5 בספטמבר 2018
כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לשפר את חלוקתה פרפין. שיטה זו משלבת חיתוך צף באמצעות תא תרמוסטטי פשוטות כדי למנוע את תהליך ההעברה הנדרש על-ידי השיטה המקובלת. כתוצאה מכך, את היעילות ואת מספר קטעים שלמים פרפין היו השתפרה מאוד.
שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום המורפולוגי, כגון חתך פרפין. היתרון העיקרי בטכניקה זו הוא שמגיע לשיאו בהליך החיתוך והקיפול ונמנע מתהליך העברה הנדרש בשיטה קונבנציונלית. כדי להתחיל, אסוף את כל החלקים המיוצרים מראש במכסה אדים.
השתמש בכלורופורם כדי לשלב את שבעת הלוחות האקריליים, כפי שמוצג כאן. התוצר הסופי יהיה מיכל המצויד בתעלת חתך ואמבט מים. התקן את גוף החימום החשמלי הצינורי דרך החור בלוח אקרילי מספר שתיים.
בעזרת מקדחה חשמלית, צרו חור קטן בלוח אקרילי מספר שבע, והתקינו תרמוסטט דיגיטלי על המיכל, וודאו שהוא נמצא לפחות סנטימטר אחד מתחת למפלס פני המים המיועד, המסומן על ידי הנקודה השחורה על המיכל. כוונן את המתח כך שיהיה מתחת ל -24 וולט לפני הפעלת הציוד. הסר את מגש הפסולת של החלק מהמיקרוטום.
לאחר מכן, השתמש באיטום סיליקון ניטרלי כדי לקשר את תעלת החלקים למחזיק להב המיקרוטום, והקפד לא לקבל שום חומר איטום מעל החלק העליון של הלהב. הניחו להתקנה להתייבש למשך הלילה כדי לתת לכלורופורם ולאיטום הסיליקון הנייטרלי זמן להתמצק. למחרת, התקן את הלהב במחזיק הלהב.
הוסף מים לאמבט המים, וודא שמשטח המים פשוט נוגע בחלק העליון של הלהב. לאחר ביצוע חיתוך פרפין קונבנציונאלי, הפעל את הציוד כדי להתחיל בחיתוך פרפין משופר. השתמש במתג זיהוי הטמפרטורה כדי לפתוח את התנור.
הגדר את הטמפרטורה היעד בין 38 מעלות צלזיוס ל-40 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת כדי לחמם את המים. השתמש בסכין כדי לשנות את גוש הפרפין שנרכש על ידי הטמעת פרפין. לאחר מכן, הנח את הבלוק על מהדק הקסטה של המיקרוטום, ונעל אותו.
חותכים את החלקים העבים יותר כדי להתקרב במהירות לדגימה. התאם לעובי חתך מתאים לדגימות. סיבוב גלגל היד יטען אוטומטית את החלקים למקטעים, תעלה ואמבטיה.
לאחר מכן, חתכו את הדגימה במכת חיתוך איטית ואחידה. הנח את החלקים לתא האמבטיה כך שהם יצופו בשורה. אם חלק הראש נצמד לקיר החדר, השתמש במוביל מברשת כדי לשמור עליו צף.
לאחר שהחלקים נפרשים במלואם באמבט המים, השתמש בפינצטה כדי להפריד כמה, ואז הרם אותם בשקופית מיקרוסקופ. מעבירים את השקופיות לתנור המכוון ל -42 מעלות לייבוש למשך הלילה. לאחר מכן ניתן לאחסן את השקופיות בטמפרטורת החדר ללא הגבלת זמן עד שהן מוכנות לניתוח.
כאשר אתה מוכן לניתוח, השתמש בצביעת המטוקסילין-אאוזין כדי להעריך את החלקים בשיטה המשופרת. במחקר זה, נעשה שימוש בשיטה משופרת להכנת קטעי פרפין לרקמת היפוקמפוס של עכבר בוגר, כליות עכבר בוגרות, מוחות עכברים עובריים ועיני דג זברה. כפי שמוצג כאן, השיטה החדשה מונעת אובדן חתכים ומגדילה את שיעור החלקים השלמים בכל סוג של רקמה שנבדקה.
בעת ביצוע חיתוך סדרה שלמה, נראה כי שיטה זו מאיצה את מהירות חיתוך הפרפין בכל הדגימות שנבדקו. במילים אחרות, שיטה זו מספקת חיתוך פרפין באיכות גבוהה יותר בפחות זמן מהשיטה הקונבנציונלית. לאחר מכן נצפים קטעי סדרה של הרשתית האופטית של דג הזברה על ידי צביעת המטוקסילין-אאוזין.
הקטעים שנקטפו מהשיטה המשופרת נראים כבעלי שלמות טובה יותר מאלה שנקטפו בשיטת חיתוך הפרפין הקונבנציונלית. אמנם אין הבדלים משמעותיים באיכות של רוב החלקים שנקטפו כאשר משווים בין שתי השיטות הללו, אך חלק מהקטעים שנקטפו בשיטה הקונבנציונלית נראים באיכות נמוכה יחסית. אל תשכח שעבודה עם כלורופורם עלולה להיות מסוכנת ביותר, ותמיד יש לנקוט באמצעי זהירות כגון מכסה אדים בעת ביצוע הליך זה.
בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור, להוסיף מים בזהירות ולהימנע ממילוי יתר.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים
מאמר זה מציג פרוטוקול שנועד לשפר את חיתוך הפרפין על ידי שילוב חיתוך וציפה בתוך תא תרמוסטטי, ובכך לבטל את הצורך בתהליך ההעברה המסורתי. שינוי זה משפר משמעותית הן את היעילות והן את שלמות מדורות הפרפין.
Paraffin sectioning remains a bottleneck in histology workflows, particularly for high-throughput target validation and phenotypic screening in discovery biology. This method improves section integrity and throughput, reducing technical variability that can confound downstream assay readouts and mechanistic de-risking efforts. By enabling reliable, reproducible tissue preparation, it supports predictive confidence in target engagement studies across neuroscience and oncology models.
The method fits within the discovery continuum from early target validation to lead optimization, where reliable histology informs go/no-go decisions.