Name: מודל Hyperandrogenic העכבר ללמוד תסמונת השחלות הפוליציסטיות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-02T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: למדו ליצור מודל עכברים עם תסמונת השחלות הפוליציסטיות באמצעות פלטות דיהידרוטסטוסטרון. שיטה זו מאפשרת שחרור הורמונלי עקבי לחקר השפעות ההיפראנדרוגניזם על הרבייה והצאצאים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי מכוני הבריאות הלאומיים (מענקים R00-HD068130 כדי ייגמר בתיקו), המרכז לחקר הסוכרת בולטימור: טייסים וגרנט היתכנות (כדי ייגמר בתיקו).

כאן, אנו מציגים נתונים היסטוריים פרוטוקולים עבור הכניסה והכנה של גלולה DHT, ולבדיקת הרבייה וחילוף. העכברים השתמשו במחקר זה היו מעורבים רקע (C57/B6, CD1, 129Sv), היו נשמרות עם אוכל ומים ad libitum במחזור/כהה 14/10 h ב 24 ° C במתקן ברודווי בניין מחקר בבעלי חיים בביה ס אוניברסיטת ג'ונס הופקינס של הרפואה. כל ההליכים אושרו על ידי ג'ונס הופקינס אוניברסיטת חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה.
1. יצירת מודל עכבר דמוי-PCOS
<ol><li>
DHT צניפה הכנה
	<ol>
<li>אוטוקלב אבובים silastic לחטא. לחתוך silastic צינורות באורך של 15 מ מ עם סכין גילוח;</li>
		<li>חותם צד אחד על ידי הזרקת סיליקון דבק רפואי לתוך הצינור עם מחט קהות 20 גרם המצורפת מזרק 3 מ. המשאבה צריכה להיות מופנמים מ המזרק ולאחר מכן דבק מוכנס לתוך המאגר. המשאבה היא להכניס מחדש, דבק נדחף למטה עד שיתחיל מגיחים המחט. המחט קהות נעשית על ידי חיתוך בצד קצה חד של 20 גרם המחט במספריים חזקים בכל. האורך של סיליקון בצינור צריך להיות יותר מ 2 מ מ כדי לאפשר חיתוך שלאחר הייצור;</li>
		<li>לילה יבש; בדוק אם יש בועות אוויר בצד אטום. אלה עם בועות אוויר לא משמשים כדורי DHT. אחרים יכולים לשמש כדורי הבקרה לא-DHT.</li>
		<li>ללבוש כפפות, מסיכה, משקפי מגן, חלוק המעבדה לפני ביצוע DHT-גלולה בשכונה כדי להימנע מחשיפה DHT העור.</li>
		<li>אבקת DHT לשפוך לתוך פלסטיק שוקלים הסירה ולחץ הצד הפתוח של הדבק הכתיר צינורות (מיוצר A1.1) לאבקה DHT.</li>
		<li>אבקת DHT יכול להיות מהודקת עם מהדק נייר גדול זה הוא straightened.  המשך עד DHT המגיע לגובה של 4 מ מ (או באורך הרצוי). בדוק את האורך של DHT עם סרגל, לאטום את הצד הפתוח עם סיליקון, יבש למשך הלילה.</li>
		<li>חותכים כל צד אטום כדי להפוך את האורך של סיליקון באורך של 2 מ מ. האורך הכולל של גלולה יהיה 8 מ מ.</li>
		<li>חותם צידי אבובים silastic ריק כמו גלולה שליטה (לא-DHT).</li>
		<li>שמור כדורי צינור חרוטי 50 מ ל עטוף בנייר כסף (כדי למנוע חשיפה קלה) בטמפרטורת החדר עד השימוש. כדורי DHT לשמור על יעילות מלאה במשך 3 חודשים לפחות של שטח אחסון.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
DHT ההכנסה והחלפת
	<ol>
<li>עד 20 DHT כדורי או שליטה כדורי טובע בנפרד צינור חרוטי 50 מ עם 30 מ ל סליין 0.9% סטרילי במשך 24 שעות ביממה ב- 37 °C עבור equilibration לפני הכניסה.</li>
		<li>לפני הניתוח, משטחים וכפפות תעוקר עם clidox, משטחי עבודה מכוסה פלסטיק נקי מגובה מגבוני נייר (משטח כירורגית).  כל הכלים יבואו במגע עם בעלי חיים הם ושוקמו מיציאתם המתקן בבעלי חיים על ידי autoclaving.  מכשירים יורשו יבש וקריר לפני השימוש.</li>
		<li>בן חודש 2 נקבות עכברים משמשים (4 – 5 עכברים/כלוב). עכברים מוזרקים intraperitoneally עם חריגות השירותים הווטרינריים (3.5 מ"ג/ק"ג bw), קטמין (78.8 mg/kg bw) באמצעות על מזרק אינסולין. חישובים עבור ערבוב של הרדמה הוא טבלה 1.</li>
		<li>לאחר הרדמה נאותה מושגת, כפי שהיא נמדדת על ידי אובדן של הבוהן רפלקס הנשימה מואטת, העכבר להיות הכנה לניתוח.</li>
		<li>לחטא את העור של האזור עם betadine בעזרת גזה סטרילי ונקי עם 70% אתנול.  האזור שוב ימותג betadine.</li>
		<li>לחתוך חור בסביבות 5 מ מ אורך עם מספריים מתחת לעור ליד הצוואר. שימוש של 10 גרם trochar, גורם מנהרה קטנה (15 מ מ) לכיוון rostral. בגדר נוסף dorsally עם trochar.</li>
		<li>הפתח ואז אטומה עם דבק כירורגי. משוער באופן ידני הפצע בקצוות עם מלקחיים וקווים צחצוח עדין כדי להחיל בשכבה דקיקה של דבק נוזלי על קצוות הפצעים משוערת. הצטברות 3 שכבות דק של דבק כדי לוודא שהדבק מופץ באופן שווה על הפצע. הדבק צריך להרחיב 1 ס מ מכל צד של קצוות הפצע. אני בטוח. בתפר או כירורגיים יכול לשמש גם כדי לסגור את החור. לשים עכברים בחזרה לכלוב, שוכן באופן אינדיבידואלי, עם כרית חום להתאוששות. החלפת גלולה כל 4 שבועות כדי לשמור על רמה קבועה של חשיפה אנדרוגן. בגדר המקורי יוסרו, גלולה החדש יתווסף כפי שמתואר A1.15 במצב דומה.</li>
		<li>בדיקה לאחר תקופת היובש estrous אחרי 3 ימים של DHT ההכנסה. ייחום הבמה מוערך על ידי ציטולוגיה הנרתיק.  תאי נרתיק נאספים 16 ימים רצופים על-ידי שימוש pipettor p10 להשפריץ מלח סטרילית (µL סביב 10) לתוך חלל הנרתיק ואז פורש את תמיסת המלח עם קצה פיפטה עקר אותו.  תאי נרתיק sloughed של קיר הנרתיק לערבב עם תמיסת מלח, נאספים.</li>
		<li>מורחים תמיסת מלח עם תאים לשקופית עם תוויות. כל שקופית יכול להכיל ששת המדגמים. שקופיות מסומנות לציין איזו דגימה ממוקמת בכל אחד מהמיקומים שש.</li>
		<li>לאחר מלוחים יש לגמרי התייבש בשקופית, לשים שקופיות לתוך מיכל עם 100% אתנול לתקן תאים. שקופיות להיות קבועה לפחות 5 דקות, אך יכול להישאר לשבועיים ללא הגבלת זמן עד שימוש נוסף.</li>
		<li>להכניס שקופיות פתרונות מכתימים 1 דקות כל עבור מאגר B ושקופיות ג לשטוף עם מים מהברז ויבש בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>בדוק מורפולוגיה תאים במיקרוסקופ 10 X אובייקטיבית אור.  מורפולוגיה לתא להבחין proestrus (P), ייחום (E), metestrus (ז), diestrus (ד) מתואר הפניות27,28,29.</li>
		<li>ספירת הימים בכל שלב ומופרדים המספר הכולל של ימים כדי לחשב את אחוז הזמן בכל שלב.</li>
		<li>מבחן גלוקוזה ב 21 ימים לאחר ההוספה DHT על ידי צום העכברים בן לילה (16 שעות), הזרקת דור 2/ק"ג משקל גוף של dextrose 20% intraperitoneally. לדוגמה, אם משקל הגוף העכבר 25 גרם, העכבר הזה להיות מוזרק עם 250 µL של 20% דקסטרוז עם מזרק אינסולין 50 cc (0.5 מ ל). רמות הגלוקוז הם מוערך על ידי רצועות סוכר ובדיקה באמצעות דגימת דם וריד הזנב-0, 15, 30, 60, 90, 120 דקות. זה מתואר ב פירוט במקום30.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
איסוף דם
	<ol>
<li>לאסוף דם שונים ימים לאחר ההוספה DHT (אנחנו נגביל אוסף נפח µL 100 על סטרואידים, 30ul עבור LH/FSH assay) בין 9 ל-10 בבוקר על ידי submandibular הווריד. מדמם עם lancet. זה מתואר ב-11.</li>
		<li>צנטריפוגה דם ב x 6,000 g ב- 4 ˚C למשך 10 דקות, ולאסוף את השכבה סרום לתוך צינור 1.5 mL אחר שניתן לאחסן ב- 80 °C עד וזמינותו.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. להעריך את הרבייה פרופילים של הצאצאים הנשי של DHT באופן כרוני מוכנס סכרים
<ol><li>
הזדווגות
	<ol>
<li>העכבר הנשי להיבדק מועברת לתוך הכלוב עם זכר מפרה מוכחת (שהיה לה בעבר הגורים עם עכבר נקבה)-15 ימים לאחר הכניסה גלולה.</li>
		<li>המסמך משקל הגוף של סכר כל שבוע כדי לקבוע אם העכבר בהריון. סכר משקל בעליות של יותר מ 3 g תוך שבוע מצביעה על הריון.</li>
		<li>איסוף הדם של סכרים השבוע השני לאחר שאנו צופים משקל הגוף מוגברת של סכרים גדול יותר מאשר 3g של שבוע לפני.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
גיל ההתבגרות לאומדן פתח הנרתיק, ייחום ראשון
	<ol>
<li>בדוק את פתח הנרתיק על-ידי בדיקה ויזואלית כל יום לאחר הגורים נגמלים ביום 21 אחרי לידה (PND), למדוד את המרחק anogenital ולהקליט הגיל של פתח הנרתיק.</li>
		<li>פעם נפתח הנרתיק, לאסוף תאי נרתיק מדי יום, כפי שמתואר 1.2.8–1.2.11 כדי לבדוק estrous לאחר תקופת היובש.</li>
		<li>להתבונן תא מורפולוגיה כפי שמתואר 1.2.12, ייחום ראשון מוגדר לתאריך כי כל התאים הם תאי אפיתל cornified.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
אגרוף במשקל ועל אוזנו הגוף
	<ol>
<li>טובלים את הטיפ נולד לתוך העיסה קעקוע לסמן כל pup עם קעקוע על הבוהן, כפי שמתואר הפניה12 -7 PND ואני שוקל עכברים מדי 7 ימים עד 70 ימים של גיל.</li>
		<li>עכברים ניקוב האוזן צריכים למספר אותם באמצעות מערכת איור 1 בין 12 עד 16 PND. כדי להבחין בין מין, לבחון בצד הגחוני של הגוף, הנקבות יהיה גלויים הפטמות.</li>
		<li>לאסוף את הדם-21, 26, 70 PND לאחר הלידה כפי שמתואר לעיל 1.3.1</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Assay הורמונלי
	<ol>
<li>רמות DHT בנסיוב הדם נמדדים על ידי שניהם מקושרים-אנזים immunosorbent assay (אליסה), באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית טנדם מסה ספקטרומטר (LC-MS)23,24,31,32. T נמדד על ידי LC-MS, או עכברוש/עכבר אליסה זה אומת על-ידי אוניברסיטת וירג'יניה ליגנד Assay הליבה במרכז לחקר רבייה23,24.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pregnancy+complications+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome.</a> Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).</li>
<li>Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implications+of+polycystic+ovary+syndrome+for+pregnancy+and+for+the+health+of+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Obstet.+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Implications of polycystic ovary syndrome for pregnancy and for the health of offspring.</a> Obstet. Gynecol. 125 (6), 1397-1406 (2015).</li>
<li>de Wilde, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+and+Metabolic+Health+of+74+Children+From+Women+Previously+Diagnosed+With+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Comparison+With+a+Population-Based+Reference+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Sci%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular and Metabolic Health of 74 Children From Women Previously Diagnosed With Polycystic Ovary Syndrome in Comparison With a Population-Based Reference Cohort.</a> Reprod. Sci. , 1933719117749761 (2018).</li>
<li>Caldwell, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+reproductive%2C+metabolic%2C+and+endocrine+features+of+polycystic+ovary+syndrome+in+female+hyperandrogenic+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Characterization of reproductive, metabolic, and endocrine features of polycystic ovary syndrome in female hyperandrogenic mouse models.</a> Endocrinology. 155 (8), 3146-3159 (2014).</li>
<li>van Houten, E. L., Kramer, P., McLuskey, A., Karels, B., Themmen, A. P., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reproductive+and+metabolic+phenotype+of+a+mouse+model+of+PCOS%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Reproductive and metabolic phenotype of a mouse model of PCOS.</a> Endocrinology. 153 (6), 2861-2869 (2012).</li>
<li>Cardoso, R. C., Puttabyatappa, M., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Steroidogenic+versus+Metabolic+Programming+of+Reproductive+Neuroendocrine%2C+Ovarian+and+Metabolic+Dysfunctions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroendocrinology%22%5BJournal%5D)">Steroidogenic versus Metabolic Programming of Reproductive Neuroendocrine, Ovarian and Metabolic Dysfunctions.</a> Neuroendocrinology. 102 (3), 226-237 (2015).</li>
<li>Dumesic, D. A., Abbott, D. H., Padmanabhan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polycystic+ovary+syndrome+and+its+developmental+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Endocr.+Metab+Disord%22%5BJournal%5D)">Polycystic ovary syndrome and its developmental origins.</a> Rev. Endocr. Metab Disord. 8 (2), 127-141 (2007).</li>
<li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Reprod%22%5BJournal%5D)">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol Reprod. 93 (3), 69(2015).</li>
<li>Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Gut+Microbiome+Is+Altered+in+a+Letrozole-Induced+Mouse+Model+of+Polycystic+Ovary+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The Gut Microbiome Is Altered in a Letrozole-Induced Mouse Model of Polycystic Ovary Syndrome.</a> PLoS One. 11 (1), e0146509(2016).</li>
<li>Kafali, H., Iriadam, M., Ozardali, I., Demir, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Letrozole-induced+polycystic+ovaries+in+the+rat%3A+a+new+model+for+cystic+ovarian+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Med.+Res%22%5BJournal%5D)">Letrozole-induced polycystic ovaries in the rat: a new model for cystic ovarian disease.</a> Arch. Med. Res. 35 (2), 103-108 (2004).</li>
<li>Maliqueo, M., Benrick, A., Stener-Victorin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+polycystic+ovary+syndrome%3A+phenotypic+presentation%2C+pathophysiology%2C+and+the+effects+of+different+interventions%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Reprod.+Med%22%5BJournal%5D)">Rodent models of polycystic ovary syndrome: phenotypic presentation, pathophysiology, and the effects of different interventions.</a> Semin. Reprod. Med. 32 (3), 183-193 (2014).</li>
<li>Yanes, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular-renal+and+metabolic+characterization+of+a+rat+model+of+polycystic+ovary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Gend.+Med%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular-renal and metabolic characterization of a rat model of polycystic ovary syndrome.</a> Gend. Med. 8 (2), 103-115 (2011).</li>
<li>Kauffman, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Novel+Letrozole+Model+Recapitulates+Both+the+Reproductive+and+Metabolic+Phenotypes+of+Polycystic+Ovary+Syndrome+in+Female+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice.</a> Biol. Reprod. 93 (3), 69(2015).</li>
<li>Filippou, P., Homburg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+foetal+hyperexposure+to+androgens+a+cause+of+PCOS%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">Is foetal hyperexposure to androgens a cause of PCOS?</a> Hum. Reprod. Update. 23 (4), 421-432 (2017).</li>
<li>Wang, Z., Shen, M., Xue, P., DiVall, S. A., Segars, J., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Female+Offspring+From+Chronic+Hyperandrogenemic+Dams+Exhibit+Delayed+Puberty+and+Impaired+Ovarian+Reserve%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Female Offspring From Chronic Hyperandrogenemic Dams Exhibit Delayed Puberty and Impaired Ovarian Reserve.</a> Endocrinology. 159 (2), 1242-1252 (2018).</li>
<li>Abbott, D. H., Barnett, D. K., Bruns, C. M., Dumesic, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgen+excess+fetal+programming+of+female+reproduction%3A+a+developmental+aetiology+for+polycystic+ovary+syndrome%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Reprod.+Update%22%5BJournal%5D)">Androgen excess fetal programming of female reproduction: a developmental aetiology for polycystic ovary syndrome?</a> Hum. Reprod. Update. 11 (4), 357-374 (2005).</li>
<li>Abbott, D. H., Dumesic, D. A., Franks, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+origin+of+polycystic+ovary+syndrome+-+a+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Developmental origin of polycystic ovary syndrome - a hypothesis.</a> J. Endocrinol. 174 (1), 1-5 (2002).</li>
<li>Padmanabhan, V., Veiga-Lopez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sheep+models+of+polycystic+ovary+syndrome+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Sheep models of polycystic ovary syndrome phenotype.</a> Mol. Cell. Endocrinology. 373 (1-2), 8-20 (2013).</li>
<li>Pierre, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysregulation+of+the+Anti-Mullerian+Hormone+System+by+Steroids+in+Women+With+Polycystic+Ovary+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Dysregulation of the Anti-Mullerian Hormone System by Steroids in Women With Polycystic Ovary Syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 102 (11), (2017).</li>
<li>Dumesic, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperandrogenism+Accompanies+Increased+Intra-Abdominal+Fat+Storage+in+Normal+Weight+Polycystic+Ovary+Syndrome+Women%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Hyperandrogenism Accompanies Increased Intra-Abdominal Fat Storage in Normal Weight Polycystic Ovary Syndrome Women.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 101 (11), 4178-4188 (2016).</li>
<li>Fassnacht, M., Schlenz, N., Schneider, S. B., Wudy, S. A., Allolio, B., Arlt, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+adrenal+and+ovarian+androgen+generation%3A+Increased+peripheral+5+alpha-reductase+activity+in+women+with+polycystic+ovary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Beyond adrenal and ovarian androgen generation: Increased peripheral 5 alpha-reductase activity in women with polycystic ovary syndrome.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 88 (6), 2760-2766 (2003).</li>
<li>Dikensoy, E., Balat, O., Pence, S., Akcali, C., Cicek, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+hepatotoxicity+during+long-term+and+low-dose+flutamide+treatment+in+hirsutism%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Gynecol.+Obstet%22%5BJournal%5D)">The risk of hepatotoxicity during long-term and low-dose flutamide treatment in hirsutism.</a> Arch. Gynecol. Obstet. 279 (3), 321-327 (2009).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgen+Receptor+in+the+Ovary+Theca+Cells+Plays+a+Critical+Role+in+Androgen-Induced+Reproductive+Dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Androgen Receptor in the Ovary Theca Cells Plays a Critical Role in Androgen-Induced Reproductive Dysfunction.</a> Endocrinology. , en20161608(2016).</li>
<li>Andrisse, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+Dose+Dihydrotestosterone+Drives+Metabolic+Dysfunction+via+Cytosolic+and+Nuclear+Hepatic+Androgen+Receptor+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Low Dose Dihydrotestosterone Drives Metabolic Dysfunction via Cytosolic and Nuclear Hepatic Androgen Receptor Mechanisms.</a> Endocrinology. , en20161553(2016).</li>
<li>Andrisse, S., Billings, K., Xue, P., Wu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+signaling+displayed+a+differential+tissue-specific+response+to+low-dose+dihydrotestosterone+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Insulin signaling displayed a differential tissue-specific response to low-dose dihydrotestosterone in female mice.</a> Am. J. Physiol.Endocrinol. Metab. 314 (4), E353-E365 (2018).</li>
<li>van Houten, E. L., Visser, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+to+study+polycystic+ovary+syndrome%3A+a+possible+link+between+metabolism+and+ovarian+function%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Reprod.+Biol%22%5BJournal%5D)">Mouse models to study polycystic ovary syndrome: a possible link between metabolism and ovarian function?</a> Reprod. Biol. 14 (1), 32-43 (2014).</li>
<li>Caligioni, C. S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19575469">Assessing reproductive status/stages in mice.</a> Curr. Protoc. Neurosci. , Appendix 4, Appendix 4I (2009).</li>
<li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+knockout+of+the+androgen+receptor+in+gonadotropes+reveals+crucial+roles+for+androgen+in+gonadotropin+synthesis+and+surge+in+female+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Conditional knockout of the androgen receptor in gonadotropes reveals crucial roles for androgen in gonadotropin synthesis and surge in female mice.</a> Mol. Endocrinol. 28 (10), 1670-1681 (2014).</li>
<li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL%2F6J+mice%3A+I.+Cycle+frequency%2C+length+and+vaginal+cytology%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).</li>
<li>Dinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+Glucose+Tolerance+Test%2C+Measurement+of+Lung+Function%2C+and+Fixation+of+the+Lung+to+Study+the+Impact+of+Obesity+and+Impaired+Metabolism+on+Pulmonary+Outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes.</a> Journal of Visualized Experiments. (133), (2018).</li>
<li>Nilsson, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+a+Comprehensive+Sex+Steroid+Profile+in+Rodent+Serum+by+High-Sensitive+Gas+Chromatography-Tandem+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Measurement of a Comprehensive Sex Steroid Profile in Rodent Serum by High-Sensitive Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry.</a> Endocrinology. 156 (7), (2015).</li>
<li>McNamara, K. M., Harwood, D. T., Simanainen, U., Walters, K. A., Jimenez, M., Handelsman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+sex+steroids+in+murine+blood+and+reproductive+tissues+by+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Steroid+Biochem.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Measurement of sex steroids in murine blood and reproductive tissues by liquid chromatography-tandem mass spectrometry.</a> J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 121 (3-5), 611-618 (2010).</li>
<li>Klein, S. L., Bird, B. H., Glass, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+differences+in+Seoul+virus+infection+are+not+related+to+adult+sex+steroid+concentrations+in+Norway+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Sex differences in Seoul virus infection are not related to adult sex steroid concentrations in Norway rats.</a> J. Virol. 74 (17), 8213-8217 (2000).</li>
<li>Siracusa, M. C., Overstreet, M. G., Housseau, F., Scott, A. L., Klein, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((17beta-estradiol+alters+the+activity+of+conventional+and+IFN-producing+killer+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">17beta-estradiol alters the activity of conventional and IFN-producing killer dendritic cells.</a> J. Immunol. 180 (3), 1423-1431 (2008).</li>
</ol>

שום דבר לא לחשוף.

Hyperandrogenism היא תכונה מרכזית של PCOS. סרום DHT רמות (שני לקפל גבוה בעכברים DHT מאשר בעכברים לא-DHT) בשימוש פרוטוקול זה נמוכים יותר מאלה שדווחו על-ידי חוקרים אחרים במחקרים קודמים, מכוילים לחקות באופן יחסי נשים עם PCOS5,19, 20,21. שלא כמו דגמים אחרים, מודל DHT 2-fold זה אינו משנה את משקל הגוף ואת הרכב הגוף כולו לעומת לא-DHT עכברים עד 3.5 חודשים לאחר DHT ההכנסה23...

Hyperandrogenism היא סימן ההיכר של תסמונת השחלות הפוליציסטיות (PCOS) על פי קריטריונים NIH, של עודף אנדרוגן, החברה PCOS (AE-PCOS). נשים עם PCOS יש קושי להיכנס להריון, הגדילו את הסיכון לסיבוכים הריון1. אפילו אם הם להיכנס להריון, צאצאיהם נקבה יש2,של תוצאות בריאותיות שליליות3. מודלים אלו פותחו מגוון אסטרטגיות4,5,6,7,8,9,10,11 , 12 . מציג תכונות רבות של PCOS (anovulation ו/או לקוי סובלנות גלוקוז, אינסולין) עם משקל גוף מוגבר והשמנה המשויך adipocyte מוגדלת בגודל ובמשקל מוגברת adipocyte ינאו ישנן שתי אסטרטגיות מרכזיות לייצר מודלים המשמשים ללמוד PCOS. אחד הוא טיפול עם רמות גבוהות של אנדרוגנים ישירות (אקסוגני אנדרוגן הכניסה/הזרקת) או בעקיפין (כגון חסימת המרה אנדרוגן לאסטרוגן עם ארומטאז) לאחר הלידה13. נוספת היא על ידי העובר hyperexposure של אנדרוגנים במהלך ההיריון14,15 ללמוד את הצאצא. לדוגמה, הצאצא הנקבה קוף רזוס16,17, כבשים18, מכרסמים שנחשפו לרמות זכר של אנדרוגן במהלך התקופה תוך רחמי לפתח תכונות כמו PCOS בהמשך החיים. מודלים אלה משופרת באופן משמעותי את ההבנה שלנו של אפקטים האנדרוגן, תיכנות העובר ואת ההשפעות הסביבתיות הרחם. עם זאת, מודלים אלה יש מגבלות משלו: 1) חיות לפתח השמנת יתר, לכן קשה להפריד את ההשפעות של hyperandrogenemia לבין השמנת יתר הנגרמת הרבייה מטבולי לקוי; 2) לפני ההריון, נשים עם PCOS כבר מוצג רמות גבוהות של אנדרוגנים, וכך נחשפו oocytes אנדרוגן עודף לפני ההפריה; 3) במינון תרופתי של טסטוסטרון (T) או דיהידרוטסטוסטרון (DHT) המשמש לאחר הלידה או במהלך ההיריון אינן משקפות בהכרח את הסביבה אנדרוגן של PCOS. נמדדו רמות טסטוסטרון ו- DHT נוזל הזקיקים בשחלות ו/או סרום, טסטוסטרון ו- DHT רמות הם מקפלים 1.5 ל 3.9 גבוהה יותר בנשים עם PCOS5,19,20,21 22, ,23 בהשוואה לנשים לא מושפע. יצרנו של העכבר למבוגרים דגם23,24,25 שמתפתח תפקוד הרבייה וחילוף בתוך שבועיים אתחול של חשיפה כרונית DHT מן ההכנסה של גלולה עם 4 מ מ אורך אבקת DHT קריסטל (האורך הכולל של גלולה הוא 8 מ מ). מודל זה מייצר רמות DHT בסרום שנמצאים על קיפול כפול גבוה יותר (המכונה 2xDHT) מזה של בקרת עכברים ללא טיפול DHT. העכברים 2xDHT לא להציג שינויים של לעשות LH, טסטוסטרון, אסטרדיול בסרום הבזליים לא לפתח השמנת יתר, ולהראות משקל דומה השחלות, רמות של כולסטרול, חומצות שומן, לפטין, TNFα ו- IL-623,24, 25 יחסית שולט אפילו עד 3.5 חודשים לאחר DHT ההכנסה23,24,25. בנוסף, על ידי הזדווגות הנקבות שכבר פיתחו תכונות של PCOS, נוכל ללמוד את ההשפעה של hyperandrogenic האימהי סביבה על הבריאות ועל הרבייה מטבולי של הצאצאים15.
הפרדיגמה החדשה (רלוונטי על הקריטריונים NIH וחברה AE-PCOS) מודלים המחלה על ידי ייצור דומה יחסית רמות אנדרוגנים לאלה של נשים עם PCOS 2 - טסטוסטרון גבוה יותר 3-fold או רמות DHT בהשוואה לנשים לא מושפע. עם זאת, מודל זה נשמר על ידי DHT אקסוגני מתמשך ולא hyperandrogenism אנדוגני מתוכנת ברגע DHT נסוגה. המטרה הכוללת של מאמר זה היא להתמקד 1) כיצד להפוך בגדר DHT; 2) כיצד לייצר רזה-PCOS כמו עכבר דוגמן 3) אסטרטגיות כדי להעריך את הצאצאים הנשי של אלה סכרים. אחרים מדידות והערכה של פנוטיפים שאינן מטופלות כתב יד זה אך ניתן למצוא5,15,23,24,25,26.

<table><tbody><tr><td>אבקת 5&alpha;-DHT גבישית</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8380-1G</td><td></td></tr><tr><td>Dow Corning צינורות סילסטיים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>11-189-15D</td><td>0.04 אינץ'/1 מ"מ קוטר פנימי x0.085 אינץ'/2.15 מ"מ קוטר חיצוני</td></tr><tr><td>דבק רפואי סיליקון</td><td>גורם II, InC.</td><td>משקפי A-100</td><td></td></tr><tr><td>, מעילי מעבדה, כפפות ומסכות.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10 ומיקרו; L קצות פיפטה ללא פילטר</td><td>ארה"ב Scientific</td><td>11113700</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ שקופית למריחה</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-550-003</td><td></td></tr><tr><td>Diff Quik לצביעה תאים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>NC9979740</td><td></td></tr><tr><td>Lancet</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9416572</td><td></td></tr><tr><td>3 מ"ל מזרק</td><td>Becton, Dickinson and Company (BD),</td><td>30985</td><td></td></tr><tr><td>מחט מחוברת: 20 גרם</td><td>BD</td><td>305176</td><td></td></tr><tr><td>סרגל: כל אורך מ-10 ס"מ בקנה מידה מילימטר.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>קסילזין</td><td>וטרינר אחד AnnSeA LA, MWI, Boise</td><td>NDC13985-704-10</td><td>100 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>קטמין הידרוכלוריד</td><td>Hospira, Inc</td><td>NDC 0409-2051-05</td><td>100 מ"ג/מ"ל</td></tr><tr><td>מצרך כירורגי</td><td>AutoClip&reg; מערכת, Fine Science Tool</td><td>12020-00</td><td></td></tr><tr><td>מזרק אינסולין</td><td>BD</td><td>329461</td><td>1/2 CC, מינון נמוך U-100 מזרק אינסולין</td></tr><tr><td>Trocar</td><td>מחקר חדשני של אמריקה</td><td>MP-182</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ</td><td>Carl Zeiss Primo Star</td><td>415500-0010-001</td><td>גרמניה</td></tr><tr><td>אגרוף אוזניים</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>13-812-201</td><td></td></tr><tr><td>טסטוסטרון עכברוש/עכבר ELISA ערכה</td><td>IBL</td><td>B79174</td><td></td></tr><tr><td>DHT ELISA ערכת</td><td>אלפא דיאגנוסטיקה בינלאומית</td><td>1940</td><td></td></tr><tr><td>מגע אחד אולטרה גלוקומטר</td><td>Life Scan, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פסי בדיקה אולטרה בנגיעה אחת Life</td><td>Scan, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>צינור אפנדורף</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>05-402-18</td><td></td></tr><tr><td>סכין גילוח</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>12-640</td><td></td></tr><tr><td>קלידוקס</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>NC0089321</td><td></td></tr><tr><td>תחתון כירורגי</td><td>פישר סיינטיפיק</td><td>50587953</td><td>יצרן: Andwin Scientific 56616018</td></tr><tr><td>תמיסת חיטוי בטדין</td><td>Walgreens</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate)</td><td>3M מדע. מיושם בחיים</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

מודל hyperandrogenic העכבר ללמוד תסמונת השחלות הפוליציסטיות

A Hyperandrogenic Mouse Model to Study Polycystic Ovary Syndrome

Hyperandrogenemia משחק תפקיד קריטי בתפקוד הרבייה וחילוף אצל נקבות, סימן ההיכר של תסמונת השחלות הפוליציסטיות. פיתוח מודל רזה PCOS דמוי העכבר המחקה נשים עם PCOS הוא בעל משמעות קלינית. ב פרוטוקול זה, נתאר מודל כזה. על-ידי הוספת באורך 4 מ מ של DHT (דיהידרוטסטוסטרון) קריסטל אבקת גלולה (האורך הכולל של גלולה הוא 8 מ מ), מחליף אותו מדי חודש, אנחנו מסוגלים לייצר דגם עכבר דמוי-PCOS עם סרום DHT רמות 2 קיפול גבוה יותר מאשר עכברים לא מושתל דיהידרוטסטוסטרון (DHT-לא). הבחנו תפקוד הרבייה וחילוף ללא שינוי במשקל הגוף ואת הרכב הגוף. בעוד מפגין רמה גבוהה של בעיות פוריות, תת קבוצה קטנה של עכברים הנשי אלה PCOS כמו שאפשר להכנס להריון צאצאיהם מראים עיכוב ההתבגרות טסטוסטרון מוגבר כמבוגרים. המודל הזה PCOS דמוי העכבר רזה הוא כלי שימושי כדי לימוד הפתופיזיולוגיה של PCOS, הצאצא של סכרים PCOS דמוי אלה.

רמות DHT בסרום ובדיקה סובלנות גלוקוז
רמות DHT נמדדו מסרום שנאספו על ידי שני אליסה ועל ידי LC-MS לפי פרוטוקול 1.24 – 1.25, 2.9, 3.0. הערכים המוחלטים של DHT שונים בין ספקטרומטר מסה, אליסה, עם זאת, כאשר הקיפול יחסית (בסביבות 2-fold) של DHT לעומת לא-DHT ההכנסה של שני מבחני ודי דומה על פני ניסויים15,23,24 ( איור 2A...

אנו מתארים את התפתחות מודל העכבר PCOS דמוי רזה עם גלולה דיהידרוטסטוסטרון ללמוד הפתופיזיולוגיה של PCOS, הצאצא של סכרים PCOS דמוי אלה.

מודל Hyperandrogenic העכבר ללמוד תסמונת השחלות הפוליציסטיות

Hyperandrogenemia plays a critical role in reproductive and metabolic function in females and is the hallmark of polycystic ovary syndrome. Developing a ...

שיטה זו יכולה לסייע לענות על שאלות מפתח בתחום הרבייה. וההינדוקרינולוגיה. והם ישימים לחקר תסמונת השחלות הפוליציסטיות או PCOS והיפראנדרוגניזם.היתרון של טכנאי זה הוא שזה מקל על שחרור עקבי, אחיד, ארוך טווח של הורמונים בצורה יעילה ויקרה. JHUs טיפול בהליך יהיה פינג שו, טכנאי מהמעבדה שלי. להכנת דיהידרוטסטוסטרון או גלולה DHT, השתמש בסכין גילוח כדי לחתוך חתיכה 15 מילימטר של צינורות סיליקון.ולהשתמש במזרק שלושה מיליליטר מצויד במחט קהה 20 מד להזריק שניים עד חמישה מילימטרים סיליקון דבק רפואי לקצה אחד של הצינור. אפשר לאמבטיות להתייבש בן לילה. ולבדוק אם יש בועות אוויר בקצה האטום.לובש את ציוד המגן האישי המתאים לשפוך אבקת DHT לתוך סירת דרך פלסטיק בזרימה. להרשים את הקצה שנפתח של הצינור כתרים דבק לתוך האבקה. באמצעות מהדק נייר גדול ומיישר, לדכא את האבקה לתוך הצינור, עד DHT מגיע לעומק הניסוי המתאים.ואז לאטום את הצד שנפתח של הצינור עם סיליקון לילה. למחרת בבוקר, לחתוך כל צד אטום כדי לקבל אורך שני מילימטר של סיליקון משני צידי DHT ולא כדורי שליטה DHT. לאחר מכן לאחסן את כדורי בצינור חרוט 50 מיליליטר עטוף בנייר כסף בטמפרטורת החדר עד שלושה חודשים.עבור הדור מודל העכבר PCOS לצייד עד 20 כדורי DHT או שליטה נפרד 50 צינורות חרוט מיליליטר המכיל 30 מיליליטר של 0.9 אחוז מלוחים במשך 24 שעות ב 37 מעלות צלזיוס. למחרת, לאשר חוסר תגובה קמצוץ בוהן בעכבר נקבה בת חודשיים הרדמה ולהשתמש גזה סטרילית לנהל רציף Povidone-יוד ו 70 אחוז אתינול קרצוף לאזור הניתוח. לאחר מכן, לעשות חתך חמישה מילימטר דרך העור ליד הצוואר.ולהשתמש טרוקאר 10 מד לעשות מנהרה 15 מילימטר בכיוון rostral. השתמש trocar להכניס גלולה dorsally לתוך המנהרה ולאטום את החתך עם דבק כירורגי. בקירוב ידני של קצות הפצע במדפים ולהשתמש במשיחות צחצוח עדינות כדי להחיל שלוש שכבות סרט דקות של דבק נוזלי לס"מ אחד מכל צד של קצות הפצע הנגדיים.לאחר מכן מניחים את העכבר לבד בכלוב על כרית חום עם ניטור עד שליטה מלאה. החלפת גלולה כל ארבעה שבועות כדי לשמור על רמה קבועה של חשיפה אנדרוגן. שלושה ימים לאחר החדרת גלולה, להשתמש פיפטה p10 להשפריץ עשרה microliters של מלוחים סטריליים לתוך חלל הנרתיק ולהשתמש בקצה פיפטה כדי לשחזר מיד את מלוחים.מורחים את דגימת תמיסת הים של התא הנרתיק על שקופית שכותרתה. ולאפשר לתמיסת מלח להתייבש בטמפרטורת החדר. תקן את השקופיות המיובשות במיכל של 100 אחוז אתינול למשך חמש דקות לפחות.לאחר מכן תכתימו את השקופיות למשך דקה אחת כל אחת במאגר B ובאגר C מערכת כתמים מהירה. בסוף החיץ הדגירה C לשטוף את המגלשות עם מי ברז במשך שלוש שניות ולייבש אותם בטמפרטורת החדר. כדי לקבוע את המחזוריות ההיסטרוסית, הצג את השקופיות תחת המטרה פי עשרה של מיקרוסקופ אור.ספור את הימים בכל שלב וחלק במספר הימים הכולל לחישוב אחוזי זמן בכל שלב. כדי לבדוק את עמידות הגלוקוז, 20 ימים DHT הכנסה, מהר את העכברים לילה. לשקול את העכברים למחרת בבוקר, ולהשתמש גלוקומטר ורצועות בדיקה כדי למדוד את רמת הגלוקוז בזיליקום של דם וריד הזנב.להזריק את העכברים עם שני גרם לכל קילוגרם משקל גוף של 20 אחוז דקסטרוז. לאחר מכן למדוד את רמת הגלוקוז של דגימות דם וריד הזנב ב 15, 30, 60, 90, 120 דקות לאחר הממשל dextrose. כדי לרכוש צאצאים נקבה מ DHT הוכנסו עלמות, להזיז את העכבר הנשי כדי לבדוק בכלוב עם זכר פורה מוכח ביום 15, בעקבות החדרת גלולה.לתעד את משקל הגוף של הגברת כל שבוע כדי לקבוע אם העכבר בהריון. ביום שלאחר הלידה 7, לטבול קצה lancet לתוך הדבק קעקוע ולסמן כל גור עם קעקוע על בוהן. שקלו את העכברים המסומנים כל שבעה ימים עד גיל 70.בין תאריך לידה 12 ל -16, אוזן אגרוף העכברים כדי למספר אותם על פי המערכת כפי שמודגם באיור. כדי להבחין בין המינים, בדוק את הצד הגחון של כל עכבר מתויג. לנקבות יהיו פטמות נראות לעין.כדי לאסוף דגימות דם עבור ניתוחים שונים במורד הזרם להשתמש Lancet כדי לאסוף את נפח הניסוי המשוער של דם בין תשע לעשר בבוקר על ידי דימום ורידים תת-מנודדים. וצנטריפוגה הדגימות כדי לאפשר איסוף סרום. ואז לאחסן את דגימות הסרומים ב 1.5 צינורות מיקרו צנטריפוגה מיליליטר במינוס 80 מעלות צלזיוס עד הניתוח שלהם.כדי להעריך את גיל ההתבגרות בצאצאים הנשיים DHT, כל יום לאחר גמילת ביום שלאחר הלידה 21, לבדוק את פתיחת הנרתיק על ידי בדיקה חזותית. ולהשתמש בקליברים כדי למדוד את המרחק של פינו-איברי המין. למרות הערכים המוחלטים של סרום DHT שונים בין ספקטרומטריית מסה וניתוח אליסה, השינוי העממי היחסי של DHT לעומת הכנסה ללא DHT דומה הן מניסויים והן מניסויים שונים.רמות DHT גדלים באופן משמעותי מן ההתעברות מראש דרך ההריון הן DHT ולא עכברים DHT. עם זאת, רמות DHT גבוהות פי שניים בעכברי DHT בהשוואה ללא עכברי DHT בנקודות זמן טרום תפיסה והן בנקודות זמן הריון. בנות DHT למבוגרים להפגין הבדלים בתפקוד הרבייה.לדוגמה, שיבש מחזוריות eestrous בהשוואה למבוגרים אין בנות DHT חווה פעמים ארוכות באופן משמעותי ב- metestrus diestrus ופחות זמן פרו אסתרית ואסטרית. בעת ניסיון הליך זה חשוב לזכור להידגר כדורי במשך 24 שעות לפני שהם משמשים לשחרור אחיד של ההורמון. בעקבות הליך זה, ניתן גם לבחון את ההשלכות הרבייה והמטבוליות של חשיפה ל- DHT.לאחר התפתחותו, טכנאי זה סלל את הדרך לחוקרים בתחום האנדוכרונולוגיה ואינטראקציות עובריות אימהיות לחקר PCOS וההשפעה של היפראנדרוגניזם ברמה נמוכה בעכברים נקביים. אל תשכח כי עבודה עם DHT יכול להיות מסוכן מאוד ואת אמצעי הזהירות כגון לבישת כפפות מסכה ומ המשקפיים, ועובד מכסה המנוע ביו בטיחות, תמיד צריך להילקח בעת ביצוע הליך זה.

a-hyperandrogenic-mouse-model-to-study-polycystic-ovary-syndrome

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

מאמר זה מתאר דרך להכין ולהחדיר כדורי דיהידרוטסטוסטרון (DHT) כדי למדל תסמונת שחלות פוליציסטיות (PCOS) בעכברים. הפרוטוקול לדוגמה מדגים את ההליך בעכברים המשמש למחקרי רבייה ומטבולים.

טיפול בדיהידרוטסטוסטרון תת עורי (DHT): מודל עכבר של תסמונת השחלות הפוליציסטיות (PCOS)

מודלים מכרסמים רבים של אנדומטריוזיס מוגבלים על ידי מורכבות טכנית, רבייה, ו / או צורך בעלי חיים immunocompromised או עכברי כתב מיוחד. אנו מציגים מערכת פשוטה של אינדוקציה נגע באמצעות כל עכבר ניסיוני עם מערכת ניקוד אובייקטיבית הניתנת לאימות עצמאי וללא דרישה לכריתת שחלות או ניתוח הישרדות.

מודל מורין סינגני של אנדומטריוזיס באמצעות עכברי רכיבה טבעיים

מחקר זה מתאר את המדידה הישירה של ייצור גלוקוז בכבד במודל עכבר תסמונת השחלות הפוציקסטי באמצעות מעקב גלוקוז איזוטופי יציב באמצעות וריד הזנב הן בצום והן במצבים עשירים בגלוקוז יחד.

הערכה של ייצור גלוקוז בכבד במודל עכבר תסמונת השחלות הפוציקסטי

הורמון מגרה זקיק (FSH) ברקמות ואיברים חוץ-גונדליים שונים קשור לפתוגנזה של מחלות מרובות. ניתן להשתמש במודל העכבר שעבר כריתת שחלות וטיפול ב- FSH (OVF) כדי לחקור את הפעולות החוץ-גונדליות של FSH.

חקר השפעות עצמאיות של הורמון מגרה זקיקים in vivo במודל עכבר

מחקר זה מציג מודל עכבר חדש שתוכנן במיוחד כדי לדמות אנדומטריומה, תת-סוג משמעותי קלינית של אנדומטריוזיס. על ידי שימוש בעכברי C57BL/6J, המודל שואף להבהיר את המנגנונים הפתופיזיולוגיים העומדים בבסיס אי פוריות הקשורה לאנדומטריומה, ומציע כלי מעודן לגשר על פער הידע הנוכחי ברפואת הרבייה.

הקמת מודל עכברי ניסיוני של אנדומטריומה כדי לחקור את אי הפוריות הקשורה אליה

פרוטוקול זה מציג טכניקה לגרימת מודלים של תסמונת השחלות הפוליציסטיות (PCOS) בעכברים באמצעות שחרור לטרוזול מבוקר באמצעות משאבות זעירות. תחת הרדמה מספקת, המשאבה הקטנה הושתלה תת עורית, ו- PCOS הושרה בהצלחה בעכברים לאחר תקופה מסוימת של שחרור המשאבה.

טכניקה שונה לגרימת תסמונת השחלות הפוליציסטיות בעכברים

אימות ניסיוני של פעילות משפר ניגש בצורה הטובה ביותר על ידי ניתוח אובדן תפקוד. מוצג כאן פרוטוקול יעיל המשתמש במחיקה בתיווך CRISPR/Cas9 כדי לחקור ויסות ספציפי לאלל של שעתוק גנים בתאי F1 ES המכילים גנום היברידי (Mus musculus129 x Mus castaneus).

יצירת CRISPR / Cas9 מתווכת Monoallelic מחיקות ללמוד לתפקד Enhancer בתאי עכבר גזע עובריים

פרוטוקול זה מציג שיטה לבצע מתחיל מתא בודד כמותי, בניתוח באתרו של ביטוי חלבון ללמוד מפרט השושלת בעוברים preimplantation העכבר. הנהלים הדרושים לאיסוף blastocysts, כל הר זיהוי immunofluorescent של חלבונים, הדמיה של דגימות על מיקרוסקופ confocal, ופילוח גרעיני וניתוח תמונה מתוארת.

ניתוח כמותי של ביטוי חלבון לחקר מפרט Lineage עכבר preimplantation עוברים

פרוטוקול זה מתאר את הבידוד, תרבות, הסתיידות של עכברוש-derived שסתום תאים ביניים, דגם מאוד פיזיולוגיים במבחנה של מחלת שסתום אבי העורקים calcific (CAVD). ניצול של מודל זה עכברוש מקלה על מחקר CAVD לחקור את התא ואת המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס תהליך פתולוגי מורכב זה.

בידוד ואפיון של החולדה הראשית שסתום תאים ביניים: מודל חדש ללמוד הסתיידות שסתום אבי העורקים

כאן נתאר שיטת הדמיה כולה-הר ברזולוציה גבוהה בעור האוזן והעכבר כולו למבוגרים, אשר מאפשרת לנו לדמיין מורפוגנזה מסעף והמתבנת של העצבים ההיקפיים, כלי הדם, כמו גם התפלגות תא החיסון.

כולה-הר מיקרוסקופיה קונפוקלית לעור מבוגר האוזן: מערכת מודל ללמוד מורפוגנזה מסעף נוירו-וסקולרית והפצה תא החיסון

למדו ליצור מודל עכברים עם תסמונת השחלות הפוליציסטיות באמצעות פלטות דיהידרוטסטוסטרון. שיטה זו מאפשרת שחרור הורמונלי עקבי לחקר השפעות ההיפראנדרוגניזם על הרבייה והצאצאים.

מודל Hyperandrogenic העכבר ללמוד תסמונת השחלות הפוליציסטיות

גלה סרטונים נוספים