טראנס זרם ישיר גירוי (tDCS) בעכברים

הליך אלבר גאוד הוא ליישם גירוי זרם ישיר transcranial בעכברים. זה הושג על ידי יצירת זרמים אינטנסיביים נמוכים מגנרטור זרם ישיר, ושליחתו ישירות אל החיה באמצעות אלקטרודות. tDCS נחקר כחלופה טיפולית לא תרופתית להפרעות פסיכיאטריות עיקריות בבני אדם, כגון דיכאון, סכיזופרניה, מחלת אלצהיימר, AHDH ואוטיזם.

יתר על כן, tDCS היא טכניקה ייחודית בשל העלות הנמוכה שלה, קלות השימוש, ופרופיל לא פולשני. עם זאת, ההשפעות הביולוגיות של tDCS אינן מובנות לחלוטין, ואין קונצנזוס לגבי פרמטרים של גירוי, כגון עוצמת זרם, משך ואריח של אזורי המוח. לכן, השימוש בהזמנות מינימום חיוני למחקר יסודי של מנגנונים כאלה, אשר יוביל להבנה טובה יותר של היעילות הקלינית של tDCS באמצעות רכישה וניתוח של נתונים תאיים ומולקולריים התנהגותיים.

יש כיום שתי הגדרות אלקטרודה עבור tDCS, המכונה גירוי אנודיאלי וקתודאלי. בגירוי אנודיאלי, הזרמים מועברים ישירות לראש החיה, דרך גוף החיה, ולתוך הקתודה המוצבת על בית החזה של החיה. בעוד בגירוי קתודאלי הזרם נכנס דרך בית החזה של החיה, נע עד ראשו לתוך הקתודה.

בשני המצבים גנרטור הנוכחי שולט בעוצמה הנוכחית ומשך הגירוי. בעת הפקת איכות איש קשר והסיק משוב. קיימות הגדרות רבות ושונות עבור מיקום פעיל.

לכן, יש לקחת בחשבון את כל הציר התלת מימדי. בפרוטוקול זה הושתלה אלקטרודה של ראש מילימטר אחד לתוך ברגמה מושרשת, בצד לקו האמצעי של הגולגולת, ואלקטרודה הגוף היה ממוקם על החזה של החיה. בשל סימולציה תקופתית קצרה, הומלץ להשתמש בפעולה מהירה ובהרדמה לטווח קצר, כגון isoflurane מאדה.

הליך זה מורכב משני שלבים קריטיים. מיקום אלקטרודה וגירוי זרם ישיר טרנס-קרינה. מכשירים כירורגיים היו מעוכלים עם תחזוקה מראש ב 440 מעלות צלזיוס.

ספוגיות כותנה היו autoclaved ב 20 פאונד לאינץ 'מרובע ב 121 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות. סובבו את בקר הפלטפורמה התרמית ל-37 מעלות צלזיוס. לשקול את החיה, ולחשב את המינון המתאים אינדוקציה הרדמה.

השתמש בתערובת של קטמין ו xylazine במינון של 100 מיליגרם לקילוגרם של קטמין, ו 8 מיליגרם לקילוגרם של קסילאזין. גודל מחט 31G. החיה צריכה להירדם בתוך 2 עד 3 דקות.

השתמש מכונת גילוח חשמלית או סכין גילוח כדי לגלח את האתר הכירורגי. מניחים את החיה על המנגנון הסטריאוטקסי מעל צלחת החימום החימום מראש. החזיקו את ראש החיה והכניסו את פסי האוזן לקצה לתוך כל אחת מהאוזניים של החיה, כדי לתקן אותה לפלטפורמה הסטרוטקסית.

ודא שאין הסטת ראש לצד השני, ותנועה אנכית מועטה על ידי הסטה איטית של ראשו של בעל החיים. מחליקים בעדינות את מסכת ההרדמה מעל אפו של העכבר ומתקן במקום על ידי הידוק הבורג. החל משחת עיניים על העיניים של החיה כדי למנוע ייבוש הקרנית במהלך הניתוח.

השתמש ספוגית כותנה כדי להכין את האתר הכירורגי עם שלושה קרצוף לסירוגין של יוד povidone, או 2% כלורוהקסידין ו 70% ethinol. השתמש זוג פינצטה כדי לאמת הרדמה לאמץ על ידי סחיטה קלה של בהונות של החיה, ואימות החוקים של רפלקס צביטה כללי פדו-נסיגה בעלי חיים. בצע חתך כשלושה מילימטרים אחוריים לקו האוזן של החיה, ולעצור בקו העין.

אתר החתך חייב להיות באורך של כ סנטימטר אחד כדי להיות גדול מספיק כדי לקבל את השתל. בעדינות לגרד את הגולגולת עם מגרד עצם כדי לשפר דבק ודבקות מלט. זה חייב להיעשות אור ביד מתוך כוונה ליצור שריטות מיקרו.

בזהירות למקם ווים כירורגיים לעור רופף כדי לשמור על שדה כירורגי פתוח ולשחרר אותו של חסימות, כגון עור פרווה. השתמש ספוגית כותנה סטרילית לייבש בעדינות את הקרקפת של החיה. השתמש במיקרוסקופ ניתוח כדי לדמיין את החלק העליון של הגולגולת של החיה.

חבר מחט למחזיק סטרוטקסי ואתר את bregma. מקם את המחט ישירות מעל ראשו של החיה נוגע קלות bregma. השתמש bregma כהפניה כדי להתאים את הקואורדינטות של אזור העניין.

תקן את השתל במחזיק הסטריאוטוקסי. מקם את השתל מעל ראשו של בעל החיים והורד אותו לאט לאזור העניין. השתמש במחט כדי להפיץ טיפה אחת, כ 35 microliters, של דבק על שטח השתל.

להזיז לאט את המחזיק כלפי מטה עד שהוא נוגע בגולגולת. ודא שטח השתל הוא לגמרי במגע עם פני השטח. הכינו את המלט הכירורגי בהתאם להוראות היצרן.

לאחר מיקום מדויק, יש למרוח שלוש שכבות מלט דקות ואף על פני הגולגולת, ועל החלק התחתון של השתל. יש למרוח שחרור בכל טיפה באמצעות מברשת יישום. שכבות חייבות ליצור מבנה בצורת U לתמיכה מבנית נוספת של השתל.

השאירו את חוט הבורג של השתל נקי ממלט כדי לאפשר חיבור חלק ובלתי מרסן. אפשר לכל שכבה להתייבש במשך כארבע דקות. לאחר הייבוש, מוציאים בזהירות את המחזיק עד שהוא מנותק לחלוטין מהשתל.

תמיד לנקוט בזהירות רבה בעת הטיפול בשתל, שכן הוא עלול להיות מושפל בטעות מגולגולתו של החיה. יש להעניק לחות לעור ולחתך של החיה בעזרת צמר גפן ספוג מלוח. חותכים את העור מעל בסיס השתל.

השתמש זוג פינצטה כדי להביא את הרקמה יחד, ולסגור את החתך עם טיפה אחת של דבק כירורגי רקמה לכל נקודה 2 ס"מ של רקמה. הסתננו 1 עד 2%lidocaine באתר החתך וברקמות הבסיסיות. לחות את החיה עם 500 microliters של צלצול לקטט בו זמנית.

מניחים את העכבר לתוך כלוב בית יחיד מחומם מראש 37 מעלות צלזיוס נקי. בנה מנה קטנה של כדורי מזון רטובים בכלוב, לגישה נוחה למזון בשעות הבאות. רשום את המשקל הכירורגי שלאחר החיה.

החיה חייבת להינתן עם קטופרופן. 5 מיליגרם לקילוגרם בו זמנית לאחר הניתוח וביומיים הקרובים. ודא שמריצי tDCS טעונים במלואם.

חבר את כבלי האנודה והקתודה לגירוי tDCS והפוך אותם לזמינים ליד אתר הסימולציה. חבר את האלקטרודה מסוג סיכה למחזיק סטרוטקסי. הגדר את הפלטפורמה התרמית ל-37 מעלות צלזיוס.

הפעל את מד זרימת החמצן במערכת ההרדמה של שאיפה ל-1 ליטר לדקה. מניחים את העכבר לתוך תא אינדוקציה הרדמה. הפעל את אידוי isoflurane ל 3% לאפשר את החיה לעבור אפקטים isoflurane במשך ארבע דקות.

בעוד החיה נמצאת בתא אינדוקציה, להשתמש מזרק סטרילי כדי למלא את האלקטרודה הגוף עם 0.9% תמיסת מלח. מוציאים את החיה מתא הגיוס וממקם את החזה שלה מעל האלקטרודה של הגוף. החלק בעדינות את מסכת ההרדמה מעל אפו של העכבר ותקן במקומו.

מנמיך את תפוקת isoflurane ל 1.5% למלא את השתל ואת האלקטרודה סוג סיכה עם מלוחים. בזהירות לצרף אותם יחד. התאם את זמן הגירוי ואת עוצמתו הנוכחית בהתאם לפרוטוקול שלך.

אמת את איכות איש הקשר במערכת tDCS מאוחר יותר. התחל את הגירוי. שים לב לרמפה הנוכחית למשך 20 שניות לערך שנבחר.

ושמירה על עצמה יציבה לזמן שנקבע. ואז, בסוף הקטע משתולל שוב. הפעל את לחצן ה-shin לשליטה.

שים לב לרמפה הנוכחית למשך 20 שניות לערך שנבחר. ואז למטה אחד לשארית תקופת הגירוי, עם רמפה סופית לערך שנבחר, בסוף, עם רמפה רצופה למטה. אחד סעיף הגירוי הושלם, בזהירות להעביר את החיה לכלוב מחומם מראש 37 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות.

פרוטוקול זה משתמש ב- tDCS כדי לעורר את קליפת המוח של העכבר מילימטר אחד הקדמי לברגמה. גרף זה מציג את הביטוי הסטטיסטי והגנטי לאחר פרוטוקול גירוי tDCS. שימוש בעוצמה נוכחית של 0.35 מיליאמפר למשך 10 דקות ביום.

שתל tCDS הציג את עצמו קיימא מהיום הראשון עד חמש ללא הבדל משמעותי בין הימים באיכות המגע. ישנם מגוון של פרוטוקולי גירוי tCDS במוח מודל. יש לבחור פרוטוקולים בהתאם ליוחות הניסוי שלך.

אזור של גירוי, עוצמת זרם, משך הפגישה, ומיצוב אלקטרודה. בפרוטוקול מסוים זה, אנו שואפים לווסת את קליפת המוח המוטורית באמצעות tDCS הידוע שלנו עם הזרם של 350 מיקרואמפר במשך 10 דקות. לאחר צפייה בסרטון זה תוכל לבצע tDCS בעכברים.

כאשר מישהו מתרגל ניתוח עשוי להימשך עד ארבע דקות לכל בעל חיים. חשוב לקחת בחשבון את הנחיות הטיפול בבעלי חיים בעת ניצול העכברים במהלך הניתוח ולאחר הטיפול שלאחר הניתוח לבעלי החיים, כך שבעלי החיים יישארו בריאים במהלך המחקר. אנו ממליצים גם להמתין חמישה עד שבעה ימים לאחר מיקום השתל כדי לבצע את הניסויים, שכן התגובה הפיזיולוגית של החיה לטראומה עלולה להפריע לתוצאות הביולוגיות.