Name: Microhemorrhages מוחי תת חריפה הנגרמת על ידי הזרקת ליפופוליסכריד בחולדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: למדו איך לגרום למיקרו-המורגיות מוחיות בחולדות Sprague-Dawley באמצעות הזרקת LPS. פרוטוקול זה מאפשר חקר מנגנוני דלקת ופגיעה במחסום הדם-מוח במחלות נוירולוגיות שונות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים ליי פנג ג'יאן המורה ועמיתיו מאוניברסיטת קפיטל הרפואה עבור הדרכה במהלך בדיקת MRI. אנו מודים גם ג'ינג Zeng מן המחלקה לנוירולוגיה, בבית החולים של ייצ'אנג של העם השני למתן תמיכה טכנית.

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי חיה על עצמך ועל שימוש הוועדה (ACUC) ה-PLA ביה"ח הכללי של צבא.
1. חומרים
<ol><li>הכנה של הזרקת LPS<ol>
<li>להוסיף 25 מ ל מים מזוקקים 25 מ ג של אבקת LPS נגזר typhimurium ס כדי ריכוז סופי של 1 מ"ג/מ"ל. לאחסן את הזריקה בשפופרת סטרילי ב 4 º C. התראה: LPS הוא רעיל.</li>
		<li>להכין פתרון EB 2% בתמיסת נורמלי 0.9% לשמור EB הזרקת ריכוז בעבודה.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. בעלי חיים
<ol><li>לנהל מאושרת. שתחסום את זכר חולדות ספראג-Dawley (SD), בגילאי 10 שבועות (ממוצע משקל: 280 ± 20 גרם) על ידי הזרקת בקרום הבטן. התראה: אם חולדות נרכשים מארגון אחר, אז השלב מסתגלת לא צריך להיות פחות מ- 7 ימים.</li>
</ol>3. LPS זריקות
<ol><li>להזריק LPS intraperitoneally לתוך כל עכברוש במינון של 1 מ"ג/ק"ג, וחוזרים העכברושים הכלוב שלהם הביתה. הערה: ההרדמה אינו הכרחי.</li>
	<li>שש שעות מאוחר יותר, להזריק את מינון זהה של הזרקת LPS לתוך העכברושים.</li>
	<li>לאחר 16 שעות להזריק באותו המינון של LPS לתוך העכברושים. התראה: מזריק SD חולדות LPS במינון של 1 מ ג/ק ג עלול לגרום שיעור התמותה של 5%. שיעור התמותה יכול להגדיל עוד יותר צעיר או מבוגר עכברים או חולדות נקבות בהריון.</li>
	<li>להחזיר את החולדות לכלובים שלהם לאחר הזרקת LPS ומספקים גישה ad libitum מזון ומשקה. הערה: חולדות תערוכת לתגובה דלקתית מערכתית ברורה, לכן חיוני כי הכלובים נשארים נקיים לאורך כל הניסוי. עכברושים צריך להיות בתדירות גבוהה (2 x יום) ניטור משקל, המראה הכללי של היחס לאחר הזריקה הראשונה LPS. אם החולדות מתחיל להפגין יציבה שפופות, נכונות לעבור, ירידה משמעותית במשקל (> 20%), פורפירין מכתים הם להיות בצורה הומאנית מורדמים לפני יום 7 נקודת סיום לימוד EB.</li>
</ol>4. דוגמה אוסף
<ol><li>הזרקת EB<ol>
<li>שבעה ימים לאחר הזריקה הראשונה, עזים ומתנגד העכברוש מאת intraperitoneally על פי הנהלים IACUC שאושרו.</li>
		<li>לחכות 1-2 דקות עד החולדות לא מראים תגובות רפלקס המצמוץ. ביצוע של 5-8 מ מדקירה עמוקה הלב על כל עכברוש; נקודת puncturing צריך להיות 5 מ מ לשוליים השמאליים של החזה ברווח intercostals 3 ו-4.</li>
		<li>המתן עד דם שחזור נצפית ולאחר להזריק EB במינון של 0.2 גרם/100 גרם משקל לתוך החדר השמאלי של הלב. התראה: דום לב לנקב, הזרקת EB יש בקפידה לבצעו. EB עשוי להיות מוזרק לתוך חלל בית החזה או קרום הלב במקום הנוזלים הלב השמאלי.<ol>
<li>למצוץ שוב עם שפופרת ריק והחלף אמצעי אחסון זה שפופרת EB לפני הזרקת כדי לעזור להפחית את הכשלונות (למשל., הזרקה אל הצלעות בטעות).</li>
		</ol>
</li>
		<li>שמור את החולדה במצב פרקדן למשך 10 דקות. הערה: אם המדגם אינו בשימוש כדי לזהות דליפות EB בתחום ההדמיה immunofluorescence, אז שלב זה עשוי להיות מושמט.</li>
	</ol>
</li>
	<li>תצפית מגעיל<ol>
<li>לבצע perfusions הלב באמצעות תמיסת מלח מאגר פוספט 1 מ' הקר (PBS) כדי לנקות את מוחי להערכת ואת המוח.<ol>
<li>באמצעות אזמל, לעשות חתך בבטן מעבר לכל אורכה של הסרעפת.</li>
			<li>חתך דרך צלעות רק שנשאר האמצע כלוב הצלעות.</li>
			<li>תפתחו חלל בית החזה. השתמש תופסנים כדי לחשוף את הלב, כדי להקל על ניקוז של דם ונוזלים אחרים.</li>
			<li>תוך החזקת בהתמדה את הלב עם מלקחיים (הלב צריך עדיין להיות מנצח), ישירות הוספה מחט לתוך בליטה של החדר השמאלי, הורחב כ 5 מ מ. לאבטח את המחט באותו מיקום על ידי מחבר חובק למעקה ליד נקודת כניסה. התראה: לא בצורה מוגזמת להרחיב את המחט, כפי שהוא יכול לחדור את החומה הפנימית לסכן את זרימת הדם של פתרונות.</li>
			<li>שחרר את השסתום כדי לאפשר זרימה פתרון PBS קר כקרח (200 – 300 מ"ל) בקצב איטי ויציב ב בסביבות 20 מ ל/דקה באמצעות משאבה זלוף. אם בעלי החיים דורשים קיבוע במקום תצפית ברוטו, השתמש המינון אותו תמיסת מלח קרה כקרח 0.9%.</li>
			<li>באמצעות מספריים חדות, לעשות חתך בחלל האטריום, המבטיח כי הפתרון זורם באופן רציף. אם הנוזל אינה זורמת בחופשיות או מגיע הנחיריים או הפה של החיה, למקם מחדש את המחט.</li>
		</ol>
</li>
		<li>מסך עבור CMHs באמצעות התבוננות ברוטו. הערה: אם המדגם לא משמש לחישוב מספר CMHs באמצעות התבוננות מגעיל, אז שלב זה עשוי להיות מושמט.</li>
	</ol>
</li>
	<li>קיבעון<ol>
<li>לבצע perfusions הלב באמצעות כקרח 0.9% תמיסת מלח (200 – 300 מ"ל) כדי לנקות את להערכת מוחי ואת המוח.</li>
		<li>לבצע perfusions הלב באמצעות קרח paraformaldehyde 4% עבור קיבעון.</li>
		<li>לערוף את החולדה, לבודד את המוח, לטבול את המוח ב- 20% סוכרוז פתרון לפחות 6 שעות.</li>
		<li>לשנות את הפתרון לתוך 30% סוכרוז, תיקון עבור עוד 6 שעות.
</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכינו 10 סעיפים רקמות המוח מ מעבה, באמצעות cryostat.</li>
</ol>5. הוא מכתים
הערה: הליך זה מבוצע באמצעות הוא מכתים ערכה.
<ol><li>לשטוף את השקופיות במים מזוקקים.</li>
	<li>כתם ב hematoxylin פתרון עבור 8 דקות לשטוף במים ברז למשך 5 דקות.</li>
	<li>להבדיל ב 1% אלכוהול חומצה עבור 30 ס' לשטוף במים מהברז עבור 1 דקות.</li>
	<li>כתם במים אמוניה 0.2% (הכחלת) או רווי ליתיום קרבונט פתרון עבור 30 s כדי 1 מינימלית לשטוף במים ברז למשך 5 דקות.</li>
	<li>שוטפים ב- 95% אלכוהול (10 מטבלים).</li>
	<li>Counterstain עם פתרון אאוזין 30 s כדי 1 דקות.</li>
	<li>מייבשים עד 95% אלכוהול, שני שינויים של אלכוהול המוחלט, למשך 5 דקות.</li>
	<li>ברור של קסילן ב-30 s.</li>
	<li>הר באמצעות שיטה של ליו9.</li>
	<li>לנתח באמצעות מיקרוסקופ זריחה brightfield. הערה: תאי דם אדומים שוחררו כלי דם, אשר הם הרכיבים של CMHs, מופיעים אדום כתום תחת הוא מכתים.</li>
</ol>6. פרל כחול פרוסי מכתים
הערה: הליך זה מבוצע באמצעות ערכת מכתים פרלס.
<ol><li>רחץ שקופיות עם מים מזוקקים.</li>
	<li>כתם בפתרון התגובה עם חלקים שווים תערובת של ferrocyanide חומצת מלח למשך 10 דקות.</li>
	<li>מייבשים, נקה, הר, ולנתח את השקופיות כמתואר בצעדים 5.7-5.10.</li>
</ol>7. EB כפול מכתים
הערה: הליך זה עוקב אחר צעד 4.1.3.
<ol><li>רחץ שקופיות עם PBS שלוש פעמים במשך 5 דקות.</li>
	<li>דגירה שקופיות עם 4', 6-diamidino-2-phenylindole פתרון (דאפי) למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר.</li>
	<li>לשטוף את השקופיות עם PBS פתרון שלוש פעמים במשך 5 דקות, והר שקופיות עם פתרון PBS-גליצרול.</li>
	<li>לנתח את התמונות על ידי קרינה פלואורסצנטית המיקרוסקופ. EB התצהיר שציין פלואורסצנטי אדום; הגרעינים מסומנים באמצעות כחול.</li>
</ol>8. אר. איי-מושכל
<ol><li>לבצע MRI על מגנט 7-T מצויד עם מערכת מעבר הצבע מחוברות באופן פעיל (16 ס"מ קוטר פנימי).</li>
	<li>שבעה ימים לאחר הטיפול, עזים ומתנגד העכברים מאת facemask שאיפה של 1.5-2.0% איזופלוריין באמצעות מערכת הרדמה איזופלוריין.</li>
	<li>להחיל משחה הוטרינר על גבי העיניים של העכברוש למניעת יובש תחת הרדמה.</li>
	<li>לשמור את החולדות שכיבה ולבצע בסריקה MRI-מושכל.</li>
	<li>להשיג מושכל משוקלל סריקות באמצעות רצף מהיר-ספין הד באמצעות הפרמטרים הבאים: הד הזמן (TE) 8 מילי-שניות, החזרה זמן (TR) 40 ms, היפוך זווית = ° 12, שדה ראייה (FOV) 35 מ מ × 35 מ מ, מטריקס רכישה 384 × 384, לרכוש פרוסות בעובי מ מ 1.</li>
	<li>לזהות CMHs ב MRI-מושכל על פי גרינברג. et al. 11, אשר כללה את הקריטריונים הבאים: (1) בקוטר של ≤10 מ"מ, ונקודות בעוצמה מעגלית (2), מבודד, קליטה נמוכה.</li>
	<li>בסוף הניסוי, המתת חסד החולדות באמצעות שיטת פחמן דו-חמצני (זרם של 6 L/min) או 30% נפח מיכל ממנת יתר.</li>
</ol>

<ol><li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+inflammation-induced+cerebral+microbleeds%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">A murine model of inflammation-induced cerebral microbleeds.</a> J Neuroinflammation. 13 (1), 218(2016).</li>
<li>Vernooij, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+risk+factors+of+cerebral+microbleeds+the+Rotterdam+Scan+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Prevalence and risk factors of cerebral microbleeds the Rotterdam Scan Study.</a> Neurology. 70 (14), 1208-1214 (2009).</li>
<li>Pettersen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbleed+topography%2C+leukoaraiosis%2C+and+cognition+in+probable+Alzheimer+disease+from+the+Sunnybrook+dementia+study%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Microbleed topography, leukoaraiosis, and cognition in probable Alzheimer disease from the Sunnybrook dementia study.</a> Archives of Neurology. 65 (6), 790-795 (2008).</li>
<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microbleeds+and+neuropsychiatric+symptoms+in+an+elderly+Asian+cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%2C+Neurosurgery%2C+and+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Cerebral microbleeds and neuropsychiatric symptoms in an elderly Asian cohort.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 88 (1), 7-11 (2017).</li>
<li>Mcauley, G., Schrag, M., Barnes, S., Obenaus, A., Dickson, A., Kirsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+iron+quantification+in+collagenase-induced+microbleeds+in+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Magnetic+Resonance+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">In vivo iron quantification in collagenase-induced microbleeds in rat brain.</a> Magnetic Resonance in Medicine. 67 (3), 711-717 (2012).</li>
<li>Reuter, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+cerebral+microbleeds+in+the+APP23-transgenic+mouse+model+of+cerebral+amyloid+angiopathy-a+9.4+tesla+MRI+study%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Aging+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Development of cerebral microbleeds in the APP23-transgenic mouse model of cerebral amyloid angiopathy-a 9.4 tesla MRI study.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 8 (8), 170(2016).</li>
<li>Scott, L. L., Downing, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+neonatal+exposure+to+BMAA+in+a+rat+model+produces+neuropathology+consistent+with+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Toxins%22%5BJournal%5D)">A single neonatal exposure to BMAA in a rat model produces neuropathology consistent with neurodegenerative diseases.</a> Toxins. 10 (1), E22(2018).</li>
<li>Toth, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+exacerbates+hypertension-induced+cerebral+microhemorrhages+in+mice%3A+role+of+resveratrol+treatment+in+vasoprotection%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Aging exacerbates hypertension-induced cerebral microhemorrhages in mice: role of resveratrol treatment in vasoprotection.</a> Aging Cell. 14 (3), 400-408 (2015).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+H%26E+and+Prussian+blue+staining+in+a+mouse+model+of+cerebral+microbleeds%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+%26+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of H&E and Prussian blue staining in a mouse model of cerebral microbleeds.</a> Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 62 (11), 767-773 (2014).</li>
<li>Zeng, J., Zhào, H., Liu, Z., Zhang, W., Huang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide+induces+subacute+cerebral+microhemorrhages+with+involvement+of+Nitric+Oxide+Synthase+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Stroke+and+Cerebrovascular+Diseases%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide induces subacute cerebral microhemorrhages with involvement of Nitric Oxide Synthase in rats.</a> Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 27 (7), 1905-1913 (2018).</li>
<li>Greenberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microbleeds%3A+A+guide+to+detection+and+interpretation%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerebral microbleeds: A guide to detection and interpretation.</a> Lancet Neurology. 8 (2), 165-174 (2009).</li>
<li>Hoffmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Field+MRI+reveals+a+drastic+increase+of+hypoxia-induced+microhemorrhages+upon+tissue+reoxygenation+in+the+mouse+brain+with+strong+predominance+in+the+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">High-Field MRI reveals a drastic increase of hypoxia-induced microhemorrhages upon tissue reoxygenation in the mouse brain with strong predominance in the olfactory bulb.</a> Plos One. 11 (2), e0148441(2016).</li>
<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+phosphodiesterase+3A+modulation+on+murine+cerebral+microhemorrhages%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Effects of phosphodiesterase 3A modulation on murine cerebral microhemorrhages.</a> Journal of Neuroinflammation. 14 (1), 114(2017).</li>
<li>Sumbria, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+exacerbates+development+of+cerebral+microbleeds+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Aging exacerbates development of cerebral microbleeds in a mouse model.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 69(2018).</li>
<li>Mello, B. S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+influences+in+behavior+and+brain+inflammatory+and+oxidative+alterations+in+mice+submitted+to+lipopolysaccharide-induced+inflammatory+model+of+depression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Sex influences in behavior and brain inflammatory and oxidative alterations in mice submitted to lipopolysaccharide-induced inflammatory model of depression.</a> Journal of Neuroimmunol. 320, 133-142 (2018).</li>
<li>Souza, D. F. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+astroglial+markers+in+a+maternal+immune+activation+model+of+schizophrenia+in+Wistar+rats+are+dependent+on+sex%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Cellular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Changes in astroglial markers in a maternal immune activation model of schizophrenia in Wistar rats are dependent on sex.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 9 (489), (2015).</li>
<li>Dutta, G., Zhang, P., Liu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Lipopolysaccharide+Parkinson%27s+disease+animal+model%3A+mechanistic+studies+and+drug+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Fundamental+%26+Clinical+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The Lipopolysaccharide Parkinson's disease animal model: mechanistic studies and drug discovery.</a> Fundamental & Clinical Pharmacology. 22 (5), 453-464 (2008).</li>
<li>El-Sayed, N. S., Bayan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possible+role+of+resveratrol+targeting+estradiol+and+neprilysin+pathways+in+lipopolysaccharide+model+of+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Possible role of resveratrol targeting estradiol and neprilysin pathways in lipopolysaccharide model of Alzheimer disease.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 822 (822), 107-118 (2015).</li>
<li>Combrinck, M. I., Perry, V. H., Cunningham, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+infection+evokes+exaggerated+sickness+behaviour+in+pre-clinical+murine+prion+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Peripheral infection evokes exaggerated sickness behaviour in pre-clinical murine prion disease.</a> Neuroscience. 112 (1), 7-11 (2002).</li>
<li>Pantoni, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+small+vessel+disease%3A+from+pathogenesis+and+clinical+characteristics+to+therapeutic+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Cerebral small vessel disease: from pathogenesis and clinical characteristics to therapeutic challenges.</a> Lancet Neurology. 9 (7), 689-701 (2010).</li>
<li>Rosand, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+clustering+of+hemorrhages+in+probable+cerebral+amyloid+angiopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Spatial clustering of hemorrhages in probable cerebral amyloid angiopathy.</a> Annals of Neurology. 58 (3), 459-462 (2005).</li>
<li>Robinson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microstructural+and+microglial+changes+after+repetitive+mild+traumatic+brain+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Microstructural and microglial changes after repetitive mild traumatic brain injury in mice.</a> Journal of Neuroscience Research. 95 (4), 1025-1035 (2017).</li>
<li>Kraft, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypercholesterolemia+induced+cerebral+small+vessel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Hypercholesterolemia induced cerebral small vessel disease.</a> Plos One. 12 (8), e0182822(2017).</li>
<li>Schreiber, S., Bueche, C. Z., Garz, C., Baun, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+brain+barrier+breakdown+as+the+starting+point+of+cerebral+small+vessel+disease%3F+-+New+insights+from+a+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+%26+Translational+Stroke+Medicine%22%5BJournal%5D)">Blood brain barrier breakdown as the starting point of cerebral small vessel disease? - New insights from a rat model.</a> Experimental & Translational Stroke Medicine. 5 (1), 4(2013).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

מחקרים על CMHs הגבירו בשנים האחרונות. עם זאת, המנגנון של CMHs עדיין לא ברור, הנחיה מדענים ליצור מודלים בבעלי חיים לדמות מצב מסוים זה. לדוגמה, הופמן. et al. פיתח הנוצרות על-ידי היפוקסיה CMHs העכבר מודל שמראה כי CMHs נגרמים על ידי היפוקסיה, שיבוש autoregulation כשאבדן12. רויטר. et al. 5 הוקם דגם CMHs העכברים הטרנסגניים-APP23, אשר הראו כי angiopathy עמילואיד במוח (סי) משחק תפקיד מרכזי האטיולוגיה של CMHs. פישר. et al. דיווח על מודל העכבר CMHs היה המוש...

Microhemorrhages מוחי הקלאסית (CMHs) עיין perivascular זעירים פיקדונות של מוצרי דם השפלה כגון hemosiderin של תאי דם אדומים במוח1. על פי המחקר רוטרדם לסרוק, CMHs ניתן למצוא אותה כמעט 17.8% של אנשים בגילאי 60-69 שנים ו- 38.3% אלה מעל 80 שנה2. השכיחות של CMHs אצל הקשישים הוא גבוה יחסית, מתאם בין ההצטברות של CMHs תפקוד קוגניטיבי, מנוטלי כבר הוקמה3,4. מספר מודלים חייתיים של CMHs לאחרונה דווחו, כולל דגמים מכרסמים המושרה על ידי הסוג הרביעי collagenase הזרקת stereotaxic5, APP הטרנסגניים6, β-N-methylamino-L-אלנין חשיפה7ויתר לחץ דם8, עם CMHs הנגרמת על ידי דלקת מערכתית כאחת האפשרויות המקובלת יותר היטב. פישר. et al. 9 השימוש הראשון LPS נגזר סלמונלה typhimurium לפתח מודל העכבר CMHs חריפה. לאחר מכן, באותה הקבוצה דיווח על התפתחות מודל תת חריפה CMHs העכבר באמצעות גישה זהה של2.
LPS נחשבת תקנית גירוי דלקתי באמצעות הזרקת בקרום הבטן. מחקרים קודמים אישרו כי הזרקת LPS עלול לגרום neuroinflammation כפי שהיא משתקפת כמויות גדולות של מיקרוגלייה, הפעלת אסטרוציט בחיה מודלים2,10. יתר על כן, מתאם חיובי בין הפעלה של הפעלת neuroinflammation המספר של CMHs כבר הקים2,10. בהתבסס על מחקרים קודמים אלה, אנחנו כשהתבקשת לפתח מודל עכברוש CMHs על ידי הזרקה בקרום הבטן של LPS.
. ההתקדמות זיהוי הטכנולוגיות גרמו לעלייה במספר חקירות מחקר ב- CMHs. הכי נרחב הודה שיטות גילוי CMHs כוללות את הגילוי של כדוריות דם אדומות על ידי hematoxylin אאוזין (הוא) מכתים, ברזל ferric זיהוי על ידי כחול פרוסי מכתים9, זיהוי של אוונס כחול (EB) תצהיר על ידי immunofluorescence הדמיה, טסלה 7.0 תהודה מגנטית-הרגישות משוקלל הדמיה (MRI-מושכל)10. המחקר הנוכחי שואפת לפתח שיטת הקרנה של CMHs.

<table><tbody><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-2630</td><td>לאינדוקציה דלקתית</td></tr><tr><td>EB</td><td>Sigma-aldrich</td><td>E2129</td><td>לזיהוי דליפות</td></tr><tr><td>EB תמיסת גסיסה DAPI</td><td>Servicbio</td><td>G1012</td><td>ספירה בינונית עבור IF</td></tr><tr><td>Perl' s צביעה פרוסית</td><td>Solarbio</td><td>G1424</td><td>ערכה לצביעה פרוסית</td></tr><tr><td>HE צביעת</td><td>Solarbio</td><td>G1120</td><td>ערכה לצביעה HE</td></tr><tr><td>כלורל הידרט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47335U</td><td>להרדמה</td></tr><tr><td>פוספט מאגר מלח (PBS)</td> <td>Solarbio</td><td>P1022</td><td>מעין תמיסת חיץ הנפוצה בניסוי</td></tr><tr><td>0.9% תמיסת</td> <td>מלחHainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., סין</td><td></td><td>פתרון לפרפוזיה</td></tr><tr><td>פרפורמלדהיד</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>158127</td><td>סוג של תמיסה המשמשת בדרך כלל לקיבוע תמיסת סוכרוז</td></tr><tr><td>20%</td><td>Solarbio</td><td>G2461</td><td>סוג של תמיסה המשמשת בדרך כלל לקיבוע תמיסת סוכרוז</td></tr><tr><td>30%</td><td>Solarbio</td><td>G2460</td> סוג <td>של תמיסה המשמשת בדרך כלל לקיבוע</td></tr><tr><td>משחה וטרינרית</td><td>ג'ל עיניים Solcoseryl, Bacel, שוויץ</td><td></td><td>להגנה על עיני חולדות</td></tr></tbody></table>

microhemorrhages מוחי תת חריפה הנגרמת על ידי הזרקת ליפופוליסכריד בחולדות

Sub-acute Cerebral Microhemorrhages Induced by Lipopolysaccharide Injection in Rats

Microhemorrhages מוחי (CMHs) שכיחים בחולים בגילאי, נמצאים בקורלציה מנוטלי הפרעות שונות. האטיולוגיה של CMHs מורכבים, neuroinflammation נצפית לעיתים קרובות כמו מופע משותף. כאן, אנו מתארים תת חריפה CMHs חולדה מודל המושרה על ידי הזרקת ליפופוליסכריד (LPS), כמו גם שיטה לגילוי הזרקת LPS מערכתית CMHs. הוא יחסית פשוט, חסכוני וחסכונית. אחד היתרונות של הזרקת LPS הוא יציבותו כדי לגרום לדלקת. CMHs הנגרמת על ידי הזרקת LPS יכול יזוהו על-ידי התבוננות ברוטו hematoxylin ו אאוזין (הוא) צביעת, של Perl מכתים הפרוסי, אוונס כחול (EB) כפול-תיוג, דימות תהודה מגנטית-הרגישות משוקלל טכנולוגיית הדמיה (MRI-מושכל). לבסוף, שיטות אחרות לפתח מודלים בעלי חיים CMHs, כולל שלהם יתרונות או חסרונות, נדונות גם בדו ח זה.

ניתן להבחין CMHs תוך שימוש בגישות שונות. השיטות המקובלת יותר היטב כוללים את הפריטים הבאים: (1) דוחה תצפית והערכה של פני השטח CMHs (ראה איור 1, החלונית העליונה); (2) הוא מכתים איתור של תאי דם אדומים (ראה איור 2A, החלונית העליונה) או הפרוסי צביעת הברזל ferric גילוי נגזר פירוק של כדוריות דם אדומות (איור 2 א, החלונית התחתונה); (3) EB הוכפל מכתים איתור התצהיר EB נגזר BBB דליפה (איור 3...

אנו מציגים פרוטוקול זירוז ולגלות CMHs הנגרמת על ידי הזרקת LPS בחולדות ספראג-Dawley, אשר עשוי להיות מנוצל בעתיד חקירות מחקר בפתוגנזה של CMHs.

Microhemorrhages מוחי תת חריפה הנגרמת על ידי הזרקת ליפופוליסכריד בחולדות

Cerebral microhemorrhages (CMHs) are common in aged patients and are correlated to various neuropsychiatric disorders. The etiology of CMHs is complex, ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום המיקרו-דימום המוחי כגון אטיולוגיה, הפצה וזיהוי של מיקרו-דימום מוחי וכן הלאה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי זריקות LPS לגרום דלקת. בנוסף, הזרקת LPS היא די פשוטה, חסכונית וחסכונית.למרות שיטה זו יכולה לספק תובנה אינדוקציה דימום מוחי, זה יכול להיות מיושם גם על הפרעות מוחיות אחרות כגון דיכאון, סכיזופרניה, מחלת פרקינסון, מחלת אלצהיימר, ומחלת פריון. ניהול LPS במינון של מיליגרם אחד לקילוגרם של משקל גוף לחולדות ספראג דאוולי זכר בן 10 שבועות על ידי הזרקה תוך-לידתית, ואז להחזיר כל חולדה לכלוב הבית. חזור על הזרקת LPS לאחר שש שעות ו 16 שעות.שים לב כי הזרקת חולדות SD עם LPS במינון של מיליגרם אחד לקילוגרם עלולה לגרום לתמותה של 5%. התמותה יכולה לעלות עוד יותר אצל חולדות צעירות או מבוגרות יותר או חולדות בהריון. להחזיר את החולדות לכלובים שלהם לאחר הזרקת LPS, ולספק גישה ליביטום מודעה למזון ושתייה.תחת הרדמה סופנית, לבצע ניקור לב עמוק חמישה עד שמונה מ"מ על כל חולדה. נקודת הדקירה צריכה להיות חמישה מילימטרים בשוליים השמאליים של עצם החזה בחלל הבין-צלעי השלישי והרביעי. החזק את המחט במקום ולהחליף את הצינור הריק עם צינור המכיל אוונס כחול.חכה עד התאוששות הדם נצפתה, ולאחר מכן להזריק אוונס כחול במינון של 0.2 מיליליטר לכל 100 גרם של משקל גוף לתוך החדר הלב השמאלי. שמור את החולדה במצב עלוב במשך 10 דקות אם הערכת דליפת אוונס כחול דרך מחסום הדם / מוח על ידי הדמיה immunofluorescence. בצע חליטות לב באמצעות קר כקרח 200 עד 300 מיליליטר של 0.9% תמיסת מלח כדי לנקות את כלי הדם המוחיים ואת המוח.עבור אל קר כקרח 4% paraformaldehyde עבור קיבעון. לאחר מכן, לאחר בידוד המוח, לטבול אותו 20% סוכרוז ב PBS לפחות שש שעות או עד המוח שוקע לתחתית הצינור. שנה את הפתרון ל- 30%sucrose ותקן אותו למשך שש שעות נוספות.לבסוף, להכין 10 מילימטר עבה רקמת המוח חלקים באמצעות קריוסטט. לשטוף את השקופיות עם PBS שלוש פעמים במשך חמש דקות כל אחד, ולאחר מכן דגירה שקופיות עם 4, 6'diamidino-2-פנילינדולה או DAPI פתרון במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר שטיפת השקופיות ב- PBS כבעבר, תן את השקופיות עם פתרון PBS-גליצרול.לכידת תמונות במיקרוסקופ פלואורסצנטי. תצהיר EB מסומן על ידי פלואורסצנטיות אדומה, גרעינים מסומנים על ידי פלואורסצנטיות כחולה. התחל מכתים H&E על ידי שטיפת המגלשות במים מזוקקים.ואז לטבול תווי hematoxylin במשך שמונה דקות. לחלופין, עבור כתמים כחולים Perl Prussian, כתם בת פתרון תגובה עם תערובת חלקים שווים של פרוציאניד וחומצה הידרוכלורית במשך 10 דקות. לאחר הכתמים, יש לשטוף במי ברז זורמים במשך חמש דקות.להבדיל 1% חומצה אלכוהול במשך 30 שניות. לאחר שטיפה במי ברז זורמים למשך דקה אחת, יש להכתים במי אמוניה 0.2% או בתווית ליתיום קרבונט רוויה למשך 30 שניות עד דקה. לאחר מכן, יש לשטוף במי ברז זורמים למשך חמש דקות.כתם נגדי עם תוסף אאוסין למשך 30 שניות עד דקה אחת. התייבשות באמצעות 90% אלכוהול, לאחר מכן 95% אלכוהול, ואלכוהול מוחלט במשך 0.5 עד שתי דקות כל אחד. לאחר התייבשות, יש לנקות את הקסילן למשך 30 שניות.לאחר ההרכבה, לנתח את כתמי H&E באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי בהיר שדה. תאי הדם האדומים המשתחררים מכלי הדם, שהם רכיבים של CMHs, מופיעים באדום-כתום תחת כתמי H&E. CMHs פני השטח ניתן לזהות על ידי תצפית ברוטו כפי שצוין על ידי החצים האדומים.הכתם הכחול של אוונס חושף פלואורסצנטיות אדומה גלויה שבה מולקולות כחולות של אוונס דלפו ממחסום דם-מוח פצוע. כתמי H&E מראים תאי דם אדומים שנמצאו מחוץ לנימים, וכתמים פרוסיים חושפים נקודות יונים ברזליות שמקורן תיזה של תאי דם אדומים. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי המינון של LPS כדי לגרום לדימום מיקרו מוחי גדול יותר מזה המשמש מחלת פרקינסון או מודל סכיזופרניה.לכן, הסביבה של בעלי חיים צריכה להישמר נקייה כדי להפחית את שיעור התמותה. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו מיקרוסקופ אלקטרונים, דימות תהודה מגנטית והדמיה immunofluorescent כדי לקבוע את הנזק למבנה החיצוני של מחסום הדם - מוח בדימום מיקרו מוחי, הפצה של מיקרו דימומים מוחיים בפרנצ'ימה במוח ב vivo, כמו גם הפעלת תאי גליה.

sub-acute-cerebral-microhemorrhages-induced-lipopolysaccharide

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

דימום תת עכבישי Aneurysmal (sah) הוא דימום שמתרחש בחלל תת העכבישים כאשר נקרע מפרצה. בעוד התחלואה והתמותה מהאירוע הזה כבר על ירידה עקב גישות טיפול משופרים, הסיכון של vasospasm לאחר דימום subarachnoid ממשיך להיות כפי שהיה לפני מספר שנים. החשיבות של הקמת מודל חיה מקיפה ולשעתק לזהות אירועי ייזום של vasospasm מוחות כבר למוקד של מחקר מאז השימוש הראשון של חולדות במודל vasospasm ניסיוני בשנת 1979 על ידי...

מודל חולדת תמותה נמוך להערכת Vasospasm מוחות המושהה לאחר דימום subarachnoid ניסויי

מודלים של בעלי חיים רלוונטיים קליני של דימום intracerebral (ICH) על מנת להרחיב את הידע של שבץ המדמם שלנו ולבחון אסטרטגיות טיפוליות חדשניות. במחקר זה, אנו מתארים ולהעריך את שני מודלי ICH המיישמים זריקות חד צדדיות של כל אחד דם אוטולוגית או collagenase חיידקים לגרעיני בסיס (קורפוס סטריאטום) של עכברים.

דימום דוגמנות intracerebral בעכברים: הזרקה של דם או השתלת collagenase קטריאלי

סרטון זה מדגים את התהליך של גרימת הפרעה במחסום הדם-מוח (BBB) ודימומים מוחיים במודל חולדה באמצעות ליפופוליסכריד (LPS). הוא מדגיש את רצף התגובות החיסוניות שמובילות לחדירות מוגברת של BBB ולאחר מכן לנזק לרקמת המוח.

השראת מיקרו-דימומים מוחיים במודל חולדה באמצעות ליפופוליסכריד

סרטון זה מדגים בדיקה לזיהוי מיקרו-דימומים מוחיים (CMHs) במודל חולדה. CMHs הם דימומים מוחיים עקב הפרעה במחסום הדם-מוח, המזוהים על ידי תאי דם אדומים שדלפו (RBCs). במודל של חולדה, רקמת מוח קבועה מוגנת בהקפאה, חתוכה ומוכתמת בהמטוקסילין-אאוזין עבור RBCs, מה שמאפשר הדמיה מיקרוסקופית של CMHs. RBCs שדלפו מופיעים כאדומים-כתומים מתחת למיקרוסקופ.

איתור מיקרו-דימומים מוחיים במודל חולדה

מודלים פרה-קליניים של דימום תוך מוחי משמשים לחיקוי היבטים מסוימים של מחלה קלינית. לפיכך, ניתן לחקור מנגנוני פציעה ואסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות. בפרוטוקול זה מתוארים שני מודלים של דימום תוך מוחי, זריקות תוך-סטריאטליות (גרעיני בסיס) של דם אוטולוגי או קולגנאז.

הזרקת Intrastriatal של עצמי בדם או קלוסטרידיאל Collagenase כמודלים Murine של Intracerebral שטף דם

אנצפלופתיה של פגות מקיפה את ההפרעות במערכת העצבים המרכזית הקשורות לפגיעה מלידה מוקדמת. דוח זה מתאר מודל חולדה רלוונטי מבחינה קלינית של איסכמיה מערכתית חולפת ברחם ומתן ליפופוליסכריד תוך מי שפיר (LPS) המחקה כוריואמניוניטיס, ואת ההשפעה הקשורה של גירויים זיהומיים ותת-עירוי שליה על התפתחות מערכת העצבים המרכזית.

דוגמנות אנצפלופתיה של פגות שימוש בהריון היפוקסיה-איסכמיה עם lipopolysaccharide Intra-השפיר בחולדות

הפרוטוקול המוצג כאן מאפשר רבייה של חיקוי נרחב של חומר אפור של שתי ההמיספרות הקליפתיות בחולדות אגוטי אפלות זכריות בוגרות. השיטה כוללת השתלה תוך-מוחית של קטטר, חיסון תת-אקליני נגד מיאלין אוליגודנדרוציטים גליקופרוטאין, והזרקה תוך-מוחית של תערובת ציטוקינים פרו-דלקתית דרך הצנתר המושתל.

מודל חולדה של דמיאלינציה קליפת המוח הנרחבת הנגרמת על ידי הזרקה תוך מוחית של ציטוקינים פרו דלקתיים

אנו מציגים פרוטוקול להקמת מודל דימום פונטין מסיבי בחולדה באמצעות הזרקה כפולה של דם אוטולוגי.

דימום פונטין מסיבי על ידי הזרקה כפולה של דם אוטולוגי

דימום תת-קרקעי ממשיך לשאת נטל גבוה של תמותה ותחלואה באדם. כדי לאפשר מחקר נוסף על המצב והפתופיזיולוגיה שלו, מוצג מודל פרה-כיאזמטי, הזרקה יחידה.

טרום כיאזמטי, הזרקה יחידה של דם אוטולוגי כדי לגרום לדימום ניסיוני subarachnoid במודל חולדה

ניתן לעצב הידרוצפלוס פוסט-דימומי של פגות (PHHP) בחולדות יילודים על ידי שילוב של כוריואמניוניטיס ודימום תוך חדרי. השילוב של אירועים אלה לפני הלידה ואחרי הלידה מסכם במדויק את סימני ההיכר הקליניים של PHHP, כולל מקרוצפליה, ונטריקולומגליה, ולחץ תוך גולגולתי מוגבר, לאורך החיים.

מידול הידרוצפלוס פוסט-דימומי של פגות בחולדות

במחקר זה, טכניקת החדרה אנדוטרכיאלית לא פולשנית הוכחה כמפתחת ALI בעכברים באמצעות לרינגוסקופ בסיסי להבטחת העברת LPS מדויקת לריאות. ה-LPS מושתל דרך צינור אנדוטרכיאלי באמצעות לרינגוסקופ. גודל הפגיעה בריאתיות מוערך במספר נקודות זמן.

מתן לא פולשני של ליפופוליסכריד באנדוטרכיה כדי לגרום לפגיעה ריאתית חריפה אצל מכרסמים

למדו איך לגרום למיקרו-המורגיות מוחיות בחולדות Sprague-Dawley באמצעות הזרקת LPS. פרוטוקול זה מאפשר חקר מנגנוני דלקת ופגיעה במחסום הדם-מוח במחלות נוירולוגיות שונות.

Microhemorrhages מוחי תת חריפה הנגרמת על ידי הזרקת ליפופוליסכריד בחולדות

גלה סרטונים נוספים