תפוקה גבוהה מדידה של קרום פלזמה חתימת יעילות בתאים בתרבית

מבחן זה פותח כדי לענות על שאלות מפתח בתחום הביולוגיה של קרום פלזמה כדי לקבוע כיצד תאים פגומים ביעילות יכולים לחתום מחדש את קרום הפלזמה שלהם. טכניקה זו יכולה לשמש כדי למדוד את היעילות של פלזמה קרום resealing בקיבולת תפוקה גבוהה כדי לזהות חלבונים ספציפיים מסלולים המתאימים לתווך פלזמה קרום resealing. התחל על ידי הוספת 20 מיליליטר של 2.5 פעמים 10 לתאי HeLa החמישי למיליליטר של השעיה בינונית צמיחה לתוך אגן פיפטה סטרילי ולהשתמש פיפטה סרולוגית 10 מיליליטר לערבב ביסודיות את התאים.

לאחר מכן, השתמש micropipette רב ערוצית לזרוע 100 microliters של תאים ל הבא בצלחת 96-גם שטוח, ברור, רקמות פוליסטירן שחור מטופלים צלחת. זכור כי התפלגות תאים הומוגנית היא המפתח לניסוי מוצלח, גם כאשר השוואות בין כל התנאים הניסיוניים דורשות ספירת תאים שוות ערך. לאחר 24 שעות באינקובטור לתרבות התאים הלחים ב-37 מעלות צלזיוס ו-5%CO2, מחממים את קורא הלוחות ל-37 מעלות צלזיוס ומגדירים את התצורה האופטית למונוכרומטור, את מצב הקריאה ל פלואורסצנטיות ואת סוג הקריאה לקינטי.