Name: סינתזה ואפיון של היפרדות כונדרויטין גופרתי (plCSA) - מיקוד השומנים - חלקיקי הפולימר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 55 s
Description: למדו שיטה פשוטה ושחזורית לסינתזת ננו-חלקיקי פולימר-שומן מצופים בפפטיד plCSA-BP למשלוח ממוקד של תרופות לגידולים ולטרופובלסטים השליה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מענקי המחקר מפתח הלאומי, תוכנית פיתוח של סין (2016YFC1000402), הקרן מדעי הטבע הלאומית (81571445 ו- 81771617), את מדעי הטבע קרן של בפרובינצית גואנג-דונג (2016A030313178) כדי X.f. ב, קרן מחקר בסיסי שנג'ן (JCYJ20170413165233512) כדי x.f. ב

1. הכנת מלאי פתרונות
<ol><li>הכן תמיסה מימית של 4% אתנול על ידי דילול 4 מ"ל אתנול מוחלטת עם 100 מ של מים הנדסה גנטית. לאחסן את הפתרון ב 4 º C. הערה: הנדסה גנטית מים מוגדר מים ללא מזהמים כגון חיידקים, חלקיקים, יונים או nucleases. הנדסה גנטית מים היה המתקבלים מערכת טיהור מים עם resistivity היעד של 18.2 עד mΩ·cm, כלומר זיהום anionic נמוכה.</li>
	<li>להכין 1 מ"ג/מ"ל לציטין סויה פתרון מניות על ידי המסת 20 מ ג של לציטין סויה ב- 20 מ של התמיסה המימית של 4% אתנול. חנות לציטין סויה פתרון מניות ב 4 º C.</li>
	<li>הכן 25 מ"ג/מ"ל DSPE-יתד (2000)-COOH מניות פתרון על ידי המסת 100 מ ג של DSPE-פג-COOH ב 4 מ"ל של התמיסה המימית של 4% אתנול. חנות הפתרון מניות ב-20 ° C.</li>
	<li>הכן 10 מ"ג/מ"ל DOX פתרון מניות על ידי המסת 50 מ"ג של DOX ב 5 מ ל מים הנדסה גנטית. אחסן את הפתרון DOX מניות ב 4 ° C בחושך.</li>
	<li>להכין 2 מ"ג/מ"ל פתרון מניות PLGA על ידי המסת 20 מ ג של PLGA ב- 10 מ"ל של acetonitrile. חנות הפתרון מניות PLGA ב 4 º C. התראה: Acetonitrile הוא דליק, רעיל. לפעול בזהירות בשכונה fume, ללבוש ציוד אישי המתאים, כגון חלוקי מעבדה, בטיחות משקפיים, כפפות גומי.</li>
	<li>להכין 0.1 M 2-(morpholino) ethanesulfonic חומצה (MES, pH 6.0) מניות פתרון על ידי המסת 2.17 גר' MES ב- 100 מ של מים הנדסה גנטית. חנות הפתרון מניות ב 4 º C.</li>
</ol>2. סינתזה של DNPs
הערה: כדי למנוע השפלה פוטו אטמוספרי DOX, כל הפעולות בוצעו בחושך. חלקיקים היו מסונתז על ידי13,1411,שיטת sonication צעד אחר צעד שדווחה בעבר.
<ol><li>להוסיף 3 מ"ל של התמיסה המימית של 4% אתנול שפופרת צנטרפוגה סטרילי 10 מ"ל. לאחר מכן, להוסיף µg 90 של הפתרון מניות של לציטין סויה, µg 210 של הפתרון מניות DSPE-פג-COOH, µg 750 של הפתרון מניות DOX עד 3 מ"ל של התמיסה המימית של 4% אתנול.</li>
	<li>להכניס את הצינור צנטריפוגה בתוך אמבטיית קרח, ומניחים את אמבטיית קרח על מעבד אולטראסוניות.</li>
	<li>עם מזרק 1 מ"ל, פיפטה 2 מ"ג של הפתרון מניות PLGA dropwise (s טיפה/4-6 1) לתוך הצינור צנטריפוגה. בינתיים, sonicate את הצינורית באמצעות מעבד אולטראסוניות ב תדירות של 20 kHz והמרביים של פלט של 30% עבור 5 דקות כדי לסנתז את DNPs. הערה: לסנתז חלקיקים אחיד בגדלים קטנים, המהירות שבה הפתרון PLGA שמטפטפים לתוך הצינור צריך להיות איטי, דור בועה להימנע.</li>
	<li>לטהר את DNPs על ידי שטיפת הפתרון במאגר MES 0.1 M (pH 6.0) 3 פעמים באמצעות מסנן צנטריפוגה (MWCO, 10 kDa). צנטריפוגה ב 4 ° C ו- 1000 g × 3 דקות בכל פעם. לבסוף, כ 1 מ"ל של חלקיקים נפתרה-MES צריכים להישאר. הערה: זה מהווה נקודת עצירה מקובלת במסגרת ההליך. אם לא נהגה נזווג פפטידים, חלקיקים יכולים להיטהר על ידי PBS מאגר (pH 7.4), DNPs מטוהרים ניתן לאחסן ב 4° C בחושך.</li>
</ol>3. ההטיה של פפטידים כדי DNPs
<ol><li>
אסתר הפעלה
	<ol>
<li>להוסיף 0.4 מ"ג EDC (ריכוז סופי 2 מ מ) עד 1 מ"ל של DNPs.</li>
		<li>להוסיף 0.24 מ"ג NHS התגובה (ריכוז סופי 2 מ מ). הערה: עבור תוספת קלה של הכמות הנכונה של EDC, NHS, פתרון מניות עשוי להיות מוכן אם ריאגנטים הם התפרקה, שימוש באופן מיידי.</li>
		<li>מערבבים את רכיבי התגובה היטב, ומניחים את התגובה על מטרף; אפשר תגובה במשך 30 דקות - 1 h בטמפרטורת החדר בחושך.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
תגובה אמין
	<ol>
<li>להגדיל את מאגר ה-pH 7.2-7.5 באמצעות PBS (20 ×, pH 7.4).</li>
		<li>להוסיף 0.5 מ ג של פפטיד פילוח plCSA (plCSA-BP, EDVKDINFDTKEKFLAGCLIVSFHEGKC) הפתרון התגובה. הערה: לפני חיבור, לפזר את פפטידים 20% acetonitrile. אם פפטידים אינם נמסים, sonication ב sonicator אמבטיה ייתכן מועיל.</li>
		<li>מערבבים היטב את הפתרון, ולאחר מכן מקם על מטרף; לאפשר את התגובה להמשיך ב 4 ° C בלילה בחושך.</li>
		<li>במקום פתרון תרכיב לתוך שקיות הדיאליזה (MWCO, 3,500 Da) כדי dialyze ולטהר את plCSA-DNPs באמצעות מאגר PBS (pH 7.4) בטמפרטורת החדר במשך 24 שעות ביממה בחושך. הערה: לחלופין, טיהור יכול להתבצע כמו שלב 2.4 כדי לקבל plCSA-DNPs.</li>
		<li>ליישומים התרבות תאים, לסנן את הפתרון משוקם דרך מסנן סטרילי מזרק מיקרומטר 0.22 להסיר פוחת משקעים פוטנציאליים.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. אפיון של השומנים, ממוקדות plCSA-חלקיקי הפולימר
<ol><li>
מדידה של גודל ננו-חלקיק hydrodynamic באמצעות פיזור אור דינאמי (DLS)
	<ol>
<li>לדלל חלקיקים במים הנדסה גנטית (דילול 50-fold). טען µL 500 של המדגם cuvette על פי ההוראות של המכשיר פוטנציאליים DLS או זטא. הערה: DLS וואקום ופוטנציאל זטה יכולים להיות שונים בהתבסס על המפרט של המכשיר.</li>
		<li>בסיום המדידה, להקליט את החלקיקים קוטר, polydispersity אינדקס (PDI) ואת פוטנציאל זטה. ממוצע התוצאות המתקבלות מ- 4 קריאות חוזרות, לחשב את סטיית התקן.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
במיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים (TEM) הערה: המורפולוגיה של חלקיקים נצפתה על ידי TEM עם השיטה כתם שלילי. 24<ol>
<li>לדלל חלקיקים במים הנדסה גנטית (דילול 400-fold). הוסף 20 µL של המדגם על גבי רשת TEM, מאפשרים לשבת במשך 5 דקות.</li>
		<li>להוסיף 100 µL של חומצה phosphotungstic 2% (w/v) ואפשר לשבת 2 דק הפתיל משם ה-droplet.</li>
		<li>יבש את הרשת TEM בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>הגדר את מתח ההאצה TEM 80 kV, והגדילו את התמונה × 100,000 להמחיש חלקיקים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
נחישות ליעילות כימוס (EE) ולה
	<ol>
<li>דור עיקול רגיל. להמיס DOX במים הנדסה גנטית כדי להכין DOX פתרונות של חמש ריכוזים שונים: µg 1/mL, µg 5/mL, 10 µg/mL, µg 50/mL ו- 100 µg/mL. למדוד את הספיגה של הפתרונות DOX-480 ננומטר עם ספקטרומטר UV-VIS. ליצור עיקול רגיל המבוסס על ריכוז DOX.</li>
		<li>לדלל 25 µL של חלקיקים עם 500 µL של מים הנדסה גנטית. למדוד את הספיגה-480 ננומטר עם ספקטרומטר UV-VIS. לחשב את ריכוז התרופה לפי העקומה סטנדרטי.</li>
		<li>לחשב את LE באמצעות המשוואה הבאה: LE = ((כמות של תרופות חלקיקים) / (סה כ משקל של חומרים)) × 100%.</li>
		<li>לחשב את הנדסת חשמל באמצעות המשוואה הבאה: הנדסת חשמל = ((כמות של תרופות חלקיקים) / (כמות נוסף סמים)) × 100%.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
מדידת יעילות ההטיה באמצעות חומצה bicinchoninic (BCA) וזמינותו 25 , 26 , 27<ol>
<li>פיפטה 25 µL של פתרונות סטנדרטיים פפטיד (טבלה 1) או plCSA-DNPs לתוך בארות microplate כפילויות. להוסיף 200 µL מהתרכובת עבודה מכל קידוח, ומערבבים את הצלחת גם על צלחת מטרף ב-30 s.</li>
		<li>לכסות את הצלחת, דגירה ב 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.</li>
		<li>למדוד את ספיגת במלון-562 ננומטר על קורא צלחת. השתמש העקומה תקן שנוצר כדי לחשב את ריכוזי plCSA plCSA-DNPs.</li>
		<li>לחשב את יעילות ההטיה באמצעות המשוואה הבאה: יעילות ההטיה = ((כמות של פפטיד בחלקיקים) / (כמות נוסף פפטיד)) × 100%.</li>
	</ol>
</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>בקבוקון</td>
			<td>נפח של diluent (μL)</td>
			<td>נפח ומקור פפטיד (μL)</td>
			<td>ריכוז פפטיד הסופי (μg/mL)</td>
		</tr>
<tr>
<td>A</td>
			<td>0</td>
			<td>300 מניות</td>
			<td>1000</td>
		</tr>
<tr>
<td>B</td>
			<td>250</td>
			<td>250 של המבחנה לדילול</td>
			<td>500</td>
		</tr>
<tr>
<td>C</td>
			<td>250</td>
			<td>250 של דילול מבחנה B</td>
			<td>250</td>
		</tr>
<tr>
<td>D</td>
			<td>250</td>
			<td>250 של דילול המבחנה C</td>
			<td>125</td>
		</tr>
<tr>
<td>E</td>
			<td>300</td>
			<td>200 של המבחנה D דילול</td>
			<td>50</td>
		</tr>
<tr>
<td>F</td>
			<td>250</td>
			<td>250 של דילול המבחנה E</td>
			<td>25</td>
		</tr>
<tr>
<td>G</td>
			<td>400</td>
			<td>100 של דילול המבחנה F</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>H</td>
			<td>500</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1. הכנה של פפטידים סטנדרטי
5. קרינה פלואורסצנטית הערכה מיקרוסקופיה של ספיגת ננו-חלקיק, ממוקדות plCSA בתאים Choriocarcinoma (JEG3)
<ol><li>זרע תאים על גבי לוחות 12-ובכן סטרילי 1.0 × 104 תאים/טוב עם DMEM מלאה/F12 (cDMEM/F12, המכיל 1% פניצילין/סטרפטומיצין ו-10% עוברית שור סרום (FBS)). מאפשרים לתאים לגדול 60% הנהרות-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2 בתנאי לחות.</li>
	<li>להסיר את המדיה, ולהוסיף 1 מ"ל של מדיה טריים קרים עם תוכן בסרום נמוכה (5% FBS) ו DNPs או plCSA-DNPs (5 µg של DOX המקבילה).</li>
	<li>דגירה התערובת של חלקיקים ב 4 ° C עבור 1 h והתאים.</li>
	<li>לאחר דגירה, מסיר את המדיה, לשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS. לאחר מכן, הוסף 1 מ"ל של cDMEM טריים/F12, דגירה התאים ב 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.</li>
	<li>להסיר את cDMEM/F12, לשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS.</li>
	<li>להוסיף 2 מ של 4% קר paraformaldehyde (PFA), דגירה בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות לתקן את התאים.</li>
	<li>הסר את כדורגלן. לשטוף את התאים עם 2 מ של PBS פעם אחת. להוסיף 1 מ"ל של PBS המכיל דאפי (1 µg/mL) עבור גרעינים מכתים, דגירה בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות.</li>
	<li>האחות של PBS, לשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS.</li>
	<li>להוסיף הרכבה בינונית, תמונה של זריחה עם מיקרוסקופ זריחה, באמצעות ערוצי ירוק וכחול כדי להמחיש את DOX ואת הגרעינים, בהתאמה.</li>
</ol>

<ol><li>Davis, M. E., Shin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+therapeutics%3A+an+emerging+treatment+modality+for+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Drug+Discovery%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771(2008).</li>
<li>Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17439359">Nanotechnology applications in cancer.</a> Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).</li>
<li>Jabir, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+overview+on+the+current+status+of+cancer+nanomedicines%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Medical+Research+and+Opinion%22%5BJournal%5D)">An overview on the current status of cancer nanomedicines.</a> Current Medical Research and Opinion. 34 (5), 911-921 (2018).</li>
<li>Pillai, G. <a target="_blank" href="https://symbiosisonlinepublishing.com/pharmacy-pharmaceuticalsciences/pharmacy-pharmaceuticalsciences09.php">Nanomedicines for Cancer Therapy: An Update of FDA Approved and Those under Various Stages of Development.</a> SOJ Pharmacy & Pharmaceutical Sciences. 1 (2), 1-13 (2014).</li>
<li>Marta, T., Luca, S., Serena, M., Luisa, F., Fabio, C. <a target="_blank" href="https://www.hindawi.com/journals/jnm/2016/5436458/">What is the role of nanotechnology in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer? Promising Scenarios for the Near Future.</a> Journal of Nanomaterials. 2016, e5436458(2016).</li>
<li>Dasari, S., Tchounwou, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cisplatin+in+cancer+therapy%3A+molecular+mechanisms+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22European+journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Cisplatin in cancer therapy: molecular mechanisms of action.</a> European journal of Pharmacology. 740, 364-378 (2014).</li>
<li>Brigger, I., Dubernet, C., Couvreur, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticles+in+cancer+therapy+and+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Nanoparticles in cancer therapy and diagnosis.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 64, 24-36 (2012).</li>
<li>Steichen, S. D., Caldorera-Moore, M., Peppas, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+of+current+nanoparticle+and+targeting+moieties+for+the+delivery+of+cancer+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">A review of current nanoparticle and targeting moieties for the delivery of cancer therapeutics.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 48 (3), 416-427 (2013).</li>
<li>Salanti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+human+cancer+by+a+glycosaminoglycan+binding+malaria+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Targeting human cancer by a glycosaminoglycan binding malaria protein.</a> Cancer Cell. 28 (4), 500-514 (2015).</li>
<li>Seiler, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Oncofetal+Glycosaminoglycan+Modification+Provides+Therapeutic+Access+to+Cisplatin-resistant+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22European+Urology%22%5BJournal%5D)">An Oncofetal Glycosaminoglycan Modification Provides Therapeutic Access to Cisplatin-resistant Bladder Cancer.</a> European Urology. 72 (1), 142-150 (2017).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+delivery+of+doxorubicin+by+CSA-binding+nanoparticles+for+choriocarcinoma+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment.</a> Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placenta-specific+drug+delivery+by+trophoblast-targeted+nanoparticles+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice.</a> Theranostics. 26 (2), 130-137 (2018).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembled+lipid--polymer+hybrid+nanoparticles%3A+a+robust+drug+delivery+platform%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Self-assembled lipid--polymer hybrid nanoparticles: a robust drug delivery platform.</a> ACS Nano. 2 (8), 1696-1702 (2008).</li>
<li>Zheng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-step+assembly+of+DOX%2FICG+loaded+lipid-polymer+nanoparticles+for+highly+effective+chemo-photothermal+combination+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22ACS%22%5BJournal%5D)">Single-step assembly of DOX/ICG loaded lipid-polymer nanoparticles for highly effective chemo-photothermal combination therapy.</a> ACS. 7 (3), 2056-2067 (2013).</li>
<li>Fang, R. H., Aryal, S., Hu, C. -M. J., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quick+synthesis+of+lipid%E2%88%92+polymer+hybrid+nanoparticles+with+low+polydispersity+using+a+single-step+sonication+method%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Quick synthesis of lipid− polymer hybrid nanoparticles with low polydispersity using a single-step sonication method.</a> Langmuir. 26 (22), 16958-16962 (2010).</li>
<li>Gu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Folate-modified%2C+indocyanine+green-loaded+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+targeted+delivery+of+cisplatin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomaterials+Science%2C+Polymer+Edition%22%5BJournal%5D)">Folate-modified, indocyanine green-loaded lipid-polymer hybrid nanoparticles for targeted delivery of cisplatin.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 28 (7), 690-702 (2017).</li>
<li>Mandal, B., Mittal, N. K., Balabathula, P., Thoma, L. A., Wood, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+in+vitro+evaluation+of+core-shell+type+lipid-polymer+hybrid+nanoparticles+for+the+delivery+of+erlotinib+in+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Development and in vitro evaluation of core-shell type lipid-polymer hybrid nanoparticles for the delivery of erlotinib in non-small cell lung cancer.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 81, 162-171 (2016).</li>
<li>Shi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+legumain-recognition+and+NIR+controlled+released+of+cisplatin-indocyanine+nanosphere+against+gastric+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Enhanced legumain-recognition and NIR controlled released of cisplatin-indocyanine nanosphere against gastric carcinoma.</a> European Journal of Pharmacology. 794, 184-192 (2017).</li>
<li>Grabarek, Z., Gergely, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zero-length+crosslinking+procedure+with+the+use+of+active+esters%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Zero-length crosslinking procedure with the use of active esters.</a> Analytical Biochemistry. 185 (1), 131-135 (1990).</li>
<li>Hadjipanayis, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EGFRvIII+Antibody-Conjugated+Iron+Oxide+Nanoparticles+for+Magnetic+Resonance+Imaging-Guided+Convection-Enhanced+Delivery+and+Targeted+Therapy+of+Glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">EGFRvIII Antibody-Conjugated Iron Oxide Nanoparticles for Magnetic Resonance Imaging-Guided Convection-Enhanced Delivery and Targeted Therapy of Glioblastoma.</a> Cancer Research. 70 (15), 6303-6312 (2010).</li>
<li>Sadhukha, T., Wiedmann, T. S., Panyam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhalable+magnetic+nanoparticles+for+targeted+hyperthermia+in+lung+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Inhalable magnetic nanoparticles for targeted hyperthermia in lung cancer therapy.</a> Biomaterials. 34 (21), 5163-5171 (2013).</li>
<li>Jennings, M., Nicknish, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+a+site+of+intermolecular+cross-linking+in+human+red+blood+cell+band+3+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Localization of a site of intermolecular cross-linking in human red blood cell band 3 protein.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (9), 5472-5479 (1985).</li>
<li>Staros, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-hydroxysulfosuccinimide+active+esters%3A+bis%28N-hydroxysulfosuccinimide%29+esters+of+two+dicarboxylic+acids+are+hydrophilic%2C+membrane-impermeant%2C+protein+cross-linkers%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">N-hydroxysulfosuccinimide active esters: bis(N-hydroxysulfosuccinimide) esters of two dicarboxylic acids are hydrophilic, membrane-impermeant, protein cross-linkers.</a> Biochemistry. 21 (17), 3950-3955 (1982).</li>
<li>Valencia, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-step+assembly+of+homogenous+lipid%E2%88%92+polymeric+and+lipid%E2%88%92+quantum+dot+nanoparticles+enabled+by+microfluidic+rapid+mixing%5BTitle%5D)+AND+%22ACS%22%5BJournal%5D)">Single-step assembly of homogenous lipid− polymeric and lipid− quantum dot nanoparticles enabled by microfluidic rapid mixing.</a> ACS. 4 (3), 1671-1679 (2010).</li>
<li>Altintas, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanobody-albumin+nanoparticles+%28NANAPs%29+for+the+delivery+of+a+multikinase+inhibitor+17864+to+EGFR+overexpressing+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Nanobody-albumin nanoparticles (NANAPs) for the delivery of a multikinase inhibitor 17864 to EGFR overexpressing tumor cells.</a> Journal of Controlled Release. 165 (2), 110-118 (2013).</li>
<li>Maya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cetuximab+conjugated+O-carboxymethyl+chitosan+nanoparticles+for+targeting+EGFR+overexpressing+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Carbohydrate+Polymers%22%5BJournal%5D)">Cetuximab conjugated O-carboxymethyl chitosan nanoparticles for targeting EGFR overexpressing cancer cells.</a> Carbohydrate Polymers. 93 (2), 661-669 (2013).</li>
<li>Deepagan, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+targeted+imaging+and+delivery+of+camptothecin+using+cetuximab-conjugated+multifunctional+PLGA-ZnS+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">In vitro targeted imaging and delivery of camptothecin using cetuximab-conjugated multifunctional PLGA-ZnS nanoparticles.</a> Nanomedicine. 7 (4), 507-519 (2012).</li>
<li>Totaro, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+investigation+of+EDC%2FsNHS-mediated+bioconjugation+reactions+for+carboxylated+peptide+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Systematic investigation of EDC/sNHS-mediated bioconjugation reactions for carboxylated peptide substrates.</a> Bioconjugate Chemistry. 27 (4), 994-1004 (2016).</li>
<li>Sinz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+cross-linking+and+mass+spectrometry+to+map+three-dimensional+protein+structures+and+protein-protein+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Mass+Spectrometry+Reviews%22%5BJournal%5D)">Chemical cross-linking and mass spectrometry to map three-dimensional protein structures and protein-protein interactions.</a> Mass Spectrometry Reviews. 25 (4), 663-682 (2006).</li>
<li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LDLR-mediated+peptide-22-conjugated+nanoparticles+for+dual-targeting+therapy+of+brain+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">LDLR-mediated peptide-22-conjugated nanoparticles for dual-targeting therapy of brain glioma.</a> Biomaterials. 34 (36), 9171-9182 (2013).</li>
<li>Koren, E., Apte, A., Sawant, R. R., Grunwald, J., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-penetrating+TAT+peptide+in+drug+delivery+systems%3A+proteolytic+stability+requirements%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Cell-penetrating TAT peptide in drug delivery systems: proteolytic stability requirements.</a> Drug Delivery. 18 (5), 377-384 (2011).</li>
<li>Chu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+ocular+delivery+to+laser-induced+choroidal+neovascularization+by+dual+internalizing+RGD+and+TAT+peptide-modified+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Topical ocular delivery to laser-induced choroidal neovascularization by dual internalizing RGD and TAT peptide-modified nanoparticles.</a> International Journal of Nanomedicine. 12, 1353-1368 (2017).</li>
</ol>

X.f. ב עורכים: ב"צ הממציאים על הפטנטים PCT/CN2017/108646, 201710906587.6 נאספו האירוע מתקיים שמכסה על שיטת סינתזה nanoparticle ממוקדות plCSA ויישום בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. אין פוטנציאל ניגודי עניינים פורסמו על ידי המחברים האחרים.

פרוטוקול זה מספק שיטה לשחזור ויעיל עבור סינתזה plCSA-BP-מצומדת השומנים-פולימר חלקיקים. בשיטת צעד אחר צעד sonication להכין את השומנים-פולימר חלקיקים הוא מהיר, הדירים שונה בשיטות nanoprecipitation טיפוסי כולל חימום, vortexing או אידוי. לפיכך, השיטה שפותחה מפחית באופן משמעותי את הזמן סינתזה. בנוסף, bioconjugate EDC/NHS בשימוש פרוטוקול זה היא טכניקה בשימוש נפוץ ונוח מאוד? משהו שנובח פפטידים, נוגדנים חלקיקים. לכן, השילוב של שיטת sonication צעד אחר צעד עם הטכניקה bioconjugate EDC/NHS לסנתז פילוח plCSA השומנים-פולימר חלקיקים ונ...

שיטה טיפולית יעילה לסרטן מפחית ומסלקת גידולים עם רעילות מינימלית מערכתית. ומכאן, גידול סלקטיבי המיקוד הוא המפתח לחקור שיטות טיפוליות מוצלחות. חלקיקים מציעים הזדמנות מבטיחה לטיפול בסרטן, הרכבות מולקולרית עם קבוצות פונקציונליות שונות לשפר את יעילות התרופה ולצמצם את תופעות לוואי המשויך1,2. יתר על כן, ננו-חלקיק מערכות לנצל בעיקר פסיביים ואקטיביים מיקוד כדי להגיע למטרה גידולים3.
פילוח פסיבי מנצלת את מאפייני מולדת של חלקיקים, חדירות משופרת ואפקטים השמירה (EPR) כדי להגיע תאים סרטניים. ליפוזומים cationic שימשו בהצלחה להעביר תרופות נגד סרטן שונים גידולים יישומים קליניים-4,-5,-6. למרות ההשפעה הפוטנציאלי טיפולית יעילה לסרטן, ריכוז נמוך סמים באזור הגידול ואת חוסר היכולת להבחין בין תאים סרטניים מרקמות נורמלי הן שתי מגבלות הגדולות של חלקיקים פסיבית פילוח7.
אסטרטגיות מיקוד פעיל את היתרון של אנטיגן-נוגדן, קולטן ליגנד אחרים ואינטראקציות הכרה מולקולרית במיוחד לספק סמים גידולים8. גליקוזאמינוגליקן היפרדות כונדרויטין סולפט (plCSA), מתבטאת בהרחבה על רוב התאים הסרטניים, היפרדות trophoblasts. יתר על כן, החלבון מלריה VAR2CSA יכול במיוחד לאגד9,plCSA10. לפיכך, VAR2CSA יכול להיות כלי מיקוד תאים סרטניים אנושיים. עם זאת, כאשר VAR2CSA היא מצומדת כדי חלקיקים, החלבון באורך מלא עלולה להגביל את חדירת חלקיקים לתוך תאים סרטניים. לאחרונה גילינו פפטיד איגוד plCSA (plCSA-BP), נגזר החלבון מלריה VAR2CSA. plCSA-BP-מצומדת השומנים-פולימר חלקיקים במהירות בונדד choriocarcinoma תאים, דוקסורוביצין ולעלייה משמעותית (DOX) פעילות נגד סרטן ויוו11; חלקיקים אלה גם באופן ספציפי בונדד כדי היפרדות trophoblasts, יכול לשמש כלי למסירה יישוב של סמים כדי שליה12.
השומנים-פולימר חלקיקים מורכבים של פגז טפט השומנים, גרעין הידרופובי פולימריים ולייצג נשא חדש עבור משלוח סמים. חלקיקים אלה לשלב את היתרונות של ליפוזומים, nanocarriers פולימריים, כגון גודל nanoparticle לשליטה, הביו גבוהה, שחרור התרופה מתמשכת, סמים גבוהה הטעינה יעילות (LE) יציבות מעולה13. בעבודה זו, השתמשנו בשיטה צעד אחר צעד sonication לסנתז השומנים-פולימר חלקיקים. שיטה זו מהירה, נוח ומתאים הסולם, כבר בשימוש נרחב כדי להכין השומנים-פולימר חלקיקים שלנו11,קבוצה14 ואחרים15,16,17,18 .
1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide הידרוכלוריד (EDC) הוא carbodiimide הפופולרי משמש כסוכן crosslinking conjugating מולקולות המכילות אמינים, carboxylates19. בנוסף EDC, N-hydroxysulfosuccinimide (NHS) היא הכימית ההטיה הנפוצה ביותר השטח, ננו-חלקיק ההטיה תגובות20,21. NHS באפשרותך להפחית את מספר ריאקציות צדדיות ולשפר את היציבות ואת התשואה של אסתר intermediates22,23.
כאן, אנו מתארים את פרוטוקול עבור סינתזה השומנים-פולימר, ממוקדות plCSA חלקיקים. ראשית, מתואר הסינתזה sonication צעד אחר צעד של חלקיקים טעונים DOX שומנים בדם-פולימר (DNPs). לאחר מכן, הוא הציג טכניקה bioconjugate EDC/NHS ליצירת חלקיקים plCSA-BP-מצומדת השומנים-פולימר. טכניקה זו bioconjugate יכול לשמש גם כדי נזווג נוגדנים אחרים, פפטידים כדי חלקיקים. לבסוף, אנו מתארים וזמינותו המאפיינים ואת במבחנה physicochemical המשמש לאפיון חלקיקים, ממוקדות plCSA השומנים-פולימר. אנו מאמינים כי חלקיקים אלה השומנים-פולימר, ממוקדות plCSA עשויה להוות מערכת יעילה עבור המשלוח יישוב של תרופות סרטן אנושיים ביותר ואת משלוח יישוב דים לטיפול בהפרעות היפרדות השליה.

<table><tbody><tr><td>פפטיד plCSA</td><td>שנחאי GL Biochem</td><td>573518</td><td>לסינתזה של פפטידים</td></tr><tr><td>אתנול מוחלט</td><td>סינופארם</td><td>10009218</td> כימי <td>לסינתזה של ננו-חלקיקים</td></tr><tr><td>לציטין פולי סויה</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>441601</td><td>לסינתזה של ננו-חלקיקים</td></tr><tr><td>DSPE-PEG-COOH</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>880125</td><td>לסינתזה</td></tr> <tr><td>של ננו-חלקיקיםDoxorubicin</td><td>JKChemical</td><td>113424</td><td>לסינתזה של ננו-חלקיקים</td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>Shanghai Lingfeng</td><td>1008621</td><td>לסינתזה של ננו-חלקיקים</td></tr><tr><td>PLGA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>719897</td><td>לסינתזה של ננו-חלקיקים</td></tr><tr><td>מעבד אולטרסאונד</td><td>Sonics</td><td>VCX130</td><td>לסינתזה של ננו-חלקיקים</td></tr><tr><td>מסנן צנטריפוגה (MWCO 10 kDa)</td> <td>Millipore</td><td>UFC801024</td> לצנטריפוגה <td>לטיהור ננו-חלקיקים</td></tr><tr><td></td><td>סיגמא</td><td>3-18KS</td><td>לטיהור ננו-חלקיקים</td></tr><tr><td>2-[מורפולינו] חומצה אתנסולפונית (MES)</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>M3671</td><td>לצימוד פפטידים</td></tr><tr><td>1-אתיל-3-(3-דימתילאמינפרופיל) קרבודימיד הידרוכלוריד (EDC)</td> <td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>3450</td><td>לצימוד פפטידים</td></tr><tr><td>N-הידרוקסיסוקסימיד (NHS)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>56480</td><td>לצימוד פפטידים</td></tr><tr><td>שקיות דיאליזה</td><td>ספקטרום</td><td>132592T</td><td>לטיהור ננו-חלקיקים</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30028.01</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>10 מ"ל צינורות צנטריפוגה, פוליפרופילן</td><td>אלאדין</td><td>S-025</td><td>לסינתזה של ננו-חלקיקים</td></tr><tr><td>15 מ"ל צינורות צנטריפוגה, פוליפרופילן</td><td>קורנינג</td><td>430791</td><td>ליישומים שונים</td></tr><tr><td>0.22 &mu; מסנן מזרק סטרילי m</td><td>Millipore</td><td>SLGV033RB</td><td>לטיהור ננו-חלקיקים</td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל, פוליפרופילן</td><td>BD</td><td>328421</td><td>לסינתזה של ננו-חלקיקים</td></tr><tr><td>Malvern Zetasizer</td><td>Malvern</td><td>Nano ZS</td><td>עבור מנתח גודל חלקיקים</td></tr><tr><td>חומצה פוספוטונגסטית</td><td></td><td></td><td>עבור רשת TEM</td></tr><tr><td>TEM</td><td>EMCN</td><td>BZ10024a</td><td>עבור TEM</td></tr><tr><td>ספקטרומטר UV-VIS</td><td>Leagene</td><td>DZ0035</td><td></td></tr><tr><td>למיקרוסקופ אלקטרונים שידור TEM </td><td>JEOL</td><td>JEM-100CXII</td><td>עבור מנתח גודל חלקיקים</td></tr><tr><td>מגיב BCA A</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23228</td><td>לבדיקת BCA</td></tr><tr><td>מגיב BCA B</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>23224</td><td>לבדיקת BCA</td></tr><tr><td>96-Well Plates</td><td>Corning</td><td>3599</td><td>עבור BCA </td></tr><tr><td>קורא צלחת</td> בדיקה <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Multiskan&trade; GO</td><td>לבדיקת BCA</td></tr><tr><td>צלחות 12 בארות</td><td>קורנינג</td><td>3513</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>JEG3</td><td>בנק תאים של האקדמיה הסינית למדעים</td><td>TCHu195</td><td>שליה אנושית</td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Hyclone</td><td>SH30272.01</td><td>פנול ללא אדום</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td><td>GIBCO</td><td>10100</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>פניצילין/סטרפטומיצין</td><td>GIBCO</td><td>15070063</td><td>לתרבית תאים</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ פלואורסצנטי</td><td>OLYMPUS</td><td>CKK53</td><td>לספיגת תאים</td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Shanghai Lingfeng</td><td>1372021</td><td>לספיגת תאים</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Sangon Biotech</td><td>A606584</td><td>לספיגת תאים</td></tr><tr><td>הרכבה בינונית</td><td></td><td>חיים P36961</td><td>לספיגת תאים</td></tr></tbody></table>

סינתזה ואפיון של היפרדות כונדרויטין גופרתי (plcsa) - מיקוד השומנים - חלקיקי הפולימר

Synthesis and Characterization of Placental Chondroitin Sulfate A (plCSA)-Targeting Lipid-Polymer Nanoparticles

שיטה טיפולית יעילה לסרטן מפחית ומסלקת גידולים עם רעילות מינימלית מערכתית. חלקיקים באופן פעיל מיקוד מציעים גישה מבטיחה לטיפול בסרטן. גליקוזאמינוגליקן היפרדות כונדרויטין סולפט (plCSA) מתבטאת במגוון רחב של תאים סרטניים trophoblasts היפרדות, ואת מלריה חלבון ש-var2csa ניתן לאגד במיוחד plCSA. פפטיד מחייב דווח על היפרדות כונדרויטין סולפט A (plCSA-BP), נגזר מלריה חלבון VAR2CSA, באפשרותך לאגוד גם באופן ספציפי כדי plCSA על התאים הסרטניים, היפרדות trophoblasts. לפיכך, plCSA-BP-מצומדת חלקיקים יכול לשמש ככלי למשלוח שיגור תרופות סרטן אנושיים, היפרדות trophoblasts. ב פרוטוקול זה, אנו מתארים שיטה לסנתז plCSA-BP-מצומדת השומנים-פולימר חלקיקים טעונים עם דוקסורוביצין (plCSA-DNPs); השיטה מורכבת צעד בודד sonication וטכניקות bioconjugate. בנוסף, מספר שיטות אפיון plCSA-DNPs, כולל החלטה physicochemical תכונותיהם ואת ספיגת התאית על ידי תאים choriocarcinoma היפרדות (JEG3), מתוארים.

ב פרוטוקול זה, לציטין PLGA, DSPE-פג-COOH, סויה הן נציג פולימר, המספר המשלים השומנים-פג-COOH השומנים, בהתאמה. הסינתזה של חלקיקים השומנים-פולימר, ממוקדות plCSA ויה צעד אחר צעד sonication שיטה, טכניקה EDC/NHS מודגם באיור1. ראשית, בתנאים sonication, לציטין סויה, PLGA, DSPE-פג-COOH בעצמם טופס הליבה-פגז מובנים DNPs. הליבה מורכבת PLGA DOX שעברו אנקפסולציה, המעטפת מורכבת DSPE-פג-COOH, טפט לציטין סויה ממוקם על הממשק של הקליפה והליבה. לאחר מכן, הקבוצות - COOH ...

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול לסינתזה של היפרדות כונדרויטין סולפט א איגוד פפטיד (plCSA-BP)-מצומדת השומנים-פולימר חלקיקים באמצעות צעד אחר צעד sonication bioconjugate וטכניקות. חלקיקים אלה מהווים כלי הרומן למסירה יישוב של הרפוי גידולים האנושי ביותר, היפרדות trophoblasts לטיפול סרטן והפרעות היפרדות.

סינתזה ואפיון של היפרדות כונדרויטין גופרתי (plCSA) - מיקוד השומנים - חלקיקי הפולימר

An effective cancer therapeutic method reduces and eliminates tumors with minimal systemic toxicity. Actively targeting nanoparticles offer a promising ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום אספקת התרופות, כגון משלוח ממוקד של טיפולים לסרטן אנושי ואת שליה cystoblast. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שזו שיטה פשוטה לשחזור לסנתז פפטידים נדנים בחלקיקים אחרים. כדי להתחיל, להוסיף שלושה מילימטרים של ארבעה אחוז אתנול לצינור צנטריפוגה סטרילי 10 מיליליטר.לאחר מכן, להוסיף 90 מיקרוגרם של פתרון מלאי לציטין סויה, 210 מיקרוגרם של פתרון מלאי חומצה DSPE-PEG-carboxylic, ו 750 מיקרוגרם של פתרון מלאי DOX. השתמש במזרק מיליליטר אחד כדי pipette שני מיליגרם של פתרון מלאי PLGA. מניחים את צינור הצנטריפוגה באמבט קרח על מעבד קולי sonicate במשך שתי דקות.לאחר מכן, להוסיף פתרון מניות PLGA טיפה חכם לתוך צינור צנטריפוגה. כדי לטהר את DNPs, השתמש במסנן צנטריפוגה כדי לשטוף את הפתרון במאגר MES טוחנת 0.1. לאחר מכן, צנטריפוגה הפתרון ב 1000 G במשך שלוש דקות בארבע מעלות צלזיוס.כדי להתחיל בהפעלת אסתר, הוסף 0.4 מיליגרם של EDC למיליליטר אחד של DNPs. לאחר מכן, להוסיף 0.24 מיליגרם של NHS לתגובה. לאחר מכן, אפשר לתגובה להתרחש עד שעה בטמפרטורת החדר בחושך.לאחר מכן, מערבבים את מרכיבי התגובה ביסודיות ומ מניחים את התגובה על שייקר. כדי להתחיל את תגובת המין, השתמש PBS כדי להגדיל את pH חיץ מ 7.2 ל 7.5. לאחר מכן, להוסיף 0.5 מיליגרם של פפטיד מיקוד pICSA לפתרון התגובה.מערבבים היטב את הפתרון ומ מניחים אותו על שייקר. לאחר מכן, לאפשר לתגובה להמשיך בארבע מעלות צלזיוס לילה בחושך. למחרת, מלאו שקיות דיאליזה בתתכנון ההטיה.לטהר את DNPs pICSA עם מאגר PBS בטמפרטורת החדר במשך 24 שעות בחושך. לאחר culturing תאים על פי פרוטוקול הטקסט, להסיר את המדיה ולהוסיף מיליליטר אחד של מדיה טרייה, קרה עם חמישה אחוזים FBS ו pICSA DNPs או DNPs. לאחר מכן, הדגירה את תערובת התא והננו-חלקיקים במשך שעה אחת בארבע מעלות צלזיוס.לאחר מכן, להסיר את המדיה ולשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS. לאחר מכן, מוסיפים מיליליטר אחד של מדיה טרייה ו דגירה התאים במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, להסיר את המדיה ולשטוף את התאים שלוש פעמים עם PBS.לאחר מכן, מוסיפים שני מיליליטר של קור, ארבעה אחוז PFA ו דגירה את התערובת בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. הסר את PFA ולשטוף את התאים עם שני מיליליטר של PBS. לאחר מכן, להוסיף מיליליטר אחד של PBS עם DAPI עבור כתמי גרעינים.אפשר לתערובת דגירה בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. לבסוף, מוסיפים מדיום הרכבה ומדמיין את הפלואורסצנטיות במיקרוסקופ פלואורסצנטי. באמצעות פרוטוקול זה, DNPs הוכנו בהצלחה והוכנסו ל- pICSA BP. לאחר ההתייחדות, קוטר ה-DNPs הראשי עלה לכ-109 ננומטר.תמונות TEM של DNPs ו DNPs pICSA הראו כי החלקיקים היו מפוזרים היטב ובדרך כלל הפגינו מורפולוגיה כדורית. פוטנציאל הזטה של הננו-חלקיקים היה שלילי 20.1 ו-29.9 מילי-וולט, מה שמצביע על כך שהננו-חלקיקים היו יציבים מאוד. ההסתערות על ספיגת התאים JEG3 הצביעה על ה-PICSA DNPs הקשורים לתאי JEG3 בתוך 30 דקות.לכן, BP pICSA היה נדמד ביעילות על פני השטח. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור sonicate את התערובת במשך 1 עד 2 דקות לפני הוספת PLGA. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע את השיטות שלנו כגון בדיקת HPLC על מנת לקבוע את יעילות ההנקה בצורה מדויקת יותר.לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום הביולוגיה הרבייה כדי לבחון את האפשרות של טיפול שליה מיקוד בסיבוכי הריון.

synthesis-characterization-placental-chondroitin-sulfate-plcsa

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

מאמר זה מתאר שיטה nanoprecipitation לסנתז פולימר מבוסס חלקיקים באמצעות diblock שיתוף פולימרים. אנו נדון את הסינתזה של diblock שיתוף פולימרים, הטכניקה nanoprecipitation, יישומים פוטנציאליים.

גיבוש חלקיקים פולימריים Diblock באמצעות טכניקה Nanoprecipitation

אנו מתארים את הייצור והאפיון של ננו-חלקיקים ומיקרו-חלקיקים המורכבים מפולי (חומצה לקטית-קו-גליקולית) באמצעות ויטמין E-TPGS כמתחלב. על ידי פרמטרי ניסוח משתנים כגון ריכוז המתחלב, ניתן לייצר ננו-חלקיקים בקוטר ממוצע שנע בין 220 ננומטר ל-1.98 מיקרומטר.

ננו-חלקיקי PLGA הנוצרים על ידי תחליב יחיד או כפול עם ויטמין E-TPGS

מטרת פרוטוקול זה היא לשלב SDF-1α, גורם ביות של תאי גזע, בננו-חלקיקי דקסטרן סולפט-צ'יטוזן.  החלקיקים המתקבלים נמדדים לפי גודלם ופוטנציאל הזטה שלהם, כמו גם התוכן, הפעילות וקצב השחרור במבחנה של SDF-1α מהננו-חלקיקים.

הכנה ואפיון של SDF-1α-Chitosan-Dextran סולפט חלקיקים

במחקר זה תוארה שיטה לסינתזה של אוכלוסיות קטנות במיוחד של ננו-חלקיקים תואמים ביולוגית, כמו גם מספר שיטות מבחנה שבאמצעותן ניתן להעריך את האינטראקציות התאיות שלהם.

מוצקים שומנים חלקיקים (SLNs) אפליקציות לתאיות מיקוד

פיגום הנדסת רקמות בזריקות מורכב פולי (N-isopropylacrylamide) סולפט -graft-כונדרואיטין (PNIPAAm-ז-CS) microparticles אלגינט המכילים הוכן. כוחו הדבק, נפיחות נכסים ב biocompatibility במבחנה מנותח במחקר זה. טכניקות האפיון שפותחו כאן עשויות לחול על מערכות thermogelling אחרות.

סינתזה של Thermogelling midi (N-isopropylacrylamide) מרוכבים -graft-כונדרואיטין סולפט עם אלגינט microparticles עבור הנדסת רקמות

ננו-חלקיק גביש נוזלי (LCNP) nanocarrier מנוצלת ככלי עבור במסירה מבוקרת של מטען הידרופובי אל קרום הפלזמה של תאים חיים.

משלוח הממברנה ממוקד על Encapsulated מטענים הידרופובי בנושאת Nanoparticle קריסטל נוזלת

מאמר זה מתאר תהליך עבור כוונון הצפיפות crosslinking ובגודל של covalently תפור חלקיקים מן ליניארית אחרים-פולימרים וסופולימרים המכיל פונקציונליות תליון. על-ידי התאמת הפרמטרים סינתזה (משקל מולקולרי פולימר, תליון פונקציונליות התאגדות, ושווי crosslinker), צפיפות crosslinking ובגודל הרצויים ננו-חלקיק יכולה להיות מושגת ליישומים משלוח סמים.

Nanosponge Tunability ב גודל וצפיפות Crosslinking

נתאר מערכת אשר מנצל שלוש שיטות כדי להעריך את הבטיחות והיעילות של תרופות ממוקדות השליה: ויוו הדמיה כדי לפקח nanoparticle הצטברות, אולטרסאונד בתדירות גבוהה כדי לעקוב אחר ההתפתחות העוברית של היפרדות , ו- HPLC לכמת משלוח סמים לרקמות.

הערכה מקיפה של היעילות והבטיחות של משלוח סמים, ממוקדות השליה באמצעות שלוש שיטות משלימות

מאמר זה מתאר את ומגעים falcarindiol ב מצופים השומנים חלקיקים nm 74. ספיגת הסלולר של חלקיקים באמצעות תאי גזע אנושי לתוך טיפות השומנים מנוטרת על ידי הדמיה פלורסנט, קונפוקלי. חלקיקים מיוצרים בשיטת הזרקת מהירה של הממס הסטה, הגודל שלהם נמדד עם טכניקה פיזור אור דינאמי.

ספיגת של חלקיקים חדשים מצופים השומנים, המכיל Falcarindiol על ידי גזע אנושי Mesenchymal

פרוטוקול זה מתאר את הסינתזה והניסוח של ביו-חומרים הידרוג'ל הידרוג'ל להזרקה, סופראמולקולריים (PNP). יישומים של חומרים אלה לאספקת תרופות, ייצוב ביופארמה, אנקפסולציה של תאים ואספקה מודגמים.

הידרוג'ל פולימר-ננו-חלקיקי להזרקה עבור יישומי אספקת תאים ותרופות

למדו שיטה פשוטה ושחזורית לסינתזת ננו-חלקיקי פולימר-שומן מצופים בפפטיד plCSA-BP למשלוח ממוקד של תרופות לגידולים ולטרופובלסטים השליה.

סינתזה ואפיון של היפרדות כונדרויטין גופרתי (plCSA) - מיקוד השומנים - חלקיקי הפולימר

גלה סרטונים נוספים