Name: Potentiation של נוגדנים נגד סרטן יעילות על-ידי סמים Antineoplastic: זיהוי של נוגדן תרופתיים הסינרגטיות באמצעות המשוואה אינדקס שילוב (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-19T13:30:00.000+00:00
Duration: 15 min 4 s
Description: למדו להעריך סינרגיזם בין נוגדנים נגד סרטן לתרופות אנטי-ניאופלסטיות באמצעות משוואת אינדקס השילוב של צ'ו וטלאלי במודלים פרה-קליניים. שיטה זו מאפשרת זיהוי אינטראקציות סינרגטיות לייעול טיפולים בסרטן.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

להעניק תמיכה: Fondation דה Projet דה L 'אוניברסיטת דה נאנט, les Bagouz' א' מאנון, הליגה חדר מרווח וחדיש le סרטן comité דה לה לואר-מלון אטלנטיק, comité du Morbihan ולאחר comité דה Vendée, une רוז למזוג S.A.R.A.H, מרטין l ' etoile de la Société פרנסז דה Lutte חדר מרווח וחדיש לס סרטן et les leucémies de ל'אנפן et de L'adolescent (SFCE). מ ב וג'יי. אף נתמכים על ידי לה ליגה חדר מרווח וחדיש Le סרטן. המחברים תודה את למעבדות-המתקן Bonamy פרנסואה מבנה Fédérative דה רשרש. המחברים גם תודה ד ר ס סוזין (Inserm, פריז) למתן את התאים IMR5, גב' ח' Estéphan לסיוע טכני שלה.

דיור בעלי חיים, ניתוח ניסיוני אושרו על ידי הממשלה הצרפתית (הסכמי #C44-278, #APAFIS 03479.01). טיפול בבעלי חיים ונהלים נערכו תחת הוראת האיחוד האירופי 2010/63/האיחוד האירופי ומשפט צרפתית #2013-118 בנושא ההגנה על בעלי חיים משמשים למטרות מדעיות.
1. הערכה של סמים האינטראקציה בין mAb 8B6 ו Topotecan ב חוץ גופית
<ol><li>הכנת הדוגמא 96-ובכן התראה: להתייעץ עם ועדת בריאות ובטיחות של המוסד, רגולציה מקומית לחוקים הקשורים לבטיחות מעבדה. סקור את חומר ומידע גיליון בטיחות לפני שעבדה עם כל המדיה, שורות תאים או נוגדנים. השתמש סטרילי טכניקה נכונה ולעבוד תא למינארי. כל פתרונות/הציוד המשמשים לטיפול תאי חייב להיות סטרילי. הערה: פרוטוקול הבאים תוכנן לשימוש עם תאים חסיד. שינויים נדרשים להחיל את השיטה על תאים nonadherent גדל ההשעיה; פרוטוקול זה משתמש ארבע פעמים עבור כל תנאי הניסוי.<ol>
<li>לגדול IMR5 תאים בבקבוקון T75.</li>
		<li>ביום הראשון (יום 0), לבחון את התרבות תאים במיקרוסקופ כדי לבדוק את confluency תא. האחות התא האמצעי הבקבוק, לשטוף אותו עם 5 מ ל תמיסת באגירה פוספט (PBS) ולהוסיף 3 מ"ל של 0.05% חומצה ethylenediaminetetraacetic (EDTA) / PBS פתרון. להחזיר את הבקבוקון החממה במשך 3 דקות (37 מעלות צלזיוס, 5% CO2).</li>
		<li>לבחון את התרבות תאים במיקרוסקופ על ניתוק התא. הערה: במקרה הצורך, לחזור את הבקבוקון החממה למשך דקות 3 עד 5 נוספים, בהתאם לסוג תאים סרטניים.</li>
		<li>להוסיף 10 מ של התא מלא בינוני הבקבוק ולהעביר התליה תא ל צינור חרוטי סטרילי 15 מ"ל. Centrifuge את התאים עבור 5 דקות ב x 300 גרם. לספור את התאים באמצעות hemocytometer.</li>
		<li>להסיר ולמחוק את תגובת שיקוע. Resuspend בגדר תא במדיום גידול מלאה. לכוון את עוצמת הקול בינונית בריכוז הסופי של עונה 1 פרק 105 תאים/מ ל....</li>
		<li>זרע 84 בארות של צלחת 96-ובכן תרבות עם 10 תאים4 , כל אחד, אשר הוא 100 µL תא השעיה. בצע את הפריסה ניסיוני באיור 2.</li>
		<li>דגירה את התאים עבור 18 h בחממה תא (37 מעלות צלזיוס, 5% CO2).</li>
	</ol></li>
	<li>הכנה פתרון סמים הערה: ללימודים רגישות עולה סמים/mAb, לשנות את התזמון האורך, ריכוז הטיפול שיתאים מיוחד הסם/mAb המדובר. שים לב הריכוז ההתחלתי הוא 3 x הריכוז הסופי.<ol>
<li>למחרת בבוקר (יום 1), להכין את הפתרונות הבאים סמים באמצעות מדיום הגידול מלאה.<ol>
<li>
mAb פתרון הכנה
			<ol>
<li>לדלל mAb ב 500 µL של מדיום הגידול מלאה להשגת פתרון עובד נוגדן ריכוז mAb של 240 µg/mL.</li>
				<li>לבצע חמש כפולה דילולים טורי כמצוין באיור2.</li>
			</ol>
</li>
			<li>
Topotecan פתרון הכנה
			<ol>
<li>שתדללו, כמו לעיל, לסם µL 500 של מדיום הגידול מלאה להשגת הפתרון עובד סמים עם ריכוז סופי של 120 ננומטר.</li>
				<li>לבצע חמש כפולה דילולים טורי כמצוין באיור2.</li>
			</ol>
</li>
			<li>
הכנה פתרון נוגדן וסמים
			<ol>
<li>לדלל את הפתרונות mAb והסמים ב 500 µL של מדיום הגידול מלאה להשגת פתרון 120 ננומטר סמים, mAb µg 240/mL (הפתרון עובד).</li>
				<li>לבצע חמש כפולה דילולים טורי כמצוין באיור2.</li>
			</ol>
</li>
		</ol>
</li>
		<li>כדי להגיע הריכוז הסופי, להעביר 50 µL של כל פתרון סמים לתוך הבארות המתאים, כפי שמצוין בפריסה ניסיוני ( איור 2). הערה: להעביר 50 µL של מדיום הגידול מלאה לתוך הבארות התא אינו מטופל, כמצוין באיור2.</li>
		<li>דגירה את התאים עבור 72 h בחממה (37 מעלות צלזיוס, 5% CO2).</li>
	</ol></li>
	<li>MTT assay
	<ol>
<li>להוסיף 10 µL MTT ריאגנט פתרון טוב לכל.</li>
		<li>דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 4 שעות.</li>
		<li>להוסיף 100 µL של פירוק פתרון (10% מרחביות ב 0.01 M HCl) כל טוב, באמצעות פיפטה רב-ערוצי, לערבב ביסודיות על ידי pipetting.</li>
		<li>דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 4 שעות בתוך תא humidified (95% לחות).</li>
		<li>לקרוא את ספיגת-570 nm (570) ו 620 nm (620) באמצעות ספקטרופוטומטרים. הערה: לערבב כל מדגם שוב על ידי pipetting לפני קריאת את ספיגת; ספיגת-620 nm מאפשר את התיקון של ערכי הרקע לא ספציפית.</li>
		<li>לחשב את ספיגת המתוקן: תוקן ספיגת =570-620.</li>
		<li>לחשב את הכדאיות תא כדלקמן: תא הכדאיות = 100 x (דוגמה רעה ספיגת המתוקן / לשלוט כלומר ספיגת המתוקן).</li>
		<li>לחשב את מושפעות שבר ערכי (Fa) באמצעות המשוואה הבאה: 1 - (דוגמה רעה ספיגת המתוקן / לשלוט כלומר ספיגת המתוקן).</li>
	</ol></li>
	<li>סמים אינטראקציה עם תוכנת הדמיה אנליטיים ליחיד ולימודי שילוב סמים
	<ol>
<li>להפעיל את תוכנת סימולציה כדי לפתוח את החלון התחלה.</li>
		<li>לחץ על הלחצן ' ניסוי חדש ' כדי לפתוח את החלון הראשי .</li>
		<li>הקלד את השם של הניסוי בחלון שם . הערה: ניתן להוסיף תאריך בחלון תאריך .</li>
		<li>לחץ על לחצן תרופה יחידה חדשה .</li>
		<li>הקלד את השם בחלון שם מלא .</li>
		<li>הקלד את הקיצור בחלון Abbrev .</li>
		<li>הקלד את יחידת ריכוז סמים בחלון יחידות .</li>
		<li>הזן נתונים נקודה 1 מנה ערך פא, הקש Enter.</li>
		<li>חזור על שלב זה עד לכל נקודות הנתונים מוזנים.</li>
		<li>לחץ על הלחצן ' סיום '.</li>
		<li>בצע את השלבים אותם להיכנס mAb נקודות נתונים. הערה: השתמש מאותה יחידה ריכוז נמצא בשימוש בסמים.</li>
		<li>לחץ על לחצן חדש התרופה המשולבת .</li>
		<li>בחר סמים mAb.</li>
		<li>בחר יחס קבוע ולחץ על אישור.</li>
		<li>הקלד את השם בחלון שם מלא .</li>
		<li>הקלד את הקיצור בחלון Abbrev .</li>
		<li>הקלד את היחס סמים/mAb בחלון יחס .</li>
		<li>הזן נתונים נקודה 1 מנה והקש Enter. הערה: התוכנית באופן אוטומטי יחשב את המנות של mAb ותיבה משולבת.</li>
		<li>הזן את ערך הנתונים נקודה 1 פא והקש Enter.</li>
		<li>חזור על שלב זה עד לכל נקודות הנתונים מוזנים.</li>
		<li>לחץ על הלחצן ' סיום ', לאחר מכן, לחץ על לחצן צור דוח .</li>
		<li>בחר mAb והסמים ולאחר מכן, לחץ על אישור.</li>
		<li>בחר משולבת ולאחר מכן, לחץ על אישור.</li>
		<li>בחר כותרת טבלה CI, טבלת סיכום. לאחר מכן, לחץ על אישור.</li>
		<li>הקלד את שם הקובץ של קובץ ה-ניתוח ולחץ על שמור כדי ליצור את הדוח. הערה: לאחר לחיצה על אישור, הדו ח ייפתחו באופן אוטומטי דפדפן ברירת המחדל של המחשב.</li>
		<li>כדי להדפיס את הדוח, בחר הדפסה בתפריט קובץ של דפדפן האינטרנט. הדוח מכיל מקטע טבלת סיכום הכולל את הכותרת, תאריך, שם הקובץ, הערה תיאור, פרמטרים (מ', מיט ו r), אד50 עבור סוכן או משמש יחידני או בכל שילוב, והטבלה CI עבור כל שילוב אד50, אד 75, אד90, ואד95. הערה: ערך CI של < 1 מציין הסינרגטיות, הערך CI = 1 מציין additivity, וערך CI של > 1 מציין אנטגוניזם.</li>
	</ol></li>
</ol>2. דור של נוירובלסטומה האנושי Xenografts בעכברים Scid גמא Nonobese הנד סוכרתית (NSG עכברים)
הערה: הכללת כל זיהום של התרבות תאים. מאז המטריקס קרום המרתף יוצר ג'ל מעל 5 ° C, כל אורח/ים ילד/cultureware או מדיה במגע עם קרום המרתף מטריקס הכימית צריך להיות prechilled/קר כמו קרח. לשמור על המטריקס קרום המרתף על קרח במהלך התהליך כולו.
<ol><li>
הכנה של התליה תא IMR5
	<ol>
<li>הפשרת הכימית מטריקס קרום המרתף בן לילה על ידי השוקע המבחנה בקרח במקרר 4 ° C לפני השימוש.</li>
		<li>ביום 0, לקצור את IMR5 תאים בתרבית כמפורט לעיל.</li>
		<li>העבר את התאים צינור חרוטי 15 מ"ל ו צנטריפוגה ב x 300 גרם במשך 5 דקות.</li>
		<li>למחוק את תגובת שיקוע. לשטוף את התאים 2 x עם 15 מ"ל של PBS קר כקרח, ולהכין תא השעיה של 5 x 107 תאים/מ ב- PBS קר כקרח. הערה: אם יש צורך, להעביר התליה תא לרכבת התחתית microcentrifuge 1.5 mL.</li>
		<li>מערבולת המבחנה מטריקס קרום המרתף. הערה: הכימית מטריקס קרום המרתף צריך להיות הקרת, התפזרו.</li>
		<li>להוסיף אמצעי אחסון אחד של קרום המרתף מטריקס ריאגנט ולערבב אותו על-ידי pipetting כדי לקבל השעיה תא של 2.5 x 107 תאים /mL.</li>
		<li>לשמור על התליה תא על קרח.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הכנה של העכברים הערה: העכברים צריך להיות בן 6-7 שבועות.<ol>
<li>לשמור על עכברים תחת תנאי ספציפי פתוגן-חופשית.</li>
		<li>לאפשר תקופת הסתגלות שלושה - חמישה ימים לאחר העכברים הגיעו.</li>
		<li>ביום של חיסון, לגלח את האגף היכן הזריקה יהיה (ראה שלב 2.3.6).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הכנה של הזריקה תא הגידול הערה: לשמור את המתלה תא קר כקרח קרום המרתף מטריקס aseptic לאורך כל ההליך.<ol>
<li>לערבב את התאים, בזהירות לצייר התליה תא לתוך מזרק 1 מ"ל רכוב עם מחט 21 G.</li>
		<li>בדוק כדי לוודא שאין אין בועות אוויר במזרק.</li>
		<li>לחטא את האזור חיסון של העכבר באמצעות פתרון חיטוי.</li>
		<li>סחוט בעדינות את העור של העכבר לאגף בין האצבעות, במקום ההזרקה.</li>
		<li>הכנס את המחט בדיוק לקפל את העור. אין למקם את המחט עמוק לתוך הרקמה כדי להבטיח זריקה תת עורית.</li>
		<li>להזריק 100 µL IMR5 תא השעיה (קרי, 2.5 x 106 תאים) subcutaneously לתוך באגף הימני התחתון של העכברים.</li>
		<li>לסובב את המזרק כדי למנוע דליפה, לשלוף את המחט.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
מעקב אחר שינויים במשקל הגוף ואת הגידול
	<ol>
<li>למדוד את האורך (א) ורוחב (ב) של הגידול עם קליבר.</li>
		<li>לחשב את נפח הגידול באמצעות הנוסחה (א x B2) x 0.5.</li>
		<li>להתחיל טיפול כאשר הגידולים הגיעו בכמות ממוצעת של ~ 50-60 מ מ3.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. סמים המינהל נוגדן בעכברים
<ol><li>
עירוי לוריד של mAb 8B6
	<ol>
<li>בזהירות ממלאים מזרק 1 מ"ל רכוב עם מחט 25 גרם mAb פתרון....</li>
		<li>הנח את העכבר מתחת למנורת חום למשך 10 דקות להתרחב את הווריד הזנב.</li>
		<li>לרסן את העכבר restrainer מכרסמים.</li>
		<li>לחטא את האזור חיסון של העכבר באמצעות פתרון חיטוי.</li>
		<li>את המחט במקביל לוריד הזנב, 2-4 מ מ חודר לתוך לומן תוך שמירה על שיפוע של המחט הפנים כלפי מעלה (איור 3 א).</li>
		<li>מזריקים µL 100 של נוגדן פתרון לווריד (העירוי).</li>
		<li>עם סיום ההזרקה, בעדינות לחץ ההזרקה כדי למנוע דימום.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
בקרום הבטן מינהל topotecan
	<ol>
<li>לצייר את הפתרון סמים בתוך מזרק 1 מ"ל רכוב עם מחט 25 גרם.</li>
		<li>החזק את העכבר במצב פרקדן, עם הקצה האחורי מעט יותר גבוהה מהרגיל.</li>
		<li>לחטא את האזור חיסון של העכבר באמצעות פתרון חיטוי.</li>
		<li>אתר קו האמצע בבטן של העכבר ולחץ נפשית לחלק את הבטן הגזרות. אתר ההזרקה ברביע הימני או השמאלי התחתון (איור 3B).</li>
		<li>הכנס את המחט לתוך. חלל הבטן (5 מ מ עמוקה) ב ~ 10° זווית, ברביע התחתון ימינה או שמאלה.</li>
		<li>להזריק 100 µL של סמים פתרון intraperitoneally (i.p.).</li>
		<li>לחטא את האתר חיסון.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Chou, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theoretical+basis%2C+experimental+design%2C+and+computerized+simulation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combination+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies.</a> Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).</li>
<li>Bayat Mokhtari, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+therapy+in+combating+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Combination therapy in combating cancer.</a> Oncotarget. 8 (23), 38022-38043 (2017).</li>
<li>Zahreddine, H., Borden, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+and+insights+into+drug+resistance+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms and insights into drug resistance in cancer.</a> Frontiers in Pharmacology. 4, 28(2013).</li>
<li>Martin, T. P., Baguley, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Re%3A+%22Postoperative+validation+of+bone-anchored+implants+in+the+single-sided+deafness+population.%22+Snapp+et+al.+Otol+Neurotol+2012%3A+33%3B291-6%5BTitle%5D)+AND+%22Otol+Neurotol%22%5BJournal%5D)">Re: "Postoperative validation of bone-anchored implants in the single-sided deafness population." Snapp et al. Otol Neurotol 2012: 33;291-6.</a> Otol Neurotol. 34 (4), 777-778 (2013).</li>
<li>Choi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitization+of+lung+cancer+cells+by+altered+dimerization+of+HSP27%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Sensitization of lung cancer cells by altered dimerization of HSP27.</a> Oncotarget. 8 (62), 105372-105382 (2017).</li>
<li>Weiner, L. M., Surana, R., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies%3A+versatile+platforms+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Immunology%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies: versatile platforms for cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (5), 317-327 (2010).</li>
<li>Mellor, J. D., Brown, M. P., Irving, H. R., Zalcberg, J. R., Dobrovic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+review+of+the+role+of+Fc+gamma+receptor+polymorphisms+in+the+response+to+monoclonal+antibodies+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Hematology+%26+Oncology%22%5BJournal%5D)">A critical review of the role of Fc gamma receptor polymorphisms in the response to monoclonal antibodies in cancer.</a> Journal of Hematology & Oncology. 6, 1(2013).</li>
<li>Kowalczyk, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+GD2-specific+14G2a+monoclonal+antibody+induces+apoptosis+and+enhances+cytotoxicity+of+chemotherapeutic+drugs+in+IMR-32+human+neuroblastoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">The GD2-specific 14G2a monoclonal antibody induces apoptosis and enhances cytotoxicity of chemotherapeutic drugs in IMR-32 human neuroblastoma cells.</a> Cancer Letters. 281 (2), 171-182 (2009).</li>
<li>Retter, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+proapoptotic+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody+and+evaluation+of+its+therapeutic+effect+on+melanoma+and+small+cell+lung+carcinoma+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Characterization of a proapoptotic antiganglioside GM2 monoclonal antibody and evaluation of its therapeutic effect on melanoma and small cell lung carcinoma xenografts.</a> Cancer Research. 65 (14), 6425-6434 (2005).</li>
<li>Nakamura, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+induction+of+human+lung+cancer+cell+line+in+multicellular+heterospheroids+with+humanized+antiganglioside+GM2+monoclonal+antibody%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Apoptosis induction of human lung cancer cell line in multicellular heterospheroids with humanized antiganglioside GM2 monoclonal antibody.</a> Cancer Research. 59 (20), 5323-5330 (1999).</li>
<li>Cochonneau, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+cycle+arrest+and+apoptosis+induced+by+O-acetyl-GD2-specific+monoclonal+antibody+8B6+inhibits+tumor+growth+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Cell cycle arrest and apoptosis induced by O-acetyl-GD2-specific monoclonal antibody 8B6 inhibits tumor growth in vitro and in vivo.</a> Cancer Letters. 333 (2), 194-204 (2013).</li>
<li>Chou, T. C., Martin, N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChou%2C+TC+%22CompuSyn+for+drug+combinations%3A+PC+software+and+user%E2%80%99s+guide%3A+a+computer+program+for+quantitation+of+synergism+and+antagonism+in+drug+combinations%2C+and+the+determination+of+IC50+and+ED50+and+LD50+values%22">CompuSyn for drug combinations: PC software and user’s guide: a computer program for quantitation of synergism and antagonism in drug combinations, and the determination of IC50 and ED50 and LD50 values</a>. , ComboSyn Inc. Paramus, NJ. (2005).</li>
<li>Alvarez-Rueda, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+monoclonal+antibody+to+O-acetyl-GD2+ganglioside+and+not+to+GD2+shows+potent+anti-tumor+activity+without+peripheral+nervous+system+cross-reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A monoclonal antibody to O-acetyl-GD2 ganglioside and not to GD2 shows potent anti-tumor activity without peripheral nervous system cross-reactivity.</a> PLoS One. 6 (9), e25220(2011).</li>
<li>Faraj, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroblastoma+chemotherapy+can+be+augmented+by+immunotargeting+O-acetyl-GD2+tumor-associated+ganglioside%5BTitle%5D)+AND+%22Oncoimmunology%22%5BJournal%5D)">Neuroblastoma chemotherapy can be augmented by immunotargeting O-acetyl-GD2 tumor-associated ganglioside.</a> Oncoimmunology. 7 (1), e1373232(2017).</li>
<li>Ishikawa, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+functional+human+blood+and+immune+systems+in+NOD%2FSCID%2FIL2+receptor+%7Bgamma%7D+chain%28null%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Development of functional human blood and immune systems in NOD/SCID/IL2 receptor {gamma} chain(null) mice.</a> Blood. 106 (5), 1565-1573 (2005).</li>
<li>Ullman-Cullere, M. H., Foltz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body+condition+scoring%3A+a+rapid+and+accurate+method+for+assessing+health+status+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Body condition scoring: a rapid and accurate method for assessing health status in mice.</a> Laboratory Animal Science. 49 (3), 319-323 (1999).</li>
<li>Teicher, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assays+for+in+vitro+and+in+vivo+synergy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Assays for in vitro and in vivo synergy.</a> Methods in Molecular Medicine. 85, 297-321 (2003).</li>
<li>White, D. B., Slocum, H. K., Brun, Y., Wrzosek, C., Greco, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+nonlinear+mixture+response+surface+paradigm+for+the+study+of+synergism%3A+a+three+drug+example%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Metabolism%22%5BJournal%5D)">A new nonlinear mixture response surface paradigm for the study of synergism: a three drug example.</a> Current Drug Metabolism. 4 (5), 399-409 (2003).</li>
<li>Mosmann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+colorimetric+assay+for+cellular+growth+and+survival%3A+application+to+proliferation+and+cytotoxicity+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunological+Methods%22%5BJournal%5D)">Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays.</a> Journal of Immunological Methods. 65 (1-2), 55-63 (1983).</li>
<li>Huyck, L., Ampe, C., Van Troys, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+XTT+cell+proliferation+assay+applied+to+cell+layers+embedded+in+three-dimensional+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Assay+and+Drug+Development+Technologies%22%5BJournal%5D)">The XTT cell proliferation assay applied to cell layers embedded in three-dimensional matrix.</a> Assay and Drug Development Technologies. 10 (4), 382-392 (2012).</li>
<li>Thompson, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy+of+topotecan+in+combination+with+vincristine+for+treatment+of+pediatric+solid+tumor+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Synergy of topotecan in combination with vincristine for treatment of pediatric solid tumor xenografts.</a> Clinical Cancer Research. 5 (11), 3617-3631 (1999).</li>
<li>Tan, M., Fang, H. B., Tian, G. L., Houghton, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+design+and+sample+size+determination+for+testing+synergism+in+drug+combination+studies+based+on+uniform+measures%5BTitle%5D)+AND+%22Statistic+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Experimental design and sample size determination for testing synergism in drug combination studies based on uniform measures.</a> Statistic in Medicine. 22 (13), 2091-2100 (2003).</li>
<li>Tang, X. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+EPHB6%2C+EFNB2%2C+and+EFNB3+expressions+in+human+neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Proceding+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Implications of EPHB6, EFNB2, and EFNB3 expressions in human neuroblastoma.</a> Proceding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (20), 10936-10941 (2000).</li>
<li>Mehta, R. R., Graves, J. M., Hart, G. D., Shilkaitis, A., Das Gupta, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+metastasis+of+human+breast+carcinomas+with+Matrigel+in+athymic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research+and+Treatment%22%5BJournal%5D)">Growth and metastasis of human breast carcinomas with Matrigel in athymic mice.</a> Breast Cancer Research and Treatment. 25 (1), 65-71 (1993).</li>
<li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67 (6), 816-820 (1996).</li>
<li>Feng, C., Tang, S., Wang, J., Liu, Y., Yang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topotecan+plus+cyclophosphamide+as+maintenance+chemotherapy+for+children+with+high-risk+neuroblastoma+in+complete+remission%3A+short-term+curative+effects+and+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Nan+Fang+Yi+Ke+Da+Xue+Xue+Bao%22%5BJournal%5D)">Topotecan plus cyclophosphamide as maintenance chemotherapy for children with high-risk neuroblastoma in complete remission: short-term curative effects and toxicity.</a> Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. 33 (8), 1107-1110 (2013).</li>
<li>Cheung, N. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ganglioside+GD2+specific+monoclonal+antibody+3F8%3A+a+phase+I+study+in+patients+with+neuroblastoma+and+malignant+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clininical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Ganglioside GD2 specific monoclonal antibody 3F8: a phase I study in patients with neuroblastoma and malignant melanoma.</a> Journal of Clininical Oncology. 5 (9), 1430-1440 (1987).</li>
<li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Basic+Clinical+Pharmacy%22%5BJournal%5D)">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> Journal of Basic Clinical Pharmacy. 7 (2), 27-31 (2016).</li>
<li>Dayde, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+burden+influences+exposure+and+response+to+rituximab%3A+pharmacokinetic-pharmacodynamic+modeling+using+a+syngeneic+bioluminescent+murine+model+expressing+human+CD20%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Tumor burden influences exposure and response to rituximab: pharmacokinetic-pharmacodynamic modeling using a syngeneic bioluminescent murine model expressing human CD20.</a> Blood. 113 (16), 3765-3772 (2009).</li>
<li>Racki, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOD-scid+IL2rgamma%28null%29+mouse+model+of+human+skin+transplantation+and+allograft+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">NOD-scid IL2rgamma(null) mouse model of human skin transplantation and allograft rejection.</a> Transplantation. 89 (5), 527-536 (2010).</li>
<li>Sherif, A., Winerdal, M., Winqvist, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+Responses+to+Neoadjuvant+Chemotherapy+in+Muscle+Invasive+Bladder+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Bladder+Cancer%22%5BJournal%5D)">Immune Responses to Neoadjuvant Chemotherapy in Muscle Invasive Bladder Cancer.</a> Bladder Cancer. 4 (1), 1-7 (2018).</li>
</ol>

S.Fa. ג'יי, ומסווגים המיועדים לשמש הממציאים של ממתינים פטנטים המכסים את היישום הקליני של נוגדנים אנטי-O-אצטיל-GD2 טיפולית.

כדי לחזות את התוצאה של תגובות בין תרופתיות, ניתן להשתמש בשלוש שיטות: מתודולוגיה isobologram17, מודל לא-ליניאריות תערובת18ו השילוב מדד1. ניתוח מדד משולב הוא הנפוץ ביותר בשימוש כי היישום שלה היא פשוטה בשל הזמינות של תוכנית מחשב ידידותי למשתמש. למטרה זו, אנו קודם מאופיין התגובה מינון-אפקט של כל סוכן להשתמש לבד או בשילוב, על ידי ביצוע וזמינותו של MTT19. מתודולוגיה זו מתבססת על היכולת של התאים קיימא כדי להפחית את המלח tetrazolium ב...

הגישה הקונבנציונלית בטיפול של מספר רב של סוגים שונים של סרטן היה מבוסס על יחידני. אפילו אם זה משמש עדיין במקרים רבים, שיטה זו נפגשו מספר מכשולים שמוביל בחירה של טיפולים משולבים2. במיוחד, תאים סרטניים פגיעים יותר לפתח עמידות כאשר מטופלים עם תרופה אחת על ידי גרימת הישרדות חלופי מנגנונים3, והתוצאה היא כישלון טיפולי בחולים4. יתר על כן, ביחידני, תרופות בדרך כלל הפארקים אחראית הרשות במינון גבוה. את המצב הזה לעיתים קרובות תוצאות המופע של תופעות לוואי למינון חזק זה יכול להיות בלתי נסבל, כוח רופאים להפסיק את הטיפול2. מסיבות אלו, האגודה של מולקולות נגד סרטן הוא עכשיו העדיפו יחידני.
שילובים תרופתיים האידיאלי יהיה אלה שפועלים בסינרגיה נגד תאים סרטניים, ללא רעילות מוגברת נגד תאים נורמליים. הסינרגטיות מתייחס האינטראקציה של שניים או יותר תרופות שמייצר השפעה תרפויטית עולה על הסכום של כל תרופה בודדים מתנהג בנפרד. אינטראקציות כזה עלול לגרום משופרת יעילות טיפולית קלינית2. זה מגביל את ההתנגדות הטיפול מגביר את היעילות, ניתן גם להפחית רעילות2. למעשה, ניתן להפחית את המינון של כל תרופה כדי להפחית את תופעות הלוואי שלהן על ידי מיקוד מסלולים שונים. בנוסף, אחד של המולקולות יכול לשמש גם סוכן sensitizing נגד תאים סרטניים. ההשפעה של התרופה השנייה שעשויים להיות מוגברת על תאים sensitized, המינונים פחות יכול להיות בשימוש5.
טיפול משולב יכול לכלול שניים או יותר תרופות כימותרפיות ו/או תרופות/מוצרים ביולוגיים, כגון נוגדנים חד-שבטיים6. אלה mAbs במיוחד היעד תאים המבטאים אנטיגן פני שטח התא של עניין מסוגלות להרוג תאים סרטניים באמצעות מסלולים אימונולוגי כולל נוגדנים תלויי תאית cytotoxicity (ADCC), עם המעורבות של תאים חיסוניים אפקטור 7, cytotoxicity תלויי-המשלים (CDC)6. הם גם משמשים דרך מנגנון חיסוניות מתווכת על ידי אפופטוזיס8,9,10,11. במקרה זה, אינדוקציה של התהליך של מוות תאים מתוכנת עלול לרגש תאים סרטניים, להחליש את תפקידם ולבצע את כימותרפית המשויך יעיל יותר במינון נמוך יותר. ככזה, proapoptotic mAb הם מועמדים טובים עבור עיצוב משטרי בשילוב עם תרופות antineoplastic.
מודלים מתמטיים שונים תוארו להעריך הסינרגטיות סמים; אחד מהם הוא מבוסס על שילוב מדד בשיטה1. שיטה זו מבוססת על העיקרון חציון-אפקט שפותחה על ידי צ'או1. המשוואה חציון-אפקט מופיע את מינון התרופה לבין האפקט כדלקמן.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq1.jpg">
. הנה, D הוא מינון התרופה; Dm הוא המינון חציון-אפקט; הפא הוא השבר מושפע המנה; מ' הוא המעריך שמסמל את הצורה של מינון-אפקט מגרש1. המינון חציון-אפקט משמש כדי לחשב את המינון Dx של התרופה מעכב או הורג "x" אחוזים של תאים. הערך CI לאחר מכן מחושב כדי להעריך את השפעת השילוב סמים, כדלקמן1מוספים.
<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58291/58291eq2.jpg" style="font-size: 14px;">
הערך CI 1 מציין אפקט תוסף וערך CI של &lt; 1 מציין אפקט סינרגיסטי, בעוד ערך CI של &gt; 1 מציין הטינה1. היישום של שיטה זו נוספת בהנחייתם של הזמינות של תוכנית מחשב, CompuSyn, הקובע הסינרגטיות של אנטגוניזם במינונים כל או רמות ההשפעה הדמיה אוטומטית12.
הקבוצה שלנו פיתח ייחודיים 8B6 mAb O-אצטיל-GD2 ganglioside (OAcGD2) נוירובלסטומה אנטיגן13 , נוספת הדגימו כי mAb הזה הוא מסוגל לגרום מוות של תאים עם תכונות של אפופטוזיס11. כדי לבדוק אם mAb 8B6 יכול לרגש לתאי נוירובלסטומה topotecan הסוכן antineoplastic, שינינו את השיטה הנ ל שפותחה על ידי צ'או1. ראשית, אנו לקבוע מנה אפקטיבית (אד50) 50 הערכים של mAb 8B6 ו- topotecan. בשלב הבא, התאים נוירובלסטומה עם יחס equipotent של שתי תרכובות בהתבסס על אד50 ערכים נחשפים לקבוע את הערכים CI שימוש בתוכנת סימולציה הנ. שיטה זו מאפשרת לנו להפגין הסינרגטיות בין mAb 8B6 ו- topotecan חוץ גופית בתוך. בשלב הבא, אנו מתארים את פרוטוקול להעריך עוד יותר את העוצמה והביטחון של שילוב משטר זה ויוו. פרוטוקול זה ניתן להחיל בקלות כדי לבחור mAb נגד סרטן חזק ובטוח ושילובים הסוכן כימותרפיות במחקרים פרה. ייצוג סכמטי של מחקר זה מסופק באיור1.

<table><tbody><tr><td>ערכת שגשוג תאים (MTT)</td><td>Roche</td><td>11-465-007-001</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת CompuSyn</td><td>ComboSyn Combosyn</td><td></td><td>ניתנת להורדה בחינם בכתובת http://www.combosyn.com</td></tr><tr><td>מכונת גילוח חשמלית</td><td>Bioseb</td><td>BIO-1556</td><td></td></tr><tr><td>סרום עגל עוברי</td><td>Eurobio</td><td>CVFSVFF00-01</td><td>10% סרום עגל עוברי מומת בחום ב-RPMI 1640</td></tr><tr><td>Firefox&nbsp;</td>ניתן להוריד את <td>Mozilla Corporation</td><td></td><td>Firefox בחינם בכתובת http://www.mozilla.org/en-US/firefox/</td></tr> <tr><td>Heat lamp</td><td>Verre& קוורץ</td><td>4003/1R</td><td></td></tr><tr><td>נוירובלסטומה אנושית IMR-5 קו תאים</td><td>Accegen Biotechnology</td><td>ABC-TC0450</td><td>IMR-5 הוא שיבוט של קו התאים הנוירובלסטומה האנושי IMR32 5459762. תאי IMR-5 סופקו בנדיבות על ידי ד"ר סנטוס סוסין (U.872, פריז, צרפת)</td></tr><tr><td>L-גלוטמין</td><td>Gibco</td><td>25030-024</td><td>2 מ"מ בתמיסת ליזה RPMI 1640</td></tr>&<tr><td>nbsp;</td><td>רוש&nbsp;</td><td>11-465-007-001</td><td></td></tr><tr><td>mAb 8B6</td><td>אוניברסיטת נאנט</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354248</td><td></td></tr><tr><td>Multiskan FC</td><td>Thermofischer Scientific&nbsp;</td><td>N08625</td><td></td></tr><tr><td>מחט 21G 1 ו-frac12; &nbsp;</td>מחט <td>304432</td><td></td> <td>BD Microlance</td></tr><tr><td>25G 1</td><td>Terumo</td><td>NN-2525R</td><td></td></tr><tr><td>עכברי NSG</td><td>מעבדות צ'ארלס ריבר</td><td>5557</td><td></td></tr><tr><td>Nunc MicroWell 96 בארות מיקרופלטות</td><td>Thermofisher</td><td>167008</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>VWR</td><td>L182-10</td><td></td></tr><tr><td>PBS, 0,05% EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9884</td><td></td></tr><tr><td>PC שפועל Windows 7</td><td>ניתן</td> לרכוש את Microsoft <td></td><td>Windows 7 בכתובת http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7</td></tr><tr><td>פניצילין-סטרפטומיצין</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>100 יחידות/מ"ל פניצילין ו-100 מ"ג/מ"ל סטרפטומיצין במאגר ריאגנטים RPMI 1640</td></tr><tr><td></td><td>Thermofischer Scientific</td><td>8094</td><td></td></tr><tr><td>מרסן מכרסמים</td><td>Bioseb</td><td>TV-150-SM</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>31870-025</td><td></td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל</td><td>Henke Sass Wolf</td><td>5010.200V0</td><td></td></tr><tr><td>Topotecan</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T2705</td><td></td></tr></tbody></table>

potentiation של נוגדנים נגד סרטן יעילות על-ידי סמים antineoplastic: זיהוי של נוגדן תרופתיים הסינרגטיות באמצעות המשוואה אינדקס שילוב

Potentiation of Anticancer Antibody Efficacy by Antineoplastic Drugs: Detection of Antibody-drug Synergism Using the Combination Index Equation

Potentiation נוגדנים חד-שבטיים עוינת (mAb) על ידי סוכנים כימותרפיות מהווה אסטרטגיה רב ערך עבור תכנון טיפול יעיל ובטוח מפני סרטן. כאן אנו מספקים פרוטוקול כדי לזהות שילוב רציונלי בשלב פרה. ראשית, אנו מתארים הנועד מבוססת תא להעריך את הסינרגטיות בין mAb נגד סרטן תרופות ציטוטוקסיות, המשתמשת המשוואה אינדקס שילוב של צ'או, Talalay1. זה כולל את המדידה של גידול התא סמים, נוגדן-רגישות שימוש assay MTT, ואחריו ניתוח המחשב אוטומטית כדי לחשב את ערכי אינדקס (CI) שילוב. CI ערכים של < 1 לציין הסינרגטיות בין mAbs נבדק סוכנים ציטוטוקסיות1. כדי לאמת את במבחנה ממצאים ויוו, נתאר בהמשך שיטה כדי להעריך את היעילות של משטר השילוב במודל גידול xenograft. במודל זה, הטיפול המשולב מעכבת באופן משמעותי הגידול, כשהתוצאה הישרדות המורחבת משמעותית בהשוואה פקדים סוכן יחיד. חשוב, הניסויים ויוו חושף משטר השילוב הוא נסבל היטב. פרוטוקול זה מאפשר הערכת יעילות תרופה נגד סרטן צירופי במודלים פרה וזיהוי של שילוב רציונלי כדי להעריך בניסויים קליניים.

התוצאות נציג ודמויות מותאמים באישור מוקדם יותר לאור העבודה14.
8B6 mAb anti-OAcGD2 משפר בסינרגיה אפקטים המעכבת של Topotecan על צמיחת שורת תאים נוירובלסטומה:
כדי ליצור את התרופה ריכוז נוגדן כדי לשמש להערכת הסינרגטיות בין 8B6 topotecan, mAb, התרופה שהיא התכוונה נוגדן של IMR5 האנושי נוירובלסטומה תאים נמדדו תחילה, שימוש assay MTT. חש...

פרוטוקול זה מתאר כיצד להעריך הסינרגטיות בין נוגדן נגד סרטן תרופות antineoplastic במודלים פרה באמצעות המשוואה אינדקס שילוב של צ'או, Talalay.

Potentiation של נוגדנים נגד סרטן יעילות על-ידי סמים Antineoplastic: זיהוי של נוגדן תרופתיים הסינרגטיות באמצעות המשוואה אינדקס שילוב

Potentiation of hostile monoclonal antibodies (mAb) by chemotherapeutic agents constitutes a valuable strategy for designing effective and safer therapy ...

אימונותרפיה בשילוב עם כימותרפיה מייצגת גישה חדשנית לפיתוח טיפול יעיל בסרטן. המטרות העיקריות הן להשיג סינרגטי, השפעות טיפוליות, הפחתת מינון ורעילות, כדי למזער או לעכב את אינדוקציה של עמידות לתרופות. עם זאת, מסיבות מעשיות ואתיות, לא ניתן לקבוע סינרגיה בחולים. לכן, לפני שילוב ישיר בניסויים קליניים, מחקרי שילוב Prenicaptor, במבחנה, ו / או בבעלי חיים, צריך להתבצע כדי לקבל את הרציונל למחקרים קליניים. שיטה פשוטה וחזקה לכמות סינרגיה בין תרופות מבוססת על משוואת מדד שילוב שפותחה על ידי Shouan Talale, כפי שמודגם בסרטון זה. באמצעות שיטה זו, וסימולציה ממוחשבת שלה, אנו ראיות כאן, הסינרגיה בין נוגדן חד שבטי 8B6, אשר ספציפי עבור O-אצטיל-GD2 נוירובלסטומה Ganglioside אנטיגן ואת התרופה הכימותרפית Topotecan על תאי נוירובלסטומה. בקצרה, לאחר קביעת המינון האפקטיבי 50 ערכים של כל תרכובת IMO אנושי, 5 קו תאים נוירובלסטומה, תאים אלה היו צנררים עם יחס הוגן של שתי תרכובות, ואת ערכי מדד שילוב חושבו באמצעות סימולציה ממוחשבת אוטומטית. לאחר מכן אישרנו את התוצאות האלה ב Vivo, ב IMO, 5 גידול קסנוגרף מודל. גידלנו תאי IMR-5 בבקבוק T75, ראינו אותם תחת מיקרוסקופ, כדי לבדוק את תכולת התאים. בינוני תא אספרט מן הבקבוק, לשטוף עם 5 מ"ל של PBS. הוסף 3 מ"ל של פתרון 0.05%EDTA/PBS. מחזירים את הבקבוק לאנקובטור למשך 3 דקות. בדוק את תרבות התאים תחת מיקרוסקופ עבור ניתוק תאים. מוסיפים 10 מ"ל של תא שלם בינוני לבקבוק, ומעבירים את מתלי התא לצינור חרוט סטרילי של 15 מ"ל. צנטריפוגה במשך חמש דקות ב 300 g.Count תאים באמצעות המוציטמטר. הסר והשליך את העל-טבעי. להשעות מחדש תאים ב בינוני צמיחה מלאה.להתאים את הנפח הבינוני כדי לקבל ריכוז סופי של 100, 000 תאים / mL.Seed 84 בארות, 96 צלחת תרבות היטב עם 10, 000 תאים כל אחד, שהוא 100 microliters של השעיית תא. תאי אינקובט במשך 18 שעות ב- Cell Incubator.Dilute נוגדן חד שבטי ב 500 microliters של מדיום צמיחה מלאה כדי לקבל פתרון עבודה נוגדן עם ריכוז נוגדנים חד שבטי 240 מיקרו גרם לכל mL.Perform 5 אשליות סדרתיות כפולות כפי שצוין בפרוטוקול. לדלל את התרופה ב 500 microliters של מדיום צמיחה מלאה כדי להשיג פתרון עבודה תרופה עם ריכוז סופי 120 nanomolar. בצע 5, פעמיים אשליות סדרתיות כפי שצוין בפרוטוקול. לדלל באותו אופן את התרופה בתוספת פתרונות anibodies חד אופן. כדי להגיע לריכוז הסופי, להעביר 50 microliters של כל פתרונות תרופה בארות המתאימות כפי שמוצג בפריסה ניסיונית זו. להטף את התאים במשך 72 שעות באינקובטור. הוסף 10 מיקרוליטרים של פתרון MTT reagent לתוך כל באר. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 4 שעות. מוסיפים 100 מיקרוליטרים של תותב lycine לתוך כל באר באמצעות פיפטה רב ערוצית ומערבבים ביסודיות על ידי צינורות. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 4 שעות בתא לח. תפטר את הספיגים ב-570 ו-620 ננומטר בעזרת ספקטרופוטומטר. חשב את הכדאיות התאית באופן הבא. חשב את הערכים המושפעים של השבר באמצעות המשוואה הבאה. הפעל את תוכנת הסימולציה, לחץ על כפתור הניסוי החדש כדי להשיג את החלון הראשי. הקלד את שם הניסוי. לחץ על תרופה אחת חדשה. הקלד את השם. הקלד את הקיצור. הקלד את יחידת ריכוז הסמים. הזן מינון נתונים 1 וערך FA. הקש Enter.Repeat על שלב זה עד להזנת כל נקודות הנתונים. לחץ על סיום.בצע את אותם שלבים כדי להזין נקודות נתונים נוגדן חד שבטי. לחץ על תרופה חדשה Combo.Select תרופות ונוגדנים חד שבטיים. בחר יחס קבוע.לחץ על אישור. הקלד את השם. הקלד את הקיצור. הקלד את יחס הנוגדנים המונוקלוני של התרופה. הזן מינון נתונים 1. הקש Enter.The התוכנית תחשב באופן אוטומטי את המינונים של נוגדן חד שבטי 8B6 ו משולבת. הזן ערך FA של נתונים 1.הקש Enter.Repeat על שלב זה עד להזנת כל נקודות הנתונים. לחץ על סיום.לאחר מכן, לחץ על צור דוח.בחר נוגדן תרופה ונוגדן חד שבטי ולאחר מכן לחץ על אישור. בחר משולב ולאחר מכן לחץ על אישור. בחר כותרת עליונה, טבלת CI וטבלת סיכום ולאחר מכן לחץ על אישור. הקלד את שם הקובץ ואת הניתוח ולחץ על שמור כדי להפיק את הדוח. הדוח נפתח באופן אוטומטי בדפדפן האינטרנט המוגדר כברירת מחדל. הדוח מכיל מקטע טבלת סיכום הכולל פרמטרים כותרת, תאריך, שם סופי, הערה תיאור, m, Dm ו- r, מינון אפקטיבי 50 עבור כל סוכן המשמש כמונותרפיה או בשילוב, וטבלת האינדקס המשולבת עבור כל שילוב במינון האפקטיבי 50, 75, 90 ו- 95.A ערך אינדקס משולב פחות מ- 1 מציין סינרגיה. ערך השווה לערך אחד מציין תוספה. ערך הגדול מ- 1 מציין אנטגוניזם. להפשיר מטריצת קרום מרתף לילה על ידי טביעה את הבקבוקון בקרח במקרר 4 מעלות צלזיוס לפני השימוש. כל בגדי התרבות, או התקשורת שבאה במגע עם מדד קרום המרתף, צריכים להיות לפני כן. לקצור את התרבות IMR5. מעבירים את התאים לצינור חרוט 15 מ"ל וצנטריפוגה ב 300 גרם במשך 5 דקות. השלך את העל-טבעי. לשטוף תאים עם 15 מ"ל קרח קר PBS פעמיים. הכן מתלה תא עבור 5 מיליון תאים לכל mL ב PBS קר כקרח. העבר את ההשעיה התא לתוך microtube 1.5 מ"ל. בקבוקון מטריצת קרום מרתף מסתובב. הוסף 1 נפח של reagent מטריצת מטריצת קרום המרתף, מעורבב על ידי צינורות כדי להשיג השעיית תא של 2.5 מיליון תאים לכל mL.Keep המתלה התא על קרח. לגלח את האגף שבו הזריקה ת ייעשה. מערבבים תאים ולצייר בזהירות את ההשעיה התא לתוך מזרק 1 מ"ל רכוב עם מחט 21 גרם. בדוק כדי לוודא שאין בועות אוויר במזרק. לחטא את אזור החיסון של העכברים עם פתרון חיטוי. לסחוט בעדינות את עור העכבר על האגף בין האצבעות באתר ההזרקה. הכנס את המחט בדיוק לתוך כיסוי העור. אין למקם את המחט עמוק לתוך הרקמה כדי לבטח הזרקה תת עורית. להזריק 100 microliters של מתלים תא IMR5 תת עורית. לסובב את המזרק כדי למנוע התפשטות נוזל ולמשוך את המחט. לפקח על עכברים עבור משקל הגוף וצמיחה הגידול. למדוד את האורך והרוחב של הגידול עם קליבר. חשב את נפח הגידול באמצעות נוסחה זו. התחל טיפול כאשר גידולים הגיעו לנפח ממוצע של 50 עד 60 מ"מ

potentiation-anticancer-antibody-efficacy-antineoplastic-drugs

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

בדיקה בתפוקה גבוהה בזמן אמת פותחה כדי לזהות בו זמנית (1) אנטי-מיקרוביאלים חודרי תאים אוקריוטיים המכוונים לפתוגן חיידקי תוך תאי, ו-(2) להעריך ציטוטוקסיות של תאים אוקריוטיים. וריאציה על אותה טכנולוגיה שולבה לאחר מכן עם טכנולוגיית חלוקה דיגיטלית כדי לאפשר מחקרי סינרגיה קלים, ברזולוציה גבוהה, מינון-תגובה וסינרגיה דו-ממדית ותלת-ממדית.

תפוקה גבוהה, בזמן אמת, בדיקת Dual-readout של פעילות מיקרוביאלית תאיים Cytotoxicity Cell איקריוטיים

שילובים תרופתיים סינרגטי הם וממושכת לזהות את הנתונים באופן אמפירי. כאן נתאר שיטת זיהוי ואימות של מולקולות קטנות סינרגטי.

זיהוי תפוקה גבוהה של שילובים תרופתיים סינרגטי בשיטת חפיפה2

ב פרוטוקול זה, נתאר כיצד להפוך Loewe סמים additivity אינטראקציה מדידות של pairwise ואת שילובים תרופתיים-כיוונית.

שיטת באלכסון כדי למדוד סינרגיה בין כל מספר של סמים

סינרגיה מיקרוביאלית בדיקות משמש כדי להעריך את ההשפעה של האנטיביוטיקה שניים או יותר שמשמשים במשולב, מבוצעת בדרך כלל על ידי באחת משתי שיטות: המערך לוח שחמט או וזמינותו להרוג זמן. כאן, אנו מציגים ממוכנת, הזרקת דיו מדפסת בסיוע לוח שחמט מערך סינרגיה טכניקה, מחקר קלאסי סינרגיה זמן-להרוג.

סינרגיה מיקרוביאלית בדיקות על ידי באמצעות מדפסת הזרקת דיו לוח שחמט אוטומטיות מערך ושיטת להרוג זמן ידנית

מסכים גנטיים גדולים באורגניזמים מודל הובילו לזיהוי של אינטראקציות גנטיות שליליות. כאן, אנו מתארים זרימת עבודה של אינטגרציית נתונים באמצעות נתונים ממסכים גנטיים באורגניזמים לדוגמה כדי לתאר שילובי תרופות המכוונים לאינטראקציות קטלניות סינתטיות בסרטן.

זרימת עבודה של שילוב נתונים לזיהוי שילובי תרופות המכוונים לאינטראקציות קטלניות סינתטיות

מערכת בדיקת תפוקה גבוהה במבחנה פותחה להערכת תרופות נגד סרטן באמצעות אורגנוידים של גידול שמקורם במטופל (PDOs), בדומה לרקמות סרטן אך אינן מתאימות למערכות במבחנה עם 96-well ו-384-well.

תפוקה גבוהה במבחנה במבחנה באמצעות organoids גידול נגזר המטופל

פרוטוקול זה מציג טכניקה אוטומטית, מבוססת תמונה, בעלת תפוקה גבוהה לזיהוי תרכובות המווסתות הרג תאי סרטן שד בתיווך תאי הרג טבעיים בנוכחות נוגדן אנטי-HER-2 טיפולי.

בדיקת סינון תוכן גבוהה לזיהוי תרכובות ציטוטוקסיות תאיות תלויות נוגדנים

במאמר זה אנו מציגים שיטה לזיהוי תרכובות המווסתות את מנגנון ADCC, מנגנון חשוב להרג תאים סרטניים של נוגדנים אנטי-סרטניים. ההשפעה ציטוטוקסית של תאי NK נמדדת בספרואידים של תאי סרטן השד בנוכחות Trastuzumab. ניתוח תמונה מזהה רוצחים חיים ומתים ותאי מטרה בספרואידים.

כימות ציטוטוקסיות תאית תלוית נוגדנים במודל ספרואידי גידול: יישום לגילוי תרופות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לבדיקת ציטוטוקסיות תלויה בנוגדנים, בתיווך תאים (ADCC) באמצעות ערכת בדיקה ביולוגית של ADCC. שיטה זו מציעה כלי רב ערך להבהרת מנגנון ה-ADCC ולהערכת הפוטנציאל הטיפולי של נוגדנים באימונותרפיה של סרטן.

הערכת ציטוטוקסיות תלויה בנוגדנים, בתיווך תאים בתאי סרטן באמצעות מבחן ביולוגי של מדווח ציטוטוקסיות בתיווך תאים תלויי נוגדנים

הליך להשתלת תאי סרטן לבלב פלואורסצנטיים ירוקים המבטאים חלבון פלואורסצנטי (PANC-1 GFP) באופן אורתוטופי לתוך הלבלב של עכברי Balb-c Ola Hsd-Fox1nu כדי להעריך את התקדמות הגידול והגרורות מוצג כאן.

דגם פלורסנט Orthotopic עכבר של סרטן הלבלב

למדו להעריך סינרגיזם בין נוגדנים נגד סרטן לתרופות אנטי-ניאופלסטיות באמצעות משוואת אינדקס השילוב של צ'ו וטלאלי במודלים פרה-קליניים. שיטה זו מאפשרת זיהוי אינטראקציות סינרגטיות לייעול טיפולים בסרטן.

Potentiation של נוגדנים נגד סרטן יעילות על-ידי סמים Antineoplastic: זיהוי של נוגדן תרופתיים הסינרגטיות באמצעות המשוואה אינדקס שילוב (וידאו) | JoVE Journal

Potentiation של נוגדנים נגד סרטן יעילות על-ידי סמים Antineoplastic: זיהוי של נוגדן תרופתיים הסינרגטיות באמצעות המשוואה אינדקס שילוב

גלה סרטונים נוספים