Name: לשעבר Vivo הדמיה של סידן לתא ספציפי איתות על הסינפסה התלת-צדדי של הסרעפת העכבר (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-04T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: למד הדמיית סידן חיה בסינפסה הנוירומוסקולרית של עכברים תוך שימוש בעכברים טרנסגניים המביעים מחווני סידן. שיטה זו מאפשרת לחקור דינמיקת תקשורת תאית בתגובה לגירוי עצבי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה בכספים של המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) GM103554, GM110767 אל (T.W.G.) ומן המרכז הלאומי לחקר משאבי 5P20RR018751, את GM103513 8P 20 הלאומית המכון של כללי למדעי הרפואה (ל G.W.H.).

גידול בעלי חיים, ניסויים בוצעו על פי מוסדות לאומיים של בריאות המדריך עבור הטיפול, השימוש של חיות מעבדה, את IACUC-האוניברסיטה של נבאדה.
1. הכנת דיאפרגמות ועצבים הסרעפת מן העכברים הטרנסגניים
<ol><li>לרכוש העכברים הטרנסגניים לנוקלאוטידים גנוטיפ אלו עכברים. הערה: תחל מפורטים בדף "מידע" עבור כל אחד אלו עכברים.<ol>
<li>מתרבים עכבר 3 ל 6-בן חודש לבטא עותק אחד של המתאים הטרנסגניים/דפיקה-ב Cre-הנהג אלל ועותקים אפס של אלל GCaMP3/6 מותנה עם עכבר השניה, באותו הגיל לבטא אחד או שני עותקים של תנאי GCaMP3 / 6 אלל ועותקים אפס של אלל נהג-Cre.</li>
		<li>גנוטיפ הגורים ומארק אלה שיש להם Cre והן מותנה אללים GCaMP3/6 – אלה ייקרא מעתה העכברים הטרנסגניים-כפול (למשל, Myf5-Cre, GCaMP3 מותנה)6. הערה: בדרך זו, כל הנתונים תפיק מן עכברים המבטאים עותק אחד של Cre והן מותנה אללים GCaMP3/6. הדבר חשוב במיוחד בעת הוספת בעכברים המוטנטים אחרים (למשל, הסתרה) הצלבים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>מתי העכברים הטרנסגניים-כפול של הגיל המתאים (למשל, כמחנכת יום 0 או 5 [P0 או P5] או למבוגרים), המתת חסד העכברים על-ידי עריפת ראשו אותם עם מספריים (עבור עכברים צעיר יותר P10) או על-ידי הצבתם תא שאיפה איזופלוריין — כאשר הם כבר לא מגיבים צובט את הזנב עם זוג מלקחיים, הם מוכנים להקריב.</li>
	<li>להקריב את החיה על ידי עריפת ראש עם זוג מספריים.</li>
	<li>מדור באופן רוחבי על פני החיה כולו מתחת הכבד, מעל הלב והריאות במספריים iridectomy.</li>
	<li>לנתח הכבד, הלב, הריאות, וישתדלו לשמור על אורך עצב הסרעפת היא ארוכה דיה להיגרר אלקטרודה היניקה (קרי, 1-2 ס מ). הערה: ניתן לזהות את עצב הסרעפת השמאלית כמו פיסת רקמה שמזין את החלק המדיאלי של הסרעפת השמאלית לבן. זה בטח לא לחתוך בעת הסרת הריאות. עצב הסרעפת נכון פועל בתוך פיסת fascia כי גם מכיל את הווריד הנבוב העליון הוא דק, לבן יותר הווריד הנבוב. יחד, הם שניהם לחדור הסרעפת נכון המדיאלי.</li>
	<li>נוסף להסיר את בית החזה של עמוד השדרה, למעט הרכס דק סביב הסרעפת.</li>
	<li>הכנס צינור microfuge עם פתרון קרבס-חיזוק עם µg 1/mL 594-αBTX 10 דקות בחושך על הסרעפת ועל המדגם עצב הסרעפת. הערה: בריכוז זה של 594-αBTX תוויות ACh קולטנים (AChRs) בלי לחסום את תפקידם (תצפית אישי).</li>
</ol>2. גירוי ורישום של פוטנציאל פעולה שריר
<ol><li>באמצעות סיכות minutien, לשתק את הסרעפת על-ידי הצמדת אותם על צלחת 6 ס מ מצופה סיליקון ג'ל מבודד, מלא ~ 8 מ"ל של פתרון קרבס-צלצולים יותר מחומצן ולמקם אותו לבמה מיקרוסקופ. Perfuse את הסרעפת עם פתרון קרבס-חיזוק נוסף (8 מ לדקה) למשך 30 דקות. הערה: זה ומעכלת את לא מאוגד 594-αBTX, וכן equilibrates את הרקמה לאחר ניתוח.</li>
	<li>הפוך אלקטרודה היניקה לפי שיטות הוקמה7.<ol>
<li>בהגדלה X 4, שימוש micromanipulator, זוז האלקטרודה היניקה עצב הסרעפת השמאלית ולהחיל שאיבה על-ידי הוצאת הקנה של מזרק 5-mL מחובר לאורך צינור שאליו מחובר האלקטרודה היניקה. הערה: כאשר בהצלחה נמשכים אל האלקטרודה היניקה, עצב הסרעפת הוא מתוח. להפעיל את ממריץ ולעורר את הסרעפת עצב על ידי flipping את ידני לעבור 1 x.</li>
		<li>ודא כי הסרעפת חוזים בתגובה הגירוי 1-הרץ על ידי חזותית בודק אותה עם תאורה brightfield. אם לא, להתאים את המתח על-ידי הפעלת הידית מתח מצטבר להשגת דופק supramaximal, אשר ניתנת לאימות כמקורית על-ידי בדיקה ויזואלית של התכווצות שרירים. אם עדיין לא גלוי, לכבות את העצב עם המזרק ולנסות לצייר אותה שוב על-ידי החלת שאיבה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>כבה את זלוף ולהוסיף את מעכב BHC שרירים ספציפיים צולבות הקישור חוטים שרירן6 או ממוצע-conotoxin8 אנטגוניסט ערוץ נתרן ממותגת מתח ריכוז סופי של 100 מיקרומטר.<ol>
<li>100 מיקרומטר BHC, פיפטה µL 4 של מניות 200 מ מ של דימתיל סולפוקסיד ולחצו predilute זה ב 1 מ"ל של פתרון קרבס-צלצול.</li>
		<li>הסר 1 מ"ל של פתרון קרבס-הצלצול של המנה.</li>
		<li>הוסף את BHC prediluted, למנה. הערה: predilution זו מסייעת למנוע את אינדוקציה על ידי דימתיל סולפוקסיד מדולל של היענות פלורסנט לא ארעי בתאים המבטאים GCaMP3.</li>
		<li>המתן 30 דקות ולאחר מכן, הפעל את זלוף בפתרון קרבס-צלצול טריים למשך עוד 20-30 דקות.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להכין את האלקטרודה הקלטה.<ol>
<li>להשתמש בכפפות, מניחים על filamented זכוכית בורוסיליקט בקוטר חיצוני (OD) של 1 מ מ, קוטר פנימי (ID) של 0.4 מ מ פולר micropipette והדק את החוגה כדי. תהדק את זה למקומו. סגור את הדלת פולר.</li>
		<li>שימוש של פולר P-97, לתכנת את ההגדרה הבאה: חום-900, ברגע האחרון 120, מהירות ב-75, הפעם 250, הלחץ 500, וכן אין לולאות נוספים. הערה: Resistance (R) נמדד באמצעות פקדי תוכנה של המגבר: התוכנה רכישת נתונים מאשר התנגדות על ידי פתירת הנוסחה V = IR. הבקר תוכנה עובר זרם ידוע (I) (בדרך כלל 1 nA) דרך האלקטרודה, מודד את השינוי במתח (V), ובכך מאפשר לנו למציאת המהירות</li>
		<li>עבור דיאפרגמות עובריים, ודא כי ההתנגדות היא ליד 60 MΩ, ובשביל דיאפרגמות בוגרים, 10-20 MΩ. לטעון את האלקטרודה הקלטה עם 3 מ' אשלגן כלורי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>בהגדלה X 10, להוריד את האלקטרודה לתוך שריר, באמצעות micromanipulator השנייה מעברו האחר של הבמה כמו אלקטרודה מגרה.</li>
	<li>באמצעות תוכנה רכישת נתונים אלקטרופיזיולוגיות, המתן עד פוטנציאל ממברנה המנוחה משתנה מ- 0 ל-65 mV או בהמשך.</li>
	<li>לעורר 1 הרץ ואמת הנוכחות של פוטנציאלי פעולה השריר על-ידי בדיקת פוטנציאל גדול זה מוצגים להחטיא צנוע (פוטנציאל המתנשא מעל 0 mV כשזה מתחיל ב-65 mV או בהמשך). אל תבלבל החפץ גירוי עם פוטנציאל הפעולה. הערה: פוטנציאל הם באופן משמעותי יותר משך (~ 5 ms) מאשר גירוי חפצים.</li>
</ol>3. הדמיה של זריחה המדגם
<ol><li>בהגדלה X 20, לאתר הלהקה endplate במרכז של השריר על-ידי חיפוש 594-αBTX – שכותרתו ' NMJs תחת עירור אור ירוק/צהוב (550 ננומטר). לעבור עירור אור כחול (470 ננומטר) התמונה Ca2 + תגובות שריר, נוירון מוטורי או תאי שוואן.</li>
	<li>אם רצונך בכך, להגדיר המפצל תמונה עם מסננים bandpass ומסנן קצה חד ודיקרואיק זוהר עבור ההדמיה כפולה באורך הגל.</li>
	<li>על מנת לחשב פלורסצנטיות מקסימלי (Fmax) הוצגו על ידי רקמת GCaMP3/6-הבעת ', להוסיף µL 12 3 מ' אשלגן כלורי (אשלגן) ההכנות של הסרעפת6.<ol>
<li>לבצע ניסויים עם הבר בהירות על הבר טבלת בדיקת מידע מוגדר כ- 110% של רמת שבו הרקמה GCaMP3/6-הבעת ' מוצגים רוויה בהגדלה X 20, מבלי binning בתגובה אשלגן כלורי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>שיא 20 מסגרות לשנייה לא תפספס שאירועים מהר.</li>
	<li>לעורר עם s 1-45 של 20-40 הרץ של גירוי עצבי על-ידי אספקת רכבת של דחפים באמצעות האלקטרודה יניקה או להוסיף אגוניסטים תרופתי על ידי יישום אמבט או זלוף ולאסוף דינמי פלורסנט Ca2 + תגובות בסוג של תא אחד יחד עם האות NMJ 594 סטטי-αBTX. הערה: אם רקמות ספציפיות אדום או מרחיקת אדום GECI או GEVI עכברים הופכים לזמינים לשימוש ב- NMJ, הם יכולים לשמש כדי לאסוף שני אותות דינמי המשקף את שני הרכיבים הסלולר ב- NMJ.</li>
	<li>כאשר הניסויים הדמיה או אלקטרופיזיולוגיות גמורים כי היה להשיג את התוצאות הרצויות, perfuse המים דרך הקווים זלוף ולמצוץ מים 2 x - x 3 דרך האלקטרודה שאיבה על מנת להבטיח כי מלחי לא לבנות.</li>
</ol>4. ייצוא וניתוח של הנתונים באינטנסיביות סטיית תקן מפה של קרינה פלואורסצנטית (SDiu16)
<ol><li>רצפי תמונות הרשומה רשמה 16 סיביות TIFF ערימות ולטעון אותן למערכת הרצויה הדמיה נתונים ניתוח לניתוח.</li>
	<li>בתפריט קובץ 8 קבוצו של התוכנה, בחר תמונה הערימה עניין ולחץ כדי לטעון.<ol>
<li>ברגע הוידאו נטען, יסרוק הזמן כדי לזהות סעיף זה אין פעילות פלורסנט הסלולר. הערה: אזור זה ישמש כדי ליצור מדגם רקע.</li>
		<li>החזק את מקש Shift ולחץ כדי לצייר אזור התיבה שנוספה (ROI) באזור מזוהה אזור הדגימה רקע.</li>
		<li>לאחר יצירת תיבת, לחצו על הרווח כדי ליצור חלקת רקע פעילות שינוי.</li>
		<li>המעקב באמצעות לחצן העכבר הימני ובחר באפשרות מגוון להציג את האפשרות לזרוק רועי כטקסט כדי להפוך את האיתור כקובץ טקסט קואורדינטות xy.</li>
	</ol>
</li>
	<li>חוזרת הוידאו של הריבית, לסרוק שוב כדי לזהות את אזור הזמן שבו מתרחשת הפעילות של ריבית.<ol>
<li>באמצעות הכפתור האמצעי של העכבר, בחר באזור הזמן בתיבה זמן צהוב.</li>
		<li>לחץ לחיצה ימנית על הסרטון ובחר מחסנית OPS ולאחר מכן אפשרות למפות Stat 5. הערה: פעולה זו תיצור מפת סטיית תקן (SD מפה) בחלון השמאלי.</li>
		<li>לחץ על המפה SD ולאחר מכן הקש ] מפתח x 19 כדי להחיל את המפה חום הצבע המתאים.</li>
		<li>המפה SD באמצעות לחצן העכבר הימני ובחר STM טען ושמור, אשר יציג את האפשרות לשמור את ה-stm כמו tiff לשמור את המפה SD.</li>
		<li>אז, הקש [ מפתח x 19 לשוב אל מפת צבע בגווני אפור.</li>
		<li>הקש C ולאחר מכן D כדי להעלות את צפיפות כלי מיפוי. באמצעות לחצן העכבר השמאלי ואת לחצן העכבר במרכז, להתאים את סף כדי לכלול כל פעילות פלורסנט שמוצג במפת ה-SD.</li>
		<li>הקש C כדי לסגור את הכלים צפיפות תוך שמירה על הגדרות הסף.</li>
		<li>המפה SD באמצעות לחצן העכבר הימני ובחר חלקיקי ה-STM , ולאחר מכן למצוא את PTCLS. הערה: זה יהיה לזהות תאים בודדים לבטא פעילות פלורסנט.</li>
		<li>לחץ לחיצה ימנית על המפה SD פעם נוספת ובחר ליצור חלקיקים ROIs. הערה: זה להרכיב את התאים שנבחרו על הוידאו המקורי של עניין.</li>
		<li>תוך החזקת מקש shift לחוץ, לחץ לחיצה ימנית על כל אחד של החלקיק מזוהה עכשיו ROIs בסרטון המקורי.</li>
		<li>בחר סמן רועי ו- Int מידה ב- ROI. הערה: פעולה זו תיצור חלקות פעילויות פלורסנט נפרדים עבור כל רועי מזוהה בסרטון של ריבית. אלה יכולים להיות נשמר על-ידי לחיצה ימנית על כל אחד מאלו, בחירת Assorted, ואחריו לזרוק רועי כטקסט.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לקבלת נתונים היסטוריים ההיגיון שבבסיס פעולות אלה, נא עיין קובץ קוד מקור9.</li>
</ol>

<ol><li>Sanes, J. R., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+vertebrate+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Development of the vertebrate neuromuscular junction.</a> Annual Review of Neuroscience. 22, 389-442 (1999).</li>
<li>Darabid, H., Perez-Gonzalez, A. P., Robitaille, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+synaptogenesis%3A+coordinating+partners+with+multiple+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular synaptogenesis: coordinating partners with multiple functions.</a> Nature Reviews Neuroscience. 15 (11), 703-718 (2014).</li>
<li>Fatt, P., Katz, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+analysis+of+the+end-plate+potential+recorded+with+an+intracellular+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">An analysis of the end-plate potential recorded with an intracellular electrode.</a> Journal of Physiology. 115 (3), 320-370 (1951).</li>
<li>Todd, K. J., Robitaille, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purinergic+modulation+of+synaptic+signalling+at+the+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Archive%22%5BJournal%5D)">Purinergic modulation of synaptic signalling at the neuromuscular junction.</a> Pflugers Archive. 452 (5), 608-614 (2006).</li>
<li>Hennig, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Genetically+Encoded+Calcium+Indicators+%28GECIs%29+Combined+with+Advanced+Motion+Tracking+Techniques+to+Examine+the+Behavior+of+Neurons+and+Glia+in+the+Enteric+Nervous+System+of+the+Intact+Murine+Colon%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+of+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Use of Genetically Encoded Calcium Indicators (GECIs) Combined with Advanced Motion Tracking Techniques to Examine the Behavior of Neurons and Glia in the Enteric Nervous System of the Intact Murine Colon.</a> Frontiers of Cellular Neuroscience. 9, 436(2015).</li>
<li>Heredia, D. J., Schubert, D., Maligireddy, S., Hennig, G. W., Gould, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Striated+Muscle-Specific+Myosin-Blocking+Drug+for+the+Study+of+Neuromuscular+Physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+of+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A Novel Striated Muscle-Specific Myosin-Blocking Drug for the Study of Neuromuscular Physiology.</a> Frontiers of Cellular Neuroscience. 10, 276(2016).</li>
<li>Johnson, B. R., Hauptman, S. A., Bonow, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+of+a+simple+suction+electrode+for+extracellular+recording+and+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Undergraduate+Neuroscience+Education%22%5BJournal%5D)">Construction of a simple suction electrode for extracellular recording and stimulation.</a> Journal of Undergraduate Neuroscience Education. 6 (1), A21-A26 (2007).</li>
<li>Hong, S. J., Chang, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+geographutoxin+II+%28mu-conotoxin%29+for+the+study+of+neuromuscular+transmission+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Use of geographutoxin II (mu-conotoxin) for the study of neuromuscular transmission in mouse.</a> British Journal of Pharmacology. 97 (3), 934-940 (1989).</li>
<li>Heredia, D. J., Feng, C. Y., Hennig, G. W., Renden, R. B., Gould, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity-induced+Ca2%2B+signaling+in+perisynaptic+Schwann+cells+of+the+early+postnatal+mouse+is+mediated+by+P2Y1+receptors+and+regulates+muscle+fatigue%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Activity-induced Ca2+ signaling in perisynaptic Schwann cells of the early postnatal mouse is mediated by P2Y1 receptors and regulates muscle fatigue.</a> Elife. 7, e30839(2018).</li>
<li>Cho, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+GCaMP-R+Family+of+Genetically+Encoded+Ratiometric+Calcium+Indicators%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">The GCaMP-R Family of Genetically Encoded Ratiometric Calcium Indicators.</a> ACS Chemical Biology. 12 (4), 1066-1074 (2017).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

כאן אנו מספקים דוגמאות של מדידת Ca2 + תגובות תאים מסוימים ברקמת עצב-שריר שלם, שימוש בעכברים לבטא GECI. על מנת לבצע בהצלחה ניסויים אלה, זה הכרחי כדי לא לפצוע את עצב הסרעפת בזמן. לשיקוף Ca2 + תגובות בתאי שוואן בעוצמה נמוך או גבוה (כלומר, 20 X או 60 X), יש צורך להשתמש BHC או ממוצע-conotoxin חסום לתנועה. עבור צריכת חשמל נמוכה הדמיה של Ca2 + תגובות בתאי השריר, זה ניתן למדוד אותם בהיעדרו של תרופות אלו, וכך מאפשר רכישה סימולטני של שריר Ca2 + ארעי עוצמות ושרירים אורך שינויים ב...

NMJ, כמו כל הסינפסות, מורכב משלושה אלמנטים: מסוף presynaptic נגזר תא עצב, תא נוירון postsynaptic/אפקטור, ותא perisynaptic גליה1,2. בעוד ההיבטים הבסיסיים של ההעברה הסינאפסית היו שהראו-זה סינפסה3, היבטים רבים של תהליך זה נשאר לא ידוע, בחלקו בשל הביטוי של מולקולות אותו על ידי אלמנטים הסלולר ברורים של סינפסה הזה. לדוגמה, קולטני פורין אדנין נוקלאוטיד ATP והן אצטילכולין (ACh), אשר פורסם במשותף על ידי מנוע נוירונים ב- NMJ חוליות, באים לידי ביטוי על ידי שריר, תאי שוואן מוטורי לגלוקוז, ובכך שמסבך את הפירוש של כל השפעה תפקודית שהופעל על ידי אלה חומרים (למשל, משדר השחרור או תגובה, יצירת כח השריר)4. יתר על כן, למרות NMJ מרכיבי ה-tripartite פשוטים בהשוואה, לדוגמה, נוירונים במערכת העצבים המרכזית אשר לעתים קרובות להפגין תשומות סינפטית מרובים, אם המנוע נוירונים, תאי שריר או תאי שוואן להשתנות בתגובה לגירויים מבוסס על מהותי שלהם הטרוגניות (למשל, נגזרת עובריים, סוג של סיבים, מורפולוגיה) אינו ברור. על מנת לטפל בכל הבעיות הללו, זה יהיה יתרון לאתר בו זמנית את התגובה של תאים רבים בתוך אחד רכיב סינפטית, כמו גם מסלול, באותו הזמן, תגובה כזו גם שאר הרכיבים נפרדים. אסטרטגיות המקובלת באמצעות צבעם למדוד סידן איתות לא יכול להשיג שתי מטרות אלה, בגלל צבע שהוחל אמבטיה הוא נלקח על ידי סוגי תאים מרובים לאחר היישום לרקמות, צבע טעון intracellularly יכול לשמש רק לדמיין גדודים נפרדים או קטן של תאים. כאן, ניצול העכברים הטרנסגניים לבטא GECIs תוכנן כדי למדוד סידן לתא ספציפי איתות, יחד עם הדמיה ספציפית, כלי תוכנה5, אנחנו מדגימים הראשון של אלה שתי מטרות הכוללת ונדון כיצד התוספת של חדש כלים הטרנסגניים יעזור להשיג השני. טכניקה זו יהיה שימושי עבור מי שמעוניין מעקב אחר הדינמיקה סידן או אחרים הסלולר איתות האירועים נצפות דרך גן מקודד חיישנים אופטיים אוכלוסיות תאים מרובים בו-זמנית.

<table><tbody><tr><td>עכברי Myf5-Cre</td><td>Jax</td><td>#007893</td><td>מניע ביטוי תאי שריר כבר ב-E136</sup</td></tr><tr><td>>Wnt1-Cre עכברי</td><td>Jax</td><td>#003829</td><td>מניע ביטוי לתוך הכל&nbsp; תאי שוואן ב-E13 אך לא P209</sup</td></tr><tr><td>>Sox10-Cre עכברי</td><td>Jax</td><td>#025807</td><td>מניע ביטוי תאי שוואן בגילאים מבוגרים יותר</td></tr><tr><td>עכברי GCaMP3 מותנים</td><td>Jax</td><td>#029043</td><td>מבטא GCaMP3 באופן ספציפי לתא</td></tr><tr><td>עכברי GCaMP6f מותנים</td><td>Jax</td><td>#024105</td><td>מבטא GCaMP6f באופן</td></tr> <tr><td>ספציפי לתאBHC (3-(N-butylethanimidoyl)-4-hydroxy-2H-chromen-2-one)</td><td>Hit2Lead</td><td>#5102862</td><td>חוסם מיוזין בשרירי השלד אך לא העברה עצבית6</sup</td></tr><tr><td>>CF594-&alpha;-BTX</td><td>Biotium</td><td>#00007</td><td>מסמן אשכולות קולטני אצטילכולין בפפטידים NMJ</td></tr><tr><td>&micro;-conotoxin GIIIb</td><td>Int'l</td><td>#CONO20-01000</td><td>חוסם Nav1.4 תעלות נתרן תלויות מתח8</td></tr><tr><td>סיליקון דיאלקטרי ג'ל; הידוע גם בשם דבקי Sylgard</td><td>Ellswoth</td> <td># Sil Dielec Gel .9KG&nbsp;</td><td>מאפשר קיבוע של הסרעפת על ידי פינים זעירים</td></tr><tr><td>פינים זעירים (קוטר 0.1 מ"מ)</td><td>Fine Science</td><td>Tools 26002-10</td><td>משתק דיאפרגמה על ג'ל סיליקון דיאלקטרי</td></tr><tr><td>Eclipse FN1 מיקרוסקופ זקוף&nbsp;</td><td>Nikon</td><td>MBA74100</td><td>מאפשר בימוי ותצפית על דגימה</td></tr><tr><td>פלטפורמת מיקרוסקופ קבועה בסיסית עם מתרגם מיקרוסקופ XY ידני&nbsp;</td><td>Autom8</td><td>MXMScr</td><td>מאפשר תנועה של דגימה</td></tr><tr><td>מיקרומניפולטור ידני&nbsp;</td><td>Narishige</td><td>M-152</td><td>מכיל אלקטרודות הקלטה וגירוי&nbsp;</td></tr><tr><td>מגבר מיקרואלקטרודה&nbsp;</td><td>התקנים מולקולריים</td>: <td>Axoclamp 900A</td><td>מאפשר אלקטרודה חדה, הקלטה אלקטרופיזיולוגית תוך-תאית</td></tr>, <tr><td>מערכת רכישת נתונים מיקרואלקטרודה עם רעש נמוך</td><td>, התקנים מולקולריים</td>, <td>Digidata 1550&nbsp;</td><td>מאפשר איסוף נתונים אלקטרופיזיולוגיים</td></tr><tr><td>מערכת ניתוח נתונים של מיקרואלקטרודות</td><td>מכשירים מולקולריים</td><td>PCLAMP 10 תקן</td><td>מבצע ניתוח נתונים אלקטרופיזיולוגיים</td></tr><tr><td>ממריץ גל מרובע</td><td>דשא</td><td>S48</td><td>מגרה עצב לעורר שרירים</td></tr><tr><td>יחידת בידוד גירוי</td><td>דשא</td><td>PSIU6</td><td>מפחית&nbsp; חפצי גירוי</td></tr><tr><td>חוטי בורוסיליקט, קוטר חיצוני 1.0 מ"מ, קוטר פנימי 0.5 מ"מ&nbsp;</td><td>Sutter</td><td>FG-GBF100-50-15</td><td>Impalas ומתעד פוטנציאל שרירים מעורר עצב חוטי</td></tr><tr><td>בורוסיליקט, קוטר חיצוני 1.5 מ"מ, קוטר פנימי 1.17 מ"מ&nbsp;</td><td>Sutter</td><td>BF150-117-15</td><td>מוארך ומשמש לאלקטרודה יניקה</td></tr><tr><td>חולץ מיקרופיפטה</td><td>Sutter</td><td>P-97&nbsp;</td><td>מושך ומכין אלקטרודות הקלטה</td></tr><tr><td>1200x1200 פיקסלים, מצלמת cMOS עם תאורה אחורית&nbsp;</td><td>Photometrics</td><td>Prime 95b</td><td>מצלמה רגישה המאפשרת הדמיה ברזולוציה גבוהה ובמהירות גבוהה</td></tr><tr><td>מקור אור</td><td>Lumencor</td><td>Spectra X</td><td>מספקת תאורה מנורות LED למניעת פלואורסצנטיות</td></tr><tr><td>&nbsp; יעדי טבילה במים פלואורסצנטיים מתוקנים באינסוף, W.D. 2 מ"מ&nbsp;</td><td>Nikon</td><td>CFI60</td><td>מספק מרחקי עבודה ארוכים להדמיה של דגימה</td></tr><tr><td>תאורת סיבים אופטיים עם מנורת הלוגן</td><td>Sumita</td><td>LS-DWL-N</td><td>מספק תאורה לתצפית בשדה בהיר</td></tr><tr><td>W-View מפצל תמונות תאומים&nbsp;</td><td>Hamamatsu</td><td>A12801-01</td><td>מקרין זוג אחד של תמונות באורך גל כפול המופרדות על ידי מצלמה דיכרואית למצלמה בודדת</td></tr><tr><td>מסנני פס פס יחיד&nbsp; (512/25-25 ו-630/92-25)&nbsp;</td><td>SemRock</td><td>FF01-512/25-25; FF01-630/92-25</td><td>מאפשר הדמיה כפולה</td></tr><tr><td>560 ננומטר מפצל קרן דיכרואי חד-קצה</td><td>Sem Rock</td><td>FF560-FDi01-25x36</td><td>מראה דיכרואית המפרידה בין אלומות אור כדי לאפשר הדמיה באורך גל כפול</td></tr><tr><td>מערכת רכישת נתוני הדמיה</td><td>Nikon</td><td>NIS Elements - MQS31000</td><td>מאפשרת רכישת נתוני הדמיה</td></tr><tr><td>מודול בקרת אורך גל</td><td>מודול MQS41220 של Nikon</td><td></td><td>לנתוני הדמיה acqusiition</td></tr><tr><td>מודול חומרה של מפצל פליטה&nbsp;</td><td>מודול Nikon</td><td>MQS41410</td><td>להדמיה של נתוני הדמיה</td></tr><tr><td>מערכת ניתוח נתוני הדמיה</td><td>NA</td><td>Volumetry 8D5, פיג'י</td><td>מאפשר ניתוח של עוצמת הקרינה ונתוני הדמיה אחרים</td></tr></tbody></table>

לשעבר vivo הדמיה של סידן לתא ספציפי איתות על הסינפסה התלת-צדדי של הסרעפת העכבר

Ex Vivo Imaging of Cell-specific Calcium Signaling at the Tripartite Synapse of the Mouse Diaphragm

ניתן לנטר את הפעילות החשמלית של תאי ברקמות בטכניקות אלקטרופיזיולוגיות, אך אלה הם בדרך כלל מוגבל לניתוח של תאים בודדים. מאז עלייה של תאיים סידן (Ca2 +) ציטוזול מתרחש לעיתים קרובות בגלל הפעילות החשמלית, או בתגובה מספר עצום של גירויים אחרים, תהליך זה יכול להיות במעקב על ידי ההדמיה של תאים נטען עם פלורסנט סידן רגיש צבענים.  עם זאת, קשה תמונה תגובה זו בסוג של תא בודד בתוך רקמת כל כי צבע אלה נתפסות על ידי כל סוגי תאים בתוך הרקמה. לעומת זאת, סידן מקודדים גנטית אינדיקטורים (GECIs) יכול לבוא לידי ביטוי על ידי סוג של תא בודד, לזרוח בתגובה לעליה של תאיים Ca2 +, וכך מאפשר ההדמיה של Ca2 + איתות של אוכלוסיות שלמות של סוגי תאים בודדים. כאן, אנו מיישמים את השימוש של GECIs GCaMP3/6 לצומת neuromuscular העכבר, תאי שוואן סינפסה התלת-צדדי בין מוטורי לגלוקוז, שרירי השלד מסוף/perisynaptic. נדגים את התועלת של טכניקה זו קלאסי שמחוץ רקמות ההכנות. שימוש של הפיצול אופטי, אנו מבצעים הדמיה כפולה באורך הגל של Ca דינמי2 + אותות ותווית סטטי של צומת עצב-שריר (NMJ) בגישה זה יכול להיות מותאם בקלות כדי לפקח על שני GECI תא ספציפי או מתח מקודדים גנטית אינדיקטורים (GEVI) בו זמנית. לבסוף, נדון את רוטינות המשמש ללכידה מפות מרחביות של עוצמת קרינה פלואורסצנטית. יחד, טכניקות אלו אופטי, מהונדס, אנליטית יכול להיות מועסק ללמוד את הפעילות הביולוגית של subpopulations תאים נפרדים ב- NMJ במגוון רחב של הקשרים.

מספר דוגמאות של שינויים בעוצמה פלורסצנטיות, מתווכת על-ידי עליות של תאיים Ca2 + בתוך התא מוגדרים סוגי NMJ, להראות את התועלת של גישה זו. תוצאות אלו מוצגים כמו זריחה המרחבי בעוצמה מפות, אשר מספקים את מיקומו של תאים מגיבה, כמו גם את עוצמת התגובות שלהם, ובכך מאפשר על ההערכה של כמה תאים מגיב ומגיב כמה כל תא מסוים גירוי. לדוגמה, כפי שמוצג באיור1, לקחנו סרטונים של ההיענויות2 + Ca אוכלוסיה של מסוף/perisynaptic שוואן תאים (TPSCs)-NMJs של הסרעפת של...

כאן אנו מציגים פרוטוקול סידן התמונה איתות באוכלוסיות של סוגי תאים בודדים באזור צומת עצב-שריר מאתר.

לשעבר Vivo הדמיה של סידן לתא ספציפי איתות על הסינפסה התלת-צדדי של הסרעפת העכבר

The electrical activity of cells in tissues can be monitored by electrophysiological techniques, but these are usually limited to the analysis of ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום neuromuscular, כגון התפקיד של סידן איתות בשריר או תאי שוואן בתגובה לגירוי עצבי. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שניתן לדמיין את ההפעלה של סוגי תאים ספציפיים בתגובה לגירוי עצבי. כדי להתחיל, להשיג עכברים מהו מהודרים, ו genotype אותם כמפורט בפרוטוקול הטקסט.בעקבות המתת חסד, חתך רוחבי על פני החיה כולה ממש מתחת לכבד וקצת מעל הלב והריאות עם מספריים iridectomy. לנתח את הכבד, הלב והריאות. הקפדה לשמור על אורך העצב הפוrenic כי הוא מספיק זמן כדי להיגרר לתוך אלקטרודה יניקה.עוד להסיר את כלוב הצלעות ואת עמוד החוליות, למעט הרכס הדק סביב הסרעפת. מניחים את הסרעפת ואת דגימת העצב הפרני בצינור microfuge עם פתרון קרבס-רינגר המכיל מיקרוגרם אחד למיליליטר של פלואורסצנטי שכותרתו אלפא bungarotoxin. אפשר את הדגימה דגירה בתסומה במשך 10 דקות בחושך.באמצעות סיכות minutien לשתק את הסרעפת על ידי הצמדת אותו על צלחת שישה סנטימטר מצופה ג'ל דיאלקטרי סיליקון ומלא כשמונה מיליליטר של פתרון קרבס-רינגר מחומצן. מניחים את המנה על במת המיקרוסקופ. לאחר מכן, לבלבל את הסרעפת עם פתרון קרבס-רינגר יותר בשמונה מיליליטר לדקה במשך 30 דקות.בהגדלה פי ארבעה, באמצעות מיקרומניפולטור, הזיזו את אלקטרודה היניקה מעל העצב הפרעוני השמאלי. החל את היניקה על ידי משיכת החבית של מזרק חמישה מיליליטר מחובר צינורות המחובר אל אלקטרודה היניקה. ודא כי הסרעפת מתכווצת בתגובה לגירוי הרץ אחד על ידי בדיקה ויזואלית זה עם תאורת ברייטפילד.אם לא, להתאים את המתח על ידי הפיכת כפתור המתח בהדרגה כדי להשיג דופק על-טבעי אשר ניתן לאמת על ידי בדיקה חזותית של התכווצות שרירים. אם עדיין לא נראה, לפוצץ את העצב עם המזרק ולנסות למשוך אותו שוב על ידי החלת יניקה. עכשיו, לכבות את זלבול להוסיף את מעכבי מיוסין ספציפי לשריר BHC או מתח מגודר נתרן ערוץ אנטגוניסט mu-conotoxin.הכן את BHC טרום דילול על ידי צינור ארבעה microliters של 200 מילימולאר מלאי BHC ב DMSO במיליליטר אחד של פתרון קרבס-רינגר. מוציאים מיליליטר אחד של תוסף קרבס-רינגר מהצלחת. לאחר מכן מוסיפים את BHC מדולל מראש לצלחת.לאחר 30 דקות, להפעיל את תדלוק של פתרון קרבס-רינגר טרי עוד 20 עד 30 דקות. לובש כפפות, להכין את האלקטרודה הקלטה על ידי הנחת זכוכית חוטית borosilicate עם קוטר חיצוני של מילימטר אחד קוטר פנימי של 0.4 מילימטרים לתוך מושך micropipette. הדק את המחוגים כדי להדק אותו למקומו ולסגור את דלת המוציא.לאחר מכן תכנת את המוציא כמתואר בפרוטוקול הטקסט. עבור דיאפרגמות עובריות, למדוד את ההתנגדות באמצעות פקדי תוכנה של המגבר. ודא שההתנגדות קרובה ל-60 מגה-הום ולסרעפות ישנות יותר, 10 עד 20 מגה-ם.עכשיו, לטעון את האלקטרודה הקלטה עם שלושה אשלגן כלורי דיוח. בהגדלה פי 10, מנמיכים את האלקטרודה לשריר באמצעות מיקרומניפולטור שני בצד הנגדי של הבמה כאלקטרודה מגרה. שימוש בתוכנה לרכישת נתונים אלקטרופיזיולוגיים ממתין עד שהממברנה המנוחה משתנה מאפס למינוס 65 מילי-וולט ומטה.לעורר בהרץ אחד ולאמת את נוכחותו של פוטנציאל פעולה שריר על ידי בדיקת פוטנציאל גדול המציג overshoot צנוע. אין לבלבל חפץ גירוי עם פוטנציאל פעולה. ב 20 פעמים הגדלה לאתר את רצועת צלחת הקצה במרכז השריר על ידי מחפש פלואורסצנטי שכותרתו אלפא bungarotoxin צמתים neuromuscular תחת העירור אור צהוב ירוק.עבור לגירוי אור כחול לתגובות סידן תמונה בשרירים, נוירון מוטורי, או תאים שוואן. בדוגמה זו GCaMP שלוש מתבטא בתאי שריר. אם תרצה, הגדר את מפצל התמונה עם מסנני מעבר פס ומסנן קצה יחיד דיכרואי להדמיית אורך הגל הכפול.בצעו ניסויים עם סרגל הבהירות על סרגל טבלת בדיקת המידע שנקבע ל-110% מהרמה שבה מחוון הסידן המקודד גנטית מבטא רוויה ברקמות בהגדלה פי 20 מבלי לבלום בתגובה לאשלגן כלורי. הקליטו במהירות של 20 פריימים לשנייה כדי לא לפספס אירועים מהירים. לעורר עם אחד עד 45 שניות של 20 עד 40 הרץ של גירוי עצבי על ידי אספקת רכבת של דחפים באמצעות אלקטרודה יניקה ולאסוף תגובות סידן פלואורסצנטי דינמי בתת סוג תא אחד יחד עם סטטי פלואורסצנטי שכותרתו אלפא bungarotoxin נוירומוסקולרי צומת אות.אגוניסטים תרופתיים ניתן להוסיף גם על ידי יישום אמבטיה או על ידי חיסון ואת התגובות סידן פלואורסצנטי דינמי ניתן לאסוף באותו אופן. כאשר ההדמיה או הניסויים האלקטרופיזיולוגיים הסתיימו מכיוון שהתוצאות הרצויות הושגו, מזיפים מים דרך קווי הזיוף ומוצצים מים פעמיים עד שלוש פעמים דרך אלקטרודה היניקה כדי להבטיח שמלחים לא יצטברו. מפה מרחבית של תגובות סידן תא שוואן גירוי עצבי פרוני של Wnt אחד GCaMP שלושה דיאפרגמת עכבר ביום שלאחר הלידה שבע להראות הגבלה לתאי שוואן parasynaptic מסוף בצומת neuromuscular.אותה דיאפרגמה תדמית לאחר תיוג עם פלואורסצנטי שכותרתו אלפא bungarotoxin, אשר קשרים כדי לאפשר קולטני אצטילכולין של צומת neuromuscular. אותה דיאפרגמה גם דימוי תחת תאורת ברייטפילד כדי להנחות אלקטרודה הקלטה לאזור הפוסט סינפטי של השריר על ידי צומת neuromuscular. מוצג כאן הוא תיחום מרחבי של תאים מקודדים בצבע או אזורים של עניין נלקח לניתוח של ארעי סידן בודדים.המפה המרחבית של תגובות סידן תא שריר של mth 5 GCaMP שלוש דיאפרגמת העכבר ב P ארבע לגירוי עצבי פרוני בנוכחות מעכבי מיוסין BHC מראה תגובה בכל האזור של כל תאי השריר הסרעפת. לעומת זאת, גירוי של אותה דיאפרגמה בנוכחות מו-קונוטוקסין גורם לתגובת סידן מוגבלת מבחינה מרחבית באזור המדיאלי של כל תאי השריר של הסרעפת התואמת את רצועת צלחת הקצה המועשרת של קולטן האצטילכולין. בעקבות הליך זה ניתן לבצע שיטות אחרות כגון אימונו-היסטוכימיה או אימונובלוט על מנת לענות על שאלות נוספות כגון, מהו הפרופיל המולקולרי של תאים המזוהים על ידי אלקטרופיזיולוגיה או הדמיית סידן?שיטה זו יכולה לספק תובנה על תגובות האוכלוסייה של תאי שוואן ותאי שריר לגירוי עצבי בעכברים יילודים נורמליים. זה יכול להיות מיושם גם על המחקר של עכברים מבוגרים או על המחקר של עכברים המבטאת מחלות נוירומוסקולריות הקשורות חלבונים.

ex-vivo-imaging-cell-specific-calcium-signaling-at-tripartite-synapse

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

מקור: } Heredia, D. J., et. al. הדמיה ex vivo של איתות סידן ספציפי לתא בסינפסה המשולשת של דיאפרגמת העכבר. J. Vis. exp. (2018)} } סרטון זה מדגים הדמיה פלואורסצנטית של דינמיקת סידן בצמתים עצביים-שריריים (NMJs) בעכבר טרנסגני המבטא מדדי סידן מקודדים גנטית. NJM מזוהה על ידי קולטני אצטילכולין מתויגים פלואורסצנטית בסרעפת עם העצב הפרני. מפצל תמונה משמש להמחשת אותות מרובים בו זמנית. גירוי חשמלי מועבר, ונרשם השינוי בקרינה ב-NMJ בתגובה לזרם הסידן.

הדמיה פלואורסצנטית של דינמיקת סידן בצמתים עצביים-שריריים בסרעפת של עכבר טרנסגני

מקור: Shannonhouse, J.,  et al. In vivo הדמיית סידן של הרכבים עצביים ברשתות של נוירונים חושיים ראשוניים בגרעיני שורש גב שלמים. J. Vis. Exp. (2023). הסרטון מדגים טכניקת הדמיית סידן in vivo לניטור פעילות עצבית בגרעיני השורש הגבי (DRG) של עכבר טרנסגני. נוירונים DRG מבטאים אינדיקטור סידן המגביר את עוצמת הקרינה בעת הקישור לסידן. גירויים מכניים או תרמיים המופעלים על כפה אחורית מייצרים פוטנציאל פעולה המתפשט ל-DRG, גורם לזרימת סידן בתאי העצב וכתוצאה מכך פליטת פלואורסצנטיות מוגברת.

הדמיית סידן in vivo של הרכבים עצביים בגרעיני השורש הגבי השלמים של עכבר

מקור: Fried, D. E., Gulbransen, B. D. באתרו ca2+{{}} הדמיה של מערכת העצבים המעי. J. Vis. exp.,  (2015){סרטון זה מדגים סידן הדמיה כדי להמחיש ולנתח את הפעילות של נוירונים מעיים וגליה בתכשירי מקלעת מיאנטרית של המעי הגס בעכבר.

הדמיית סידן של פעילות נוירונים מעיים וגליה במקלעת מיאנטרית של עכבר

מקור: Ishimoto, H. et. al., הדמיית סידן ex vivo להמחשת תגובות המוח לאיתות אנדוקריני בדרוזופילה. J. Vis. exp. (2018)}{{}}} {{}}} סרטון זה מדגים הדמיית סידן למחקרDrosophila תגובות מוח לנוירופפטידים. נוירונים המבטאים אינדיקטור סידן פלואורסצנטי חושפים דינמיקת סידן תוך תאית ותגובות תפקודיות למולקולות איתות.

הדמיית סידן ex vivo לחקר תגובות המוח של דרוזופילה לנוירופפטידים

כאן אנו מציגים טכניקות להדמיית אירועי Ca2+ מקומיים בתיווך IP3 באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי בתאי יונקים שלמים הטעונים באינדיקטורים Ca2+ יחד עם אלגוריתם שהופך את הזיהוי והניתוח של אירועים אלה לאוטומטיים.

ההדמיה המקומית Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; אותות בתאי יונקים בתרבית

מאמר זה מתאר פרוטוקול עבור ex-vivo סידן הדמיה של המוח דרוזופילה . בשיטה זו, תרכובות טבעי או סינתטי ניתן להחיל את המאגר כדי לבחון את היכולת שלהם להפעיל את המסוים הנוירונים במוח.

לשעבר Vivo הדמיית סידן להמחשת התגובות המוח איתות האנדוקרינית ב דרוזופילה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול עבור דימות וכימות הדינמיקה סידן באוכלוסיות תאים הטרוגנית, כגון תאים איון הלבלב. כתבים פלורסנט מועברים לתוך שכבת היקפי של תאים בתוך איון, אשר לאחר מכן מאויית והתמונה, ועל ניתוח לתאים של הדינמיקה של עוצמת הניאון מבוצעת.

הדמיה של סידן דינמיקה באוכלוסיות משנה של תאים הלבלב איון של העכבר

הפרוטוקול הנוכחי מתאר יצירת חלון גולגולתי גדול (6 x 3 מ"מ2) באמצעות עטיפת מזון, סיליקון שקוף וזכוכית כיסוי. חלון גולגולתי זה מאפשר ניסויים בהדמיית סידן בשדה רחב ובשני פוטונים באותו עכבר.

אין ויוו הדמיית סידן בשדה רחב ושני פוטונים מעכבר באמצעות חלון גולגולתי גדול

פרוטוקול זה מתאר את החשיפה הכירורגית של גנגליון השורש הגבי (DRG) ואחריו GCaMP3 (אינדיקטור Ca2+ מקודד גנטית; חלבון פלואורסצנטי ירוק-קלמודולין-M13 חלבון 3) Ca2+ הדמיה של הרכבים עצביים באמצעות עכברי Pirt-GCaMP3 תוך הפעלת מגוון גירויים על הכף האחורית ipsilateral.

ב Vivo הדמיית סידן של הרכבים עצביים ברשתות של נוירונים חושיים ראשוניים בגרעיני שורש גבי שלמים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להדמיית סידן ex vivo בדרוזופילה למבוגרים המבטאים GCaMP6 לניטור פעילויות אפילפטיפורמיות. הפרוטוקול מספק כלי רב ערך לחקר אירועים איקטליים בדרוזופילה בוגרת באמצעות הדמיית סידן ex vivo , המאפשר לחקור את המנגנונים הפוטנציאליים של אפילפסיה ברמה התאית.

אקס ויוו הדמיית סידן למודל דרוזופילה לאפילפסיה

אנו מציגים פרוטוקולי הדמיית סידן עבור נוירון ריח של זחל דרוזופילה, באמצעות דבק רקמות מקומי לקיבוע. שיטה זו משפרת את היציבות, ומאפשרת ניסויים אמינים in vivo ו-ex-vivo. סקריפטים מותאמים אישית של R מנתחים אותות סידן, ומספקים פלטפורמה יעילה למחקר נוירופיזיולוגי מפורט.

הדמיית סידן in vivo ו-ex-vivo של נוירון במעגל הריח בזחל Drosophila melanogaster בכוכב השלישי

למד הדמיית סידן חיה בסינפסה הנוירומוסקולרית של עכברים תוך שימוש בעכברים טרנסגניים המביעים מחווני סידן. שיטה זו מאפשרת לחקור דינמיקת תקשורת תאית בתגובה לגירוי עצבי.

לשעבר Vivo הדמיה של סידן לתא ספציפי איתות על הסינפסה התלת-צדדי של הסרעפת העכבר

גלה סרטונים נוספים