Name: מכשירי קצירת רקמות Microcolumns (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-25T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: למד שיטה לקצירת עור מלא בעוביו באמצעות מחטים מיוחדות הממזערות צלקות באתר התורם. טכניקה זו מאפשרת איסוף נפח גבוה של רקמות תוך שמירה על שלמות העור לצורך מחקר ביולוגי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת באופן חלקי על ידי הצבא, חיל הים, NIH, חיל האוויר, VA לענייני בריאות כדי לתמוך את המאמץ AFIRM II, תחת מס פרס W81XWH-13-2-0054. U.S. צבא מחקר רכישת הפעילות הרפואית, 820 צ'נדלר Street, פורט דטריק, MD 21702-5014 הוא המשרד רכישת הענקת הפרסים, ניהול. דעות, פרשנויות, מסקנות והמלצות אלה של המחבר, בהכרח לא אושרה על ידי משרד ההגנה.

כל לעבוד עם בעלי חיים, דגימות רקמה חיה אושרו על ידי מסצ'וסטס כללי החולים מוסדיים חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה (IACUC).
1. ייצור של קציר מחטים
<ol><li>כיוונון של ההפקה<ol>
<li>לאבטח מחבר נעל זכוכית הנשי אל פוסט, והר ה-post על שלב הסיבוב כך המנעול סכינים סטריליים במרכז הבמה (איור 1א').</li>
		<li>הצב בשלב ראשון זה סיבוב אנכי ולאחר הר זה בניצב אל שלב הסיבוב השני, אופקי (איור 1B).</li>
		<li>הר השלב סיבוב אופקי אל שלב שני-ציר תרגום (איור 1B).</li>
		<li>הדקו את השילוב על משטח יציב, כגון בממרח אופטי.</li>
		<li>בנפרד לטעון כלי רוטרי אל בממרח אותו, בעזרת הכלי מוצבים במקביל עם בממרח, בערך באותו גובה כמו המחבר נעל זכוכית על הבמה שילוב רוטציה/תרגום (איור 1C).</li>
		<li>התקנת שני גלגלים ניתוק גלילים בציר מעגלי אל הכלי סיבוביים (חצץ קטן, נמוך יהלום ניתוק גלגל מעל גלגל ניתוק אבן חצץ גדול יותר, גבוה יותר) (איור 1D). הערה: על 9 מ מ בין הקוטר של שני הגלגלים מספיקה בדרך כלל.</li>
		<li>תנוחה מוגבהת אור מקור עם זרוע מתכווננת מעל הכלי סיבוביים, עם האור מכוון הגלגלים חיתוך.</li>
		<li>כדי לשפר את ההדמיה, מקם מיקרוסקופ ויבתר מעל הגדרת הייצור כך העיינית של המצלמה מתמקדת על דיסקי חיתוך (איור 1C). הערה: לחלופין, משתמשים יכולים ללבוש eyewear מגדלת.</li>
	</ol>
</li>
	<li>עיצוב מחדש של קצה המחט<ol>
<li>ללבוש eyewear הגנה, מסכה כירורגית כדי למנוע חדירה העיניים או איירווייז חלקיקים מתכת.</li>
		<li>לבחור מחטים תת-עוריים של המתאים להעריך את גודל, בהתבסס על הדרישות ניסיוני.</li>
		<li>סמן את אורך המיועד על כל המחט האיסוף. הערה: עבור לקצור מן העור החזירים, 8 מ"מ מחטים מספיקים בדרך כלל; למרות האורך עשויים להשתנות בהתאם לצרכי ניסיוני (למשל., עובי רקמת העור המטרה, גודל מד מחט). באופן כללי, מחט 19-מד עובד טוב לעור החזירים.</li>
		<li>נמוך המחט בניצב לכלי סיבוביים עם הכוח, משתמש הקצה של הדיסק החיצוני חיתוך לחתוך את אורך המחט, עודף בנקודת סימנה בשלב 1.2.3.</li>
		<li>להתחבר המחט מקוצר, בוטה המחבר נעל זכוכית הנשי על הבמה הייצור.</li>
		<li>להתאים את הבמה סיבוב אופקי כך המחט בזווית של 12° במקביל דיסקי חיתוך על הכלי סיבוביים (שינוי הזווית תשפיע על הכוח הנדרשים על מחט ההכנסה).</li>
		<li>להפעיל את התקורה אור ולהתאים את מעמדה תוך התבוננות על המחט תחת הגדלה, עד האור משתקף את האמצע (מקצה לקצה) של המחט.</li>
		<li>הפעל כלי רוטרי ולאחר מכן השתמש השלב תרגום כדי לקדם את המחט לכיוון הפנימי (יהלום) חיתוך הדיסק (איור 2א).</li>
		<li>לשמור על קידום המחט לאט נגד דיסק חיתוך עד דיסק חיתוך מגיע כ האמצע של המחט (כמו מטמיעים על ידי ההשתקפות של במנורת לאורך הקו האמצעי).</li>
		<li>לאט הניעו את השטח המחט גזור מן הגלגל הפנימי יהלום על גבי ההגה אבן החיצוני כדי לסיים את פני השטח המחט לחתוך עם פולני פיינר (איור 2B).</li>
		<li>. משכי את המחט מן התקליטור חיתוך.</li>
		<li>באמצעות השלב סיבוב אנכי, לסובב את המחט 180°.</li>
		<li>חזור על צעדים 1.2.9-1.2.10 לעצב בצד השני של המחט. הערה: המחט עכשיו צריך את שתי עצות לחסכון באורך שווה בקירוב (איור 2C ו- 2D).</li>
		<li>הסר את המחט של ההפקה.</li>
		<li>נקי מבפנים נשא עם חוט מתכת זה מעט קטנה יותר הקוטר הפנימי של המחט.</li>
		<li>באמצעות מקל עץ חד (למשל., על ידי הצמדת מסוף מקל עץ קטן על המוליך עצה כותנה), להסיר כל הזיזים עשויים עדיין לצרף את הקצוות של המחט החדשה. הערה: קציר מחטים יכול להיות אלקטרופוליש, מחוטא ע י אוטוקלב במידת הצורך.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. קצירת רקמות העור
<ol><li>להשתמש את המחטים האיסוף כדי לאסוף את העור microcolumns ex-vivo רקמות או בעלי חיים.</li>
	<li>Ex-vivo לעור רקמות דק (במיוחד מדגימות בו השומן התת עורית חסרה או תוקן-משם), להחזיק את רקמת המטרה על הפתיחה של שפופרת צנטרפוגה 50 מ ל, או מחסנית שתי חתיכות רקמה על גבי אחד את השני, כדי למנוע נזק של n טיפים eedle על ידי להכות אותם נגד משטחים קשים. הערה: לקבלת ויוו לקצור מבעלי חיים, מומלץ לידוקאין מקומיים, אפינפרין ינוהלו על ידי הזרקת intradermal שיכוך כאבים וכדי להפחית את הדימום.</li>
	<li>להרכיב את המנגנון האיסוף לפי כמות microcolumns הצורך, כפי שמתואר להלן.</li>
	<li>אפשרות אחסון נמוך-בינוני:<ol>
<li>הקציר קטן בינוני כמויות של microcolumns, פשוט ממלאים מזרק רגיל (10-20 מ"ל מזרקים בדרך כלל עובדים טוב) עם תמיסת וחבר אותו מחט האיסוף.</li>
		<li>לחלוטין את המחט האיסוף אל תוך העור התורם ולאחר מכן לפרסם תיקון.</li>
		<li>ללחוץ על הבוכנה של המזרק לניקוי ועצירה תמיסת מלח דרך המחט האיסוף של לגרש את microcolumn שתקוע בבטן נשא מחט.</li>
		<li>כדי להאיץ את תהליך האיסוף, חזור על שלב 2.4.2 3 עד 5 פעמים לפני לגרש את microcolumns בשלב 2.4.3. הערה: זה בדרך כלל נוח לגרש את microcolumns לתוך מסננת תא סטנדרטי כדי להקל על האוסף עוקבות של microcolumns.</li>
		<li>אם מחטים סתומים, להגדיל את הלחץ על הבוכנה כדי לגרש רקמות תקוע ולהסיר את להדביק. אם פשוט הגדלת הלחץ אינה מספיקה, הוספה חוט מתכת דרך הפתח קצה המחט לנקות את להדביק במחט נשא.</li>
		<li>לשמור את microcolumns שקוע בתוך saline או בינוני עד השימוש כדי למנוע לייבוש. הערה: עם אופרטור מנוסים, השיטה המתוארת לעיל ניתן למסוק microcolumns בשיעור של 1 microcolumn לשניה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>אפשרות נפח גבוה:<ol>
<li>ליצור התקן בסיוע שאיבה פשוטה ניתן לבנות כדי להקל על אוסף של כמויות גדולות של microcolumns. הערה: המכשיר מורכב מחט האיסוף, 20 מ"ל מזרק עם סכינים סטריליים נעל הנחיר, מתאם היניקה משמש בדרך כלל עבור שאיבת שומן (איור 3א), מיכל שאיבה סטרילי.</li>
		<li>הסר את הבוכנה של המזרק 20 מ.</li>
		<li>לצרף את המזרק מתאם היניקה.</li>
		<li>להשלמת ההרכבה על ידי הצמדת מחט האיסוף המזרק (איור 3ב).</li>
		<li>השתמש חתיכה של צינורות היניקה סטרילי כדי להתחבר למתאם יניקה מיכל שאיבה סטרילי. ודא שהמנגנון האיסוף מחובר קלט מיכל זה מאפשר לנוזלים לזרום לתוך המיכל אינו מופרע (אשר עשויים לדרוש חיבור ליציאה מיכל מסומן עבור יצוא במקום תזרים).</li>
		<li>לחבר את המנגנון למקור לחץ שלילי. הערה: הלחץ הנדרש תלוי המחט קוטר אורך, כפי שתואר לעיל8. עבור המנגנון המתואר בכתב היד, מערכת שאיבה נמצאו חדרי הניתוח טיפוסי מספיקה בדרך כלל.</li>
		<li>להתחבר מחט האיסוף המזרק.</li>
		<li>לקצור את microcolumns על ידי החדרת המחט האיסוף לתוך העור. הערה: microcolumns להיות נמשך לתוך המזרק ביניקה, ולאחר מכן לרוקן לתוך המיכל היניקה.</li>
		<li>לסירוגין לטבול את המחט האיסוף לתוך מכולה של מלח סטרילית במהלך ההליך האיסוף לרוקן את המערכת. הערה: סומק מלוחים זו מקלה על התעבורה של microcolumn ומבטיחה שהם הצמאון. לחלופין, ניתן לחבר מתאם סכינים סטריליים מזין רב-תכליתי המנעול סכינים סטריליים של המזרק, ועל דרך של צינורות חיבור, גם כדי שקית עירוי לתלייה.</li>
		<li>לשמור על ידו חוט מתכת, או קטן יותר להעריך את המחט, זה מעט קטנה יותר הקוטר הפנימי של המחט האיסוף. אם המחט הופך סתומות, ניתן לפנות אותו על-ידי הוספת את החוט מתכת נשא מחט.</li>
		<li>כאשר הסכום הרצוי של microcolumns צברו את המכל, לנתק את המכשיר יניקה, לאחר מכן שופכים את תכולת המיכל שאיבה החוצה דרך מסנן כדי לאסוף את microcolumns.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאחר הקטיף, להחיל אנטיביוטית אקטואלי על האתרים התורם. הערה: רטבים נוספים נדרשים בדרך כלל לא לאתרים התורם.</li>
</ol>

<ol><li>Sun, B. K., Siprashvili, Z., Khavari, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+skin+grafting+and+treatment+of+cutaneous+wounds%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Advances in skin grafting and treatment of cutaneous wounds.</a> Science. 346 (6212), 941-945 (2014).</li>
<li>Singh, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenging+the+Conventional+Therapy%3A+Emerging+Skin+Graft+Techniques+for+Wound+Healing%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Challenging the Conventional Therapy: Emerging Skin Graft Techniques for Wound Healing.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 136 (4), 524-530 (2015).</li>
<li>Tam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fractional+Skin+Harvesting%3A+Autologous+Skin+Grafting+without+Donor-site+Morbidity%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery.+Global+Open%22%5BJournal%5D)">Fractional Skin Harvesting: Autologous Skin Grafting without Donor-site Morbidity.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. Global Open. 1 (6), 47(2013).</li>
<li>Tam, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+full-thickness+skin+by+microcolumn+grafting%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Tissue+Engineering+and+Regenerative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of full-thickness skin by microcolumn grafting.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 11 (10), 2796-2805 (2017).</li>
<li>Huang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+hair+and+other+skin+appendages%3A+A+microenvironment-centric+view%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Regeneration of hair and other skin appendages: A microenvironment-centric view.</a> Wound Repair and Regeneration. 24 (5), 759-766 (2016).</li>
<li>Fernandes, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micro-mechanical+fractional+skin+rejuvenation%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Micro-mechanical fractional skin rejuvenation.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 131 (2), 216-223 (2013).</li>
<li>Rettinger, C. L., Fletcher, J. L., Carlsson, A. H., Chan, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+epithelialization+and+improved+wound+healing+metrics+in+porcine+full-thickness+wounds+transplanted+with+full-thickness+skin+micrografts%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair+and+Regeneration%22%5BJournal%5D)">Accelerated epithelialization and improved wound healing metrics in porcine full-thickness wounds transplanted with full-thickness skin micrografts.</a> Wound Repair and Regeneration. 25 (5), 816-827 (2017).</li>
<li>Franco, W., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/270571598_Fractional_Skin_Harvesting_Device_Operational_Principles_and_Deployment_Evaluation">Fractional skin harvesting: device operational principles and deployment evaluation.</a> Journal of Medical Devices. 8 (4), 041005(2014).</li>
<li>Rasmussen, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+autologous%2Fallogeneic+constructs+for+skin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Military+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chimeric autologous/allogeneic constructs for skin regeneration.</a> Military Medicine. 179, 8 Suppl 71-78 (2014).</li>
<li>Ter Horst, B., Chouhan, G., Moiemen, N. S., Grover, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+keratinocyte+delivery+in+burn+wound+care%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Advances in keratinocyte delivery in burn wound care.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 123, 18-32 (2018).</li>
<li>Wong, V. W., Levi, B., Rajadas, J., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cell+niches+for+skin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Stem cell niches for skin regeneration.</a> International Journal of Biomaterials. 2012, 926059(2012).</li>
<li>Manstein, D., Herron, G. S., Sink, R. K., Tanner, H., Anderson, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fractional+photothermolysis%3A+a+new+concept+for+cutaneous+remodeling+using+microscopic+patterns+of+thermal+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Lasers+in+Surgery+and+Medicine%22%5BJournal%5D)">Fractional photothermolysis: a new concept for cutaneous remodeling using microscopic patterns of thermal injury.</a> Lasers in Surgery and Medicine. 34 (5), 426-438 (2004).</li>
<li>Iriarte, C., Awosika, O., Rengifo-Pardo, M., Ehrlich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+applications+of+microneedling+in+dermatology%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical%2C+Cosmetic+and+Investigational+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Review of applications of microneedling in dermatology.</a> Clinical, Cosmetic and Investigational Dermatology. 10, 289-298 (2017).</li>
<li>Anderson, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+treatment+of+traumatic+scars+with+an+emphasis+on+ablative+fractional+laser+resurfacing%3A+consensus+report%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Medical+Association+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Laser treatment of traumatic scars with an emphasis on ablative fractional laser resurfacing: consensus report.</a> Journal of the American Medical Association Dermatology. 150 (2), 187-193 (2014).</li>
<li>Hogan, S., Velez, M. W., Ibrahim, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microneedling%3A+a+new+approach+for+treating+textural+abnormalities+and+scars%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Cutaneous+Medicine+and+Surgery%22%5BJournal%5D)">Microneedling: a new approach for treating textural abnormalities and scars.</a> Seminars in Cutaneous Medicine and Surgery. 36 (4), 155-163 (2017).</li>
<li>Manuskiatti, W., Fitzpatrick, R. E., Goldman, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+effectiveness+and+side+effects+of+carbon+dioxide+laser+resurfacing+for+photoaged+facial+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Long-term effectiveness and side effects of carbon dioxide laser resurfacing for photoaged facial skin.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 40 (3), 401-411 (1999).</li>
</ol>

המחברים הם ממציאים על הפטנטים הנוגעים שהטכנולוגיה המתוארת בעלון זה המאמר, שממנו הם קיבלו רישוי וההכנסות תמלוגים באמצעות מוסד שלהם, בית החולים הכללי במסצ'וסטס. טאם ג' מייעץ גם עבור Medline תעשיות בע מ, המחזיקה את הרשיון המסחרי של טכנולוגיה זו.

השיטות המתוארות כאן נועדו לאפשר את האוסף של רקמת microcolumns בכמויות מספיקות ללימודים ויוו גדולים בעלי חיים, באמצעות כלי עשוי ציוד מעבדה זמינים מסחרית. המנגנון הזה שימש בעבר של קצירת רקמות העור האנושי נכרת4,9 , כמו גם עור חזיר בשידור חי3. שאר הפרמטרים ספציפיים המתוארים הם אלה נמצאו מתאימה ביותר לשימוש אצל חזיר. הוא צפוי כי המנגנון באותה אפשרות לשנותם ולאחר הותאם עבור איסוף רקמת מכרסמים ובעלי חיים קטנים אחרים, אבל זה לא נבדק במעבד...

עצמיים השתלת עור הוא עמוד התווך של הפצע. לתקן, אבל זה מוגבל על ידי מחסור האתר התורם ותחלואה, שמוביל שבמאמץ מרוכז בעשורים האחרונים לפתח אפשרויות טיפוליות חדשות כדי להחליף את השתלת עור רגיל1,2 . לאחרונה פיתחנו שיטה חלופית קציר העור כדי לרתום את היתרונות של השתלת עור בעובי מלא תוך צמצום תחלואה האתר התורם. על ידי איסוף מלא-עובי העור בצורה של קטן (~0.5 מ"מ קוטר)"microcolumns", תורם אתרי מסוגלים לרפא במהירות, ללא צלקות בנסיבות רגילות (עבור חריגות אפשריות, עיין בסעיף הדיון להלן)3. Microcolumns יכול להיות מיושם ישירות לתוך הפצע מיטות כדי להאיץ סגירת הפצע, להקטין התכווצות3ולשחזר את מגוון רחב של סוגי תאים באפידרמיס, עורי ו מבנים adnexal תפקודית4, שרבים מהם חסרים השתלת עור מפוצל-עובי קונבנציונאלי או הנוכחי הנדסה ביולוגית העור תחליפים5. היכולת של microcolumns להגדיל ריפוי, האתרים שלהם תורם כדי לרפא ללא הצטלקות יש שניהם באופן עצמאי מאומתים על-ידי אחרים6,קבוצות מחקר7.
קודם לכן פיתחנו מערכת האיסוף מעבדה כדי לאפשר את האוסף של microcolumns-מידה8; עם זאת, מערכת זו מורכבת של רכיבים מותאמים אישית רבים שאינם זמינים באופן נרחב. כאן, נתאר בפירוט את התהליך עבור הפקת קציר מחטים, כמו גם מערכות איסוף פשוט, עשוי בעיקר מדף רכיבים, יכול לשמש כדי להשיג בנפח גבוה קציר. המנגנון המתואר בכתב יד זה מתאים עבור במבחנה ועבודה בבעלי חיים, אך לא לשימוש בבני אדם. מכשיר קליני בעל אישור ה-FDA להחלת טכניקה זו בבני אדם זמין מסחרית אך לא תידון בהרחבה כאן.

<table><tbody><tr><td>גלגל יהלום</td><td>Dremel</td><td>545</td><td></td></tr><tr><td>מחט היפודרמית (19G)</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-840-98</td><td>ניתן להשתמש בגדלי מחט אחרים, בהתאם לצרכי הניסוי</td></tr><tr><td>גלגל אבן</td><td>Dremel</td><td>540</td><td></td></tr><tr><td>מזרק (20 מ"ל עם מנעול לואר)</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-124-967</td><td></td></tr><tr><td>מתאם יניקה</td><td>Tulip Medical</td><td>PA20BD</td><td>אופציונלי, לקטיף בנפח גבוה</td></tr><tr><td>מיכל יניקה</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-898-212</td><td>אופציונלי, לקטיף בנפח גבוה. יש לעקר לפני השימוש.</td></tr><tr><td>צינורות יניקה</td><td>Medline</td><td>DYND50216H</td><td>אופציונלי, לקטיף בנפח גבוה</td></tr></tbody></table>

מכשירי קצירת רקמות microcolumns

Apparatus for Harvesting Tissue Microcolumns

כתב יד זה מתאר את תהליך ייצור עבור מנגנון מעבדה, זני רכיבי מדף, יכול לשמש כדי לאסוף את microcolumns של רקמת עור בעובי מלא. גודל קטן של microcolumns מאפשר התורם אתרי להחלים במהירות מבלי לגרום התורם הצטלקות, בעת שעבדה מלא-עובי רקמת מאפשר שילוב של כל הרכיבים הסלולר, חוץ-תאי של רקמות העור, כולל אלה הקשורים עם אזורים עורי עמוק יותר, המבנים adnexal העור, אשר טרם ניתן לשכפל בהצלחה באמצעות רקמות קונבנציונאלי הנדסה טכניקות. ניתן להחיל את microcolumns ישירות לתוך העור פצעים להגדיל ריפוי, או הם יכולים לשמש כמקור תאים עצמיים/רקמה עבור גישות אחרות הנדסת רקמות. המחטים האיסוף נעשים על-ידי שינוי מזרקים רגילים, ולא ניתן משמש לבד קציר כמויות קטנות של רקמות או בשילוב עם מערכת איסוף מבוסס-שאיבה פשוטה (גם זני ציוד מעבדה זמין נפוץ) עבור בנפח גבוה קציר כדי להקל על מחקרים בבעלי חיים גדולים.

. המחטים האיסוף צריך להיות מסוגל לאסוף microcolumns של רקמת עור בעובי מלא עם שיעור הצלחה 80-90%, כל microcolumn צריך להכיל האפידרמיס הדרמיס, קצת שומן תת עורית (איור 4). אז אם שיעור ההצלחה של קציר נמוכה, או אם הוא הופך להיות קשה להוסיף מחט לתוך רקמות, ככל הנראה צורך מחט חדשה. אם שיעור ההצלחה של קציר נמוך באופן עקבי, אפילו עם מחטים חדש, ואז המחטים הם כנראה קצר מדי.
אם נעשה שימוש vivo, התורם א...

כאן נתאר פרוטוקול להפקת קציר מחטים יכול לשמש כדי לאסוף רקמת עור בעובי מלא מבלי שהדבר תורם באתר הצטלקות. המחטים יכול להיות משולב עם מערכת איסוף פשוט להשיג בנפח גבוה קציר.

מכשירי קצירת רקמות Microcolumns

This manuscript describes the production process for a laboratory apparatus, made from off-the-shelf components, that can be used to collect microcolumns ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות חיוניות בתחום התחדשות רקמת העור אשר כיצד להחליף את סוגי התאים המגוונים ומבנים הכלולים בעור טבעי. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי עור אוטולוגי בעובי מלא ניתן לאסוף עם תחלואה באתר תורם מינימלי. הדגמת ההליך תהיה ביל פארינלי, שהוא עמית מחקר במעבדה שלנו.התחל הליך זה עם כיוונון שלב הייצור כמתואר בפרוטוקול הטקסט. התקן שני גלגלי ניתוק קונצנטריים על הכלי הסיבובי. השתמש בגלגל ניתוק יהלום רשת תחתון קטן יותר מעל גלגל ניתוק אבן רשת גבוה יותר.מקם מקור אור תקורה עם זרוע מתכווננת מעל הכלי הסיבובי כשהאור מכוון לגלגלי החיתוך. כדי לשפר את ההדמיה, מקם מיקרוסקופ ניתוח מעל הגדרת הייצור כך שהעין מתמקדת בדיסקי החיתוך. בעת לעצב מחדש את קצה המחט, ללבוש משקפי מגן מסכה כירורגית כדי למנוע חלקיקי מתכת עדינים מלהיכנס לעיניים או דרכי הנשימה.בחר מחטים hypodermic של גודל המד המתאים בהתבסס על דרישות ניסיוניות. סמן את האורך המיועד על כל מחט קציר. מנמיכים את המחט בניצב לכלי הסיבובי עם הכוח להשתמש בקצה דיסק החיתוך החיצוני כדי לחתוך את האורך העודף של המחט בנקודה המסומנת.חבר את המחט הקהה המקוצרת למחבר מנעול הלור הנשי בשלב הייצור. כוונן את שלב הסיבוב האופקי כך המחט היא בזווית של 12 מעלות במקביל דיסקי חיתוך על הכלי הסיבובי. הפעל את האור העליון ולהתאים את מיקומו תוך התבוננות המחט תחת הגדלה עד האור משתקף את קו האמצע של המחט.כוח על הכלי הסיבובי. לאחר מכן השתמש בשלב התרגום כדי לקדם את המחט לכיוון דיסק החיתוך הפנימי. שמור על קידום המחט לאט נגד דיסק החיתוך עד דיסק החיתוך מגיע בערך קו האמצע של המחט.הזז באיטיות את משטח המחט החתוכה מגלגל היהלום הפנימי אל גלגל האבן החיצוני כדי לסיים את משטח המחט החתוכה עם לק עדין יותר. חזור בך מהמחט מדיסק החיתוך. באמצעות שלב הסיבוב האנכי, לסובב את המחט 180 מעלות.חזור על שלבים אלה כדי לעצב מחדש את הצד השני של המחט. עכשיו להסיר את המחט מהשלב הייצור. נקה את החלק הפנימי עם חוט מתכת קטן במקצת מהקוטר הפנימי של המחט.באמצעות מקל עץ חד, להסיר את כל burrs כי עדיין עשוי להיות מחובר לקצוות של המחט שזה עתה נוצר. כאשר יש צורך בנפח גבוה של מיקרו-קולומים, הסר את הבוכנה ממזרק של 20 מיליליטר. לאחר מכן חבר את המזרק למתאם יניקה.להשלים את ההרכבה על ידי חיבור מחט קציר למזרק. השתמש בפיסת צינורות יניקה סטריליים כדי לחבר את מתאם היניקה למיכל יניקה סטרילי. ודא שמנה הקציר מחובר לקלט מיכל המאפשר לנוזל לזרום לתוך המיכל ללא הפרעה.עכשיו לחבר את המנגנון למקור לחץ שלילי. לקצור את microcolumns על ידי החדרת מחט הקציר לתוך העור. לסירוגין לטבול את מחט הקציר לתוך מיכל של מלוחים סטריליים במהלך הליך הקציר כדי לשטוף את המערכת.יש לשמור על חוט מתכת או מחט קטנים במקצת מהקוטר הפנימי של מחט הקציר. אם המחט הופכת סתומים, זה יכול להיות פינה על ידי החדרת חוט המתכת לתוך המחט נשא. כאשר הכמות הרצויה של מיקרו-קולומים הצטברה במיכל, נתק את ההתקן מיניקה.ואז לשפוך את התוכן של מיכל היניקה החוצה דרך מסנן כדי לאסוף את microcolumns. המוצג כאן הוא מחט קציר סיים נצפה מהחזית ומהצוד. שימו לב לשתי נקודות החיתוך בקצה.מחטי הקציר אמורות להיות מסוגלות לאסוף מיקרו-קולומלונים מרקמת עור בעובי מלא עם שיעור הצלחה משוער של 80 עד 90%. בנתון זה, סימני ביקורת מייצגים מילימטר אחד. כל מיקרו-קולום צריך להכיל אפידרמיס, דרמי ושומן תת עורי.Microcolumns ניתן להחיל ישירות על ריפוי פצעים או שהם עשויים להיות משולבים עם חומרי מטריצה שונים כדי לייצר מבנים משולבים. מיקרוקולומלונים יכולים להישמר גם בתרבות למחקרי במבחנה. בעת ביצוע קציר בנפח גבוה, חשוב לזכור לשלב סומק מלוחים לסירוגין.למרות שיטה זו תוכננה לתיקון פצע העור, עיקרון דומה יכול להיות מיושם על מערכות איברים אחרות כגון שרירים שבהם השתלת רקמה אוטולוגית יש צורך.

apparatus-for-harvesting-tissue-microcolumns

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

סרטון זה מתאר את הטכניקה לקבלת תא בודד מאוכלוסיית תאים הטרוגנית באמצעות מיקרודיסקציה לכידת לייזר. התא המבודד היחיד יכול לשמש למחקרים גנומיים נוספים או לחקר הסרטן.

דגימת תא בודד באמצעות מיקרודיסקציה לכידת לייזר: טכניקה לקצירת תאי מטרה מאוכלוסיית תאים הטרוגנית

בסרטון זה, אנו מציגים את הפרוטוקול לקבלת אבקת מטריצה חוץ-תאית טחונה דק מרקמה דה-צלולרית ליופילית על ידי הקפאה. אבקת ECM שומרת על הרכבה הביוכימי וניתן להשתמש בה לסינתזה של מיקרו-נשאים.

Cryomilling של רקמה decellularized: טכניקה להשגת אבקת מטריצה תאית עדינה

סרטון זה מדגים את ההליך של ייצור מיקרו-נשא חוץ-תאי שמקורו במטריצה על ידי התזה חשמלית. מיקרו-נשאים אלה מדמים את המיקרו-סביבה הספציפית לרקמה המקומית והם יציבים במודלים ארוכי טווח של תרביות תאים במבחנה תלת-ממדית.

ייצור פיגומים ביולוגיים על ידי התזה חשמלית: טכניקה ליצירת פיגומים מיקרו-נשאיים שמקורם במטריצה חוץ-תאית של רקמה דה-צלולרית

בסרטון זה, אנו מדגימים מיצוי מבוסס SPME של מטבוליטים מכליה מתורם שנקטף מראש. ניתן להשתמש במטבוליטים שחולצו לביצוע אנליזה מטבולית וליפידומית על מנת להעריך את איכות האיברים להשתלה.

דגימת מיקרו-מיצוי בשלב מוצק: טכניקה מבוססת בדיקה לחילוץ דגימות מרקמות השתל

סרטון זה מדגים שיטה ליצירת פיגומי אסטרוציטים תלת-ממדיים בתוך מיקרו-עמודות הידרוג'ל. החלק הפנימי של המיקרו-עמודים מצופה בקולגן. אסטרוציטים מוצגים, אשר דבקים קולגן, עם דגירה נוספת, הרכבה עצמית לתוך פיגום תלת מימדי.

שיטת In Vitro ליצירת פיגומים אסטרוציטים בתוך מיקרו-עמודות הידרוג'ל

מקור: Struzyna, L. A. et al., רשתות עצביות מהונדסות מיקרו-רקמות תלת מימדיות בהשראה אנטומית לשחזור, אפנון ומידול של מערכת העצבים. J. Vis. Exp. (2017)סרטון זה מדגים את הפיתוח של רשתות עצביות מהונדסות מיקרו-רקמות באמצעות מיקרו-עמוד הידרוג'ל עם ליבת מטריצה חוץ-תאית. אגרגטים עצביים זרועים נצמדים, מרחיבים הקרנות ויוצרים רשתות עצביות מובנות, ותורמים להתקדמות בהתפתחות הנוירולוגית ובמחקר הנוירותרפי.

פיתוח רשת עצבית מהונדסת מיקרו-רקמות באמצעות מיקרו-עמודה מבוססת הידרוג'ל

לויקוציטים ריאתיים-שוליים מציגים מאפיינים ייחודיים ותפקודים אימונולוגיים מובהקים בהשוואה לאוכלוסיות לויקוציטים אחרות. כאן אנו מתארים קציר סלקטיבי של תת-אוכלוסייה זו של לויקוציטים ריאתיים, על ידי זלוף מאולץ של הריאות בחולדות ועכברים. נראה כי לויקוציטים ריאתיים שוליים הם קריטיים בקביעת הרגישות למחלות המועברות בדם ולמחלות הקשורות לריאות.

קציר סלקטיבי של לויקוציטים Marginating-ריאתי

לויקוציטים שוליים-כבדיים מציגים מאפיינים ייחודיים ותפקודים אימונולוגיים מובהקים בהשוואה לאוכלוסיות לויקוציטים אחרות. כאן אנו מתארים שיטה לקטיף סלקטיבי של אוכלוסיית תאי הכבד הספציפית הזו, באמצעות זלוף מאולץ של הכבד של חולדות או עכברים. לויקוציטים שוליים בכבד נראים קריטיים בקביעת הרגישות למחלות וגרורות הקשורות לכבד.

קציר סלקטיבי של לויקוציטים Marginating-כבדית

כתב היד הזה מפרט את ייצור של רקמות מיקרו- רקמות מהונדסות ברשתות עצביות: מבנים תלת-מימדיים בגודל מיקרון המורכבים משטחים אקסונליים ארוכי טווח המקיפים אוכלוסייה נוירונית מצטברת (s), המצופים בהידרוגול צינורי. אלה הפיגומים החיים יכולים לשמש ממסרים תפקודית לשחזר או לווסת מעגלים עצביים או כמו מיטות בדיקה ביופידלית מחקה נוירונטומי חומר אפור לבן.

אנטומיה השראה תלת מימדי מיקרו רקמות מתוכנן רשתות עצביות עבור שחזור מערכת העצבים, אפנון, דוגמנות

אנחנו ראווה הפיתוח של חבילות שהורכב עצמית, תלת מימדי של somata astrocytic longitudinally מיושר ותהליכים בתוך למטרתו biomaterial הרומן. אלה מהונדסים "חי פיגומים", מפגין בקנה מידה מיקרון קוטר עדיין הארכת ס מ אורך, עשוי לשמש מבחן-מיטות לימוד מנגנוני התפתחותיות או להקל על neuroregeneration על-ידי הגירה העצבית המשגה ו/או עצב pathfinding.

תלת מימדי רקמות מהונדסים מיושר אסטרוציט רשתות כדי לסכם מנגנונים התפתחותית וכדי להקל על מערכת העצבים התחדשות

פרוטוקול זה מתאר שיטה חסכונית להאצת חילוץ DNA מפלסמיד. באמצעות מדפי תלת-ממד מותאמים אישית התואמים לרוטורים סטנדרטיים עם פלטות דלי מתנדנדות, חוקרים יכולים לעבד עד 48 עמודי סיבוב עם פקקים או עד 116 עמודות סיבוב ללא פקקים בו-זמנית, מה שמקצר משמעותית את זמן הטיפול בהשוואה לשיטות מיקרוצנטריפוגה ידניות.

חילוץ DNA בעמודה בקצב בינוני באמצעות מדפי 24 בארות

למד שיטה לקצירת עור מלא בעוביו באמצעות מחטים מיוחדות הממזערות צלקות באתר התורם. טכניקה זו מאפשרת איסוף נפח גבוה של רקמות תוך שמירה על שלמות העור לצורך מחקר ביולוגי.

מכשירי קצירת רקמות Microcolumns

גלה סרטונים נוספים