Name: Microdialysis של חומצות אמינו מעוררות במהלך ההקלטות EEG בחופשיות העברת חולדות (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-08T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: למדו מיקרודיאליזה בשילוב הקלטות EEG בחולדות חופשיות לניתוח שחרור אספרטט וגלוטמט בהיפוקמפוס. שיטה זו מאפשרת חקירת דינמיקה נוירוכימית במהלך התפתחות אפילפסיה ומחלות נוירולוגיות אחרות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים רוצים להודות אנה Binaschi, פאולו Roncon והוא אלאונורה פלמה על תרומתם כתבי יד לאור הקדימויות.

המחברים אין לחשוף.

בעבודה זו, אנו מראים כיצד ניתן לבצע הקלטות וידאו EEG רציף בשילוב עם microdialysis במודל ניסיוני של TLE. טכניקות הקלטה וידאו EEG משמשים כדי לאבחן כראוי את השלבים השונים של התקדמות המחלה בבעלי חיים, הטכניקה microdialysis משמש לתיאור השינויים במהדורה גלוטמט המתרחשות בזמן (אין שינויים מעולם לא נמצא אספרטט ב מחקר שפורסם בעבר2). אנו ממליצים השימוש של המכשיר/שתל בודד כדי לבצע אותן הן כל בעל חיים מהסיבות נדון בהקדמה.
בכל פעם זמין, radiotelemetry צריך להיות המועדפת מערכות עגינה ...

כדי לספק תובנות תיפקודי של גלוטמט בתיווך שליחים של GABAergic עצבית מעכבות וכתוצאה מכך להתקפים ספונטנית אפילפסיה של האונה הרקתית (TLE), אנחנו באופן שיטתי פיקוח ריכוזי חוץ-תאית גאבא1 ו מאוחר יותר הרמות של גלוטמט אספרטט2 באמצעות microdialysis בהיפוקמפוס הגחון של חולדות בנקודות שונות בזמן-של המחלה הטבעית כמובן, קרי, במהלך פיתוח והתקדמות של אפילפסיה. לקחנו יתרון של TLE פילוקרפין דגם בחולדות, אשר מחקה את המחלה באופן מדויק מבחינת שינויים התנהגותיים, אלקטרופיזיולוגיות, histopathological3,4 , אנחנו בקורלציה dialysate ריכוז אמינו חומצות כדי שלה שלבים שונים: השלב חריפה לאחר העלבון epileptogenic, שלב החביון, זמנם של ההתקף הראשון ספונטנית ו6,5,7phass כרונית. מסגור את שלבי המחלה היה מופעל על ידי ניטור וידאו EEG לטווח ארוך, EEG מדויק, איפיון קליני של התקפים ספונטנית. היישום של השיטה microdialysis המשויכת לטווח ארוך ניטור וידאו EEG מאפשרת לנו להציע השערות מכניסטית TLE neuropathology. לסיכום, בטכניקה המתוארת בכתב יד זה מאפשר הזיווג של שינויים עצבית בתוך אזור המוח מוגדר עם פיתוח, התקדמות של אפילפסיה במודל חיה.
התקנים לזווג, המורכב של אלקטרודה עומק juxtaposed כדי בצינורית microdialysis, מועסקים לעיתים קרובות בלימודי מחקר אפילפסיה שבו שינויים עצביים, שלהם מטבוליטים או אנרגיה מצעים צריכים להיות בקורלציה פעילות. עצבית. ברוב המכריע של המקרים, זה נמצא בשימוש בחיות מתנהגות באופן חופשי, אך זה יכול להתבצע גם בצורה דומה בבני אדם, למשל, בקרב חולי אפילפסיה טוהר הפרמה קופ עמידים לעומק החקירה אלקטרודה לפני הניתוח8. EEG הקלטה וגם אוסף dialysate יכול להתבצע בנפרד (למשל, השתלת האלקטרודה באונה אחת, את microdialysis בדיקה ההמיספרה השנייה או אפילו ביצוע את microdialysis בקבוצה אחת של בעלי חיים בעת ביצוע הבלעדית EEG בקבוצה אחרת של בעלי חיים). עם זאת, צימוד האלקטרודות כדי הגששים ייתכן יתרונות מרובים: זה מפשט את ניתוח stereotaxic, מגביל את רקמת נזק באונה אחת בלבד (תוך השארת האחר, ללא פגע, כפקד ללימודי היסטולוגית), ו homogenizes את תוצאות כמו אלה מתקבלים באותו האזור במוח, אותה חיה.
מצד שני, הכנת המכשיר בדיקה-אלקטרודה microdialysis בשילוב דורש מיומנויות זמן אם זה תוצרת בית. אחד לבזבז סכומי כסף גבוהים יחסית אם רכשת מהשוק. יתר על כן, כאשר microdialysis רגשים (בדיקה טיפים הם בדרך כלל 200-400 מיקרומטר קוטר ו 7-12 מ מ אורך)9ו אלקטרודות EEG (אלקטרודה טיפים בדרך כלל של 300-500 מיקרומטר בקוטר, מספיק זמן כדי להגיע את מבנה המוח של ריבית10)? יחד, המכשיר הנטען מייצגת אובייקט מגושם וכבד יחסית בצד אחד של הראש, וזה בעייתי לבעלי ונוטים להיות איבדה במיוחד כאשר הוא מחובר המשאבה דיאליזה ומערכת הקלטה EEG קווית. היבט זה רלוונטי יותר בבעלי אפילפטי קשה לטפל, פחות גמישים לפגישות microdialysis. טכניקות ניתוחיות נכונה וטיפול לאחר הניתוח המתאים יכול לגרום השתלים לאורך זמן לגרום אי נוחות מינימלית בעלי חיים, צריך להיות נרדף עבור ניסויים combinatory microdialysis EEG10,11, 12.
היתרונות ואת המגבלות של הטכניקה microdialysis נבדקו בפירוט בידי מדעני מוח רבים. היתרון העיקרי שלו על פני ויוו זלוף טכניקות אחרות (למשל, זרימה מהירה מו-דו או גביע קורטיקלית זלוף) היא בקוטר קטן של המכשיר אשר משתרע על שטח יחסית מדויק של עניין13,14, 15. שנית, קרום microdialysis יוצר מכשול פיסי בין הרקמות של perfusate; לכן, משקל מולקולרי גבוה חומרים לא לחצות, אל תתערבו עם ניתוח ה-16,17. יתר על כן, הרקמה מוגן מפני הזרם מערבולות perfusate18. יתרון חשוב נוסף הוא האפשרות לשנות את זרימת perfusate עבור למקסם את ריכוז analyte perfusate (קרי, התהליך של microdialysis יכולות ובכן להגדיר באופן מתמטי, ניתן לשנות להניב תשואה גבוהה ריכוזי analyte המדגם)19. לבסוף, ניתן להשתמש בטכניקה כדי להשרות את תרופות או חומרים פעילים פרמקולוגית לתוך הרקמה עניין וכדי לקבוע את ההשפעה שלהם באתר של התערבות20. מצד שני, microdialysis יש זמן מוגבל רזולוציה (בדרך כלל יותר מ 1 דקות בשל הזמן הנדרש לאיסוף דגימות) בהשוואה חיישנים ביולוגיים או אלקטרוכימי; זו טכניקה פולשנית הגורמת נזק לרקמות; זה פוגע את האיזון עצבית בתוך המרחב סביב הקרום עקב מעבר הצבע ריכוז רציפה של כל חומרים מסיסים אשר מזין את perfusate יחד עם analyte עניין. לבסוף, הטכניקה microdialysis מאוד מושפע ממגבלות שיטות אנליטיות מועסק כימות של חומרים perfusate9,21,22,23 . כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים (HPLC) לאחר derivatization עם orthophthaldialdehyde עבור ניתוח גלוטמט אספרטט בדגימות ביולוגיות טוב המאומת24,25,26 , 27 ו שלה דיון נרחב מתוך הטווח של כתב יד זה, אך הנתונים הופק באמצעות שיטה זו יתוארו בפרוטרוט.
כאשר מבוצעת כראוי וללא שינויים של ההרכב perfusate, microdialysis יכול לספק מידע אמין על רמות הבסיס של שחרור נוירוטרנסמיטר. החלק הגדול ביותר של רמות הבסיס הוא כנראה התוצאה של העודפים המשדר הסינפסות9. כי במקרים רבים דגימה פשוטה של הנוירוטרנסמיטר בחלל תוספת סינפטית אינה מספיקה לרדוף אחר המטרות של חקירה, הטכניקה microdialysis יכול להיות גם מועסק כדי לעורר את הנוירונים או כדי לשלול מהם חשוב יונים פיזיולוגיים כגון K+ או Ca2 +, על מנת לעורר או למנוע את שחרור הנוירוטרנסמיטר.
גירוי K+ גבוהה משמש לעיתים קרובות מצאו כדי לעורר פעילות. עצבית לא רק בבעלי חיים ערה, אלא גם בתרבויות ראשי ו organotypic. החשיפה של מערכת העצבים המרכזית בריאה לפתרונות עם ריכוזים גבוהים של K+ (40-100 מ מ) מעורר את בזרימת של נוירוטרנסמיטורים28. יכולת זו של נוירונים לספק שחרור נוסף בתגובה גבוהה K+ אולי התגלה באפילפטיים חיות1 וב -29,אחרים מחלות ניווניות30. באופן דומה, ה-Ca2 + מניעת (מתקבל על ידי פרפוזיה Ca2 + פתרונות חינם) משמש ליצירת סידן תלוית שחרור של מרבית הנוירוטרנסמיטרים נמדדת microdialysis. בדרך כלל הוא האמין כי Ca2 + התלויים שחרור הוא ממוצא עצביים, ואילו Ca2 + עצמאית שחרור מקורו עכשיו, דונלד, אך מחקרים רבים העלו מחלוקת על המשמעות של Ca2 +-מדידות רגיש למשל גלוטמט או GABA9: לפיכך, במידת האפשר, רצוי לתמוך microdialysis מחקרים עם לימודי microsensor, כמו אלה האחרונים יש רזולוציה מרחבית גבוהה יותר ומאפשר האלקטרודות כדי להתקרב הסינפסות31.
בנוגע microdialysis מחקרים בבעלי חיים אפילפטי, חשוב להדגיש כי הנתונים המתקבלים רובם להסתמך על וידאו או וידאו EEG ניטור של התקפים, קרי, ההתרחשות ארעית של סימנים או תסמינים בשל חריגה סינכרוני או יתר פעילות. עצבית את המוח32. יש קצת פרטים של התקפים electrographic בבעלי פילוקרפין מטופלים אשר יש לקחת בחשבון בעת הכנת הניסוי. התקפים ספונטנית ולאחריו פעילות מדוכא עם EEG תכופים קוצים interictal3 , מתרחשים באשכולות33,34. חיות-אפילפטי המופעלים המזויפים עשוי להפגין הפציינט35 ולכן הפרמטרים להערכה הקלטות EEG צריך להיות מתוקנן36 ו, במידת האפשר, התזמון של הפעלות microdialysis צריכה להיות מוגדרת היטב. לבסוף, אנו ממליצים בחום בעקבות עקרונות ותקנים מתודולוגי עבור ניטור וידאו EEG בחולדות למבוגרים שליטה המתוארים על ידי מומחים של הליגה הבינלאומית נגד אפילפסיה, החברה האמריקאית אפילפסיה בדוחות שלהם לאחרונה37 ,38.
כאן, אנו מתארים microdialysis ושל גלוטמט אספרטט במקביל הקלטות וידאו EEG לטווח ארוך בבעלי חיים אפילפטי וניתוח שלהם dialysate על ידי HPLC. יושם דגש על השלבים הקריטיים של פרוטוקול אחד צריך לדאוג לקבלת התוצאה הטובה ביותר.

<table><tbody><tr><td>אלקטרודה דו-מפותלת בעלת 3 ערוצים</td><td>Invivo1, פלסטיק אחד, רואנוק, וירג'יניה, ארה"ב</td><td>MS333 / 3-B / SPC</td> מדריך <td>חומר</td></tr><tr><td>צינורית</td><td>Agn Tho's, Lindig &ouml;, שוודיה</td><td>MAB 4.15.IC</td><td></td></tr><tr><td>חומר שרף KK2 פלסטיק</td><td>Elettra Sport, לקו, איטליה</td><td>KK2</td><td>חומר</td></tr><tr><td>סופר התקפה ג'ל Loctite Henkel</td><td>Italia Srl, מילאנו, איטליה</td><td>2047420_71941</td><td>חומר</td></tr><tr><td>Imalgene-Ketamine</td><td>Merial, טולוז, צרפת</td><td>221300288 (AIC)</td><td>Solution</td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Sigma, מילאנו, איטליה</td><td>X1251</td><td>חומר</td></tr><tr><td>Isoflurane-Vet</td><td>Merial, טולוז, צרפת</td><td>103120022 (AIC)</td><td>תמיסת</td></tr><tr><td>Altadol 50 מ"ג/מ"ל - tramadol</td><td>Formevet, מילאנו, איטליה</td><td>103703017 (AIC)</td><td>Solution</td></tr><tr><td>Gentalyn 0.1% crm - gentamycine</td><td>MSD איטליה, רומא, איטליה</td><td>20891077 (AIC)</td> <td>חומר</td></tr><tr><td>סימפלקס מהיר צמנט שיניים</td><td>Kemdent, Associated Dental Products Ltd, סווינדון, בריטניה</td><td>ACR811</td><td>חומר</td></tr><tr><td>GlasIonomer CX-Plus צמנט</td><td>שופו, קיוטו, יפן</td><td>PN1167</td><td></td></tr><tr><td>מחזיק קליפ בדיקה</td> חומר <td>Agn Tho's, Lindig&ouml;, שוודיה</td><td>p/n 100 5001</td><td>ציוד</td></tr><tr><td>היסטואקריל&reg; דבק עור מקומי כחול</td><td>TissueSeal, אן ארבור, מישיגן, ארה"ב</td><td></td><td>TS1050044FP חומר</td></tr><tr><td>Valium 10 מ"ג/2 מ"ל - דיאזפם</td><td>רוש, מונזה, איטליה</td><td>019995063 (AIC)</td> <td>חומר</td></tr><tr><td>מזרק 1 מ"ל עם מחט 25G</td><td>Vetrotecnica, פדובה, איטליה</td><td>11.3500.05</td><td>חומר</td></tr><tr><td>מחט האכלה גמישה של חולדה 17G</td><td>Agn Tho's, Lindig&ouml; שוודיה</td><td>7206</td><td>Material</td></tr><tr><td>Grass Technology מכשירים Grass</td><td>Technologies, Natus Neurology Incorporated, פלזנטון, קליפורניה, ארה"ב</td> ציוד <td>M665G08</td><td>(מגבר AS40, תיבת ראש, כבלים מחברים, דגם טלפקטור RPSA S40)</td></tr> <tr><td>רכישת נתונים מודולרית ו&nbsp; מערכת ניתוח MP150</td><td>Biopac, גולטה, קליפורניה, ארה"ב</td><td>ציוד</td><td>MP150WSW</td></tr><tr><td>מערכת מעקב וידאו דיגיטלית</td><td>AverMedia Technologies, פרמונט, קליפורניה, ארה"ב</td><td>V4.7.0041FD</td><td>ציוד</td></tr><tr><td>בדיקת מיקרודיאליזה</td><td>Agn Tho's, Lindig&ouml; שוודיה</td><td>MAB 4.15.1.Cu</td><td></td></tr><tr><td>חומר מיקרודיאליזה בדיקה</td><td>סינפטק, קולורדו ספרינגס, קולורדו, ארה"ב</td><td>S-8010</td><td></td></tr><tr><td>מחמם בלוק</td> חומר <td>Grant Instruments, קיימברידג', אנגליה</td><td>QBD2</td><td>בוחש ציוד</td></tr><tr><td></td><td>Cecchinato A, Aparecchi Scientifici, מסטרה, איטליה</td><td>711</td><td></td></tr><tr><td>משאבת עירוי</td> ציוד <td>Univentor, Zejtun, מלטה</td><td>864</td><td>ציוד</td></tr><tr><td>צינורות פוליאתן משובחים</td><td>סמיתס מדיקל אינטרנשיונל בע"מ, קין, ניו המפשייר, ארה"ב</td><td>800/100/100/100</td><td>חומר</td></tr><tr><td>מתאמי צינורות כחולים</td><td>Agn Tho's, Lindig &ouml; שוודיה</td><td>1002</td><td>חומר</td></tr><tr><td>מתאמי צינורות אדומים</td><td>Agn Tho's, Lindig&ouml; שוודיה</td><td>1003</td><td>חומר</td></tr><tr><td>מזרק 2.5 מ"ל עם מחט 22G</td><td>Chemil, פדובה, איטליה</td><td>S02G22</td><td></td></tr><tr><td>חומר מכסה בקבוקון</td><td>Cronus, Labicom, Olomouc, צ'כיה</td><td>VCA-1004TB-100</td><td>חומר</td></tr><tr><td>מחיצה</td><td>Thermo Scientific, Rockwoood, טנסי, ארה"ב</td><td>National C4013-60 8 מ"מ TEF / SIL מחיצה</td><td>חומר</td></tr><tr><td>זכוכית עם קפיץ תחתון</td><td>Supelco, סיגמה, מילאנו, איטליה</td><td>27400-U</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקון דגימה אוטומטית</td> של חומרים <td>National Scientific, Thermo Fisher Scientific, מונזה, איטליה</td><td>C4013-2</td><td>Material</td></tr><tr><td>Smartline manager 5000 בקר מערכת ויחידת מסיר גז</td><td>Knauer, ברלין, גרמניה</td><td>V7602</td><td>Equipment</td></tr><tr><td>Smartline 1000 משאבת שיפוע רבעונית</td><td>Knauer, ברלין, גרמניה</td><td>V7603</td><td>Equipment</td></tr><tr><td>גלאי ספקטרופלואורומטרי</td><td>Shimadzu, קיוטו, יפן</td><td>RF-551</td><td>ציוד</td></tr><tr><td>עמוד כרומטוגרפי</td><td>Knauer, ברלין, גרמניה</td><td>25EK181EBJ</td><td>חומר</td></tr><tr><td>טרום עמודה כרומטוגרפית</td><td>Knauer, ברלין, גרמניה</td><td>P5DK181EBJ</td><td>חומר</td></tr><tr><td>פתרון פאזה נייד A</td><td>0.1 M מאגר נתרן פוספט, פתרון pH 6.0</td><td></td><td></td></tr><tr><td>פתרון שלב נייד B</td><td>40% 0.1 M מאגר נתרן פוספט, 30% מתנול, 30% אצטוניטריל, pH 6.5</td><td></td><td></td></tr><tr>הרכב<td>תמיסת רינגר</td><td>תמיסה במ"מ: MgCl2 0.85, KCl 2.7, NaCl 148, CaCl2 1.2, 0.3% תמיסת BSA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>שונה הרכב תמיסת רינגר</td><td>במ"מ: MgCl2 0.85, KCl 100, NaCl 50.7, CaCl2 1.2, 0.3% תמיסת מלח תמיסת BSA</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>0.9% NaCl, pH מותאם ל-7.0</td><td></td><td>תמיסת</td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>תמיסה 10% סוכרוז בתמיסת מים</td><td></td><td></td> מזוקקים</tr></tbody></table>

microdialysis של חומצות אמינו מעוררות במהלך ההקלטות eeg בחופשיות העברת חולדות

Microdialysis of Excitatory Amino Acids During EEG Recordings in Freely Moving Rats

Microdialysis היא טכניקה neuroscience ומבוססת זה לא מופיע את השינויים של חומרים פעילים נוירולוגית לשדר לחלל המוח אינטרסטיציאליות עם ההתנהגות ו/או עם תוצאה מסוימת של פתולוגיה (למשל, התקפים על אפילפסיה). כשלומדים אפילפסיה, הטכניקה microdialysis משולב לעתים קרובות עם לטווח קצר או לטווח ארוך אפילו וידאו-אלקטרואנצפלוגרם (EEG) ניטור להעריך בתדירות ההתקפים ספונטנית, חומרתה, התקדמות, קיבוץ באשכולות. Microdialysis-EEG המשולב מבוסס על השימוש של מספר שיטות וכלים. כאן, אנחנו הופיעה ויוו microdialysis רציף וידאו EEG הקלטה יצוא גלוטמט, אספרטט צג לאורך זמן, בשלבים שונים של ההיסטוריה הטבעית של אפילפסיה במודל של עכברים. גישה משולבת זו מאפשרת הזיווג של שינויים שחרור נוירוטרנסמיטר עם שלבים מסוימים של מחלת התפתחות, התקדמות. ריכוז חומצת אמינו ב dialysate נקבע ע י כרומטוגרפיה נוזלית. כאן, אנו מתארים את השיטות ואת החלוקה לרמות ראשי אחד אמצעי זהירות לנקוט במהלך ויוו microdialysis-EEG, עם תשומת לב מיוחדת בניתוח stereotaxic, אשלגן הבזליים וגבוה המרצה במהלך microdialysis, עומק אלקטרודות EEG הקלטה וניתוח ביצועים גבוהים כרומטוגרפיה נוזלית של אספרטט גלוטמט dialysate. גישה זו עשוי להיות מותאם כדי לבחון מגוון רחב של סמים או מחלה הנגרמת שינויים של פיזיולוגיים ריכוזי אספרטט גלוטמט במוח. בהתאם לזמינות assay אנליטי המתאים, זה עשוי להיות עוד יותר משמש לבדיקת מולקולות שונות מסיסים בעת העסקת EEG הקלטה בו זמנית.

בדיקה שחזור
ההתאוששות רשע (קרי, חומצת אמינו רשע בתוכן perfusate כאחוז של התוכן אמצעי שווה של הפתרון המבחנה) היה ± 15.49 0.42% בקצב הזרימה של μL 2/min ו- ± 6.32 0.64 ב μL 3/דקה על גלוטמט ו ± 14.89 0.36% בקצב הזרימה של 2 ΜL/min ו- ± 10.13 0.51 ב μL/דקה 3 עבור אספרטט בעת שימוש המכשיר הממברנה cuprophane. אם משתמש החללית ממברנה polyacrylonitrile, ההחלמה הממוצע היה ± 13.67 0.42% בקצב הזרימה של μL 2/min ו- ± 6.55 1.07 ב μL 3/דקה...

כאן, אנו מתארים שיטה ויוו microdialysis לניתוח שחרור אספרטט ולא גלוטמט בהיפוקמפוס הגחון של חולדות אפילפסיה ואפילפטי, בשילוב עם הקלטות EEG. חוץ-תאית ריכוזי אספרטט גלוטמט יכול להיות בקורלציה עם השלבים השונים של המחלה.

Microdialysis של חומצות אמינו מעוררות במהלך ההקלטות EEG בחופשיות העברת חולדות

Microdialysis is a well-established neuroscience technique that correlates the changes of neurologically active substances diffusing into the brain ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח במדעי המוח כגון שינויים בנוירוכימיה במהלך ההיסטוריה הטבעית של מחלות נוירולוגיות. היתרון העיקרי של טכניקת EEG microdialysis המוצע הוא כי גישה משולבת כזו מאפשרת זיווג של שינויים בשחרור הנוירוטרנסמיטר בתוך שלבים ספציפיים של התפתחות המחלה והתקדמות. התחל על ידי מיתוג המגבר ממוקם מחוץ לכלוב פאראדיי.פתח את תוכנת EEG והתחל את רכישת EEG וצפה באות EEG המיוצר על-ידי כבלים לא מחוברים. לאחר מכן, חבר את החיה למערכת ההקלטה EEG קשור על ידי החזקת ראשו של החיה בין שתי אצבעות מתוחות של יד אחת לדפוק את המחברים אל מעמד האלקטרודה באמצעות היד החופשית השנייה. הגדר גורם הגברה על כל ערוץ של המגבר על פי אות האלקטרודה של חיה אחת כך אות EEG הוא בקנה מידה.ואז לתת לחיה לחקור את הכלוב החדש לפחות שעה אחת תחת התבוננות ישירה של החוקר. כווננו את הכבל לפי הסחורה של החיה, והבטיחו שהכבלים לא יפריעו לתנועות החיה ולתנואם השקרים. לבסוף, בדוק אם יש את מסגור התמונה הנכון במצלמות הווידאו ולאחר מכן הפעל את הקלטת הווידאו EEG.התחל על ידי הכנת בדיקות microdialysis לשימוש הראשון על פי המדריך של המשתמש היצרן ולמלא אותם עם הפתרון של רינגר. לאחר מכן, לחתוך 10 ס"מ חתיכות ארוכות של צינורות FEP ולחבר אותם לתוך ושקע cannulas של החללית באמצעות מתאמי צינורות בצבעים שונים. ודא שצנרת נוגעת במתאמים ללא שטח פנוי בכל החיבורים.הסר את cannula הבובה מהמדריך שלה באמצעות פינצטה על ידי החזקת ראשו של החיה בחוזקה. הכנס את בדיקה microdialysis לתוך המדריך cannula ולהשתמש חימר דוגמנות כדי לחבר עוד יותר את cannula. לאחר מכן, חבר את החיה למערכת ההקלטה של EEG.ואז לשים את החיה לתוך גליל פלקסיגלס ולתת לו לחקור את הסביבה החדשה. עקבו אחר תנועות העכברושים הערים והמזיזות בחופשיות. לאחר מכן, לחבר את התוך של החללית למזרק 2.5 מיליליטר עם מחט קהה 22 מד המכיל פתרון של רינגר באמצעות מתאמי צינורות.לדחוף מיליליטר אחד של הפתרון של רינגר לתוך החללית ב 10 שניות על ידי דחיפת הבוכנה של מזרק 2.5 מיליליטר ברציפות. בדוק את טיפת הנוזל המופיע בשקע כדי לסמן מתי החללית מוכנה לשימוש. לבסוף, מלא את המזרקים 2.5 מיליליטר מחובר צינורות FEP על ידי צינורות מתאמים עם הפתרון של רינגר ולהעלות אותם על משאבת עירוי.הפעל את המשאבה בשני microliters לדקה ולתת לו לרוץ לילה. לאחר אימות באמצעות הקלטות וידאו EEG היעדר התקפים בשלוש השעות שקדמו לאיסוף הדגימה, לעצור את המשאבה נושאת צינורות FEP מזרקים cannulated מלא עם הפתרון של רינגר. הר קבוצה נוספת של מזרקים 2.5 מיליליטר מחובר צינורות FEP עם מתאמי צינורות מלא עם פתרון צלצול שונה המכיל 100 פתרון אשלגן מילימולר.הפעל את המשאבה בשני microliters לדקה ולתת לו לרוץ. בדוק את היעדר בועות האוויר במערכת וודא כי הצינור נוגע במתאמים ללא שטח מת בכל החיבורים. לאחר מכן, בדוק את טיפת הנוזל המופיע על השקע כדי לסמן מתי החללית מוכנה לשימוש.לאחר מכן, חבר את צינורות FEP של מזרקים מלאים עם הפתרון של רינגר לתוך הצינורית של החללית בכל חיה ולחכות להופעת טיפת הנוזל על קצה השקע. חבר את שקע הגשוש לצינור FEP שמוביל לאיסוף במבחנה. הכנס את צינורות FEP לתוך מבחנה סגורה 0.2 מיליליטר עם כובע מחורר ולהבטיח כי הצינור נשאר במקום על ידי תיקון זה עם פיסת חימר דוגמנות.לאחר הפעלת המשאבה בשני מיקרוליטרים לדקה במשך 60 דקות מבלי לאסוף דגימות כדי לצייד את המערכת, לאסוף חמש דגימות דיאליזה רצופות של 30 דקות בתנאי בסיס, ולאחסן דגימות על קרח. לאחר 10 דקות, לעבור את הצינורות מן המזרקים המכילים 100 מילימולר אשלגן רינג'ר פתרון רגיל של רינגר ולתת את המשאבה לרוץ. לאחר איסוף הדיאליזה החמישית שלאחר שיווי המשקל, אספו 20 שברי דיאליסט מיקרוליטר כל 10 דקות למשך שעה.לאחר מכן לאסוף שלוש דגימות דיאליזה נוספות 30 דקות ולעצור את המשאבה. לבסוף, לאחסן את הדגימות במינוס 80 מעלות צלזיוס לאחר הניסוי עד ניתוח HPLC. לאחר השלמת הניסוי, יש לשטוף את בדיקות המיקרו-דיאליזה המשמשות במים מזוקקים ולאחסן אותן בבקבוקון מלא במים מזוקקים נקיים עד לשימוש הבא.לבסוף, לשטוף את ההתקנה microdialysis כולו עם מים מזוקקים ואחריו 70 אחוז אתנול. החלף אתנול באוויר ואחסן את ההתקנה בסביבה סטרילית. אלה הם עקבות EEG נציג נרשם מן ההיפוקמפוס של שליטה חולדות אפילפטיות במהלך השלב הכרוני של המחלה.לא נצפתה שינוי EEG בחולדות בקרה, ואילו פעילות אפילפטיפורם פרוקסימלי מסונכרנת נצפתה כ -500 אלפיות שנייה לפני ובמהלך ההתקפים ההתנהגותיים בחולדות אפילפטיות. ריכוז הגלוטמט הבסיסי שנמצא בחולדות אפילפטיות כרוניות היה גבוה משמעותית מאשר בבעלי חיים שולטים. אשלגן גבוה עורר שחרור נוסף של גלוטמט במשך כ -30 דקות בחולדות בקרה ובמשך כ -60 דקות בחולדות אפילפטיות כרוניות.בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי בעלי חיים המושתלים עם המכשיר נוטים לאבד אותו במהלך ניסוי ממושך, ולכן להשתמש סט ראש אור כבלים ארוכים מספיק כדי למנוע הפרעה לניידות בעלי חיים. בהתאם לזמינות של חיבור אנליטי מתאים, השיטה עשויה לשמש עוד יותר כדי לבדוק מולקולות מסיסים שונים במוח בעת שימוש הקלטת EEG באותו זמן. לאחר התפתחותה, טכניקה זו אפשרה לחוקרים בתחום האפילפטולוגיה לספק תובנה לשינויים בנוירוטרנסמיסציה בעירור במקרה של אפילפסיה של האונה הרקתית.לאחר צפייה בסרטון זה, אנו סומכים עליך תהיה הבנה טובה יותר של איך לבצע microdialysis vivo יחד עם הקלטת EEG אלקטרודה עומק בחולדה אפילפטית נעה בחופשיות.

microdialysis-excitatory-amino-acids-during-eeg-recordings-freely

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

סרטון זה מדגים בדיקה מבוססת מערך מיקרואלקטרודות לחקר פעילות הרשת העצבית באזורי חוט השדרה של עכבר. ראשית, נרשמת הפעילות האלקטרופיזיולוגית מהקרן הגבית השטחית (SDH) של הפרוסה. לאחר מכן, מעכב תעלת אשלגן מוצג כדי להאריך את הדפולריזציה, וכתוצאה מכך פעילות ריתמית סינכרונית על פני הרשת העצבית.

הערכה מבוססת מערך מיקרואלקטרודות של רשתות עצביות בפרוסות חוט השדרה של עכבר

סרטון זה מדגים רישום אלקטרואנצפלוגרפי (EEG) של התקפים אפילפטיים בחולדות המושרות על ידי אפילפסיה. חולדה עם אלקטרודות שהושתלו בהיפוקמפוס הגחוני מחוברת למערכת רישום EEG וממוקמת בתא פרספקס. החולדה מורשית לנוע בחופשיות בזמן שפעילות המוח נרשמת כדי לעקוב אחר התרחשות ההתקפים.

רישום אלקטרואנצפלוגרפי של התקפים אפילפטיים בחולדות המושרות על ידי אפילפסיה

מקור: Soukupová, M., et al. מיקרודיאליזה של חומצות אמינו מעוררות במהלך רישומי EEG בחולדות הנעות בחופשיות. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים את ההערכה של רמות נוירוטרנסמיטורים מעוררים חוץ-תאיים בחולדות עם השראת אפילפסיה כרונית. לאחר השתלת בדיקת מיקרודיאליזה במוח ואישור היעדר התקפים באמצעות אלקטרואנצפלוגרפיה (EEG), נאסף נוזל חוץ-תאי כדי להעריך רמות נוירוטרנסמיטורים גבוהות בחולדות אפילפטיות. לאחר מכן מוזרקת תמיסה עתירת אשלגן כדי לשמור על ריגוש עצבי ולעורר שחרור מוגבר של נוירוטרנסמיטורים, כאשר...

הערכת רמות נוירוטרנסמיטורים מעוררים בחולדות הנגרמות על ידי אפילפסיה כרונית

מקור: Moore, J. D., et al.  ניטור ולוקליזציה של נוירונים בודדים בתוך מבני מוח תת-קורטיקליים של חולדות ערניות ומרוסנות ראש. J. Vis. Exp. (2015)סרטון זה מדגים את השיטה של רישום וצביעה בחולדה מאופקת וערה ההליך כולל הקלטת אותות מנוירונים והזרקת צבע כדי למקם במדויק את אתר ההקלטה. טכניקה זו מאפשרת מיפוי מדויק של הפעילות העצבית למבנה האנטומי של המוח.

רישום וצביעה צמודים למיפוי מדויק של פעילות עצבית בחולדה ערה 

אנחנו כאן מתארים כיצד לבצע הקלטות מערך רב-אלקטרודה של רקמת קליפת המוח אפילפסיה אנושית. כריתת אפילפסיה רקמה, הכנת פרוסה ומערך רב-אלקטרודה הקלטות של אירועי interictal וictal הם הפגינו בפירוט.

הקלטות מערך רב-אלקטרודה של רקמה האנושית אפילפטיים לאחר הניתוח בקליפת המוח

כאן, אנו מתארים את ההתקנה, תוכנת ניווט, וניתוח נתונים עבור שיטה מרחבית מדויקת ובזמן של מדידת טוניק ושינויי גלוטמט תאי פאזית in vivo באמצעות מערכי microelectrode enzyme-linked (MEA).

באמצעות חיישנים ביולוגיים מבוססי Enzyme למדוד טוניק ו phasic גלוטמט בעכברי מודל אלצהיימר

מחקר זה בוחן את השימוש הרומן מבוססי אנזים microelectrode טכנולוגיית מערך (מאה) כדי לעקוב אחר ויוו עצבי פעילות מטילי יסודי. ההשערה הייתה ש-dysregulation גלוטמט הזה תורם המנגנון של הרדמה neurotoxicity. כאן, אנו מציגים פרוטוקול להסתגל MEA הטכנולוגיה כדי לחקור את המנגנון של הרדמה-induced neurotoxicity.

עיבוד של טכנולוגיית מערך Microelectrode לחקר הרדמה-induced Neurotoxicity במוח חזרזיר שלם

אנו מדגימים כיצד לבצע הקלטה וחשמליים מודולציה של פעילות אפילפטית 4-aminopyridine-induced פרוסות המוח מכרסמים באמצעות מערכי microelectrode. חדר הקלטה מותאמת אישית שומר על רקמות הכדאיות ברחבי מישיבות ניסיוני. חיים מיפוי אלקטרודה, מבחר זוגות מגרה מבוצעות על ידי ממשק משתמש גרפי מותאם אישית.

הקלטה של אפנון של הפעילות פרוסות המוח מכרסמים מצמידים מערכים Microelectrode

מתואר השימוש המשולב בטכנולוגיית מערך מיקרו-אלקטרודים ובגירוי כימי המושרה על-ידי 4-אמינו-פירידין לחקר פעילות נוציצפטיבית ברמת הרשת בקרן הגבית של חוט השדרה.

הקלטת פעילות רשת במעגלים נוסיקפטיים בעמוד השדרה באמצעות מערכי מיקרו-אלקטרוניקה

הפרוטוקול מתאר את המתודולוגיה של רישום חוץ-תאי בקליפת המוח המוטורית (MC) כדי לחשוף תכונות אלקטרופיזיולוגיות חוץ-תאיות בעכברים מודעים הנעים בחופשיות, כמו גם ניתוח נתונים של פוטנציאלי שדה מקומיים (LFPs) וקוצים, אשר שימושי להערכת הפעילות העצבית ברשת העומדת בבסיס התנהגויות מעניינות.

הקלטה חוץ-תאית רב-ערוצית בעכברים הנעים בחופשיות

פרוטוקול זה פותח כדי ליצור מערכת אמינה ונגישה לרישום EEG של מכרסמים הנעים בחופשיות.

פרוטוקול חסכוני וזעיר פולשני לרישום אלקטרואנצפלוגרפיה כרונית מרובת אתרים בעכברים הנעים בחופשיות

למדו מיקרודיאליזה בשילוב הקלטות EEG בחולדות חופשיות לניתוח שחרור אספרטט וגלוטמט בהיפוקמפוס. שיטה זו מאפשרת חקירת דינמיקה נוירוכימית במהלך התפתחות אפילפסיה ומחלות נוירולוגיות אחרות.

Microdialysis של חומצות אמינו מעוררות במהלך ההקלטות EEG בחופשיות העברת חולדות

גלה סרטונים נוספים