Name: פחד משופרת מתח למידה, מודל מכרסמים חזקים של הפרעה פוסט-טראומטית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 49 s
Description: למד את שיטת למידת הפחד המשופרת מתח (SEFL) לחקר מנגנונים ביולוגיים של PTSD במכרסמים. מודל זה מאפשר ניתוח כמותי אמין של תגובות פחד בהתנהגות הקפאה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו מומן על ידי לאומי המכון של בריאות R01AA026530 (MSF), Staglin מרכז המוח ואת בריאות התנהגותית (MSF), NRSA-F32 MH10721201A1, NARSAD 26612 (AKR) של DGE אכ מ- 1650604 (SG).

1. נושאים
<ol><li>חולדות<ol>
<li>סדר חולדות מגיעים כאשר הם כ 90 ימים הישן ובו שכנו-יחיד בכלובים עכבר רגיל. הערה: דיור אחת, כיוון שלעתים דיור קבוצה מייצרת השתנות בשל האינטראקציות בין חיות בכלוב בבית, במיוחד בעקבות חשיפה ללחץ. SEFL הוכח בחולדות זכר ונקבה ב לונג-אוונס וחולדות Dawley ספראג, בחולדות צעיר בן 19 ימים7,10.</li>
		<li>באופן אקראי להקצות חיות לפחות שני תנאים: טראומה (n = 8), אין טראומה (n = 8) (ראו ראו. et al. 5 תנאים בקרה נוספים).</li>
	</ol>
</li>
	<li>עכברים<ol>
<li>סדר עכברים להגיע כאשר הם כ 60 ימים הישן ובו שכנו-יחיד בכלובים עכבר רגיל. יחיד-בית העכברים לפחות 4 שבועות לפני הטראומה, כמו גם לאורך כל משך הניסוי.</li>
		<li>באופן אקראי להקצות חיות לפחות שני תנאים: טראומה (n = 8), אין טראומה (n = 8).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. ציוד התקנה
<ol><li>להגדיר קבוצה אחת של פחד-מיזוג צ'יימברס לשמש בהקשר A, קבוצה שנייה של פחד-מיזוג צ'יימברס לשמש בהקשר B (ראה טבלת חומרים). למקם כל חדר הפחד-מיזוג בתוך תא attenuating-קול כדי למנוע חדירה של רעש מבחוץ (ראה טבלת חומרים).<ol>
<li>ודא כי שיטת מאיר התאים עם האור הנראה (כגון אור הלבן תקורה) נוכח הצ'יימברס הגשה בהקשר של (ראה טבלת חומרים).</li>
		<li>להבטיח כי פתרונות שונים זמינים לנקות את החדרים בין כל חיה לספק ריחות שונים אחד (למשל., ניקוי פתרון ו- 1% חומצה אצטית מדוללת). הערה: זה קריטי כי ריחות הנוצרים על-ידי חיה להיות בוטלו11.</li>
		<li>מקום מוסיף פלסטיק ההקשר B כדי להבדיל את הפריסה הפנימית של שני ההקשרים. מומלץ להוסיף משולש שחור פרספקס. לחלופין, להשתמש סדין פלסטיק לבן כדי ליצור קיר מעוקל האחורי (ראה טבלת חומרים).</li>
		<li>מניחים רשת רצפת בפחד כל מיזוג קאמרית למסירה footshock, באמצעות תבנית רשת שונים של הקשר כל להבדיל קומה מרקם בין הקשרים (ראה טבלת חומרים). הערה: דפוסים ברורים מספיק רשת לכלול רשתות שטוח (ברים כל מסודרים מישור אופקי בודד), התנודד רשתות (ברים מסודרים שני מטוסים ההיסט האופקי), לסירוגין רשתות (ברים מסודרים במישור אופקי בודד אבל שונות קטרים).</li>
		<li>במקום מחבתות מתכת נקייה מתחת בכל קומה רשת כדי לאסוף את הגללים. ריח סירים עם הפתרון ניקוי (ראה טבלת חומרים).</li>
	</ol>
</li>
	<li>לספק תזמון מדויק footshock המסירה משרעת בכל הקשר.<ol>
<li>לחבר של מחולל זעזועים, מערבל מסוגלת לגרום 1 mA או זעזועים משרעת נמוכה בכל קומה רשת למסירה footshock (ראה טבלה חומרים). הערה: גנרטורים הלם של scramblers צריך להיות ממוקם מחוץ הצליל attenuating קאמרית, עם הכבלים המחברים את הגנרטורים ואת מערבל הקומות רשת באמצעות פתחי הצליל attenuating קאמרית. זה ימנע נזק בשל לעיסה, ניקוי פתרון, וכו '.</li>
		<li>השתמש multimeter כדי לבדוק את הזרם שנשלחה על-ידי הלם על-ידי הצבת כל בדיקה על הבר שונים של רשת רצפת ולאשר משרעת הלם הרצוי מופק (ראה טבלת חומרים).</li>
		<li>ודא כי שיטה לשליטה את התזמון ואת משרעת של הלם משלוח (למשל, תוכנות מחשב) זמין (ראה טבלת חומרים).</li>
	</ol>
</li>
	<li>ודא כי שיטת הקלטת וידאו כל חיה במהלך כל מפגש ניסיוני זמין (ראה טבלת חומרים). הערה: זה יהיה הכרחי להקליט 1) כאשר התאים מוארים על ידי האור הנראה והן 2) כאשר התאים הינם כהה. האחרון יכול להתבצע גם באמצעות מצלמת ראיית לילה או מאירה ו הקלטה הצ'יימברס החשוך באמצעות אור אינפרא-אדום או אינפרא אדום.</li>
	<li>ודא כי שיטה ייחודית של הובלת בעלי חיים מן ביבר ההקשר ב' זמין עוד להבדיל בין שני ההקשרים. הערה: בעוד שיטות כמו אמבטיה פלסטיק שחור (38 x 30 x 24 ס מ) מחולק ארבעה תאים או כלובים נקי ריק כבר השתמשו בהצלחה, כל קופסה תחבורה אחרים יהיה מובדל מן הכלוב הבית יכול לשמש.</li>
</ol>3. SEFL נוהל חולדות ועכברים
<ol><li>להתמודד עם מכרסמים כל מדי יום על-ידי בעדינות להוציאם ממעגל homecage כל 60-90 שניות לפחות 7 ימים לפני תחילת ההליך SEFL.</li>
	<li>1 יום של ההליך SEFL, במקום נושאים רקע A, איפה הם יקבלו הלחץ טראומטי.<ol>
<li>לשדך את ההקשר של ערכה אחת של רשת רצפת (למשל., שטוח רשתות), להאיר את החדרים עם האור הנראה.</li>
		<li>השתמש multimeter כדי לבדוק את הזרם שנשלחה על-ידי הלם על-ידי הצבת כל בדיקה על הבר שונים של רשת רצפת ולאשר משרעת הלם הרצוי הוא מיוצר. הערה: נזק או קורוזיה של הסורגים יכול לגרום במשלוח הלם חלש או לא אחידה. נוזלים כולל שתן לגעת הרשת לאורך הקיר עלולה להשפיע לרעה גם הלם משלוח.</li>
		<li>לנקות את החדר קירות ודלתות, לרסס את הסירים מתחת לרצפות רשת עם פתרון אחד (למשל., מדולל ניקוי פתרון). הערה: זה נחוץ למנוע ריחות מהחיות הקודם.</li>
		<li>תחבורה חיות מכל ביבר לחדר ניסיוני בכלובים שלהם הביתה הניח על העגלה בעלת המקום בנפרד לתוך חדרי מיזוג פחד. רק להחזיר את אחד עגול שווה של חיות (שנקבע על ידי המספר של פחד מיזוג צ'יימברס) לחדר ניסוי בכל פעם. הערה: כדי להימנע מבלבל בשל סדר או תזמון, כל סיבוב צריך להכיל חיות הטראומה והן ללא תנאים טראומה.</li>
		<li>לניסויים עכברוש, השתמש מחולל זעזועים scramblers כדי לספק footshocks 1-s, 1-mA 15 באופן אקראי הציג מעל 90 דקות (ממוצע של ISI = 6 דקות) דרך סורגי רשת התאים המכיל נושאים במצב טראומה. לחשוף את הפקדים טראומה אין כדי באותו ההקשר במשך 90 דקות ללא משלוח הלם.</li>
		<li>לניסויים העכבר, השתמש מחולל זעזועים scramblers כדי לספק footshocks 1-s, 1-mA 10 באקראי הציג מעל 60 דקות (ממוצע של ISI = 6 דקות) לאורך הקומות רשת של התאים המכיל נושאים במצב טראומה. לחשוף את הפקדים טראומה אין כדי באותו ההקשר עבור 60 דקות ללא משלוח הלם.</li>
		<li>לאחר 90 דקות (עכבר ניסויים) או 60 דקות (עכבר ניסויים), לחזור כל בעלי החיים homecages שלהם ולחזור מיד ביבר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>ביום 2 של ההליך SEFL, להעריך את הפחד להקשר טראומה במידת הצורך.<ol>
<li>להגדיר את הקשר A כפי שנעשה ב- 1 יום.</li>
		<li>תחבורה החיות לחדר ניסוי בכלובים שלהם הביתה כמו על 1 יום.</li>
		<li>מקום חיות בהקשר A 8 דקות ללא זעזועים משלוח ווידאו לתעד את ההתנהגות במהלך כל ההפעלה.</li>
		<li>לאחר 8 דקות, לחזור כל בעלי החיים homecages שלהם ולחזור מיד ביבר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>יום 3 של ההליך SEFL, לחשוף את כל הנושאים את הלחץ מתון ההקשר ב'... הערה: הליך זה יכולים להתרחש בכל מקום מ- 24 שעות עד 90 ימים לאחר הלחץ טראומטי9.<ol>
<li>לשדך את ההקשר B קבוצה שונה של רשת רצפת לבין אלו להשתמש בהקשר A (למשל, מתחלפים או מעד רשת רצפת), שחור או לבן משולש מעוקל מוסיף פרספקס. נדלקת התאים עם האור הנראה; למרות, אור אינפרא-אדום או אינפרא אדום ניתן להשתמש לפי הצורך.</li>
		<li>השתמש multimeter כדי לבדוק את הזרם שנשלחה על-ידי הלם על-ידי הצבת כל בדיקה על הבר שונים של רשת רצפת ולאשר משרעת הלם הרצוי הוא מיוצר. השתמש multimeter כדי לבדוק את הזרם שנשלחה על-ידי הלם על-ידי הצבת כל בדיקה על הבר שונים של רשת רצפת ולאשר משרעת הלם הרצוי הוא מיוצר. הערה: נזק או קורוזיה של הסורגים יכול לגרום במשלוח הלם חלש או לא אחידה. נוזלים כולל שתן לגעת הרשת לאורך הקיר עלולה להשפיע לרעה גם הלם משלוח.</li>
		<li>לנקות את החדרים, לרסס את הסירים מתחת לרצפות רשת עם הפתרון לא רגיל בהקשר A (למשל., 1% חומצת חומץ).</li>
		<li>תחבורה חיות מכל ביבר לחדר ניסיוני בשיטת נבדל בשיטת משמש בהקשר של (למשל, אמבטיה פלסטיק שחור) ולמקם אותם בנפרד לתוך פחד מיזוג צ'יימברס. רק להחזיר את אחד. הסיבוב שווה של חיות לחדר ניסוי במועד (שנקבע על ידי המספר של פחד מיזוג צ'יימברס).</li>
		<li>לחשוף את כל החיות הלחץ מתון (יפורט בהמשך), הקלטת וידאו קפוא, פעילות במהלך ההפעלה.<ol>
<li>לאחר תקופה 180-s בסיסית, לספק יחידה 1-s, 1-mA footshock (עכברים) או של יחיד 2-s, 1-mA footshock (עכברים) כל בעלי החיים. הערה: ודא כי במהלך תקופת 180-s בסיסית הקפאה לא יעלה על 5%12.</li>
			<li>להסיר את כל החיות 30 שניות לאחר הלידה הלם ולחזור מיד ביבר.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>ביום הרביעי של ההליך SEFL, בדוק את הפחד ההקשר הלחץ מתון.<ol>
<li>להגדיר את הקשר B כפי שנעשה היום 3.</li>
		<li>תחבורה חיות מכל ביבר לחדר ניסיוני בעוד באותה ההעברה כפי שנעשה היום 3.</li>
		<li>המקום חיות ההקשר ב' 8 דקות ללא זעזועים משלוח ווידאו פלילי קופא לאורך המפגש.</li>
		<li>להסיר את כל החיות לאחר 8 דקות ולחזור מיד ביבר.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. ניתוח נתונים
<ol><li>מדד הפחד במהלך המפגשים ניסיוני מוקלט באמצעות קפוא, מוגדרים כמו חוסר תנועה כל פרט זה הנדרש עבור הנשימה. הערה: קיפאון הוא הבקיע בדייקנות מפליאה על ידי מלך השערים אדם עיוור, אך ישנם מספר תוכניות אוטומטיות המבצעות טוב. עם זאת, כל המערכות אוטומטיות חייב להיות המכויל משקיף האנושי להיות מדויק13.<ol>
<li>ניקוד קפוא בעבודת יד, יש נסיינית עיוור תנאים ניסיוני מתבונן הנושא כל 4 שניות לאורך כל תקופת זמן של ריבית3. ב כל תצפית, לסווג את הנושא "הקפאה" או "לא הקפאה". להשוות את מספר התצפיות מקפיא המספר הכולל של תצפיות כדי לקבוע על הקפאת אחוז הזמן המושקע.</li>
		<li>לשימוש ניתוח וידאו אוטומטית כדי להבקיע הקפאה, תחילה ודא כי התוצאות של ניתוח וידאו אוטומטית להתאים התוצאות המתקבלות מן הניקוד יד, כמו ניקוד קופא באופן משמעותי שונה מניתוח אוטומטי יכול לייצר תוצאות לא מדויקות. הערה: חולדה או עכבר לא היה שזיעזע צריך להראות קפוא בין 0 ל- 5%, ואילו ערכים גבוהים יותר מציע המסכן וכיול של הציוד</li>
	</ol>
</li>
	<li>השתמש באחת מהשיטות שתוארו לעיל כדי למדוד את הפחד במהלך פרקי זמן של עניין (יפורט בהמשך).<ol>
<li>למדוד את הפחד רקע טראומה כמו אחוז הזמן קפוא על פני המושב כולו 8-מין מבחן ביום 2.</li>
		<li>למדוד הכללה של פחד מן ההקשר טראומה להקשר הלחץ מתון כמו אחוז הזמן קופא בתקופה 3-מין בסיסית הקשר B-3 יום לפני הלידה הלם. הערה: עבור SEFL, חשוב להבדיל בין ההקשרים מספיק טוב, כך שלא קיים הכללה משמעותי.</li>
		<li>מדד הפחד מיד לאחר ההלם על יום 3 אחוז משך הזמן בילה קפוא במהלך תקופת 30-s שאחרי ההלם.</li>
		<li>למדוד את הפחד ההקשר הלחץ מתון זמן מבוזבז אחוז ברחבי המושב כולו 8-מין מבחן ביום הרביעי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>למדוד תגובתיות הלם על-ידי הסכום, או מהירות, תנועה במהלך תקופת 3-s במהלך, מייד לאחר ההלם על יום 3. הערה: ANOVAs מומלץ עבור כל ניתוח נתונים, כמו קבוצות נוספות (למשל., תרופות לטיפול) ניתן להוסיף לפי הצורך.</li>
</ol>

<ol><li>Bremner, J. D., Krystal, J. H., Southwick, S. M., Charney, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+neuroanatomical+correlates+of+the+effects+of+stress+on+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Traumatic+Stress%22%5BJournal%5D)">Functional neuroanatomical correlates of the effects of stress on memory.</a> Journal of Traumatic Stress. 8 (4), 527-553 (1995).</li>
<li>Dykman, R. A., Ackerman, P. T., Newton, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Posttraumatic+stress+disorder%3A+a+sensitization+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Integrative+Physiological+and+Behavioral+Science%22%5BJournal%5D)">Posttraumatic stress disorder: a sensitization reaction.</a> Integrative Physiological and Behavioral Science. 32 (1), 9-18 (1997).</li>
<li>Fanselow, M. S., Bolles, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naloxone+and+shock-elicited+freezing+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+and+Physiological+Psychology%22%5BJournal%5D)">Naloxone and shock-elicited freezing in the rat.</a> Journal of Comparative and Physiological Psychology. 93 (4), 736-744 (1979).</li>
<li>Fanselow, M. S. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0166223684802532">What is Conditioned Fear?</a> Trends in Neurosciences. 7, 460-462 (1984).</li>
<li>Rau, V., DeCola, J. P., Fanselow, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-induced+enhancement+of+fear+learning%3A+an+animal+model+of+posttraumatic+stress+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">Stress-induced enhancement of fear learning: an animal model of posttraumatic stress disorder.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 29 (8), 1207-1223 (2005).</li>
<li>Perusini, J. N., Fanselow, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurobehavioral+perspectives+on+the+distinction+between+fear+and+anxiety%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+and+Memory%22%5BJournal%5D)">Neurobehavioral perspectives on the distinction between fear and anxiety.</a> Learning and Memory. 22 (9), 417-425 (2015).</li>
<li>Poulos, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitization+of+fear+learning+to+mild+unconditional+stimuli+in+male+and+female+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Sensitization of fear learning to mild unconditional stimuli in male and female rats.</a> Behavioral Neuroscience. 129 (1), 62-67 (2015).</li>
<li>Perusini, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+Expression+of+Fear+Sensitization+Caused+by+Acute+Traumatic+Stress%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Induction and Expression of Fear Sensitization Caused by Acute Traumatic Stress.</a> Neuropsychopharmacology. 41 (1), 45-57 (2016).</li>
<li>Rau, V., Fanselow, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+a+stressor+produces+a+long+lasting+enhancement+of+fear+learning+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stress%22%5BJournal%5D)">Exposure to a stressor produces a long lasting enhancement of fear learning in rats.</a> Stress. 12 (2), 125-133 (2009).</li>
<li>Poulos, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amnesia+for+early+life+stress+does+not+preclude+the+adult+development+of+posttraumatic+stress+disorder+symptoms+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biological+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Amnesia for early life stress does not preclude the adult development of posttraumatic stress disorder symptoms in rats.</a> Biological Psychiatry. 76 (4), 306-314 (2014).</li>
<li>Fanselow, M. S., Sigmundi, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Species-specific+danger+signals%2C+endogenous+opioid+analgesia%2C+and+defensive+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+Psychology%3A+Animal+Behavior+Processes%22%5BJournal%5D)">Species-specific danger signals, endogenous opioid analgesia, and defensive behavior.</a> Journal of Experimental Psychology: Animal Behavior Processes. 12 (3), 301-309 (1986).</li>
<li>Jacobs, N. S., Cushman, J. D., Fanselow, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+accurate+measurement+of+fear+memory+in+Pavlovian+conditioning%3A+Resolving+the+baseline+issue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">The accurate measurement of fear memory in Pavlovian conditioning: Resolving the baseline issue.</a> Journal of Neuroscience Methods. 190 (2), 235-239 (2010).</li>
<li>Anagnostaras, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+assessment+of+pavlovian+conditioned+freezing+and+shock+reactivity+in+mice+using+the+video+freeze+system%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Automated assessment of pavlovian conditioned freezing and shock reactivity in mice using the video freeze system.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. , (2010).</li>
<li>Long, V. A., Fanselow, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-enhanced+fear+learning+in+rats+is+resistant+to+the+effects+of+immediate+massed+extinction%5BTitle%5D)+AND+%22Stress%22%5BJournal%5D)">Stress-enhanced fear learning in rats is resistant to the effects of immediate massed extinction.</a> Stress. 15 (6), 627-636 (2012).</li>
<li>Craske, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+inhibitory+learning+during+exposure+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Behaviour+Research+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Optimizing inhibitory learning during exposure therapy.</a> Behaviour Research and Therapy. 46 (1), 5-27 (2008).</li>
<li>Paylor, R., Tracy, R., Wehner, J., Rudy, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DBA%2F2+and+C57BL%2F6+mice+differ+in+contextual+fear+but+not+auditory+fear+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">DBA/2 and C57BL/6 mice differ in contextual fear but not auditory fear conditioning.</a> Behavioral Neuroscience. 108 (4), 810-817 (1994).</li>
<li>Graham, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1983-32882009000200015">Strain and sex differences in fear conditioning: 22 kHz ultrasonic vocalizations and freezing in rats.</a> Pyschology and Neuroscience. 2 (2), 219-225 (2009).</li>
</ol>

ד ר Fanselow הוא חבר מועצת המנהלים המייסדות של מעבדות Neurovation.

SEFL הוא מודל התנהגותי חזקים של PTSD זה יכול להיות recapitulated אצל חולדות ועכברים והוא יכול לשמש כדי לחקור את התגובות פחד sensitized המאפיינות PTSD. בעקבות לחץ טראומטי, מכרסמים להראות בתגובת פחד מוגבר בהקשר שונה במובהק רק לאחר שההקשר מזווג עם מתון יותר מלחיץ משרת כתזכורת חוויה טראומטית הקודם. בעקבות לחץ טראומטי מכרסמים באופן לא מפתיע מראים רמות גבוהות של פחד כאשר חזר להקשר טראומטית ביום 2, המציין את הזיכרון הזה טראומטית הוא שלם (איור 1). עם זאת, הם מראים פחד מינימלי הכללה מההקשר טראומטית ל...

הפחד הוא התנהגות קריטיים להישרדות, המאפשרת ליחידים לזהות ולהגיב לאיומים. עם זאת, תגובות פחד מוגזם יכול לתרום להתפתחות של הפרעות פסיכיאטריות כגון הפרעה פוסט-טראומטית (PTSD). מאפיין אחד של PTSD הוא מענה מוגזם לחצים מתון, במיוחד אלה מזכירים את הטראומה המקורית, ונטייה לפתח פחדים חדשים1,2. במעבדה, פחד נמדדת לעתים קרובות באמצעות הקפאת התנהגות, אשר הוא אינדקס ethologically חוקי ואמין של פחד3,של בני אדם, מכרסמים-4. אמנם ידוע כי PTSD כולל dysregulation של הבעת פחד משופרת ופחד, יש חוסר חזקים מודלים חייתיים של PTSD אמינה לוכד תגובה זו פחד מוגבר לגירוי יחסית לא מזיק.
פרוטוקול זה מספק את המתודולוגיה מפורט נדרשים לערוך ניסויים למידה (SEFL) משופרת מתח פחד, אמין וחזק פרה מודל של PTSD, חולדות ועכברים. SEFL מנצל היבטי פבלוביות פחד מיזוג, ובכל זאת הוא מייצר תגובות נפרדות מיזוג פחד רגיל, recapitulates את הפחד משופרת טראומטית הבאים שנצפתה PTSD מטופלים5,6. במודל זה, חוויה מאוד מלחיצה יחיד (המכונה כאן כמו טראומה) שמוביל שנמשך שינויים התנהגותיים, כולל פחד קיצוני של גירויים שמשויכת לאירוע טראומטי, חרדה מוגברת, גדל להבהיל תגובתיות, שונה glucocorticoid איתות7,8. התכונה העיקרית של SEFL היא כי החשיפה הבאה יותר מלחיץ טראומטי (סדרת זעזועים unsignaled) בהקשר ברורים, חיות להציג מענה פחד מוגזם מתון יותר מלחיץ (למשל., הלם יחיד) בהקשר אחר. חשוב לציין, האפקט SEFL ואינו ההכללה מההקשר טראומה בהקשר הרומן או רגישות מוגברת הלם5. במודל שלנו, אנו מנצלים בכוונה הליכים להפחית כל הכללה כדי הקשר חדשניים כגון תחבורה, ריח, רשת רצפת דפוס פעולה ברור. לכן, בניגוד מיזוג פחד רגיל, SEFL הוא תהליך לשיוך שמוביל הלמידה פחד חדש שקשור פרופורציה רמזים סביבתיים הקשורים ישירות עם החוויה הטראומטית. עבודה נרחב מראה כי טיפול 90 דקות אחד המכיל 15 לא צפויים זעזועים חולדות (או מושב בודד 60 דקות, המכיל 10 לא צפויים זעזועים בעכברים) המניע של רגישות עולה לטווח ארוך של פחד מיזוג יחד עם חרדה מוגברת, dysregulation בקצב השעון הביולוגי של corticosterone הבזליים. לעומת זאת, טרום חשיפה יחיד footshock אינו מייצר SEFL9. יתר על כן, SEFL יכול להיות מנוצל באופן אמין אצל חולדות ועכברים.
ומכאן, המודל SEFL של PTSD הוא כלי רב עוצמה עבור בודק את המנגנונים הביולוגיים המעורבים פתופסיולוגיה PTSD. באמצעות SEFL, חוקרים יכולים לבחון כיצד חשיפה לטראומה יכולות להשפיע על הלמידה פחד העתיד. בנוסף, מודל זה יכול להיות שימושי עבור חוקרים מנגנונים תאית ומולקולרית ספציפי זה עשויים להיות מעורבים בוויסות הבעת פחד משופרת כפי שנצפה ב- PTSD.

<table><tbody><tr><td>תא מיזוג פחד לרצפות בפרופיל נמוך</td><td>Med Associates Inc.</td><td>VFC-008-LP</td><td>תא מיזוג פחד</td></tr><tr><td>תא הנחתת קול</td> Med <td>Associates Inc.</td><td>NIR-022SD</td><td>תא מושך קול למניעת חדירת רעש חיצוני</td></tr><tr><td>NIR/White Light Control Box</td><td>Med Associates Inc.</td>תיבת בקרת אור <td>NIR-100VR</td><td>המסוגלת לספק אור לבן וקרוב לאינפרא אדום</td></tr><tr><td>NIR VFC Light Box</td><td>Med Associates Inc.</td><td>NIR-100L2</td><td>תאורת בית עילית לבנה</td></tr><tr><td>Windex&nbsp; מנקה זכוכית מקורי</td><td>Windex</td><td></td><td>פתרון לניקוי וריח תאי מיזוג פחד בין בעלי חיים</td></tr><tr><td>חומצה אצטית</td><td>פישר מדעי</td><td>A38-212</td><td>פתרון לניקוי וריח תאי מיזוג פחד בין בעלי חיים</td></tr><tr><td>A-Frame Chamber Insert</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-008-IRT</td><td>תוספת משולשת פרספקס שחורה להבדיל בין פריסה פנימית של הקשרים A ו-B</td></tr><tr><td>הכנסת קיר מעוקל</td><td>Med Associates Inc.</td><td>VFC-008-CWI</td><td>יריעת פלסטיק לבנה להבדיל בין פריסה פנימית של הקשרים A ו-B</td></tr><tr><td>רצפת רשת הקשרית בפרופיל נמוך עם מוטות רשת בגודל 1/8 אינץ' עבור Mouse</td><td>Med Associates Inc.</td><td>VFC-005A</td><td>רצפת רשת שטוחה לעכברים</td></tr><tr><td>רצפת רשת הקשרית בפרופיל נמוך עם מוטות רשת מתחלפים 1/8 אינץ' ו-3/16 אינץ' עכבר</td><td>Med Associates Inc.</td><td>VFC-005-S</td><td>רצפת רשת מדורגת לעכברים</td></tr><tr><td>רצפת רשת הקשרית בפרופיל נמוך עם מוטות רשת מדורגים בגודל 1/8 אינץ' עבור Mouse</td><td>Med Associates Inc.</td><td>VFC-005A-L</td><td>רצפת רשת מתחלפת לעכברים</td></tr><tr><td>רצפת רשת הקשרית בפרופיל נמוך עם מוטות רשת בגודל 3/16 אינץ' עבור Rat</td><td>Med Associates Inc.</td><td>VFC-005</td><td>רצפת רשת שטוחה לחולדות</td></tr><tr><td>רצפת רשת הקשרית בפרופיל נמוך עם מוטות רשת מתחלפים 3/16 אינץ' ו-3/8 אינץ' Med</td><td>Associates Inc.</td><td>VFC-005-L</td><td>רצפת רשת מתחלפת לחולדות</td></tr><tr><td>רצפת רשת הקשרית בפרופיל נמוך עם מוטות רשת מדורגים בגודל 3/16 אינץ' עבור Rat</td><td>Med Associates Inc.</td><td>VFC-005-S</td><td>רצפת רשת מדורגת לחולדות</td></tr><tr><td>מחבתות מתכת</td><td>Med Associates Inc.</td><td></td><td>מחבתות מתכת לתפיסת גללים מתחת לרצפות הרשת</td></tr><tr><td>Standalone Aversive Stimulator/Scrambler</td><td>Med Associates Inc.</td><td>ENV-414S</td><td>מחולל זעזועים וסקרמבלר לאספקת זעזועים</td></tr><tr><td>מולטימטר</td><td>Fluke</td><td>87-5</td><td>כלי למדידת משרעת זעזוע כף הרגל</td></tr><tr><td>VideoFreeze Software</td><td>Med Associates Inc.</td><td>תוכנת SOF-843</td><td>VideoFreeze לשליטה במסירת זעזועים</td></tr><tr><td>מצלמת וידאו מונוכרום במהירות גבוהה Firewire</td> Med <td>Associates Inc.</td><td>VID-CAM-MONO-4</td><td>מצלמת וידאו המסוגלת להקליט באור אינפרא אדום קרוב</td></tr></tbody></table>

פחד משופרת מתח למידה, מודל מכרסמים חזקים של הפרעה פוסט-טראומטית

Stress-Enhanced Fear Learning, a Robust Rodent Model of Post-Traumatic Stress Disorder

פחד התנהגויות חשובים להישרדות, אך רמות גבוהות פרופורציה של פחד יכול להגביר את הפגיעות לפיתוח הפרעות פסיכיאטריות כגון הפרעה פוסט-טראומטית (PTSD). כדי להבין את המנגנונים הביולוגיים של פחד dysregulation של PTSD, חשוב להתחיל עם מודל בעלי חיים חוקית של ההפרעה. פרוטוקול זה מתאר את המתודולוגיה נדרשים לערוך ניסויים למידה (SEFL) משופרת מתח פחד, דגם פרה של PTSD, חולדות ועכברים. SEFL פותחה כדי לסכם PTSD, כולל רגישות עולה לטווח ארוך של לימוד פחד הנגרם על ידי הלחץ חריפה היבטים קריטיים. SEFL שימושים היבטי פבלוביות פחד מיזוג אבל מייצר תגובת פחד sensitized ברור וחזק בהרבה תגובות פחד מותנה נורמלי. הניתוח טראומה כרוך הצבת מכרסם תא מיזוג וניהול 15 זעזועים unsignaled באופן אקראי מבוזר מעל 90 דקות (לניסויים עכברוש; לניסויים העכבר, 10 unsignaled משמשים זעזועים בצורה אקראית מבוזרת מעל 60 דקות) . ביום 2, מכרסמים ממוקמים ברומן מיזוג ההקשר שבו הם מקבלים הלם יחיד; לאחר מכן, ביום 3 הם להציב בחזרה באותו ההקשר גם על יום 2, נבדקו שינויים קפואים רמות. מכרסמים שקיבלו בעבר התצוגה טראומה משופרת רמות של הקפאת ביום הבדיקה בהשוואה לאלו שלא התקבל ללא זעזועים ביום הראשון. לפיכך, עם מודל זה, חוויה מאוד מלחיצה יחיד (הטראומה) מייצר פחד קיצוני של הגירויים שמשויכת לאירוע טראומטי.

תוצאות הבדיקה ההקשר טראומה ביום 2 מוצגים באיור1. בעלי חיים במצב טראומה הראו רמות גבוהות באופן משמעותי להקפאת בהקשר A בהשוואה הפקדים טראומה אין, המציינת את רכישת פחד להקשר טראומה [חולדות: F(1,17) = 23.58, p &lt; 0.01; עכברים: F(1,14) = 666.50, p &lt; 0.0001]. הקפאה במהלך תקופת בסיסית לפני ההלם יחיד בהקשר הרומן על 3 יום מוצג באיור2. הטראומה והן חיות טראומה לא הראו רמות מקפיא מינימלי ולא נבדלים אחד את השני [חולדות:...

כאן נתאר את המתודולוגיה מפורט נדרשים לערוך ניסויים למידה (SEFL) משופרת מתח פחד, דגם פרה של הפרעה פוסט-טראומטית, חולדות ועכברים. המודל מנצל היבטים של פחד פבלוביות מיזוג קפוא כמו אינדקס של פחד משופרת בחולדות.

Fear behaviors are important for survival, but disproportionately high levels of fear can increase the vulnerability for developing psychiatric disorders ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום מדעי המוח ההתנהגותיים, כגון כיצד להבין טוב יותר את המנגנונים הביולוגיים הבסיסיים של PTSD. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא חזקה, אמינה, כמותית, ו ניתן לבצעה במספר מינים. התחל על ידי הקמת קבוצה אחת של תאי התניה פחד לשמש הקשר A, וקבוצה שנייה של תאים מיזוג פחד לשמש הקשר B.Place כל תא מיזוג פחד בתוך תא הפחתת קול כדי למנוע חדירה של רעש חיצוני.לאחר מכן מקם רצפות רשת בכל תא מיזוג פחד לאספקת זעזועים ברגל, תוך שימוש בתבנית רשת שונה עבור כל הקשר כדי להבדיל בין מרקם הרצפה לבין ההקשרים. לאחר מכן, מקם הוספות משולשות plexiglass שחורות בהקשר B כדי להבדיל בין הפריסה הפנימית של שני ההקשרים. לנגב את הקירות והדלתות בתא לרסס את המחבתות מתחת לרצפות הרשת עם פתרון ניקוי מדולל.לאחר ניקוי רצפת הרשת, חבר גנרטור הלם מערבל מסוגל לספק הלם משרעת 1 מיליאמפר או נמוך יותר לכל רצפת רשת עבור אספקת הלם ברגל. לבסוף, השתמש multimeter כדי לבדוק את הזרם מועבר על ידי מחולל ההלם על ידי הצבת כל בדיקה על סרגל אחר של רצפת הרשת, ומאשר כי משרעת ההלם הרצוי מיוצר. ביום הראשון, הגדר הקשר א' עם רצפות רשת ואור נראה.ודא שהריבוי-מטר מחובר לסורגים שונים כדי לאשר את משרעת ההלם הרצויה. מעבירים בעלי חיים מהוויווריום לחדר הניסויים בכלובי הבית שלהם מונחים על עגלה, ומניחים בנפרד לתוך ארבעת תאי מיזוג הפחד. לניסויים בעכבר, השתמש במחולל ההלם ובערבלים כדי לספק 10 שניות, זעזועים של רגל אחת מיליאמפר שהוצגו באופן אקראי במשך 60 דקות דרך רצפות הרשת של התאים המכילים נבדקים מותנה טראומה.לניסויי עכברושים, השתמש במחולל ההלם ובערבלים כדי לספק 15 שניות, זעזועים של רגל אחת מיליאמפר שהוצגו באופן אקראי במשך 90 דקות דרך פסי הרשת של התאים המכילים נושאים מותנים בטראומה. לאחר 90 דקות עבור החולדה, או 60 דקות לניסויי העכבר, להחזיר את כל בעלי החיים לכלובים הביתיים שלהם מיד לחזור vivarium. ביום השני, הקימו הקשר א' והעבירו בעלי חיים לחדר הניסויים כפי שנעשה ביום הראשון.מקם בעלי חיים בהקשר A במשך שמונה דקות, ללא מסירת הלם, ווידאו להקליט את ההתנהגות במהלך הפגישה כולה. לאחר שמונה דקות, להחזיר את כל בעלי החיים לכלובי הבית שלהם מיד לחזור vivarium. ביום השלישי, הגדר הקשר B עם קבוצה שונה של רצפות רשת מאלה המשמשות בהקשר A ומוסיף פלקסיגלס מעוקל משולש או לבן.השתמש באור אינפרא-אדום או כמעט אינפרא-אדום במידת הצורך כדי להאיר את התאים, ולבדוק את משרעת ההלם עם multimeter. לנגב את התאים לרסס את המחבתות מתחת לרצפות הרשת עם הפתרון לא בשימוש בהקשר A.Next, להעביר בעלי חיים מן vivarium לחדר הניסוי באמבט פלסטיק שחור, ולמקום אותם בנפרד לתוך תאי מיזוג פחד. לאחר תקופת בסיס של 180 שניות, ספק שנייה אחת, הלם רגל מיליאמפר אחד לחולדות, או הלם רגל אחד של שתי שניות, רגל אחת מיליאמפר לעכברים, לכל בעלי החיים.לאחר מכן, להסיר את כל בעלי החיים 30 שניות לאחר משלוח הלם ומיד לחזור vivarium. ביום הרביעי של ההליך, להגדיר הקשר B כפי שנעשה ביום השלישי. להעביר בעלי חיים מהוויווריום לחדר הניסויים באותה תחבורה כפי שנעשה ביום השלישי.מקם בעלי חיים בהקשר B במשך שמונה דקות ללא מסירת הלם, והקלטת וידאו הקפאה לאורך כל הפגישה. לבסוף, להסיר את כל בעלי החיים לאחר שמונה דקות מיד לחזור vivarium. התוצאות מצביעות על כך שבעלי חיים במצב טראומה הראו רמות גבוהות משמעותית של הקפאה בהקשר א' בהשוואה לפקדי הטראומה ללא טראומה, מה שמצביע על רכישת פחד להקשר הטראומה.גם הטראומה וגם חיות הטראומה לא הראו רמות הקפאה מינימליות שלא היו שונות זו מזו. יתר על כן, חיות הטראומה הראו תגובתיות הלם נמוכה יותר בהשוואה ללא בקרות טראומה, וחיות טראומה הראו קפאה גדולה יותר בהשוואה ללא בקרות טראומה, מה שמצביע על כך שחשיפה ללחץ הטראומטי הגבירה את הפחד מיד לאחר גורם הלחץ הקל. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו מבוך פלוס מוגבה, שדה פתוח ותיבה כהה בהירה כדי לענות על שאלות נוספות כמו כיצד טראומה משפיעה על פנוטיפים דמויי חרדה.

stress-enhanced-fear-learning-robust-rodent-model-post-traumatic

Research

JoVE Journal

Behavior

התנהגות

אנו מתארים מודל עכברים של הפרעת פוסט טראומטית (PTSD) החושפת את השינויים המתמשכים בתפקוד נוירואנדוקריניים ותגובה המאוחרת לטווח ארוך, המוגזמת פחד, אופייניים לחולי PTSD. מודל החיה ושיטות שתוארו כאן הם שימושיים עבור correlating סמנים ביולוגיים בגרעיני מוח, שהם מכאניים אך לא ניתן למדוד בחולים, עם סמנים ביולוגיים בתאי דם לבן בפריפריה, שיכול.

סמנים ביולוגיים במודל חיה לחשיפה קושרת עצבית, המטולוגית, והתנהגות של PTSD

מאמר זה מתאר את השימוש בלחץ חברתי פורץ תושב כרוני כהפרדיגמה ethologically רלוונטית לדיכאון שלאחר לידה והחרדה במודל מניק מכרסמים.

שימוש בלחץ חברתי כרוני לדיכאון לאחר לידה בדגם מניקות מכרסמים

פרוטוקול המתח הקל הכרוני הבלתי צפוי (UCMS) הוא שיטה מתוקפת לחקר שינויים התנהגותיים ופיזיולוגיים הקשורים למתח כרוני ותסמיני דיכאון. שמונה שבועות של הטלת פרוטוקול UCMS גורמים לשינויים התנהגותיים ולתוצאות בריאותיות גרועות במכרסמים משני המינים.

פרוטוקול מתח מתון כרוני בלתי צפוי לתסמיני דיכאון ייזום, שינויים התנהגותיים ותוצאות בריאותיות שליליות במכרסמים

מבחן בטיחות האיום החברתי מאפשר הערכה סימולטנית של התפתחות הימנעות חברתית כמדד ללמידה מותנית מרתיעה ויכולת אפליה בין איום חברתי לבטיחות, שתיהן משמשות לזיהוי פרטים רגישים ללחץ ועמידים ללחץ בתוך קבוצה אחת של עכברים זכרים מובסים חברתית כרונית.

מבחן בטיחות איום חברתי חושף פנוטיפים הקשורים ללחץ פסיכו-סוציאלי

פרוטוקול זה מתאר מודל לחץ קל כרוני בלתי צפוי (CUMS) לדיכאון המבוסס על תיאוריה רפואית מונגולית, יחד עם שיטות לאימות מבחנים התנהגותיים.

לחץ כרוני בלתי צפוי קל בחולדות מבוסס על התרופה המונגולית

כדי לחקור התנהגויות טיסה בהקשר של פחד, אנו מציגים פרוטוקול התניה שונה של פחד. פרוטוקול זה מבטיח שעכברים יפגינו באופן עקבי התנהגויות טיסה במהלך הצגת רמזים בהתניה של פחד.

התניה שונה של פחד לגרימת התנהגויות טיסה בעכברים

פרוטוקול זה מפרט כיצד לבצע לחץ חברתי כרוני של 10 ימים בעכברים זכרים בגיל ההתבגרות המוקדמת כדי לייצר הימנעות חברתית ארוכת טווח בבגרות ביותר מ-60% מהעכברים.

מתח תבוסה חברתית כרוני בעכברים זכרים בגיל ההתבגרות המוקדמת

על ידי שילוב ארבעה גורמי לחץ חברתיים יומיומיים, המחקר הנוכחי מתאר מודל לחץ חברתי משולב מרובה (MISS) להפרעות פסיכיאטריות בעכברי C57BL/6J נקבות. לאחר עשרה ימים של חשיפה חוזרת ונשנית ל-MISS, העכברים פיתחו פנוטיפים דמויי דיכאון וחרדה, ובכך סיפקו מודל טבעי מבוסס אטיולוגיה לחקר הפרעות פסיכיאטריות אצל נבדקים.

מודל מתח חברתי משולב מרובה להפרעות פסיכיאטריות בעכברי C57BL/6J נקבות

בניסוי הבא אנו מתארים פרוטוקול לאוויר פחד עקבות בעכברים. סוג זה של זיכרון אסוציאטיבי כולל תקופת עקבות שמפרידה בין הגירוי הניטרלי והגירוי הבלתי מותנה.

עקוב אחר פחד אוויר בעכברים

מודלים של עכברים הפכו פופולריים יותר ויותר במחקרים של מדעי המוח ההתנהגותיים.  ככל שהמודלים מתקדמים, חשוב לפתח מדדים התנהגותיים רגישים ספציפיים לעכבר.  פרוטוקול זה מתאר את משימת הגעה למטריצת הפסטה, שהיא משימה מוטורית מיומנת לשימוש במודלים של שבץ מוחי.

ימב שימוש מפצה והתנהגות הערכה של למידה מיומנות מוטורית בעקבות הסנסורית Cortex פגיעה במודל של עכברים של שבץ איסכמי

למד את שיטת למידת הפחד המשופרת מתח (SEFL) לחקר מנגנונים ביולוגיים של PTSD במכרסמים. מודל זה מאפשר ניתוח כמותי אמין של תגובות פחד בהתנהגות הקפאה.

פחד משופרת מתח למידה, מודל מכרסמים חזקים של הפרעה פוסט-טראומטית

גלה סרטונים נוספים