Name: חיתוך ושיטת צף בשביל לרקמות פרפין-מוטבע על חלוקתה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-05T15:30:00.000+00:00
Duration: 5 min
Description: למד שיטת חיתוך וצף משופצת לרקמות פרפין-מוטבעות בעכברים ודגי זברה. הפרוטוקול משפר את שלמות החתכים ומקצר את זמן העבודה בהשוואה לשיטות קונבנציונליות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי נבחרת מדעי הטבע קרן של סין (מענק מס 31400936, 31460260), את מדעי הטבע קרן של ג'יאנגשי פרובינציה של סין (20171BAB215020). אנו מודים גם את תוכנית משותפת בין אוניברסיטת נאנצ'אנג המלכה מרי אוניברסיטת לונדון לתמיכה עבודה זו.

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה של אוניברסיטת נאנצ'אנג.
1. להרכיב את הציוד ולחבר את האזמל הקטן
<ol><li>עיצוב הפרמטר לפי הדרישות (Supplementary איור 1).</li>
	<li>להגיש את הפרמטר במפעל מקומי לייצור לוחות אקריליק.</li>
	<li>להרכיב את כל החלקים ברצף: שימוש בכלורופורם לשילוב 7 לוחות אקריליק מסחריים לתוך טנק עם סעיף ערוץ ומים אמבטיה (איור 1). התראה: כלורופורם מייצר חומרים רעילים כאשר היא עונה אור וחמצן. להרכיב את המנגנון בשכונה fume.</li>
	<li>התקנת הרכיב חשמליים דרך החור בלוח אקריליק #1 (איור 2 א, ראש חץ).</li>
	<li>כדי להתקין את בקר טמפרטורה, ליצור חור קטן על הלוח אקריליק #2 באמצעות מקדחה חשמלית, ולהתקין גלאי טמפרטורה (איור 2 א, חץ). להתקין תרמוסטט דיגיטלית על הטנק (איור 2 א). הערה: גלאי טמפרטורה צריך להיות בתוך 1 ס מ מתחת לפני המים.</li>
	<li>כדי לספק גישה כוח, להתאים את המתח מתחת 24 V לפני הפעלת הציוד.</li>
	<li>הסר את המגש פסולת סעיף האזמל הקטן.</li>
	<li>קישור התעלה מקטעים עם בעל להב מיקרוטום עם איטום סיליקון ניטראלי (איור 2B). הערה: לא ימרחו כלשהו איטום סיליקון ניטראלי מעל החלק העליון של הלהב כך הלהב הישן מוחלף בקלות.</li>
	<li>יבש לילה כדי לאפשר את הכלורופורם ואת הזמן איטום סיליקון ניטראלי לגבש.</li>
	<li>התקן את הלהב בעל להב. יוצקים מים לאמבט המים (איור 2C). פני המים צריך רק לגעת העליון של הלהב (ראש חץבאיור 2D, ).</li>
</ol>2. פרפין חלוקתה
הערה: פסולת לצבור לעיתים קרובות על הקצה העליון או התחתון של הרחוב שעווה, פני המים. יש לנקות את הלכלוך הזה באופן קבוע.
<ol><li>
לבצע הפרפין קונבנציונליים חלוקתה10.
	<ol>
<li>תהדק את הדגימה פרפין-מוטבע על מיקרוטום סיבוביים ולמקם את הלהב בעל להב.</li>
		<li>להפוך את handwheel, סעיף הדגימה.</li>
		<li>העברת הכלים פרפין למחלקה לאמבט מים חמים 38.5 מעלות צלזיוס.</li>
		<li>לאסוף שהסעיפים אל המיקרוסקופ שקופית של פני המים לאחר התגלגלות.</li>
		<li>יבש את השקופיות בתנור ב 42 מעלות צלזיוס למשך הלילה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
פרפין משופרת חלוקתה (איור 3)
	<ol>
<li>הפעל את הציוד.</li>
		<li>לפתוח את התנור עם מתג זיהוי טמפרטורה ולהגדיר את הטמפרטורה יישוב בין C º 38.0 40.0 מעלות לשעה מראש לחמם את המים.</li>
		<li>לשנות לבלוק פראפין שרכשה פרפין להטביע; אז במקום לבלוק פראפין על המלחציים קלטת של מיקרוטום ונעל אותה. הערה: גבולות לכוחו של הרחוב פרפין צריך להיות שונה בצורה אופקית כדי למנוע רצועת סעיף מ ויוצרים קשת ולהיות מסוגלים לזרום דרך ערוץ קטעים צרים.</li>
		<li>במהירות הגישה המדגם על ידי חיתוך להקשיה.</li>
		<li>התאם בעובי סעיף מתאים (10 מיקרומטר מוח העכבר למבוגרים, למבוגרים העכבר הכליות של העובר מוח העכבר, 4 מיקרומטר לעיניים דג זברה). להפוך את handwheel ואת הסעיפים יזין באופן אוטומטי את המקטעים ערוץ ואמבט.</li>
		<li>בסעיף הדגימה במשיחה חיתוך איטית ואחידה (איור 3 א). הערה: Thethickness של המקטע הראשון תשונה לאחר handwheel הופסק למשך מספר דקות. יש להחליף את הלהבים חד פעמי כאשר הסעיפים יש שריטות רצופים.</li>
		<li>מדריך הסעיפים לחדר אמבטיה לצוף בקו (איור 3B, ג 3). הערה: אם שבאזור head לאנאפוליס הקיר קאמרית, השתמש מדריך מברשת לשמור אותו צף.</li>
		<li>דבקים סעיפים על גבי שקופיות מיקרוסקופ. לאחר הסעיפים לחלוטין נפרשים באמבט מים, מספר מקטעים נפרדים עם פינצטה. אז להרים מהאמבטיה מים על גבי שקופיות מיקרוסקופ (דמות תלת-ממד). הערה: סעיפים יש לאסוף מן הצד האחורי של האמבט במים, כמו אלה בערוץ חלקים, החלק הפנימי. של האמבטיה מים לא עדיין יהיה מלא פרש.</li>
		<li>יבש את השקופיות על-ידי הצבתם בתנור 42 º C למשך הלילה. השקופיות ואז ניתן לאחסן בטמפרטורת החדר ללא הגבלת זמן.</li>
	</ol>
</li>
	<li>השתמש Hematoxylin-אאוזין (HE) צביעת לצורך הערכה של שיטה משופרת8.</li>
</ol>

<ol><li>Chung, K., Deisseroth, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23722210">CLARITY for mapping the nervous system.</a> Nature Methods. 10 (6), 508-513 (2013).</li>
<li>Fujita, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+neuron+differentiation+in+the+central+nervous+system+by+tritiated+thymidine+autoradiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">Analysis of neuron differentiation in the central nervous system by tritiated thymidine autoradiography.</a> Journal of Comparative Neurology. 122 (3), 311-327 (1964).</li>
<li>Mironov, V., Boland, T., Trusk, T., Forgacs, G., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ+printing%3A+Computer-aided+jet-based+3D+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Organ printing: Computer-aided jet-based 3D tissue engineering.</a> Trends in Biotechnology. 21 (4), 157-161 (2003).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryosectioning+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Cryosectioning tissues.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 3 (8), (2008).</li>
<li>Viebahn, C., Luttenberg, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+anti-roll+plate+as+a+remedy+for+the+ill-effects+of+electrical+charge+during+cryosectioning%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">A modified anti-roll plate as a remedy for the ill-effects of electrical charge during cryosectioning.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 37 (7), 1157-1160 (1989).</li>
<li>Onozato, M. L., Hammond, S., Merren, M., Yagi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+completely+automated+tissue-sectioning+machine+for+paraffin+blocks%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a completely automated tissue-sectioning machine for paraffin blocks.</a> Journal of Clinical Pathology. 66 (2), 151-154 (2013).</li>
<li>Sabaliauskas, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+zebrafish+histology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput zebrafish histology.</a> Methods. 39 (3), 246-254 (2006).</li>
<li>Chen, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hybrid-Cut%3A+An+Improved+Sectioning+Method+for+Recalcitrant+Plant+Tissue+Samples%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54754(2016).</li>
<li>Kucherenko, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paraffin-Embedded+and+Frozen+Sections+of+Drosophila+Adult+Muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Paraffin-Embedded and Frozen Sections of Drosophila Adult Muscles.</a> Journal of Visualized Experiments. (46), e2438(2010).</li>
<li>Cornell, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paraffin+Embedding+and+Thin+Sectioning+of+Microbial+Colony+Biofilms+for+Microscopic+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Paraffin Embedding and Thin Sectioning of Microbial Colony Biofilms for Microscopic Analysis.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), e57196(2018).</li>
<li>Whiteland, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+detection+of+T-cell+subsets+and+other+leukocytes+in+paraffin-embedded+rat+and+mouse+tissues+with+monoclonal+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical detection of T-cell subsets and other leukocytes in paraffin-embedded rat and mouse tissues with monoclonal antibodies.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (3), 313-320 (1995).</li>
<li>Tucker, D. K., Foley, J. F., Bouknight, S. A., Fenton, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sectioning+Mammary+Gland+Whole+Mounts+for+Lesion+Identification%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Sectioning Mammary Gland Whole Mounts for Lesion Identification.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), e55796(2017).</li>
<li>Venegas-Pino, D. E., Banko, N., Khan, M. I., Shi, Y., Werstuck, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Analysis+and+Characterization+of+Atherosclerotic+Lesions+in+the+Murine+Aortic+Sinus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus.</a> Journal of Visualized Experiments. (82), e50933(2013).</li>
<li>Lau, S. K., Chu, P. G., Weiss, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD163%3A+A+specific+marker+of+macrophages+in+paraffin-embedded+tissue+samples%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">CD163: A specific marker of macrophages in paraffin-embedded tissue samples.</a> American Journal of Clinical Pathology. 122 (5), 794-801 (2004).</li>
<li>Campbell-Thompson, M. L., Heiple, T., Montgomery, E., Zhang, L., Schneider, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staining+Protocols+for+Human+Pancreatic+Islets%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Staining Protocols for Human Pancreatic Islets.</a> Journal of Visualized Experiments. (63), e4068(2012).</li>
</ol>

המחברים יש פטנט על התקן זה והצהר אין אינטרסים מתחרים.

כדי לשפר מורפולוגיה סעיף פרפין לפתור את הבעיה של זמן מבוזבז במהלך הפרפין קונבנציונליים חלוקתה, יצרנו של פרפין משופרת חלוקתה שיטה המשלבת חיתוך התגלגלות. שיטה משופרת זו מסתמכת על ציוד פשוטה שכוללת ערוץ סעיף, אמבט מים, תנור עם מתג זיהוי טמפרטורה. הכלים סעיף נכנס לאמבט מים דרך ערוץ סעיף, מתגלה באופן אוטומטי בעת גזירה. לכן, בשיטה זו משפרת את הפרפין חלוקתה איכות ויעילות, אשר אומתה באמצעות פרפין חלוקתה של העכבר למבוגרים ההיפוקמפוס, העכבר למבוגרים כליות, מוח העכבר E15.5, והעיניים דג זברה למבוגרים.
כדי...

מחקר מורפולוגי חשוב במחקר הביולוגי. למרות הטכנולוגיה החדשה אפשרה לחוקרים לבחון את המטרות שלהם ישירות מן כל רקמות או אורגניזמים1,2,3, חיתוך הדגימה למקטעים דק, ואחריו מכתים, נשאר הראשית מורפולוגיה של רקמות היחיד של שיטה ולא לקחת כסף אבל גם חלבון מיקוד ישירות בתוך הרקמה. מיקרוסקופ אור עושה שימוש בשלושה סוגי המקטעים: פרפין, מוקפאים, ולא semithin. למרות cryosectioning נפוץ להגנה על רקמות antigenicity, הכנת הדגימה היא פשוטה, המורפולוגיה רקמות יתרת הוא עני, מצוייה דק אופטים4,5. פרפין חלוקתה היא השיטה השכיחה בתערוכה מורפולוגיה השתמרה היטב. דגימות הן מיובשת לגמרי, המוטבעות שעווה, ניתן לאחסן את אבני פרפין ללא הגבלת זמן. בנוסף, פרפין חלוקתה מייצרת חלקים דקים לשפר את הגישה בדיקה ביולוגית בניסויים נוספים ולהפחית תא כיסוי שכבת בכיוון Z.
עם זאת, חלוקתה הפרפין קונבנציונליים הוא מייגע, דורש מיומנות מפעיל. פרפין מקטעים לעבור קיבוע התייבשות, הטבעה, חותכים, צף. חשוב, העברת סרטים סעיף מהמחזיק סכין לאמבט מים הוא הכרחי, אבל קשה עבור מפעילי ג'וניור. בעיקר אוויר יבש, הסרטים סעיף חשל עקב חשמל סטטי ולכן קשה נפרשים על פני מים חמים. כדי לשפר את סעיף איכות, הרטבה השטח חשוף רקמות בין מיקרוטום להב מעברים, קירור הבלוקים השעווה הטבעית אותם במי קרח, או העלאת הלחות עם מכשיר לחות ליד האזמל הקטן מומלץ6,7 . שיטות חדשות לשיפור פרפין חלוקתה כוללים היברידית הטבעה פרפין, cryosectioning8ו מחלקה מסחרית העברת מערכת סיוע9. למרות השיטות לשפר באופן חלקי פרפין חלוקתה מהירות ואיכות, הם גורמים חלוקתה הרבה יותר מסורבלת, מערכות העברת מקטע מסחריים יקרים.
ב פרוטוקול זה, נדגים כיצד ליצור פשוט, זול וגמיש ציוד צעד אחר צעד, אשר ניתן לחבר בעל להב מיקרוטום רוטרי. ציוד זה כולל ערוץ סעיף באמבט מים, תנור עם מתג זיהוי טמפרטורה. לאחר חיתוך, עשרות סעיפים לזרום לתוך הערוץ מדור והזן את המים הרותחים ישירות, ובכך התגלגלות באופן אוטומטי. זה משפר את היעילות של פרפין חלוקתה, הופך את הטכנולוגיה הזו נוחה יותר. שימוש זו שיטה, הבוגרים יותר בעכבר מקטעים בהיפוקמפוס, העכבר למבוגרים כליות מקטעים, עובריים 15.5 מיושן (E15.5) העכבר המוח, ומקטעים עין דג זברה בוגרת מקטעים היו קוצרים בפחות זמן, נשארה יותר מורפולוגית. שיטה זו יכולה לשמש גם עבור דגימות רקמה אחרים הדורשים פרפין מואצת חלוקתה תוך הימנעות איבוד ההבחנה סעיף.

<table><tbody><tr><td>חממת</td><td>Boekel Scientific</td><td>133000-2</td><td></td></tr><tr><td>אתנול&nbsp;</td><td>סינופארם ריאגנט כימי ושות', מכסה</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>קסילן&nbsp;</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., מכסה</td><td>1330-20-7</td><td></td></tr><tr><td>Paraplast</td><td>Leica</td><td>39601006</td><td></td></tr><tr><td>מודול הטמעת פרפין מחומם</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>לוח</td><td></td><td></td><td></td>אקרילי מסחרי</tr><tr><td>Trichloromethane</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., מכסה</td><td>67-66-3</td><td></td></tr><tr><td>גוף חימום חשמלי צינורי (12 V 200 W)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>בקר טמפרטורה (12 וולט 120 וואט)</td><td>Mingsuo</td><td>XH-W3002</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוטום סיבובי&nbsp;</td>איטום סיליקון ניטרלי <td>של Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>קשר את תעלת המים עם מחזיק סכין המיקרוטום</td>שנאי מתח Dearll S-250-12 להב חד פעמי Accu-Edge 4689 Hematoxylin Baso Diagnostics Inc.<td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>BA-4025</td><td></td></tr><tr><td>אאוזין&nbsp;</td><td>בסו דיאגנוסטיקס בע"מ</td><td>BA-4025</td><td></td></tr><tr><td>Microslide</td><td>Sail Brand</td><td>7105</td><td></td></tr><tr><td>ניטרלי Balsam</td><td>Sinopharm Chemical Reagent Co., מכסה</td><td>10004160</td><td></td></tr><tr><td>Coverslip&nbsp;</td><td>Citoglas</td><td>10212424C</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חומצה הידרוכלורית</td><td>Xilong Chemical</td><td>7647-01-0</td><td></td></tr><tr><td>אמבט מים לקטעי פרפין</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HistoCore Arcadia C&nbsp;- תרסיס</td> דוחה פרפין <td>Leica</td><td></td><td></td>Plate</tr><tr><td>&nbsp;</td><td>תרמו סיינטיפיק</td><td>9990420</td><td></td></tr></tbody></table>

חיתוך ושיטת צף בשביל לרקמות פרפין-מוטבע על חלוקתה

The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning

חלוקתה של הרקמה פרפין-מוטבע הוא בשימוש נרחב כיום מגוון של פתולוגיה. עם זאת, מייגע. כדי לשפר את שיטה זו, מספר חברות מסחריות פיתחו מערכות העברת מקטע מורכבים באמצעות מים נוזלים. כדי לפשט את הטכנולוגיה הזאת, יצרנו שיטה פשוטה באמצעות ציוד ביתי המשלב הביתור ועל צף בתוך תא תרמוסטטי פשוטה; לכן, הסעיפים להזין באופן אוטומטי את המים הרותחים על פני המים. ההיפוקמפוס מוח העכבר למבוגרים, העכבר למבוגרים כליות, מוח העכבר מתחלקים, עיניים למבוגרים דג זברה נחתכו באמצעות חלוקתה הפרפין קונבנציונליים והן בשיטת הציג להשוואה. ניתוח סטטיסטי מראה שיפור השיטה שלנו הזמן שנחסך המיוצר חלקים באיכות גבוהה יותר. בנוסף, פרפין חלוקתה של הדגימה כל תוך זמן קצר קל עבור מפעילי ג'וניור.

השיטה משופרת גדל מספר קטעים שלמים פרפין. בדקנו שיטה חדשה על רקמות בהיפוקמפוס העכבר למבוגרים, העכבר למבוגרים כליות, מוח העכבר מתחלקים עיני דג זברה. מים נוסף למיכל, טמפרטורת המים נשמר בין 38.0 ° C עד 40.0 מעלות צלזיוס. לאחר באופן סדרתי הכנת את דגימות הרקמות, היו למחלקה, בהשוואה חלוקתה קונבנציונלי. השיטה החדשה נמנע מקטע הפסד והגדילה את הפרופורציה של מקטעים שלמים העכבר למבוגרים ההיפוקמפוס, העכבר למבוגרים כליות, מוח העכבר E15.5, ובעיניים דג זברה למבוגרים (איור 4A<...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לשפר את חלוקתה פרפין. שיטה זו משלבת חיתוך צף באמצעות תא תרמוסטטי פשוטות כדי למנוע את תהליך ההעברה הנדרש על-ידי השיטה המקובלת. כתוצאה מכך, את היעילות ואת מספר קטעים שלמים פרפין היו השתפרה מאוד.

Sectioning of the paraffin-embedded tissue is widely used in histology and pathology. However, it is tedious. To improve this method, several commercial ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום המורפולוגי, כגון חתך פרפין. היתרון העיקרי בטכניקה זו הוא שמגיע לשיאו בהליך החיתוך והקיפול ונמנע מתהליך העברה הנדרש בשיטה קונבנציונלית. כדי להתחיל, אסוף את כל החלקים המיוצרים מראש במכסה אדים.השתמש בכלורופורם כדי לשלב את שבעת הלוחות האקריליים, כפי שמוצג כאן. התוצר הסופי יהיה מיכל המצויד בתעלת חתך ואמבט מים. התקן את גוף החימום החשמלי הצינורי דרך החור בלוח אקרילי מספר שתיים.בעזרת מקדחה חשמלית, צרו חור קטן בלוח אקרילי מספר שבע, והתקינו תרמוסטט דיגיטלי על המיכל, וודאו שהוא נמצא לפחות סנטימטר אחד מתחת למפלס פני המים המיועד, המסומן על ידי הנקודה השחורה על המיכל. כוונן את המתח כך שיהיה מתחת ל -24 וולט לפני הפעלת הציוד. הסר את מגש הפסולת של החלק מהמיקרוטום.לאחר מכן, השתמש באיטום סיליקון ניטרלי כדי לקשר את תעלת החלקים למחזיק להב המיקרוטום, והקפד לא לקבל שום חומר איטום מעל החלק העליון של הלהב. הניחו להתקנה להתייבש למשך הלילה כדי לתת לכלורופורם ולאיטום הסיליקון הנייטרלי זמן להתמצק. למחרת, התקן את הלהב במחזיק הלהב.הוסף מים לאמבט המים, וודא שמשטח המים פשוט נוגע בחלק העליון של הלהב. לאחר ביצוע חיתוך פרפין קונבנציונאלי, הפעל את הציוד כדי להתחיל בחיתוך פרפין משופר. השתמש במתג זיהוי הטמפרטורה כדי לפתוח את התנור.הגדר את הטמפרטורה היעד בין 38 מעלות צלזיוס ל-40 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת כדי לחמם את המים. השתמש בסכין כדי לשנות את גוש הפרפין שנרכש על ידי הטמעת פרפין. לאחר מכן, הנח את הבלוק על מהדק הקסטה של המיקרוטום, ונעל אותו.חותכים את החלקים העבים יותר כדי להתקרב במהירות לדגימה. התאם לעובי חתך מתאים לדגימות. סיבוב גלגל היד יטען אוטומטית את החלקים למקטעים, תעלה ואמבטיה.לאחר מכן, חתכו את הדגימה במכת חיתוך איטית ואחידה. הנח את החלקים לתא האמבטיה כך שהם יצופו בשורה. אם חלק הראש נצמד לקיר החדר, השתמש במוביל מברשת כדי לשמור עליו צף.לאחר שהחלקים נפרשים במלואם באמבט המים, השתמש בפינצטה כדי להפריד כמה, ואז הרם אותם בשקופית מיקרוסקופ. מעבירים את השקופיות לתנור המכוון ל -42 מעלות לייבוש למשך הלילה. לאחר מכן ניתן לאחסן את השקופיות בטמפרטורת החדר ללא הגבלת זמן עד שהן מוכנות לניתוח.כאשר אתה מוכן לניתוח, השתמש בצביעת המטוקסילין-אאוזין כדי להעריך את החלקים בשיטה המשופרת. במחקר זה, נעשה שימוש בשיטה משופרת להכנת קטעי פרפין לרקמת היפוקמפוס של עכבר בוגר, כליות עכבר בוגרות, מוחות עכברים עובריים ועיני דג זברה. כפי שמוצג כאן, השיטה החדשה מונעת אובדן חתכים ומגדילה את שיעור החלקים השלמים בכל סוג של רקמה שנבדקה.בעת ביצוע חיתוך סדרה שלמה, נראה כי שיטה זו מאיצה את מהירות חיתוך הפרפין בכל הדגימות שנבדקו. במילים אחרות, שיטה זו מספקת חיתוך פרפין באיכות גבוהה יותר בפחות זמן מהשיטה הקונבנציונלית. לאחר מכן נצפים קטעי סדרה של הרשתית האופטית של דג הזברה על ידי צביעת המטוקסילין-אאוזין.הקטעים שנקטפו מהשיטה המשופרת נראים כבעלי שלמות טובה יותר מאלה שנקטפו בשיטת חיתוך הפרפין הקונבנציונלית. אמנם אין הבדלים משמעותיים באיכות של רוב החלקים שנקטפו כאשר משווים בין שתי השיטות הללו, אך חלק מהקטעים שנקטפו בשיטה הקונבנציונלית נראים באיכות נמוכה יחסית. אל תשכח שעבודה עם כלורופורם עלולה להיות מסוכנת ביותר, ותמיד יש לנקוט באמצעי זהירות כגון מכסה אדים בעת ביצוע הליך זה.בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור, להוסיף מים בזהירות ולהימנע ממילוי יתר.

the-cutting-floating-method-for-paraffin-embedded-tissue-for

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

הסרטון הבא מתאר כיצד לשמר מורפולוגיה של רקמה באמצעות קיבוע פורמלין והטבעה של פרפין.

שימור רקמות משובצות פרפין קבוע פורמלין (FFPE): שיטה לחקר מורפולוגיה של רקמות

בסרטון זה, אנו מדגימים את העיבוד של FFPE או חלקים משובצים פרפין קבוע פורמלין המתקבלים מרקמת הגידול במערכת העיכול. שלבי deparaffinization ו rehydration מאפשרים עיבוד של דגימת הרקמה עבור יישומים אנליטיים הבאים.

Deparaffinization ו rehydration של קטעי רקמות: הליך דו-שלבי להסרת שעוות פרפין משקופיות רקמת FFPE ואחריו התייבשות רקמות

אנו מתארים assay השתלת כרית תחביב השחלות מתאים מחקרים של אפיתלים נורמלי טרנספורמציה של מערכת הרבייה הנשית. כרית שומן העכבר מאפשרת השתלה של שברי רקמות גדולים, נגיש בקלות לניתוח והדמיה, ומספקת את הסביבה הטבעית הטובה ביותר עבור רקמות ממוצא Müllerian.

השתלת לתוך כרית עכבר השחלות שומן

פרוטוקול זה מתאר שיטת חיתוך רקמות פשוטה של חיתוך היברידי שימושית עבור רקמות צמחים סרבניות. קטעי רקמה באיכות טובה מאפשרים מחקרים אנטומיים ומחקרים ביולוגיים אחרים כולל הכלאה באתרה (ISH).

-Cut ההיברידי: שיטת חתך משופרת עבור דוגמאות רקמות צמח סרבן

פיתחנו שיטה כדי להסיר בהצלחה, לעבד, קטע, כתם, להערכה histopathological, רקמת החלב שנקבע במקור על שקופיות כמו mounts שלם. שיטה זו עשויה לקדם את איסוף והערכה של בלוטת החלב כולו mounts במחקרים הנחייה מבחן הרבייה.

חתך בלוטות החלב שלמות מלא עבור זיהוי הנגע

קרינה פלואורסצנטית מקומיים הכלאה (דגים) נדרש לעיתים קרובות בשילוב עם histopathology ואבחון מולקולרי לבחירה של טיפול ברפואה אישית. מקבע הרומן רקמת-קישור קרוס, ללא פורמלין המאפשר באיכות גבוהה מורפולוגיות, מולקולרית וניתוחים דגים מן הדגימה זהה על ידי תוספת של שלב קיבוע שאחרי לפני דגים מוצג.

פרוטוקול עבור HER2 דגים באמצעות מקבע-קישור קרוס, ללא פורמלין רקמות כדי לשלב את היתרונות של הקפאה-שימור קיבוע פורמלין

אנו מתארים קיבעון, פרפין הטבעה וטכניקות דק אופטים עבור biofilms מושבת חיידקים. בדגימות מוכן, דפוסי ביטוי בתיוג וכתבת biofilm ניתן לאבחן באמצעות מיקרוסקופ.

פרפין הטבעה ואת חלוקתה דק של מושבת חיידקים Biofilms לבדיקה מיקרוסקופית

אנו מספקים שיטה הדור, ניתוח שיטתי של פרוסות organotypic נגזר גידולים ריאות מאתר וטיפוח. אנו מתארים גם מיטוב עבור עובי הפרוסה, וכיצד לבחור ריכוזי התרופה לטיפול הגידול פרוסות.

הקמת וניתוח של הגידול פרוסה Explants כתנאי בדיקות אבחון

פרוטוקול זה מציג שיטה להגדלת תכולת הגידול באחוזים של דגימות רקמה משובצות פרפין קבועות פורמלין.

שיפור תכולת הגידול באמצעות מקרו-דיסקציה של הגידול

מאמר זה מתאר פרוטוקול מפורט לייצור רירית רחם דקה אמינה וניתנת לשחזור עם שיעור תמותה נמוך מאוד והידבקויות תוך רחמיות מינימליות על ידי הזרקת 95% אתנול לרחם העכבר תוך 1-3 דקות.

הקמת מודל עכבר של רירית רחם דקה

למד שיטת חיתוך וצף משופצת לרקמות פרפין-מוטבעות בעכברים ודגי זברה. הפרוטוקול משפר את שלמות החתכים ומקצר את זמן העבודה בהשוואה לשיטות קונבנציונליות.

חיתוך ושיטת צף בשביל לרקמות פרפין-מוטבע על חלוקתה

גלה סרטונים נוספים