לאפשר חילוף הגזים נאותה זלוף. היל ואח1 תיאר את השימוש הראשון לאקמו בחולים ב- 1972; עם זאת, זה רק הפך להיות בשימוש נרחב לאחר היישום המוצלח שלה במהלך ה שפעת H1N1 מגיפת 20092. היום, לאקמו באופן שגרתי משמש הליך מציל חיים בשלב הסופי לב, מחלות ריאה3. לאקמו Veno-ורידי הוא יותר ויותר מועסק כחלופה פולשנית אוורור מכני ער, הלא-לצינורות, נושם באופן ספונטני בחולים עם כשל נשימתי עקשן4.
למרות אימוצו הנרחב, סיבוכים מגוונות דווחו לאקמו5,6,7. סיבוכים יכולים להיחוות על ידי מטופלים לריאה כוללים דימום פקקת, אלח דם, טרומבוציטופניה, תקלות הקשורות להתקן, תסחיף אוויר. יתר על כן, תסמונת תגובה דלקתית מערכתית (אדונים) והתוצאה היא נזק לאיבר רב מתואר היטב הן מבחינה רפואית והן מחקרים ניסיוניים8,9. סיבוכים נוירולוגיים כגון אוטם מוחי מדווחים לעתים קרובות גם בחולים שעברו טיפול לאקמו לטווח ארוך. כדי לבלבל את העניינים, קשה לעתים להבחין בין אם סיבוכים נגרמות על ידי לאקמו עצמו או לנבוע הפרעות כבסיס המלווה חריפה ומחלות בשלב הסופי.
ללמוד באופן ספציפי את ההשפעות של לאקמו על אורגניזם בריא, ליצור מודל אמין בעל חיים ניסיוני. ישנם דיווחים מעטים על הביצועים של לאקמו על חיות קטנות ואינם מוגבלים כולם חולדות. נכון להיום, אין מודל העכבר של לאקמו תואר בספרות. בשל הזמינות של מספר גדול של זנים מהונדסים העכבר, הקמת מודל לאקמו העכבר יאפשר בהמשך חקירת המנגנון המולקולרי מעורב סיבוכים הקשורים לאקמו10,11.
בהתבסס על המודל שלנו מאתר שתואר לעיל של לב-ריאה (משטרת שיקאגו)12, פיתחנו שיטה יציב של לאקמו veno-ורידים בשאינם-לצינורות, נושם באופן ספונטני עכברים. המעגל לאקמו (איור 1), המכיל יצוא תזרים קנולות, משאבת סחרור, oxygenator, ו מאגר האוויר-השמנה, דומה למודל שתואר לעיל שלנו של משטרת שיקאגו מאתר12 למעט שיש לקרקע קטן יותר נפח (0.5 מ"ל). פרוטוקול זה מדגים את טכניקות מפורט פיזיולוגיים ניטור, בדיקות גזים דם מעורב בהליך לאקמו מוצלח.

<table><tbody><tr><td>Sterofundin</td><td>B.Braun Petzold GmbH</td><td>PZN:8609189</td><td>ב-1:1 עם Tetraspan</td></tr><tr><td>Tetraspan 6% Solution</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>PZN: 05565416</td><td>ב-1:1 עם Sterofundin</td></tr><tr><td>Heparin Natrium 25.000</td><td>Ratiopharm GmbH</td><td>PZN:</td> 3029843-2,5 <td>IU למ"ל של תחול</td></tr><tr><td>NaHCO3 8,4% תמיסה</td><td>B. Braun Melsungen AG</td><td>PZN: 1579775-3</td><td>% בתמיסת הכנה</td></tr><tr><td>קרפרופן</td><td>Zoetis Inc., ארה"ב</td><td>PZN:00289615</td><td>5 מ"ג/ק"ג/BW</td></tr><tr><td>1 Fr PU קטטר</td><td>Instechlabs INC., ארה"ב</td><td>C10PU-MCA1301</td><td>עורק קרוטיד</td></tr><tr><td>2 Fr PU</td><td>קטטר Instechlabs INC., ארה"ב</td><td>C20PU-MJV1302</td><td>וריד צוואר</td></tr><tr><td>8-0 תפר משי קלוע</td><td>Ashaway Line & חוטים ושות', ארה"ב</td><td>75290</td><td>קשירה</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal טיפול קריטי GmbH</td><td>PZN:9714675</td><td>נרקוזה</td></tr><tr><td>מספריים קפיצים - 6 מ"מ להבים</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>15020-15</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>מספריים קפיציים - 2 מ"מ להבים</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>15000-03</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>Halsted-Mosquito Hemostat</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>13009-12</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>Dumont #55 מלקחיים</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>11295-51</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>Castroviejo מחזיק מחט מיקרו - 9 ס"מ</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>12060-02</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>Micro Serrefines</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>18555-01</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>בולדוג Serrefine</td><td>Fine Science Tools GmbH</td><td>18050-28</td><td>מכשירים</td></tr><tr><td>Isoflurane Vaporizer Drager 19.1</td><td>ד"ר&אומל; gerwerk AG & Co. KGaA</td><td></td><td>הרדמה 1,3 -2,5%</td></tr> <tr><td>מכשיר אקוויזיציה נתונים רב ערוצי עם תוכנת ISOHEART</td><td>הוגו זקס אלקטרוניק GmbH, גרמניה</td><td></td><td>לחץ פולשני, א.ק.ג, t &deg; C</td></tr><tr><td>מכשיר נייד STAT</td><td>מעבדות אבוט, לייק בלוף, אילינוי, ארה"ב</td><td></td><td>ניתוח גזי דם</td></tr><tr><td>מחסניות STAT CG4+ ו-CG8+</td><td>מעבדות אבוט, לייק בלוף, אילינוי, ארה"ב</td><td></td><td>ניתוח גזי דם</td></tr><tr><td>C57Bl/6 עכברים, זכר, 30 גרם, בני 14</td><td>שבועות מעבדות</td><td></td> צ'ארלס ריבר <td>שוכנו שבוע לפני</td></tr></tbody></table>

ממברנה בעיות ורידים-veno חמצון בעכבר

Veno-Venous Extracorporeal Membrane Oxygenation in a Mouse

השימוש של קרום בעיות חמצון (לאקמו) גדל באופן משמעותי בשנים האחרונות. לאקמו הפך להיות טיפול יעיל ואמין עבור חריפה כמו גם מחלות ריאה בשלב הסופי. עם עליית הביקוש קליני, שימוש ממושך לאקמו, אופטימיזציה פרוצדורלי, למניעת נזק לאיבר מרובה הם חשיבות קריטית. המטרה של פרוטוקול זה היא להציג שיטה מפורטת של לאקמו veno-ורידים אי-לצינורות, נושם באופן ספונטני העכבר. פרוטוקול זה מדגים את העיצוב הטכני של לאקמו ושל פעולות כירורגיות. מודל לאקמו מאתר זה יקל על לימוד פתופיזיולוגיה הקשורים לאקמו (למשל, דלקת, דימום ואירועים תרומבואמבוליים). בשל השפע של עכברים מהונדסים, המנגנונים המולקולריים המעורבים סיבוכים הקשורים לאקמו גם יכול להיות גזור.

פרוטוקול זה מתאר את השיטה של לאקמו veno-ורידים בעכבר. מודל זה הוא אמין לשחזור, בהשוואה להמודל שתואר לעיל שלנו של משטרת שיקאגו עם הנשימה, הדם מעצר12,13, כל דבר אחר פחות טכנית להקים.
לאקמו זרימה במערכת ורידית נשמר בין 1.5 ו 5 mL/min. הלחץ בעורקים רשע נשמר בין 70 ו 85 מ מ כספית על-ידי הוספת פתרון לקרקע נוספת לתוך המעגל לאקמו. בדרך כלל, הוספת 0.1 מ"ל של פתרון לקרקע כדי המעגל...

כאן אנו מציגים פרוטוקול המתאר את הטכניקה של חמצון ממברנה בעיות ורידים-veno (לאקמו) ב שאינם לצינורות, באופן ספונטני נשימה העכבר. מודל זה מאתר של לאקמו ניתן ליישם ביעילות מחקרים ניסיוניים של חריפה ומחלות ריאות בשלב הסופי.

ממברנה בעיות ורידים-Veno חמצון בעכבר

The use of extracorporeal membrane oxygenation (ECMO) has increased substantially in recent years. ECMO has become a reliable and effective therapy for ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום המחקר הריאה, כגון אלה הקשורים לטיפול במחלת ריאות חריפה וכרונית בשלב הסיום. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מקלה על תחילת מנגנונים מולקולריים ופתולוגיים של נזק רב-איברים במהלך חמצון קרום בלתי גשמי ממושך כהליך מציל חיים. בתנאים נקיים ולא סטריליים, השתמש בלהב כירורגי ובמיקרוסקופ מנותח כדי להכניס שלוש הצפחות לשליש הדיסטלי של קטטר פוליאוריתן צרפתי תחת הגדלה של פי 16.לאחר מכן, מניחים את צינורית הזרימה לתוך פתרון priming, להפעיל את המשאבה הפריסטואלית כדי למלא את חמצון קרום חוץ גשמי, או מכונת ECMO, עבור priming של המעגל בקצב זרימה של מילימטר אחד לדקה. לאחר 30 דקות, מוסיפים 0.5 ליטר לדקה של 100% חמצן לחמצן ומאשרים את חוסר התגובה לצביטת בוהן בעכבר מבוגר הרדמה. לאחר החלת משחה על עיני החיה, בצע חתך עור צדדי של ארבעה מילימטרים בצד שמאל של הצוואר כדי לדמיין את וריד הצוואר, ולהשתמש במטליות מיקרו ומטליות כותנה כדי לחשוף עוד יותר את הכלי.השתמש ב- 8-0 תפר משי כדי לקשור את הקצה הדיסטלי של וריד חשוף, ולהמקם קשר להחליק בקצה הפרוקסימלי. חתוך את הקיר האחורי של וריד עם microscissors, ולהזריק 2.5 יחידות בינלאומיות לגרם של הפרין לתוך וריד הצוואר באמצעות ברנולה 26-מד, מרים את הקצה הראשי של כרית כירורגית על ידי 30 מעלות, כדי למנוע איבוד דם מוגזם במהלך הכניסה. בזהירות להכניס את צינורית פוליאוריתן צרפתית שני fenestrated לתוך הקצה הפרוקסימלי של וריד הצוואר, סיבוב צינורית מעט, תוך דחיפת cannula לעומק של ארבעה סנטימטרים כדי להגיע bifurcation איליאק של וריד וריד נחות.חשוב לדחוף את ה Cannula בעדינות רבה, אבל ברציפות ללא שימוש בכוח נוסף. אם נתקלים בהתנגדות, משוך את ה cannula בחזרה והכנס אותו שוב. לאבטח את ה Cannula עם 8-0 קשרים משי, ולחשוף את וריד הצוואר הימני כפי שהוכח רק.Cannulate וריד הצוואר הימני עם צינורית פוליאוריתן צרפתית אחת, בעדינות להזיז את צינורית חמישה מילימטרים לכיוון אטריום הנכון, ולאבטח את cannula עם 8-0 קשרים משי. צנתר את עורק הירך השמאלי עם עוד אחד צרפתית פוליאוריתן cannula לניטור לחץ פולשני וניתוח גז דם, ולהכניס מחטי אלקטרוקרדיוגרמה מחובר למכשיר רכישת נתונים תת עורית לתוך שני נצח, לתוך קיר בית החזה השמאלי. לאחר מכן הכנס מדחום רקטלי המחובר להתקן איסוף נתונים.כדי ליזום חמצון קרום חוץ-גשמי ונו-ורירי, הפעל את המשאבה לקצב זרימה התחלתי של 0.1 מיליליטר לדקה. לאחר שתי דקות, להתאים את קצב הזרימה לשלוש עד חמישה מיליליטר לדקה. תחת זרימה יציבה, נטר את הפרמטרים החיוניים באמצעות מכשיר איסוף הנתונים במצב בזמן אמת, בדוק ללא הרף את הזרימה האחורית מהניקוז הווריד וניטור רמת הדם במאגר לוכד האוויר.השתמש במזרק מיליליטר אחד מצויד ברנולה 24-מד כדי לאסוף כל דליפת דם, ולהחזיר את הדם למעגל ECMO דרך מאגר לכידת האוויר. לניתוח גז דם, 10 דקות לאחר אתחול ECMO, השתמש במחסנית דגימת דם כדי לאסוף כ -75 מיקרוליטרים של דם עורקי מן הנבוב הנבוב הנחות לפני החמצן, ישירות לאחר החמצן, ומעורק הירך. 30 ו 60 דקות לאחר חניכת ECMO, לאסוף דם מעורק הירך בלבד.45 ו 90 דקות לאחר החניכה, לנהל 0.1 מיליליטר של פתרון priming כדי לפצות על אובדן נוזלים intravasal באמצעות לוכד האוויר. שעתיים לאחר החניכה, לאסוף דם מן החמצן, ונה קאווה נחות, עורק הירך. לאחר איסוף הדם האחרון, להפחית את קצב הזרימה על המשאבה במהלך חמש דקות, ובכך לעצור את ECMO, תוך המשך תיעוד הפרמטרים החיוניים במשך 10 דקות נוספות.בניסוי טיפוסי, הפרמטרים הפיזיולוגיים של החיה נרשמים כל 10 דקות. בניסוי מייצג זה, הפרמטרים ההמטולוגיים הראו המודילוציה רלוונטית במהלך ECMO, אם כי לא היה צורך בעירוי דם כדי לפצות על אנמיה מתונה. הפרמטרים חמצון הציג ביצועים חמצן נאותה בתערובת אוויר חמצן בשבריר של חמצן השראה של 1.0.כמו כן, השינויים המטבוליים במהלך ECMO כללו אלקלוזיס נשימתי בתחילת הניסוי ובסוף הניסוי. לא בוצעה אגירה נוספת בדם. חשוב להשתמש בטכניקת הקנולציה הנכונה כדי לספוג את זרימת הדם דרך מעגל ה- ECMO, כדי לפקח על פרמטרי החמצון באמצעות ניתוח גז דם, ולהחליף כל איבוד דם שנגרם על ידי דגימת דם בתתא ראשוני נוסף.טכניקה זו סוללת את הדרך לחוקרים בתחום מחלות הריאות לשפר באופן משמעותי את הפרוטוקולים לטיפולים מצילי חיים באמצעות למעלה מ-80 מודלים זמינים של עכברי נוקאאוט.

veno-venous-extracorporeal-membrane-oxygenation-in-a-mouse

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

סרטון זה מדגים את ההליך של שכפול שבץ טרומבוטי במודל עכבר על ידי חסימת עורק הצוואר המשותף הימני וחשיפת העכבר לסביבה דלת חמצן. תהליך זה מפחית את זרימת הדם והחמצן למוח, וגורם להיווצרות קרישי דם ולנזק מוחי.

גרימת שבץ טרומבוטי באמצעות היפוקסיה ואיסכמיה במודל עכבר

שכבת פני שטח glycocalyx / אנדותל האנדותל היא למד באופן אידיאלי באמצעות מיקרוסקופ intravital. מיקרוסקופיה Intravital טכני מאתגרת באיבר מרגש כגון ריאות. אנחנו מדגימים איך brightfield סימולטני ומיקרוסקופיה ניאון ניתן להשתמש כדי להעריך את עובי שכבת פני שטח האנדותל שבנע...

במדידת vivo של שכבת פני שטח האנדותל ריאתי המאוסה

מאמר זה מתאר כיצד לבצע ריאה בעכברים. מודל חדש זה יקל על החקירה של המנגנון המולקולרי מעורבת ועוגב נזק.

לב-ריאה במודל של עכברים: גישה מוזרה

Aortocaval פיסטולה נוצר על ידי לפרוץ את העורקים מורנה אינפרא כליות באמצעות שני הקירות לתוך הורקאווה הנחותים ולאחר מכן הבריאה של היצרות בתוך הזרימה שלה באמצעות הארכה חלקית של האובורד הנחותים. מודל זה ניתן לשימוש כדי ללמוד היצרות הורידים המרכזי.

מודל מורנה של היצרות הורידים המרכזית באמצעות Aortocaval פיסטולה עם היצרות זרימה יוצאת

הפרוטוקול מתאר שיטה פשוטה לכריתת כבד עכבר שלם למחקרים מטבוליים באמצעות זלוף ורידים פורטלי.

אקס ויוו זלוף כבד דרך וריד הפורטל בעכבר

פרוטוקול זה מספק הליך שלב אחר שלב לביצוע מתן מינון בולוס תוך ורידי מרובים וניטור המודינמי פולשני בעכברים. חוקרים יכולים להשתמש בפרוטוקול זה לבדיקת תרכובת טיפולית עתידית ליתר לחץ דם בעורק הריאה.

מינון בולוס תוך ורידי מרובים והערכה המודינמית פולשנית במודל יתר לחץ דם של עורק ריאתי בעכבר הנגרם על ידי היפוקסיה

מודל ניתוחי בעכבר ליצירת פגיעה באיסכמיה של הריאה השמאלית (IR) תוך שמירה על אוורור והימנעות מהיפוקסיה.

מודל עכברי של אינטובציה אורוטרכאלית וניתוח איסכמיה ריאה מונשמת

מערכת זילוח כבד נורמותרמית ex vivo (NEVLP) נוצרה עבור כבדי עכברים. מערכת זו דורשת ניסיון במיקרו-כירורגיה אך מאפשרת תוצאות זילוח הניתנות לשחזור. היכולת להשתמש בכבדים של עכברים מאפשרת לחקור מסלולים מולקולריים לזיהוי תוספי פרבוסט חדשים ומאפשרת ביצוע ניסויים המתמקדים בתיקון איברים.

זילוח מכונת כבד Normothermic Ex Vivo בעכבר

מצב כפול הדמיה המערכת פותחה עבור הערכה ללא מגע של חמצון הרקמות עורית ותפקוד כלי הדם.

Dual-mode הדמיה של חמצון רקמות עורית ועל תפקוד כלי הדם

סקירה מקיפה של טכניקות מעורב ביצירת מודל עכברי של סרטן הפה ניטור כמותי של הפלישה הגידול בתוך הלשון באמצעות מיקרוסקופ רב פוטון של תאים שכותרתו מוצג. מערכת זו יכולה לשמש פלטפורמה שימושי להערכת יעילות התרופה מולקולרית של תרכובות אנטי פולשנית.

Multi-פוטון הדמיה של הפלישה תאים סרטניים במודל עכבר orthotopic של קרצינומה של תאים קשקשיים אוראלי

למדו את פרוטוקול ECMO ונו-ונוס בעכברים נושמים באופן ספונטני ללא אינטובציה. שיטה זו מאפשרת חקר מנגנונים מולקולריים ופתולוגיים של נזק רב-איברי במחלות ריאה חריפות וכרוניות.

ממברנה בעיות ורידים-Veno חמצון בעכבר

גלה סרטונים נוספים