Name: פרוטוקול לא צפוי מתח כרוני מתון להשראת אנהדוניה בעכברים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-24T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: למדו פרוטוקול UCMS ליצירת דיכאון דמוי-קליני בעכברים באמצעות מתח מתון בלתי צפוי. השיטה מאפשרת הערכה התנהגותית ונוירומולקולרית של אנהדוניה ורמות BDNF בהיפוקמפוס לסקרינג תרופות נוגדות דיכאון.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצה להודות גלי ברויר על הסיוע ב הפקת הסרטון. מחקר זה נתמך על ידי משרד המדע, הטכנולוגיה והחלל (מענק מס 313552), על ידי המכון הלאומי לפסיכוביולוגיה בישראל (NIPI-208-16-17b) ועל ידי קרן האוניברסיטה הפתוחה.

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה של אקדמיים במכללת תל-אביב יפו.
1. בעלי חיים
<ol><li>שימוש המתבגר מראש (קרי, בן 3 שבועות) המכון של סרטן מחקר (ICR) outbred עכברים זכרים.</li>
	<li>אקראי עכברים לקבוצת הלחץ באופן שווה בגודל שני (UCMS לעומת נאיבי). השתמש עכברים 15 לכל קבוצה טיפול (למשל: אם יש 3 תרופתי קבוצות הטיפול להשתמש 90 הכוללת עכברים; [UCMS לעומת תמים] 2 × 3 [טיפולי] × 15 [עכברים] = 90)</li>
	<li>עכברים בבית לפי קבוצת לחץ; כלומר, הבית עכברים תמים עם עכברים תמים רק ועכברים הבית UCMS קבוצה עם עכברים מקבוצת UCMS בלבד.</li>
	<li>בית חיות בכלובים בבית רגיל (30 × × 14 ס מ 15; עכברים 5 לכל בכלוב; כל הכלוב המכיל עכברים של כל קבוצות טיפול [קרי, טיפול תרופתי קבוצות]; לשמור על עכברים באותו כלוב לאורך כל הניסוי, למעט כאשר צוין אחרת) .</li>
	<li>למלא את הכלובים הביתה עם נסורת טריים (מוחלפים פעמיים בשבוע), הוסף פיסת צמר גפן העשרה.</li>
	<li>חיות הבית בכלוב בבית לתקופה בעזיבה של שבוע אחד. לאפשר גישה ad libitum צ'או מכרסמים ומים (למעט במהלך UCMS הלחץ יישומים).</li>
	<li>לשמור על מחזור/כהה עקבי 12 שעות (למעט כאשר צוין אחרת). במהלך הליכי UCMS לשמור על עכברים תמימה בכלוב שלהם הביתה.</li>
</ol>2. UCMS
<ol><li>לייעד את חדר נפרד במעבדה, לשימוש הבלעדי של הפרוטוקול UCMS.</li>
	<li>עיצוב משטר 4 שבועות הלחץ שבו כל אחד גורמי שבע (קרי, כלוב רטוב, נסורת לחה, כלוב מוטה, כלוב ריק, הלחץ החברתי, עכברים איפוק, שיבוש מחזור/כהה) מנוצל פעם בשבוע, ביום אחר כל שבוע (עבור עיצוב אפשרי לראות את הדו ח המשלים טבלה 1).</li>
	<li>בעקבות 1 בשבוע של להתאקלמות (ראה 1.6) ליזום לחצים היישום (להבטיח כי עכברים הם בן כ- 4 שבועות).</li>
	<li>כל יום, לפני היישום של הלחץ, העברת הכלובים של קבוצת UCMS מן החדר דיור אל חדר UCMS.</li>
	<li>במהלך הלחץ יישומים, לחסום את הגישה האוכל מכרסמים ואת המים עבור קבוצת UCMS (למעט במהלך היפוך/כהה מחזור). הערה: זו יכולה להיות מושגת על ידי ההחלפה של המקורית כלוב המכסה (שמכילה מזון ומים), מכסה כלוב ריק.</li>
	<li>
להחיל את גורמי הבאים לפי משטר תוכננה קודם (ראה 2.2):
	<ol>
<li>כלוב רטוב<ol>
<li>הצב עכברים עם עמיתיהם הביתה כלוב בכלוב ריק (קרי, ללא נסורת הכלוב).</li>
			<li>למלא את הכלוב ריק עם מים כל הזמן-24 ± 1 ° C עד לעומק של 1 ס מ (לשפוך במשנה זהירות כדי למנוע דליפה מים ישירה על עכברים). לשמור על עכברים בכלוב רטוב במשך 4 שעות.</li>
			<li>להעביר את העכבר כל נפרד בודדים הציעה שתושב זמני הייבוש כלוב עם מנורת חימום מעליו, כרית החימום תחת זה ומצעים נייר מגבת. מקום מדחום בכלוב ארעי כדי לוודא בטמפרטורה שלא תעלה על 37 מעלות צלזיוס.</li>
			<li>שמור כל עכבר בכלוב ארעי עד יבש, נראה נמרץ (כ 10-15 דקות). עכברים לשוב הביתה כלוב עם עמיתיהם אותו.</li>
		</ol>
</li>
		<li>נסורת לחה<ol>
<li>יוצקים מים שמרו ב 24 ± 1 ° C לכלוב הביתה עד הנסורת הוא בינוני לחה (לשפוך במשנה זהירות כדי למנוע דליפה מים ישירה על עכברים). הערה: אין צורך להשתמש נסורת טריים לפני לשפוך את המים.</li>
			<li>לאחר 4 שעות, יבש עכברים בכלוב ארעי כמתואר ב- 2.6.1.3. מקום עכברים עם עמיתיהם הביתה כלוב כלוב סטרילי עם נסורת טריים.</li>
		</ol>
</li>
		<li>כלוב מוטה<ol>
<li>להטות כלובים-45° הקיר במשך 4 שעות. הערה: במהלך תקופה זו, עכברים הלחץ להישאר בכלוב שלהם הביתה עם עמיתיהם.</li>
		</ol>
</li>
		<li>כלוב ריק<ol>
<li>העברת עכברים, יחד עם עמיתיהם כלוב הביתה ספציפיים, מן הכלוב בבית אל כלוב ריק במשך 4 שעות.</li>
		</ol>
</li>
		<li>לחץ חברתי<ol>
<li>העברת עכברים, יחד עם עמיתיהם כלוב הביתה ספציפיים, מן הכלוב הביתה אל כלוב אשר הוחזק על ידי קבוצה שונה של עכברים לתקופה של פחות 3 d לקראת יישום גורם הלחץ. לשמור על עכברים בכלוב לא מוכר במשך 4 שעות. הערה: כדי למנוע חוסר וודאות במקום מדבקה על כל הכלוב כדי לציין מקור עכברים בכלוב.</li>
		</ol>
</li>
		<li>עכברים איפוק<ol>
<li>הנח את העכבר כל בנפרד ב- restrainer העכבר נקי עבור 4 h עכברים החזרה לכלוב הביתה עם עמיתיהם אותו.</li>
		</ol>
</li>
		<li>שיבוש מחזור/כהה<ol>
<li>העברת עכברים בכלוב שלהם הביתה עם עמיתיהם ספציפית, אל חדר UCMS. להשאיר את האור דולק, במשך 24 שעות רצופות. הערה: רק במהלך הזה גורם הלחץ עכברים תתאפשר גישה ad libitum צ'או מכרסמים ומים.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>בעקבות הלחץ יישום, להחזיר כלובים של קבוצת UCMS מן החדר UCMS אל חדר דיור.</li>
	<li>במהלך 4 שבועות של חשיפה ללחץ, לשמור על קבוצת תמימים בכלובים בבית שלהם ממוקם בחדר דיור. הערה: עכברים תמים שאינן מועברות אל החדרים UCMS כי חשיפה לעכברים אחרים שעברו הליך מתח שיכולים לזרז אפקט stressogenic, אפילו בלי חשיפה ישירה הלחץ89,90.</li>
	<li>
פיקוח על בעלי חיים במהלך UCMS
	<ol>
<li>במהלך הלחץ יישומים (למעט במהלך שיבוש/כהה מחזור) לפקח על עכברים כל 30 דקות על-ידי נסיינית מנוסים. אם מצוקה לא טיפוסיות (למשל, רעד, עייפות, חוסר תנועה) הוא ציין (זהירות מיוחדת צריכה להינתן היפותרמיה פוטנציאליים במהלך 'רטוב קייג '' ו 'לחה נסורת') לשחרר את העכבר מן הלחץ באופן מיידי.</li>
		<li>לבדוק כל עכבר מדי יום עבור פצעים או מומים פיזיים או התנהגותיים אחרים. אם כך ומפוקחים להתייעץ עם הוטרינר של המעבדה כדי להחליט אם העכבר לא להיות כלולים הניסוי.</li>
		<li>שוקלים כל עכבר כל 3 ימים. ירידה חזקה במשקל הגוף (קרי, > הפחתת 10% מן המשקל הבסיסית או > 15% הפחתה מן האחרון נמדד משקל) יש לדווח הוטרינר של המעבדה העכבר כשמשהו מהניסוי.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. סינון עבור תרופות נגד דיכאון
<ol><li>ביום שלאחר הפסקת בפרוטוקול UCMS, להתחיל מינהל בשם סוכנים תרופתי טיפולית (כלומר, אסציטלופרם [15 מ"ג/ק"ג; i.p.; 3 שבועות; על המינהל ליום]30,50או רומן צמחים טיפול [NHT; 30 מ"ג/ק"ג i.p.; 3 שבועות; ניהול אחת ליום]30,50). הערה: לקבלת מינונים של תרופות אחרות לא נכלל בפרוטוקול זה ראה: flouxetine46, 47, 49, 89, 90, האסירה51, imipramine35,41,42,43, desipramine18,44,45, maprotiline46,47, mianserin48, מלטונין43,49, URB59754, טבעיים אחרים תרכובות37,55,56,57,58. הערה: NHT היא בנוסחת צמחים שפותחה במעבדתנו. הוא מורכב של 4 המרכיבים: עוזרר Pinnatifida, חיטת הלחם, Lilium בראוני , שיזף Fructus Zizyphi. הנוסחה מוגש על ידי המסת מרכיבי (רכשה כמו גרגרי הליחה) ביחד בתוך תמיסת מלח המכיל 1% דימתיל סולפוקסיד לתת ריכוז סופי של 0.47 מ"ג/מ"ל (כל)27,50.</li>
	<li>לכלול קבוצת טיפול לשלוט ולפקח תמיסת מלח (i.p.; 3 שבועות זריקה אחת ליום) לקבוצה זו.</li>
	<li>לחשב את התרופה במינון לפי עכברים ' משקל, כפי שהתקבל בשקילת הקודמת.</li>
	<li>מחלקים תרופות באופן כרוני (בדרך כלל אחד והתרופות האמריקני ביום באמצעות הזרקת בקרום הבטן [i.p.] למשך 3 שבועות). הערה: יש צורך עזים ומתנגד העכברים לפני הזריקה i.p..</li>
	<li>ממשיכים לשקול עכברים כל 3 d; שקילת האחרון צריך להיות 3 d לפני ההנהלה התרופה האחרונה.</li>
</ol>4. הערכה של טון האסתטית SPT
<ol><li>בעקבות שלב הטיפול, להסיר את העכבר כל הכלוב הביתה ומניחים אותו בנפרד בתוך כלוב מלא עם נסורת טריים וחתיכת צמר גפן העשרה.</li>
	<li>להכין שני בקבוקים, אחת עם מים מזוקקים ואחרת עם פתרון 2% סוכרוז (חומר אחר שיכול לשמש: למשל, סכרין91, אתנול30). הערה: כל בקבוק צריך להכיל באותו אמצעי אחסון של נוזל. לא להתאקלמות מוקדמת ולא habituation שלבים נחוצים לפני כניסתה של נוזלים.</li>
	<li>שוקל שני בקבוקים ולהגדיר אותם על המכסה את הכלוב כדי לאפשר את העכברים גישה ad libitum שני פתרונות לתקופה של (באחת מהאפשרויות הבאות): 24/48/72/144 h.</li>
	<li>מקם את שני הבקבוקים בשני הקצוות של המכסה את הכלוב. המקום צ'או מכרסמים בין שני בקבוקים כדי לאפשר גישה ad libitum מזון.</li>
	<li>החלף בקבוקים כל 24 שעות, באמצעות סטרילי בקבוקים עם נוזלים טריים. הערה: כמו עכברים שוכנים בנפרד יש צורך לשנות את הנסורת גם לאחר 144 h92.</li>
	<li>להחליף העמדות של חרירי כל 12 שעות (כאשר הבדיקה משך 24 שעות ביממה) או פעם ביום (כאשר משך הבדיקה עולה 24 שעות ביממה) לאזן את האפשרות כי התוצאות נמהלו לפי העדפת מיקום.</li>
	<li>שוקלים בקבוקים כל יום כדי להעריך את הצריכה של כל בקבוק.</li>
	<li>לחשב סוכרוז העדפה כמו theratio של סוכרוז צריכת מתוך סך צריכת הנוזלים (קרי, סוכרוז/סוכרוז + מים).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

ככל MDD היא הפרעה נפוצה מאוד מתישה, התייחס באופן חלקי בלבד על-ידי אפשרויות טיפוליות הנוכחי, בחיפוש אחר טיפולים טובים יותר מדעי הוא עדיין לסוגיה דחופה. יחד עם חידושים טכניקות פסיכולוגיות, pharmacotherapies נוספים נדרשים עבור חלק גדול של חולים שאינם מגיבים לתרופות קיימות. מוקפד מודלים לטיפול בדיכאון הם רכיב המפתח במשימה זו. מודלים כאלה להקל על הקרנות עבור דיכאון חדשני ולהרחיב את ההבנה של האטיולוגיה של ההפרעה. UCMS הוא אחד הדגמים מכרסמים הבולטים של דיכאון. שלה ' קומתו מוצגת על-ידי תובנות הבולטים12<su...

הפרעת דיכאון (MDD) הינה מחלה מתישה, זה כבר ציינו כמו ה-11 סיבתth הנטל הכלל-עולמי למחלות1, עם שכיחות שלמים של 11-16%2,3. MDD שויכה מגבלות קשות על המטופלים בתפקוד החברתי, תעסוקתי, מופחתת איכות החיים, רבים הפרעות מנטלית ופיזית סיכון מוגבר לתמותה4,5,6 , 7. ישנם מספר pharmacotherapies אפקטיבי והתערבויות פסיכולוגיות עבור MDD; עם זאת, יותר מאשר השלישי של החולים לא להשיג הפוגה עם קיימות אפשרויות טיפוליות8,9,10,11. לכן, כדאי מיפוי של הפתופיזיולוגיה של MDD ופיתוח תרופות חדישות הן עדיין בעל חשיבות עליונה. על מנת מענה לצרכים מודלים בעלי חיים אלו משימות לאמת מדעית כדי להיות מנוצל.
מתח בלתי צפוי כרוני מתון (UCMS) היא פרדיגמה מכרסמים הנודע בשימוש כדי לגרום דיכאון, חרדה-כמו התנהגויות12,13,14,15. המטרה העיקרית של UCMS היא ליצור גירעונות התנהגותית (כגון אנהדוניה ייאוש התנהגותית12,15) ב עכברים וחולדות, ולקדם הקרנות עבור פוטנציאל סוכנים תרופתי טיפולית. ההליך היה הוצג לראשונה על ידי כץ16 , לאחר מכן פותח על ידי וילנר17,18, מניב תוצאות התנהגותי, הנוירוביולוגי העצום זיכרונות התנסותו עם דיכאון12. זה תוכנן בתחילה על חולדות, אחר כך לאכלס עכברים13,19. בשגרה, מתבגרים בעלי חיים חשופים באופן כרוני שונים לא צפויים לחצים מתון. לאחר מכן, סוכנים תרופתי מנוהלים. מדדים התנהגותיים, ביולוגיות מתקבלים עם סיום הטיפול. אחד המבחנים בולט יותר שנערך בעקבות UCMS הוא המבחן העדפה סוכרוז (SPT). SPT מבוסס על העדפה מולדת של מכרסמים הפתרון ממותק ולא מים, הוא הודה נרחב כמודל translational חיוניים להערכת אנהדוניה12,18,20, 21 (וזה תסמין הליבה הדיכאון האנושי22,23).
בכניסתו העשור הרביעי מאז השקתו, UCMS הוחל על עכברים וחולדות במחקרים רבים. הרוב המכריע של מחקרים אלה מועסקים UCMS כשיטה לזירוז התנהגויות כמו דיכאון12,13,21,24. מחקרים גם המועסקים המודל ליצירת anxiogenic אפקטים25,26,27,28,29. סוכרוז והעדפות סכרין הן הבדיקות העיקריות להערכת אנהדוניה בעקבות UCMS12,18,30,31,32,33. אמצעים אחרים התוצאה ראויה לציון זה משולבים מאוד בספרות UCMS הם: ההשעיה הזנב בדיקה (הבטחה למחיר)28,34,35, לשחות בכוח בדיקה (FST)28,34 , 36 , 37 (שני מדידת הלחץ התמודדות/התנהגותית ייאוש), ניסוי השדה פתוח (OFT; מודדים לניתוח התנהגות, חרדה, כמו התנהגות ופעילות גינקולוגיות)28,25,38, את גבוה בנוסף מבוך (EPM; התנהגות חרדה מדידה)25,39,40 ובדיקות נוספות למדידת התנהגויות כמו דיכאון, חרדה, כמו התנהגויות, התפקוד הקוגניטיבי, התנהגות חברתית12 . ממשל כרונית של נוגדני דכאון (TCAs; imipramine35,41,42,43, desipramine18,44,45 ), תרופות נגד דיכאון tetracyclic (TeCAs;46,maprotiline47, mianserin48), מעכבי ספיגה חוזרת של סרוטונין (תרופות Ssri; פלואוקסטין46,47,49 ,30,אסציטלופרם50, האסירה51,52), מלטונין43,49, agomelatine53, החומר המדכא ההידרולז (FAAH) של חומצת שומן אמיד URB59754 ו מספר תרכובות טבעיות30,37,50,55,56,57,58 כבר הפגינו כדי להפוך את UCMS-induced דיכאון, חרדה-תסמינים דמויי. בסך הכל, השפעות טיפוליות אלו לא הושגו באמצעות טיפולים חריפה12 (למשל, האסירה51,52, imipramine53,54,59 ,60, פלואוקסטין53, agomelatine53, URB59754, brofaromine60).
חשיפה ללחץ בתקופת הילדות וההתבגרות היא גורם סיכון מרכזי להיווצרות הקדמי MDD (בין מספר הפרעות פסיכיאטריות אחרות) ב בגרות-61,-62,-63. הציר ההיפותלמוס-יותרת המוח-יותרת הכליה (HPA) היא מערכת נוירואנדוקריניים הגדולות ויסות התגובה הביו-התנהגותי ללחץ64. מתח לטווח ארוך במהלך תקופות התפתחותיות רגיש הילדות וההתבגרות מחליש את האיזון של הציר HPA. . זה יכול להרגיז למצב של הפעלה משופרת סימפטי, תגובתיות לא מאוזן, hypercortisolemia קיימא באמצעות המדינה המנוחה; לפיכך, עיבוד אנשים פגיעים דיכאון או חרדה הקשורים נפש65,66,67,68. UCMS מתרגמת כראוי זה הפתוגנזה: דגש על יישום במהלך עכברים ' ההתבגרות מעוררת רגישות כמו דיכאון לטווח ארוך. יתר על כן, חסרונות התנהגותיים המושרה על ידי UCMS, הן והיכרות שינויים משמעותיים ב- HPA ציר מתפקדת (למשל, על-ידי גרימת הפחתה במקדם neurotrophic נגזר מוח בהיפוקמפוס [BDNF; חלבון מעורב מאוד האיזון של HPA ציר69,70]30, או על-ידי ופוגע ויסות הפרשת corticosterone ל71,הדם72), בדמיון פתופיזיולוגיה בני12, 50,73.
UCMS יש מספר תכונות bolstering כמודל עבור דיכאון: למשל (i) ההתמחרות של אנהדוניה (אשר נחשב endophenotype של MDD23,74); (ii) UCMS מאפשר להעריך מגוון רחב של התנהגויות כמו דיכאון כמו ייאוש התנהגותית, התנהגות חברתית מופחתת, התדרדרות במצב הפרווה עוד34; וכן (iii) כרונית (2-4 שבועות), אך לא חדות, מנהלה של נוגדי דיכאון עקב חשיפה מתח יכול לייצר השפעה תרפויטית ממושך במקביל האפקט שבידי בחולים אנושיים אותם סוכנים30,75 ,76,77.
תכונות אלה מחזקים את תוקפו של UCMS לעומת דגמים אחרים בעלי חיים של דיכאון. של FST78 את הבטחה למחיר79 שני מודלים המשמשים לזירוז או להעריך התנהגות דיכאונית בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. כמודלים להשראת התנהגויות כמו דיכאון יש להם ברור הגירעונות בהשוואה ל- UCMS; הם אינם לבקש שינויים התנהגותיים לטווח ארוך ועל אולי רק לשקף את התאמת כהתקפת ולא תשואה של ביטוי, כמו דיכאון עמיד76.
במודל חיה חלופית של דיכאון הוא הדגם תבוסה חברתית. בניגוד FST, הבטחה למחיר את הדגם הזה (כמו UCMS) מחייב היישום של מתח כרוני (מזהה est [קרי], לו את חוזרים ונשנים של החיה החברתית aversive מפגשים עם עמיתיהם דומיננטית)76,77 , 80 , 81 , 82. היתרון העיקרי של המודל תבוסה חברתית היא כי היא מעסיקה גירויים חברתיים כמו לחצים, ובכך המשקף את התפקיד של מתח פסיכו-סוציאלי בפתוגנזה של הדיכאון האנושי. בדומה UCMS, המודל תבוסה חברתי מעורר לטווח ארוך התנהגויות כמו דיכאון, שינויים נוירואנדוקריניים. שוב במקביל UCMS, יש התבוסה-induced חברתית ' יוכל להעצר באמצעות הנהלת כרונית, אך לא חדות, של תרופות נוגדות דיכאון. בסך הכל, אין תמיכה גדולה עבור הניצול של UCMS ותבוסה חברתית כמו מנגנוני קליניים על חקירת הפתופיזיולוגיה של דיכאון76,77,81,82 . הפיגור העיקריים של המודל חברתית מפלה זאת, כי זה יכול רק להיות מיושם על מכרסמים זכר, כמוצג נקבות לא מספיקות התנהגות תוקפנית כלפי השני83. . Contrastingly, UCMS הוכח כדי להפיק אפקטים דמויי דיכאון מספר על שני עכברים זכר ונקבה34.
מתח צפוי כרוני מתון (PCMS) הוא מודל מכרסם אחר זה אוכף משטר של חשיפה חוזרת יומי איפוק מתח28,84,85,86,87. מספר מחקרים הראו כי PCMS מוגבר, כמו חרדה התנהגויות28,87; אמנם, ישנם סותרות דוחות ושהבנק vis PCMS היכולת לגרום התנהגויות כמו דיכאון לטווח ארוך. בניגוד UCMS, PCMS הפיק תוצאות משביעות רצון פחות מתייחס יכולתו לגרום84,28,נו כמו המדינה86. . זה עקבי עם הפנומנולוגיה האנושית, שבה לא צפויים לחצים הם מזיקים יותר מאשר צפוי אלה88.

<table><tbody><tr><td>מנורת חימום</td><td>איקאה</td><td>AA-19025-3</td><td></td></tr><tr><td>כרית חימום</td><td>Sachs</td><td>EF-188B</td><td></td></tr><tr><td>מסנן</td><td></td><td></td><td></td>עכברים</tr><tr><td>איזון אלקטרוני נייד (*.** גרם)</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>פקק גומי סטנדרטי, גודל 5</td><td>Ancare</td><td>#5.5R</td><td>כדי למנוע שפיכה במהלך SPT</td></tr><tr><td>צינור שתייה פתוח ישר (2.5 אינץ')</td><td>Ancare</td><td>OT-100</td><td>כדי למנוע שפיכה במהלך SPT (הכנס שפופרת שתייה לפקק גומי)</td></tr> <tr><td>תמיסת</td><td></td><td></td><td></td>סוכרוז 2</tr><tr><td>% צינור</td><td></td><td></td> צנטריפוגה חרוטי 50 מ"ל <td>עבור עכברי SPT</td></tr><tr><td>טרום מתבגרים (כבני 20 יום) ICR עכברי יציאה מ-ICR</td><td>Envigo</td><td>Hsd:ICR (CD-1)</td><td></td></tr></tbody></table>

פרוטוקול לא צפוי מתח כרוני מתון להשראת אנהדוניה בעכברים

The Unpredictable Chronic Mild Stress Protocol for Inducing Anhedonia in Mice

דיכאון הוא מצב נפוץ מאוד, מתישה, התייחס באופן חלקי בלבד על-ידי pharmacotherapies הנוכחית. חוסר התגובה לטיפול על ידי מטופלים רבים יבקש הצורך לפתח חלופות טיפוליות חדשות כדי להבין טוב יותר את האטיולוגיה של ההפרעה. מודלים קליניים עם היתרונות translational מפותחים עבור משימה זו. כאן אנו מציגים פרוטוקול עבור שיטת מתח בלתי צפוי כרוני מתון (UCMS) בעכברים. ב פרוטוקול זה, עכברים בגיל ההתבגרות באופן כרוני חשופים מתחלפות לא צפויים לחצים מתון. דמוי בפתוגנזה של דיכאון אצל בני אדם, מתח חשיפה במהלך תקופת ההתבגרות עכברים רגישים שמסיתה הפנוטיפ דיכאונית כמו בבגרות. UCMS יכול לשמש עבור הקרנות של נוגדי דיכאון על מגוון רחב של התנהגויות כמו דיכאון ובמדד neuromolecular. בין הניסויים בולט יותר להעריך התנהגות דיכאונית בחולדות הוא מבחן העדפה סוכרוז (SPT), אשר משקף אנהדוניה (לסימפטום הליבה של דיכאון). SPT יוצגו גם בפרוטוקול זה. היכולת של UCMS כדי לגרום אנהדוניה, לעורר חסרונות התנהגותיים לטווח ארוך ולאפשר היפוך גירעונות אלה באמצעות טיפול כרוני (אך לא חריפה) עם תרופות נוגדות דיכאון מחזקת את תוקפו של הפרוטוקול לעומת פרוטוקולים בעלי חיים אחרים עבור גרימת התנהגויות כמו דיכאון.

על מנת לאמת את היעילות של ההליך UCMS להשראת גירעונות, כמו דיכאון, נערכה בדיקת מניפולציה. עכברים ICR outbred זכר חולקו באופן אקראי לתנאים או UCMS או נאיבית (4 שבועות, כפי שמתואר פרוטוקול 2.2). לאחר מכן, SPT (6 ימים, כפי שמתואר פרוטוקול 4) היה מנוהל כדי להעריך אם עכברים לאחר שעברו UCMS הפגינו גירעונות האסתטית. כעבור זמן קצר, עכברים הוקרבו, ההיפוקמפוס היה גזור החוצה לחלוטין עבור BDNF (חלבון מאוד מעורבים הפתופיזיולוגיה של דיכאון70,93)...

כאן אנו מציגים את פרוטוקול לא צפוי מתח כרוני מתון בעכברים. פרוטוקול זה המניע הפנוטיפ לטווח ארוך, כמו דיכאון, מאפשר להעריך את היעילות של תרופות נגד דיכאון בשם היפוך של גירעונות כמו דיכאון ובעיות התנהגות neuromolecular.

Depression is a highly prevalent and debilitating condition, only partially addressed by current pharmacotherapies. The lack of response to treatment by ...

היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מתרגמת כראוי תכונות נוירוביולוגיות והתנהגותיות מרכזיות המעורבות בפתוגנזה, אטיולוגיה וטיפול בדיכאון. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בהבנת הפתופיזיולוגיה של חרדה ודיכאון ולקדם את הפיתוח של טיפולים תרופתיים חדשניים. המשמעות של טכניקה זו להרחיב לטיפול בדיכאון, כי זה מאפשר הקרנות עבור תרופות נוגדות דיכאון פוטנציאליות תוך דמיון כמובן ממושך של הפוגה ניכרת בחולים אנושיים.התחילו במילוי כלובים ביתיים בנססורת טרייה, ומוסיפים חתיכת צמר גפן להעשרה. בית בעלי חיים בכלוב הבית לתקופת הסמכה של שבוע אחד, ולשמור על מחזור אור / כהה עקבי של 12 שעות. אפשר גישה לליביאטום מודעה לצ'או מכרסמים ומים.תכנן משטר לחץ של ארבעה שבועות שבו כל אחד משבעת לחצים מנוצל פעם בשבוע, ביום אחר בכל שבוע. לאחר שבוע של הסמכה, ליזום יישום של לחצים על העכברים ארבעה שבועות בחדר UCMS. עבור גורם הלחץ הראשון, מניחים עכברים יחד עם עמיתיהם בכלוב הביתי שלהם בכלוב ריק.מלאו את הכלוב הריק במים שנשמרו ב-24 מעלות פלוס או מינוס אחת לעומק של סנטימטר אחד, ושמרו עכברים בכלוב הרטוב במשך ארבע שעות. לאחר מכן מעבירים כל עכבר לכלוב ייבוש ארעי נפרד עם מנורת חום מעליו, כרית חימום מתחתיו ומצעי מגבת נייר. מניחים מדחום בכלוב ארעי כדי לוודא שהטמפרטורה אינה עולה על 37 מעלות צלזיוס.שמור כל עכבר בכלוב חולף עד שהוא יבש ונראה נמרץ, ולאחר מכן להחזיר עכברים לכלוב הבית עם אותם עמיתים. עבור נסורת מעומעמת, מים עניים נשמרו ב 24 פלוס או מינוס אחד מעלות צלזיוס לתוך כלוב הבית עד נסורת הוא מעומעם בינוני. לאחר ארבע שעות, ייבשו את העכברים בכלובים ארעיים.ואז למקם את העכברים עם עמיתים בכלוב ביתי בכלוב סטרילי עם נסורת טרייה. עבור גורם הלחץ הבא, להטות את הכלוב ב 45 מעלות על הקיר במשך ארבע שעות. עבור קייג' ריק, העבר את כל חמשת העכברים יחד עם עמיתיהם הספציפיים בכלוב הביתי מכלוב הבית לכלוב ריק למשך ארבע שעות.עבור גורם הלחץ החמישי, להעביר עכברים יחד עם עמיתיהם הספציפיים כלוב הבית מהכלוב הביתי לכלוב אשר שוכנו על ידי קבוצה אחרת של עכברים לתקופה של לפחות שלושה ימים לפני יישום גורם הלחץ. שמור עכברים בכלוב לא מוכר במשך ארבע שעות. עבור גורם הלחץ השישי, מניחים כל עכבר בנפרד מרסן עכבר נקי במשך ארבע שעות.לאחר מכן, להחזיר עכברים לכלוב הבית עם אותם עמיתים. עבור גורם הלחץ האחרון, להעביר עכברים בכלוב הביתי שלהם עם עמיתיהם הספציפיים לחדר UCMS. תשאיר את האור דוהר במשך 24 שעות רצופות.לבסוף, לאחר יישום גורם הלחץ, להחזיר את הכלובים של קבוצת UCMS מחדר UCMS לחדר הדיור. במהלך ארבעת השבועות של חשיפה ללחץ, לשמור על הקבוצה הנאיבית בכלובי הבית שלהם ממוקם בחדר הדיור. ביום שלאחר הפסקת פרוטוקול UCMS, להתחיל ניהול של סוכנים פרמקולוגיים טיפוליים putative.לאחר שלב הטיפול, מוציאים כל עכבר מכלוב הבית ומ מניחים אותו בנפרד בכלוב מלא נסורת טרייה ופיסת צמר גפן להעשרה. לאחר מכן הכינו שני בקבוקים, אחד עם מים מזוקקים, ואחד עם תווי סוכרוז 2%. שוקלים את שני הבקבוקים ומגדירים אותם בשני קצות מכסה הכלוב ומ מניחים צ'או מכרסמים בין שני הבקבוקים כדי לאפשר לעכברים גישה עד ליביטום הן לפתרונות והן למזון לתקופה של 24, 48, 72 או 144 שעות.לאחר 12 שעות, או פעם ביום אם משך הבדיקה עולה על 24 שעות, שוקלים את הבקבוקים כדי להעריך את הצריכה מכל בקבוק ולהחליף את עמדות הזרבוביות כדי לאזן את האפשרות שהתוצאות היו מבולבלות על ידי העדפת מיקום. לבסוף, לשקול את הבקבוקים כל יום כדי להעריך את הצריכה מכל בקבוק. קבוצת UCMS הוכיחה העדפת סוכרוז מופחתת בהשוואה לקבוצה הנאיבית, מה שמרמז כי פרוטוקול UCMS היה יעיל בגרימת anhedonia.יתר על כן, הקבוצה UCMS הפגינו רמות BDNF היפוקמפוס פחתה בהשוואה לקבוצה הנאיבית, מה שמרמז כי פרוטוקול UCMS הוביל לצמצום ברמות BDNF ההיפוקמפוס כפי שניכר בדיכאון אנושי. התוצאות הצביעו על כך שהקבוצה UCMS מלוחים הפגינו ירידה משמעותית בהעדפת סוכרוז בהשוואה לקבוצת מלוחים נאיביים, כמו גם בהשוואה הן UCMS escitalopram וקבוצות NHT UCMS, מה שמרמז הן escitalopram ו NHT מנורמל את אנהדוניה UCMS-induced. בנוסף, קבוצת UCMS מלוחים הפגינו ירידה ברמות BDNF ההיפוקמפוס בהשוואה לקבוצת מלוחים נאיביים, כמו גם בהשוואה הן escitalopram UCMS וקבוצות NHT UCMS, מה שמרמז כי הן escitalopram ו NHT מנורמל UCMS-induced הפחתה ברמות BDNF בהיפוקמפוס.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו בדיקת השעיית זנב, מבחן שחייה כפוי ומבוך פלוס מוגבה. בדיקות אלה משמשות להערכת ייאוש התנהגותי, כמו גם גישוש וחרדה כמו התנהגות.

the-unpredictable-chronic-mild-stress-protocol-for-inducing-anhedonia

Research

JoVE Journal

Behavior

התנהגות

סרטון זה מדגים את השיטה של גרימת מתח כרוני בעכבר באמצעות קיבוע חוזר ונשנה, מה שמוביל לשחרור קורטיקוסטרון ולהפחתת פעילות קולטני הגלוטמט בנוירונים, מה שמביא להתנהגות דמוית דיכאון.

גרימת התנהגות דמוית דיכאון בעכבר באמצעות מתח קיבוע

מקור: Yan, Z., et al. הערכת ההשפעה האנטי-דיכאונית של Xiaoyaosan על עכברים הסובלים מלחץ כרוני. J. Vis. Exp. (2019). הסרטון מדגים את תהליך הקמת מודל עכברי של דיכאון כרוני הנגרם על ידי מתח והערכת התנהגויות דיכאון. היישום הכרוני של גורמי לחץ שונים מעורר שחרור של קורטיקוסטרון, מה שמוביל לעירור יתר עצבי ובסופו של דבר למוות עצבי, מה שגורם לתסמינים דמויי דיכאון בעכברים.

אינדוקציה והערכה של דיכאון בעכברים באמצעות חשיפה למתח כרוני

כאן, שיטות לפיתוח מודל עכבר של מתח תבוסה החברתית subchronic והקל מתוארות ושימוש כדי לחקור את התכונות פתוגניים של דיכאון כולל hyperphagia- וסימפטומים כמו polydipsia-הבאים עלייה במשקל גוף.

במודל עכבר של מתח הבס חברתי Subchronic והקל להבנת גירעונות התנהגותיים ופיסיולוגיים הנגרם על-מתח

פרוטוקול המתח הקל הכרוני הבלתי צפוי (UCMS) הוא שיטה מתוקפת לחקר שינויים התנהגותיים ופיזיולוגיים הקשורים למתח כרוני ותסמיני דיכאון. שמונה שבועות של הטלת פרוטוקול UCMS גורמים לשינויים התנהגותיים ולתוצאות בריאותיות גרועות במכרסמים משני המינים.

פרוטוקול מתח מתון כרוני בלתי צפוי לתסמיני דיכאון ייזום, שינויים התנהגותיים ותוצאות בריאותיות שליליות במכרסמים

מאמר זה מספק פרוטוקול פשוט ומתוקננת עבור השראה של התנהגות כמו דיכאון בעכברים כרוניים מקיבוע באמצעות הרסן. בנוסף, התנהגות וטכניקות פיסיולוגיים כדי לוודא אינדוקציה של דיכאון מוסברים.

פרוטוקול מאמץ משתק כרוני לגרימת התנהגות של דיכאון כמו עכברים

משימת מחסום Y-maze היא מבחן התנהגות הבוחן את המוטיבציה לבזבז מאמץ עבור תגמול. כאן, אנו דנים בבדיקת לחצים כרוניים מרובים מאומתים היטב כולל קורטיקוסטרון כרוני ומתח תבוסה חברתית עם התנהגות זו, כמו גם את הרומן כרוני לא מפלה לחץ תבוסה חברתית (CNSDS), אשר יעיל בנקבות.

מתח כרוני משנה התנהגות בחירה הקשורה למאמץ במשימת מחסום Y-מבוך בעכברים

פרוטוקול זה מתאר מודל לחץ קל כרוני בלתי צפוי (CUMS) לדיכאון המבוסס על תיאוריה רפואית מונגולית, יחד עם שיטות לאימות מבחנים התנהגותיים.

לחץ כרוני בלתי צפוי קל בחולדות מבוסס על התרופה המונגולית

פרוטוקול זה מפרט כיצד לבצע לחץ חברתי כרוני של 10 ימים בעכברים זכרים בגיל ההתבגרות המוקדמת כדי לייצר הימנעות חברתית ארוכת טווח בבגרות ביותר מ-60% מהעכברים.

מתח תבוסה חברתית כרוני בעכברים זכרים בגיל ההתבגרות המוקדמת

על ידי שילוב ארבעה גורמי לחץ חברתיים יומיומיים, המחקר הנוכחי מתאר מודל לחץ חברתי משולב מרובה (MISS) להפרעות פסיכיאטריות בעכברי C57BL/6J נקבות. לאחר עשרה ימים של חשיפה חוזרת ונשנית ל-MISS, העכברים פיתחו פנוטיפים דמויי דיכאון וחרדה, ובכך סיפקו מודל טבעי מבוסס אטיולוגיה לחקר הפרעות פסיכיאטריות אצל נבדקים.

מודל מתח חברתי משולב מרובה להפרעות פסיכיאטריות בעכברי C57BL/6J נקבות

מאמר זה מתאר את השימוש בלחץ חברתי פורץ תושב כרוני כהפרדיגמה ethologically רלוונטית לדיכאון שלאחר לידה והחרדה במודל מניק מכרסמים.

שימוש בלחץ חברתי כרוני לדיכאון לאחר לידה בדגם מניקות מכרסמים

למדו פרוטוקול UCMS ליצירת דיכאון דמוי-קליני בעכברים באמצעות מתח מתון בלתי צפוי. השיטה מאפשרת הערכה התנהגותית ונוירומולקולרית של אנהדוניה ורמות BDNF בהיפוקמפוס לסקרינג תרופות נוגדות דיכאון.

פרוטוקול לא צפוי מתח כרוני מתון להשראת אנהדוניה בעכברים

גלה סרטונים נוספים