Name: דג זברה בוגרת מודלים פציעה ללמוד את השפעות Prednisolone רגנרציה רקמת העצם (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-18T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: חקור את ההשפעות של תרופות אימונוסופרסיביות על רגנרציה של רקמת עצם בדגי זברה בוגרים באמצעות מודלים של פציעת סנפיר וגולגולת. השיטה מאפשרת חשיפה מבוקרת לתרופות וניטור מינרליזציה של עצם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

מחקר זה נתמך על ידי מענק מרכז של משובי טיפולים דרזדן ("דג זברה כמודל לפענח את המנגנונים של אובדן עצם המושרה glucocorticoid"), בנוסף על ידי מענק של פתוח (Transregio 67, פרויקט 387653785) כדי FK. אנחנו מאוד אסירי תודה. Jan Kaslin, Chekuru אווינאש עבור שלהם הדרכה וסיוע על ביצוע trepanation של calvariae, שברים סנפיר גרמית קרני הניסויים היו תוכנן, שבוצעה, נותחו על ידי ק ג, FK. FK כתב היד. כן נרצה להודות Katrin למברט, ניקול Cudak וחברים אחרים של מעבדות קנופף וברנד לקבלת סיוע טכני ודיון. תודתנו גם הולך אל פישר מריקה, Jitka Michling לטיפול דגים מעולה, הנרייטה קנופף, ג'וש קורי להגהת כתב היד.

<ol><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+Zebrafish+Book.+A+Guide+for+The+Laboratory+Use+of+Zebrafish+%28Danio+rerio%29%22">The Zebrafish Book. A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio)</a>. 385, (2000).</li>
<li>Xu, C., Volkery, S., Siekmann, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intubation-based+anesthesia+for+long-term+time-lapse+imaging+of+adult+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Intubation-based anesthesia for long-term time-lapse imaging of adult zebrafish.</a> Nature Protocols. 10 (12), 2064-2073 (2015).</li>
<li>Kaufman, C. K., White, R. M., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+genetic+screening+in+the+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Chemical genetic screening in the zebrafish embryo.</a> Nature Protocols. 4 (10), 1422-1432 (2009).</li>
<li>Paul, S., Crump, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+on+skeletal+cell+plasticity+from+studying+jawbone+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Bonekey+Reports%22%5BJournal%5D)">Lessons on skeletal cell plasticity from studying jawbone regeneration in zebrafish.</a> Bonekey Reports. 5, 853(2016).</li>
<li>Witten, P. E., Harris, M. P., Huysseune, A., Winkler, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+teleost+fish+provide+new+insights+into+human+skeletal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Small teleost fish provide new insights into human skeletal diseases.</a> Methods in Cell Biology. 138, 321-346 (2017).</li>
<li>den Uyl, D., Bultink, I. E., Lems, W. F. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s11926-011-0173-y">Advances in glucocorticoid-induced osteoporosis.</a> Current Rheumatology Reports. 13 (3), 233-240 (2011).</li>
<li>Barrett, R., Chappell, C., Quick, M., Fleming, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid%2C+high+content%2C+in+vivo+model+of+glucocorticoid-induced+osteoporosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnology+Journal%22%5BJournal%5D)">A rapid, high content, in vivo model of glucocorticoid-induced osteoporosis.</a> Biotechnology Journal. 1 (6), 651-655 (2006).</li>
<li>de Vrieze, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prednisolone+induces+osteoporosis-like+phenotype+in+regenerating+zebrafish+scales%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoporosis+International%22%5BJournal%5D)">Prednisolone induces osteoporosis-like phenotype in regenerating zebrafish scales.</a> Osteoporosis International. 25 (2), 567-578 (2014).</li>
<li>Pasqualetti, S., Congiu, T., Banfi, G., Mariotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alendronate+rescued+osteoporotic+phenotype+in+a+model+of+glucocorticoid-induced+osteoporosis+in+adult+zebrafish+scale%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+Of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Alendronate rescued osteoporotic phenotype in a model of glucocorticoid-induced osteoporosis in adult zebrafish scale.</a> International Journal Of Experimental Pathology. 96 (1), 11-20 (2015).</li>
<li>Geurtzen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+Suppressive+and+Bone+Inhibitory+Effects+of+Prednisolone+in+Growing+and+Regenerating+Zebrafish+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Immune Suppressive and Bone Inhibitory Effects of Prednisolone in Growing and Regenerating Zebrafish Tissues.</a> Journal of Bone and Mineral Research. , (2017).</li>
<li>Geurtzen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mature+osteoblasts+dedifferentiate+in+response+to+traumatic+bone+injury+in+the+zebrafish+fin+and+skull%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mature osteoblasts dedifferentiate in response to traumatic bone injury in the zebrafish fin and skull.</a> Development. 141 (11), 2225-2234 (2014).</li>
<li>Matthews, M., Varga, Z. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23382350">Anesthesia and euthanasia in zebrafish.</a> Institute of Laboratory Animal Resources Journal. 53 (2), 192-204 (2012).</li>
<li>Lee, Y., Grill, S., Sanchez, A., Murphy-Ryan, M., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf+signaling+instructs+position-dependent+growth+rate+during+zebrafish+fin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Fgf signaling instructs position-dependent growth rate during zebrafish fin regeneration.</a> Development. 132, 5173-5183 (2005).</li>
<li>Hirasawa, T., Kuratani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+the+vertebrate+skeleton%3A+morphology%2C+embryology%2C+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Zoological+Letters%22%5BJournal%5D)">Evolution of the vertebrate skeleton: morphology, embryology, and development.</a> Zoological Letters. 1, 2(2015).</li>
<li>Kaslin, J., Kroehne, V., Ganz, J., Hans, S., Brand, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+of+neuroepithelial-like+and+radial+glia-like+progenitor+cells+in+cerebellar+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Distinct roles of neuroepithelial-like and radial glia-like progenitor cells in cerebellar regeneration.</a> Development. 144 (8), 1462-1471 (2017).</li>
<li>Knopf, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerates+via+Dedifferentiation+of+Osteoblasts+in+the+Zebrafish+Fin%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Regenerates via Dedifferentiation of Osteoblasts in the Zebrafish Fin.</a> Developmental Cell. 20 (5), 713-724 (2011).</li>
<li>van Eeden, F. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+affecting+somite+formation+and+patterning+in+the+zebrafish%2C+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Mutations affecting somite formation and patterning in the zebrafish, Danio rerio.</a> Development. 123, 153-164 (1996).</li>
<li>Walker, M. B., Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+two-color+acid-free+cartilage+and+bone+stain+for+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnic+%26+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">A two-color acid-free cartilage and bone stain for zebrafish larvae.</a> Biotechnic & Histochemistry. 82 (1), 23-28 (2007).</li>
<li>Kyritsis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+inflammation+initiates+the+regenerative+response+in+the+adult+zebrafish+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Acute inflammation initiates the regenerative response in the adult zebrafish brain.</a> Science. 338 (6112), 1353-1356 (2012).</li>
<li>Oppedal, D., Goldsmith, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemical+screen+to+identify+novel+inhibitors+of+fin+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">A chemical screen to identify novel inhibitors of fin regeneration in zebrafish.</a> Zebrafish. 7 (1), 53-60 (2010).</li>
<li>Ellett, F., Pase, L., Hayman, J. W., Andrianopoulos, A., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((mpeg1+promoter+transgenes+direct+macrophage-lineage+expression+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">mpeg1 promoter transgenes direct macrophage-lineage expression in zebrafish.</a> Blood. 117 (4), e49-e56 (2011).</li>
<li>Spoorendonk, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoic+acid+and+Cyp26b1+are+critical+regulators+of+osteogenesis+in+the+axial+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Retinoic acid and Cyp26b1 are critical regulators of osteogenesis in the axial skeleton.</a> Development. 135 (22), 3765-3774 (2008).</li>
<li>Gioia, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chaperone+activity+of+4PBA+ameliorates+the+skeletal+phenotype+of+Chihuahua%2C+a+zebrafish+model+for+dominant+osteogenesis+imperfecta%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">The chaperone activity of 4PBA ameliorates the skeletal phenotype of Chihuahua, a zebrafish model for dominant osteogenesis imperfecta.</a> Human Molecular Genetics. 26 (15), 2897-2911 (2017).</li>
<li>Fiedler, I. A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severely+impaired+bone+material+quality+in+Chihuahua+zebrafish+resembles+classical+dominant+human+osteogenesis+imperfecta%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bone+and+Mineral+Research%22%5BJournal%5D)">Severely impaired bone material quality in Chihuahua zebrafish resembles classical dominant human osteogenesis imperfecta.</a> Journal of Bone and Mineral Research. , (2018).</li>
<li>Fisher, S., Jagadeeswaran, P., Halpern, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiographic+analysis+of+zebrafish+skeletal+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Radiographic analysis of zebrafish skeletal defects.</a> Developmental Biology. 264 (1), 64-76 (2003).</li>
<li>Hayes, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+deformity+in+aged+zebrafish+is+accompanied+by+degenerative+changes+to+their+vertebrae+that+resemble+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Spinal deformity in aged zebrafish is accompanied by degenerative changes to their vertebrae that resemble osteoarthritis.</a> PLoS One. 8 (9), e75787(2013).</li>
<li>Mitchell, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+tools+for+studying+osteoarthritis+genetics+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">New tools for studying osteoarthritis genetics in zebrafish.</a> Osteoarthritis Cartilage. 21 (2), 269-278 (2013).</li>
<li>Fleming, A., Sato, M., Goldsmith, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+in+vivo+screening+for+bone+anabolic+compounds+with+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomolecular+Screening%22%5BJournal%5D)">High-throughput in vivo screening for bone anabolic compounds with zebrafish.</a> Journal of Biomolecular Screening. 10 (8), 823-831 (2005).</li>
<li>de Vrieze, E., Zethof, J., Schulte-Merker, S., Flik, G., Metz, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+novel+osteogenic+compounds+by+an+ex+vivo+sp7%3Aluciferase+zebrafish+scale+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Identification of novel osteogenic compounds by an ex vivo sp7:luciferase zebrafish scale assay.</a> Bone. 74, 106-113 (2015).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

דג זברה הוכיחו מועיל במחקר שלד לגבי רבים. מוטציות שנבחר לחקות היבטים של מחלות אנושיות כגון פרכת או דלקת מפרקים ניוונית23,24,25,26,27, הזחלים, כמו גם סולמות משמשות כדי לזהות העצם תרכובות סטרואידים אנבוליים מולקולה קטנה מסכי7,28,29. הטיפולים של דג זברה עם סמים המוחלות ה...

דג זברה מייצגים במודל בעלי חיים רב עוצמה ללמוד פיתוח חוליות ומחלות. זה בשל העובדה כי הם חיות קטנות זה מתרבים טוב מאוד, כי הגנום שלהם הוא מלא ברצף, לבצע מניפולציה1. יתרונות נוספים כוללים את האפשרות לבצע הדמיה חיה המשך בשלבים שונים, לרבות ויוו הדמיה של דג זברה בוגרת2והיכולת לבצע תפוקה גבוהה סמים מסכי דג זברה הזחלים3. בנוסף, דג זברה בעלי קיבולת גבוהה משובי במגוון של איברים ורקמות כולל העצם, ובכך לשמש מערכת שימושי כדי ללמוד מחלת השלד ותיקון4,5.
אוסטאופורוזיס glucocorticoid-induced (ג'יו) היא מחלה הנובעת טיפול לטווח ארוך עם glucocorticoids, למשל במהלך טיפול מחלות אוטואימוניות כגון אסטמה או דלקת מפרקים שגרונית. ג'יו מתפתח אצל כ- 30% מהחולים שטופלו glucocorticoid ומייצגת בעיה בריאות ור6; לכן, חשוב לחקור את ההשפעה של החיסוני על רקמת העצם בפירוט רב. בשנים האחרונות פותחו מגוון דגמים דג זברה העוסקים בפתוגנזה של ג'יו. איבוד העצם בתיווך glucocorticoid יש כבר המושרה בדג זברה הזחלים, לדוגמה, אשר הובילה הזיהוי של תרכובות counteractive הגדלת מסת העצם אצל סמים מסך7. יתר על כן, עצם המושרה glucocorticoid מעכבות ההשפעות יש כבר חיקה של דג זברה מאזני גם במבחנה וגם ויוו8,9. מבחני אלה הם מאוד משכנע גישות, במיוחד כשמדובר הזיהוי של הרומן סמים אנבוליים לדיכוי המערכת החיסונית ועצמות. עם זאת, הם רק בחלקו לקחת בחשבון את השלד, לא בוצעו בהקשר משובי. לפיכך, הם אינם מאפשרים את חקירת glucocorticoid בתיווך ההשפעות במהלך מהיר מצבים של היווצרות העצם למבוגרים, משובי.
כאן, אנו מציגים פרוטוקול המאפשר לחוקרים ללמוד glucocorticoid בתיווך ההשפעות על עצמות דג זברה מבוגרים שעברו התחדשות. פציעה מודלים כוללים קטיעה חלקית של סנפיר דג זברה סימטרית, trepanation של הגולגולת, כמו גם היצירה של פין ריי שברים (איור 1Aג-1), בשילוב עם חשיפה הדגירה ויה glucocorticoid (איור 1E ). השתמשנו לאחרונה חלק של פרוטוקול זה כדי לתאר את ההשלכות של חשיפה prednisolone, אחת התרופות הסטרואידים שנקבע בדרך כלל, על דג זברה בוגרת התחדשות העצם סנפיר והגולגולת10. דג זברה, מוביל מינהל prednisolone אוסטאובלסט ירד התפשטות, בידול אוסטאובלסט לא שלם של אינדוקציה מהירה של אפופטוזיס שושלת היוחסין מונוציט/מקרופאג10. ב פרוטוקול זה, גם נתאר כמה שברים יכול להיות מוחדרים יחידה פין גרמית ריי מקטעי11, כמו גישה זו עשויה להיות שימושית כאשר לומדים בתיווך glucocorticoid השפעות על עצם המתרחשים במהלך תיקון שבר. השיטות המובאות כאן יסייע לכתובת נוספות שבבסיס מנגנוני הפעולה glucocorticoid במהירות התחדשות העצם, עשוי גם להיות מועסק בהגדרות אחרות של ניהול סמים מערכתית בהקשר של התחדשות רקמות דג זברה.

<table><tbody><tr><td>פרדניזולון</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>P6004</td><td></td></tr><tr><td>דימתילסולפוקסיד (DMSO)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>אתיל-3-אמינובנזואט מתאנסולפונאט (MS-222)</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A5040</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים קהים</td><td>Aesculap</td><td>BD027R</td><td></td></tr><tr><td>מלקחיים עדינים</td><td>דומונט</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>אזמל</td><td>בראון</td><td>5518059</td><td></td></tr> מחט הזרקת <tr><td>840004</td><td></td><td>Agarose</td><td>Biozym</td></tr><tr><td>(0.3 מ"מ x 13 מ"מ)</td><td>BD Beckton Dickinson</td><td>30400</td><td></td></tr><tr><td>Micro Drill</td><td>Cell Point Scientific</td><td>67-1000</td><td>מופץ למשל על ידי Harvard Apparatus</td></tr><tr><td>Steel Burrs (0.5 &micro; קוטר מ')</td> <td>כלי מדע עדין</td><td>19007-05</td><td></td></tr><tr><td>Artemia ssp.</td><td>Sanders</td><td>425GR</td><td></td></tr><tr><td>פיפטה פסטר (פלסטיק, פסטה)</td><td>Alpha Labs</td><td>LW4111</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>אבקת S אדומה אליזרין</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5533</td><td></td></tr><tr><td>כחול אלצ'יאן 8 GX</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A5268</td><td></td></tr><tr><td>Calcein</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>C0875</td><td></td></tr><tr><td>טריפסין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>T7409</td><td></td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>Leica</td><td>MZ16 FA</td><td>עם מצלמת QIMAGING RETIGA-SRV</td></tr><tr><td>סטריאומיקרוסקופ</td><td>אולימפוס</td><td>MVX10</td><td>עם מצלמת אולימפוס DP71 או DP80</td></tr></tbody></table>

דג זברה בוגרת מודלים פציעה ללמוד את השפעות prednisolone רגנרציה רקמת העצם

Adult Zebrafish Injury Models to Study the Effects of Prednisolone in Regenerating Bone Tissue

דג זברה מסוגלים להתחדש איברים שונים, כולל תוספות (סנפיר) לאחר קטיעה. פעולה זו כרוכה לרגנרציה של העצם, אשר מתחדש בערך שבועיים לאחר פציעה. יתר על כן, דג זברה מסוגלים לרפא עצם במהירות לאחר trepanation של הגולגולת, ותיקון שברים זה יכול להיות בקלות מוחדרים קרני גרמית סנפיר דג זברה. מבחני פציעה אלה מייצגים פרדיגמות ניסיוני האפשריים כדי לבחון את ההשפעה של תרופות מנוהלת על במהירות ויוצרים העצם. כאן נתאר את השימוש של מודלים אלה פציעה 3 ואת שלהם להשתמש בשילוב עם טיפול מערכתי glucocorticoid, אשר מפעילה עצם מעכבות ואפקטים לדיכוי המערכת החיסונית. אנו מספקים זרימת עבודה כיצד להתכונן לטיפול לדיכוי המערכת החיסונית דג זברה למבוגרים, להמחיש כיצד לבצע קטיעה פין, trepanation של calvarial עצמות, שברים סנפיר, ולתאר כיצד השימוש glucocorticoids משפיעה על שני יוצרי העצם תאי העצם, תאי של שושלת היוחסין מונוציט/מקרופאג כחלק מולדת חסינות רקמת העצם.

פרוטוקול המובאת כאן שימש שוב ושוב כדי לעודד היווצרות העצם מהיר במהלך התחדשות של ה דג זברה סנפיר והגולגולת10,11,16. בשילוב עם שיטת הציג prednisolone המינהל, מחקרים על ההשפעות של prednisolone במהלך התחדשות העצם יכול להיות נרדף. לדוגמה, ניתן לבצע מחקרים על היווצרות העצם ואת מינרליזציה ב להתחדש. נגד, כמו אחרים19,glucocorticoids20, מוביל עיכוב...

כאן נתאר 3 מודלים פציעה דג זברה מבוגרים, שלהם להשתמש בשילוב עם טיפול תרופות לדיכוי המערכת החיסונית. אנו מספקים הדרכה על הדמיה של התחדשות הרקמות ועל גילוי מינרליזציה עצם המצוי בו.

דג זברה בוגרת מודלים פציעה ללמוד את השפעות Prednisolone רגנרציה רקמת העצם

Zebrafish are able to regenerate various organs, including appendages (fins) after amputation. This involves the regeneration of bone, which regrows ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום ההתערבות הטיפולית בדיכוי המערכת החיסון לחקר ההשפעות השליליות של תרופות על התחדשות רקמות, בפרט, בעצמות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא משלבת מודלים קודמים של התחדשות עצם זברה עם חשיפה מערכתית לתרופות על ידי טבילה של דג הזברה הפצוע במים דגים בתוספת סמים. לפני תחילת ההליך, autoclave רדיד אלומיניום אחד כיסה 600 מיליליטר לכל זברהפיש ומספר מתאים של בקבוקי זכוכית של מי דגים לניסוי ולהכין את התרופה לדיכוי המערכת החיסון בפתרונות בקרה ניסיוניים של עניין.לפציעה של קטיעה, השתמש במטליות קהות כדי למקם בזהירות דג זברה הרדמה על צידו הצדדי על המכסה ההפוך של צלחת פטרי 100 מילימטר ולהשתמש באזמל כדי לכרות 50% מהסנפיר. לאחר מכן מניחים את הדג לתוך מקור autoclaved המכיל 300 מיליליטר של מי דגים בתוספת חומר ניסיוני מתאים לכסות את המזימה עם רדיד אלומיניום כדי למנוע בריחה זברה. כדי לגרום לפגיעה בשבר בסנפיר, מניחים דג זברה הרדמה בצד הצדדי שלו בצלחת פטרי מצופה 100 מילימטר מתחת למיקרוסקופ ניתוח ודחפו מחט הזרקה מעט לתוך קטע קרן סנפיר גרמי עד שיופיע סדק.חשוב להכניס לא יותר מדי שברים לתוך הסנפיר כי זה עלול לפגוע מאוד ביציבות. ואז להעביר את הדג לתוך מקור autoclaved המכיל 300 מיליליטר של מי דגים בתוספת סוכן ניסיוני המתאים. כדי ליצור פגיעה בגולגולת, החזק דג זברה הרדמ

adult-zebrafish-injury-models-to-study-effects-prednisolone

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

ביולוגיה התפתחותית

כדי לשפוך אור על המנגנונים התאיים והמולקולריים של נוירוגנזה והתחדשות בוגרים של דג הזברה, פיתחנו פרוטוקול לניתוח פולשני הגורם לפציעות מכניות בטלנצפלון הבוגר של דג הזברה וניטור לאחר מכן של שינויים בחצי הכדור הדקירה על ידי אימונוהיסטוכימיה או הכלאה באתר.

פציעה דקירת פצע של דג הזברה telencephalon מבוגרים: שיטה לחקר המוח של בעלי החוליות Neurogenesis והתחדשות

כאן אנו מציגים שיטה אמינה לחקר התחדשות כליות במבוגרים על ידי גרימת פגיעה כלייתית חריפה על ידי הזרקת גנטמיצין. אנו מראים כי הפציעה תלויה במינון הגנטמיצין ובטמפרטורת הסביבה באמצעות הכלאה באתרה כדי לתייג lhx1a+ מפתח נפרונים חדשים.

התחדשות בכליות למבוגרי דג הזברה על ידי גנטמיצין מושרה פגיעה

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשתלת תאים של שריר השלד של דג הזברה ורבדומיוסרקומה עוברית (ERMS) לתוך דג זברה מוטנטי מוטנטי הומוזיגוטי של rag2E450fs. פרוטוקול זה מאפשר ניתוח יעיל של התחדשות וטרנספורמציה ממאירה של תאי שריר.

השתלת תאי שריר נורמלית וממאירים לחיסון חלש למבוגרים דג הזברה

פרוטוקול זה מתאר את ההליכים כדי לגרום לפגיעה בכליות חריפה (AKI) ב זברה-דג מבוגר באמצעות ציספלטין כסוכן נטרוקסי. פירטנו את השלבים כדי להעריך את הרבייה של הטכניקה ושתי טכניקות לניתוח דלקת ומוות תאים ברקמת הכליה, ציטומטריית זרימה ו- TUNEL, בהתאמה.

מודל פגיעה בכליות חריפה המושרה על ידי ציספלטין בדג זברה למבוגרים

התחדשות שרירי השלד מונעת על ידי תאי גזע שריריים תושב רקמות, אשר לקויים במחלות שרירים רבות כגון ניוון שרירים, וזה גורם לחוסר היכולת של השריר להתחדש. כאן, אנו מתארים פרוטוקול המאפשר בדיקה של התחדשות שרירים במודלים של דגי זברה של מחלת שרירים.

בחינת התחדשות שרירים במודלים של דגי זברה של מחלת שרירים

שינינו את מודל ירידה במשקל של מרמארו לדגי זברה בוגרים כדי לבחון רוחב של פתולוגיות בעקבות פגיעה מוחית טראומטית בוטה (TBI) והמנגנונים שבבסיס ההתחדשות העצבית שלאחר מכן. מודל TBI קהה זה הוא מדרגי, מעורר TBI מתון, בינוני או חמור, ומשיב הטרוגניות פציעה שנצפו ב- TBI האנושי.

מודל מדרגי לחקר ההשפעות של פגיעה בוטה בכוח בדגי זברה בוגרים

מודל מכני של פגיעה מוחית בדגי זברה בוגרים מתואר כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים המווסתים את יכולת ההתחדשות הגבוהה שלהם. השיטה מסבירה יצירת פציעת פצע דקירה בטקטום האופטי של מינים רבים של דגים קטנים כדי להעריך את התגובות הרגנרטיביות באמצעות אימונוסטיישן פלואורסצנטי.

מודל פציעת פצע דקירה של הטקטום האופטי הבוגר באמצעות דגי זברה ומדאקה לניתוח השוואתי של יכולת התחדשות

פרוטוקול זה מתאר את הקציר וההדמיה של קשקשים אלסמואידים של דגי זברה במהלך התחדשות in vivo . בנוסף, תרבות ex vivo של קשקשים אלה עד 7 ימים לאחר הקציר מוצג.

התחדשות סולם דגי זברה בתרבות הקשקשים של טוטו ואקס ויוו

פרוטוקול זה מתאר מודל cryoinjury כדי לגרום נזק עמוק של כמה מיומרים caudal בדגי זברה בוגרים. שיטה זו מספקת גישה חדשה לחקר התחדשות שרירי השלד לאחר אובדן חמור של רקמה אצל בעלי חוליות שאינם יונקים.

מודל Cryoinjury לחקר התחדשות שרירי השלד של הפדונקל הקאודלי בדגי זברה בוגרים

פרוטוקול זה מציע שיטה לחקר דינמיקה תאית באמצעות טכניקה פשוטה של תרבית חוץ גופית . הוא מספק הזדמנות לחוקרי דגי זברה ולמחנכים לחקור תהליכים תאיים, כגון אלה הקשורים להומאוסטזיס עצם ולביולוגיה בסיסית של התא, על ידי הדמיה של גרעינים פלואורסצנטיים ותאים אפופטוטיים בתוך הקשקשים.

טכניקת תרבית חוץ גופית לחקר דינמיקה תאית בסקאלות דגי זברה

פרוטוקול זה מתאר גישת אבלציה בלייזר של שני פוטונים המתבצעת בזחלי דגי זברה, המשמשת מודל לחקר התחדשות העצם והשפעות התגובה החיסונית לאבלציה.

אבלציה בתיווך לייזר דו-פוטוני של אוסטאובלסטים בהתפתחות זחלי דגי זברה

חקור את ההשפעות של תרופות אימונוסופרסיביות על רגנרציה של רקמת עצם בדגי זברה בוגרים באמצעות מודלים של פציעת סנפיר וגולגולת. השיטה מאפשרת חשיפה מבוקרת לתרופות וניטור מינרליזציה של עצם.

דג זברה בוגרת מודלים פציעה ללמוד את השפעות Prednisolone רגנרציה רקמת העצם

גלה סרטונים נוספים