September 11th, 2018
שיטות למדידת תגובות סימפטי ואת הלב וכלי הדם מערכת העצבים המרכזית (CNS) מניפולציות חשובים לקידום מדעי המוח. פרוטוקול זה פותחה כדי לסייע למדענים מדידה וכימות שינויים חריפה בפעילות כליות העצבים הסימפתטית (RSNA) בחולדות מרדימים (ההישרדות).
שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח על מערכת העצבים האוטונומית, במיוחד על מנגנוני מערכת העצבים המרכזית המווסתים את הזרימה הסימפתטית לכליה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא מאפשרת למדוד את ההשפעה שיש למניפולציות של מערכת העצבים המרכזית על היציאה הסימפתטית הכלייתית לכליה. לפני קנולציה עורקית, בדוק את צנתר חישת הלחץ בהגדלה גבוהה כדי לוודא שהקטטר נקי מבועות ופסולת ויש לו מניסקוס שלם בין הנוזל לרכיבים מלאים בג'ל.
לפני כל השתלה, מלאו מחדש את הג'ל בקצה הדיסטלי של הצנתר והשתמשו במגנט כדי להפעיל את המשדר. הנח חצי קשר רופף מעל התפר הפרוקסימלי כדי לחסום לזמן קצר את עורק הירך. והחזקת מכניס הצנתר ביד הלא דומיננטית, השתמש במלקחיים של צינורית כלי כדי לתפוס את קצה הצינורית של יחידת הטלמטריה כדי למנוע תזוזה של הג'ל מהקצה.
השתמש בקצה מחט כפוף בגודל 22 כדי לנקב חור בעורק ולהכניס את הצינורית לעורק ככל האפשר. לאחר מכן אבטח את קטטר הלחץ עם קשרי התפרים הפרוקסימליים והדיסטליים. ותוחב את גוף שתל הטלמטריה בתוך הצד הסמוך לחתך.
לגישה למוח, העבירו בעדינות את החולדה למצב שכיבה במסגרת ניתוח סטריאוטקסי עם הראש בין מוטות האוזניים והתאימו את מוט החותכות כדי להשוות את גובה הלמבדה והברגמה. לאחר מכן בצע חתך זנב רוסטרלי של שני סנטימטרים דרך קו האמצע של הקרקפת והשתמש באפליקטורים עם קצה כותנה כדי להסיר בחוזקה כל רקמת חיבור משטח הגולגולת. מרחו מי חמצן על הגולגולת החשופה כדי לסייע בהדמיית תפרי הברגמה, הלמבדה וקו האמצע.
בעזרת אטלס של מוח החולדה כדי להנחות את המטרה, קדחו אוסטאוטומיה של חור חור בגודל לגישה לאלקטרודות דרך הגולגולת. כדי לבודד את העצבים הסימפתטיים הכלייתיים, חבר פעילות עצבית סימפתטית כלייתית חוטית או אלקטרודת RSNA למגבר מקדים 10X ומגבר מיקרואלקטרודה ובצע חתך אזמל המשתרע בין ארבעה לחמישה סנטימטרים מתחת לצלעות בכיוון הזנב מעט לרוחב עמוד השדרה. ניתוח קהה כדי לדמיין את שרירי עמוד השדרה ולבצע חתך זנב רוסטרלי שטחי מאוד של סנטימטר עד שניים במקום בו השומן פוגש את השריר.
בעזרת אפליקטורים עם קצה כותנה, מורחים את השומן הרחק מהשריר כדי לדמיין את הכליה מבלי להיכנס לחלל הצפק. והשתמש במחזירים כדי להפריד בעדינות את הכליה משרירי עמוד השדרה כדי לדמיין את עורק הכליה ואת אבי העורקים הבטני. והשתמש בהגדלה גבוהה כדי לזהות את עצבי הכליה בכיס החתך.
צרורות העצבים נראים בקלות רבה ביותר בזווית הישרה שנוצרת על ידי אבי העורקים ועורק הכליה העוקב מקרוב אחר עורק הכליה מאבי העורקים לכליות. לאחר מכן השתמש בפינצטה מיקרו-ניתוחית כדי לנתח בעדינות קטע של צרור העצבים שיונח על אלקטרודת ההקלטה מהרקמה שמסביב. אבטח את אלקטרודת ה-RSNA של החוט במחזיק והורד את האלקטרודה לגובה קטע העצב.
השתמש בוו עצב כדי להרים בעדינות קטע של עצב הכליה על האלקטרודה מבלי למתוח את העצב. ומלאו את החתך בשמן מינרלי כדי לשמור על לחות העצב הסימפתטי של הכליה החשופה. חבר קליפ הארקה לחיה ואת הקצה השני לכלוב פאראדיי והשתמש בסינון מעבר גבוה ונמוך כדי לכוון את האות למגברים.
לאחר מכן כוונן את ההגבר עד 10 קילו-הרץ כולל צג שמע כדי להעריך את דפוס ההתפרצות של ה-RSNA. כדי להעריך את איכות הקלטת ה-RSNA, עורר את הברורפלקס עם הזרקה תוך ורידית של בולוס 100 מיקרוליטר של 10 מיקרוגרם למיליליטר פנילפרין כדי להעלות את לחץ הדם ולעכב את פעילות העצב הסימפתטי הכלייתי תוך התאמת מיקום האלקטרודות לשיפור האות לפי הצורך. לאחר שהתקבל אות ברור, שאפו את השמן המינרלי ואבטחו את האלקטרודה במקומה בעזרת סיליקה ג'ל
.בניסוי מייצג זה, נעשה שימוש בהזרקה תוך ורידית של פנילפרין כדי לגרום לעלייה בלחץ העורקי הממוצע ולעורר את הברורפלקס והעיכוב הסימפתוינטי החולף. כדי לכמת את ה-RSNA, ה-RSNA הגולמי תוקן וממוצע עבור מקטעים לא חופפים של 10 שניות ואומדן הרעש הופחת מכל מקטע. בעת ביצוע הליך זה, חשוב לזכור לוודא שהחולדה מורדמת כראוי, שהיא ממוקמת כראוי במסגרת הסטריאוטקסית ושהמערכת מוארקת כראוי כדי להפחית את הרעש החשמלי.
בעקבות הליך זה ואיסוף רקמת המוח, ניתן ליישם שיטות היסטולוגיה כדי לאפיין את סוגי גרעיני המערכת המרכזית השולטים בתגובה סימפתו-מעוררת. טכניקה זו מאפשרת למדעני מוח לחקור מנגנוני ויסות אוטונומיים בחולדות מורדמות, מה שמודיע על מחקרים עתידיים בבעלי חיים כדי להבין את השליטה בלחץ הדם ותפקוד הכליות. אל תשכח שחשוב להעריך את מישור ההרדמה לפחות כל 15 דקות.
ולספק הרדמה משלימה לפי הצורך.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
המחקר הנוכחי מציג שיטה למדידת פעילות העצבים הסימפתטיים הכלייתיים (RSNA) בחולדות מורדמות כדי לחקור את מערכת העצבים האוטונומית. על ידי בחינת שינויים בזרימה הסימפתטית הקשורה למניפולציות של מערכת העצבים המרכזית, הפרוטוקול מספק תובנות לגבי המנגנונים המסדירים את התגובות האוטונומיות המשפיעות על תפקוד הכליות.