מודל במבחנה של מערכת מקבילה-Plate זלוף ללמוד חיידקי ההקפדה להשתיל רקמות

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בפתוגנזה של אנדוקרדיטיס מדביק, ופתוביוגרמות דרך שדות כגון יחסי הגומלין בין חיידקים, תאי דם ותאי אנדותל רירית שרירים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שתלי הרקמה עשויים להיחשף ישירות לאינטראקציות הדדיות עם מטרות שונות, כגון חיידקים, טסיות דם וחלבונים בתנאי זרימה מתוקנים. המשמעות של טכניקה זו להרחיב את הטיפול שלנו של אנדוקרדיטיס מדביק, כי זה יכול לפענח אינטראקציות מולקולריות חשובות וגורמים המניעים להדביק גבוה של רקמות מסוימות.

שיטה זו מספקת תובנה לתוך פתוגנזה של היווצרות צמחייה. זה יכול להיות ישים גם במחקרים החוקרים חן כלי דם, ניידות התא, ביטוי תאים גנים. כדי להתחיל את הפרוטוקול, למקם ביופסיה רקמה מוכן בעבר 10 מילימטרים קוטר, ואת אותו עובי בין מגלשת מיקרוסקופ וניקוב מעגלי שמונה מילימטר, אטם גומי עם המשטח הפנימי פונה כלפי מעלה, כדי ליצור קשר עם ההשעיה החיידקית.

התמקד בכיוון השתלת הרקמה בעת הנחתו במחזיק. ודאו שהמשטח הפנימי של הרקמה כבר חשוף למחזור הדם כדי ליצור קשר עם המדיום הניסיוני שלכם. לאחר מכן, הכנס את המחזיק שלך עם הרקמה לתוך גיליון אטם כי הוא מוטבע במסגרת המתכת התחתונה של התא.

חבר את מסגרת המתכת העליונה עם גיליון אטם המתאים על החלק התחתון של התא עם מחזיק הרקמה שהוכן בעבר. ואז להרכיב את התא כולו עם שמונה ברגים ולבורג אגוזים. ודא כי גובה התא הוא תמיד זהה על פני שתלים באמצעות caliper או סרגל.

לאחר מכן חבר את תא הזרימה עם משאבה פריסטואלית. ואז לחבר את מאגר הנוזלים 400 מיליליטר עם הצינורות. לנטרל את הרקמות עם 100 מתלים מיליליטר של עשרה עד שבעת המושבה שכותרתו פלואורסצנטית להרכיב יחידות מלוחים מאגר פוספט עם הלחץ הטהור של שלושה סועדים לסנטימטר מרובע וקצב זרימה מתאים של ארבעה מיליליטר לדקה במשך שעה אחת באמצעות המשאבה peristaltic ואת מאגר החיידקים.

Recirculate ברציפות ההשעיה חיידקי 100 מיליליטר באמצעות אותו מאגר איסוף. לאחר תדלוק, לפרק את התא כדי לשחרר את השתל. לשטוף את פיסת הרקמה פעמיים עם ארבעה מיליליטר של PBS בצלחת 12 גם באמצעות שייקר מסלולית במשך שלוש דקות.

ואז לחתוך את החלק הפנימי של השתל באמצעות אגרוף ביופסיה העור עם קוטר קטן יותר. מניחים כל ביופסיה רקמה לתוך צינור נפרד 14 מיליליטר המכיל מיליליטר אחד של סטרילי 0.9% נתרן כלורי. לנתק את החיידקים מן הרקמה באמצעות אמבטיה sonication במשך 10 דקות.

הכינו צינור יחיד של 14 מיליליטר עם 10 מיליליטר של סטרילי 0.9% נתרן כלורי כדי לבצע דילול סדרתי של ההשעיה החיידקית המתקבלת לאחר sonication. תייג את הצינור מספר שתיים. הכן שלושה צינורות 14 מיליליטר עם 10 מיליליטר של סטרילי 0.9% נתרן כלורי עבור דילול סדרתי של ההשעיה החיידקית הראשונית נלקח לניסוי שפע.

תייג את הצינורות מספר שלוש, מספר ארבע ומספר חמש. לאחר מכן, לאבטח שלוש צלחות אגר, אחד עבור חליטה חיידקית, אחד עבור חליטה שליטה של PBS, והשלישי עבור ההשעיה החיידקית הראשונית המשמשת חליטות. סמן שלושה סקטורים לכל צלחת לניסוי הרקמה באופן הבא:10-1, 10-3 ו- 10-4.

כדי לספור את מספר היחידות יוצרות המושבה בהתבולות החיידקיות, סמן את הלוח כדלקמן: 10-1, 10-3, 10-5 ו- 10-7. מערבולת הצינורות המכילים את ביופסיית הרקמה במשך 15 שניות כל אחד, כדי לבצע דילול סדרתי. כדי להכין את הדילולים הסדרתיים, להעביר 100 microliters של צינור מספר אחד לצינור מספר שתיים, ומערבולת הצינור לערבב ביסודיות את הפתרון.

להפיץ 100 microliters של התוכן של צינור מספר אחד ומספר שתיים על המגזרים המתאימים, 10-1 ו 10-3 של צלחת אגר. ואז להפיץ 10 microliters של צינור מספר שתיים על מגזר 10 ארבעה. חזור על שלב זה ארבע פעמים כדי להשיג ארבע גידולים נפרדים מכל נפח של 10 microliters.

כדי להכין דילול סדרתי של התרבות הראשונית, מערבולת ראשונה את הדילול במשך 15 שניות ולהעביר 100 microliters של השעיה חיידקית לצינור מספר שלוש, ומערבבים במרץ על ידי מערבולת. מוסיפים 100 מיקרוליטרים של צינור מספר שלוש לצינור מספר ארבע ומערבבים שוב. חזור על ההליך לצינור מספר חמש מצינור מספר ארבע.

להפיץ 100 microliters של התוכן של צינורות מספר שלוש, מספר ארבע, מספר חמש, ואת התרבות הראשונית שכותרתו בהתאמה על מגזרים 10-3, 10-5, 10-7, ו 10-1 של צלחת אגר הדם. השאירו את צלחות אגר הדם מתחת למכסה המנוע למינאר כדי לייבש את התפשטות החיידקים, בדרך כלל במשך 10 דקות. לאחר מכן, מניחים את הצלחות ב 37 מעלות צלזיוס עבור דגירה לילה.

לאחר הדגירה לילה, לספור את המושבות חיידקי כדי להשיג את מספר CFUs. בתנאי לחץ, התקשרות חיידקית דומה על פני רקמות השתל השונות נצפתה הן עבור סטפילוקוקוס אוראוס והן זיהום אפידרמידיס סטפילוקוקוס. בעקבות ההליכים, סטרפטוקוקוס sanguinis הפגין הפחתה משמעותית של דבקות בקיר וריד הצווארי, בהשוואה לתיקון פריקארדיום bovine.

כאשר משווים את שלושת המינים של חיידקים, סטרפטוקוקוס sanguinis מציג הידבקות נמוכה משמעותית לקיר וריד הצווארי של חזיר ביחס סטפילוקוקוס aureus ו staphylococcus epidermidis. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור שהכין רקמות נכונות של אותו ראש. הוא יבטיח תנאים דומים בכל דגימות הניסוי וימזער את השונות בנתונים בין סדרות ניסויים שונות.

לאחר התפתחותה, טכניקה זו מאפשרת לחוקרים לחקור את מערכות ההפרעה המורכבות באופן צעד אחר צעד על ידי העשרת הגישות שלהם במודל החוץ-חוץ-חוץ-מערכתי עם אלמנטים שונים כדי לבנות מורכבות מלאה קרוב למצב הרפואי.