Name: דיכוי צמיחת תאים מיאלומה In Vivo על ידי ננו-צינורית פחמן קיר אחד (SWCNT)-נמסר MALAT1 Antisense Oligos (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-12-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 24 s
Description: למדו שיטת משלוח תרופות באמצעות ננו-צינוריות פחמן קיר אחד לטיפול במיאלומה נפוצה. טכניקה זו משפרת את יעילות הדיכוי התאי ומציעה פוטנציאל ליישומים נוספים ברפואה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים תודה את המכון לחקר לרנר פרוטיאומיה מבנית, גנומית, ואת ההדמיה ליבות לסיוע שלהם ותמיכה. מימון: עבודה זו נתמכה כלכלית על ידי NIH/NCI מענק R00 CA172292 (J.J.Z.) ואת ראשונית (ל J.J.Z.) ואת קלינית Translational המדע שיתופית (CTSC) של התיק Western Reserve אוניברסיטת הליבה ניצול טייס גרנט (ל J.J.Z.). עבודה זו מנוצל מיקרוסקופ קונפוקלי SP8 לייקה אשר נרכש עם מימון מוסדות לאומיים של בריאות סיג גרנט 1S10OD019972-01.

כל הניסויים המערבות בעלי חיים אושרו מראש על-ידי IACUC מרפאת קליבלנד (אכפת לי חיה המוסדית והוועדה שימוש).
1. סינתזה של Functionalized SWCNTs
<ol><li>מערבבים 1 מ ג של SWCNTs, 5 מ"ג של DSPE-PEG2000-אמין ו 5 מ ל מים נטולי נוקלאז סטיריליים בקבוקון נצנוץ זכוכית (20 מ ל). לנער את זה טוב כדי להמיס כל ריאגנטים לחלוטין.</li>
	<li>Sonicate את המבחנה ב sonicator אמבט מים ברמת הכוח של 40 W לשעה בטמפרטורת החדר (RT, מינימום 20 x 3, להחליף את המים כל 20 דקות כדי למנוע התחממות יתר). לאחר מכן, centrifuge זה ב x 24,000 g עבור 6-אייץ ' ולאסוף את הפתרון supernatant. ניתן לאחסן פתרון פונקציונלי זה SWCNT ב 4 מעלות צלזיוס למשך חודשיים.</li>
	<li>להוסיף 1 מ"ל של פתרון SWCNT מהשלב 1.2 למכשיר 100 kDa MWCO צנטריפוגלי מסנן, ואחריו 4 מיליליטר מים נטולי נוקלאז מעוקר. צנטריפוגה 10 דקות ב x 4,000 g ב- RT כדי להסיר תוספת DSPE-PEG2000-אמין. חזור על התוספת של 4 מ של מים, צנטריפוגה 5 x. יותר מ- 0.5 mL של שאריות SWCNT פתרון יישאר במסנן לאחר כל צנטריפוגה.</li>
	<li>למדוד את הריכוז של הפתרון SWCNT שאריות במסנן באמצעות ספקטרומטר של UV/VIS ב 808 nm לאחר כביסה הסופי. הריכוז הסופי הוא בדרך כלל כ 50 מ ג/ליטר (מחושבת על-פי השיטה שפותחה על ידי ואח קם18). הערה: ודא DSPE-פג-functionalized ' SWCNTs הם מסיסים במים לאחר שלב 1.4 יציבים בפתרונות ביולוגיים שונים ללא צבירת גלויים לאחר מספר שבועות.</li>
</ol>2. ההטיה של אנטי-MALAT1 Gapmer DNA ולצדו 2'-O RNAs ששונה כדי Functionalized SWCNT
<ol><li>להוסיף 0.5 מ ג של Sulfo-LC-SPDP לתוך 450 µL של DSPE-PEG2000-אמין functionalized SWCNT. להוסיף µL 50 ל- 10 x PBS ולאחר מכן תקופת דגירה של 2 h-RT.</li>
	<li>כדי להסיר תוספת Sulfo-LC-SPDP, להוסיף את התגובה מ שלב 2.1 למכשיר 100 kDa MWCO צנטריפוגלי מסנן, ואחריו 4 מיליליטר מים נטולי נוקלאז. צנטריפוגה 10 דקות ב x 4,000 g -RT. חוזר התוספת של 4 מ"ל של מים, צנטריפוגה את 5 x.</li>
	<li>להוסיף 200 ננומטר תיול-השתנה anti-MALAT1-Cy3 gapmer DNA לתוך 1.5 מ של פתרון DTT מסחרי, תקופת דגירה של 90 דקות ב- RT. Purify את המוצר עם עמודה NAP-5, ע פ הפרוטוקול של היצרן. Elute האנטי-MALAT1-Cy3 עם µL 500 1 ללא נוקלאז סטיריליים x PBS. הערה: ניתן לאחסן את SWCNT functionalized עם DTT נוסף, אשר ייתכן קליב דיסולפידי נוסדים במהלך האחסון של gapmer אנטי-MALAT1 thiolated ה-DNA. ניתן להסיר את DTT נוסף לפי עמודה aNAP-5 לפני ההטיה עם SWCNT.</li>
	<li>לאסוף את הפתרון SWCNT DSPE-PEG2000-אמין sulfo-LC-SPDP-טיפול עזב את המסנן, לדלל את זה עם µL 500 של פתרון אנטי-MALAT1-Cy3. לאחר מכן, דגירה זה ב 4 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות ביממה. SWCNT-נגד-MALAT1 מצומדת שניתן לאחסן ב 4 מעלות צלזיוס למשך 3 שבועות. בעקבות הליך דומה SWCNT מצומדת עם oligo antisense לטרוף יכול להיות מסונתז והוא משמש SWCNT-control.</li>
</ol>3. הזנב הזרקה לווריד של SWCNT-נגד-MALAT1
<ol><li>
ליצור מודל העכבר המופץ מ מ.
	<ol>
<li>כדי להשיג את התוצאות הטובות ביותר של השוואה, לארגן באופן אקראי 14 במנוד ראש. CB17-Prkdcscid/J עכברים (בן 8 שבועות) משפט או פקד קבוצות (שבע בכל קבוצה) עם אותו יחס זכר/נקבה.</li>
		<li>לנקות את הספסל מבצע ולחטא אותו עם אלכוהול 70%.</li>
		<li>השתמש מנורת חימום כדי לחמם את העכבר כדי לעזור הזנב הווריד להופיע. לרסן את העכבר כראוי עם restrainer הזרקה הזנב.</li>
		<li>מזריקים תאים 5 x 106 MM.1S-לוק-mCherry 50 µL ל- PBS דרך הווריד של זנב ללא הרדמה. הקש ההזרקה עם ספוגית אלכוהול עבור 30 ס' סמן העכבר מוזרק ולהחזיר את כלוב נקי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
להתחיל את הטיפול ביום 7 אחרי הזריקה תא MM.1S.
	<ol>
<li>מזריקים µL 50 ל- PBS המכיל SWCNT-נגד-MALAT1 לווריד הזנב של העכבר. השתמש PBS המכילים SWCNT-הפקד כפקד.</li>
		<li>הקש ההזרקה עם ספוגית אלכוהול עבור 30 s.</li>
		<li>לצפות את הדימום המקומי על הזנב ואת ההתנהגות הכללית של העכבר עבור 1 דקות ולאחר מכן להחזירו כלוב נקי. להתבונן עכברים כל מוזרק שוב לפני שחזר לכלוב המדף, כדי לוודא כי הזריקות מתקבלים טוב.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
לחזור על הזריקה כל 7 ימים עד לסיום הניסוי.
	<ol>
<li>לסיים את הניסוי כאשר הבריאות הכללית של העכבר מבזה: כשאני לא אוכלת או שותה, את המראה של כפות רגליים חיוור, דימום תת עורי, קוצר נשימה, ירד פעילות, שיתוק של הגפיים התחתונות, ו/או מסה שניתן לגעת בהם הבטן הוא ציין.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. הערכת התקדמות המחלה
<ol><li>להעריך את המצב הכללי של העכברים בכל יום אחרי הזריקה תא MM.1S-לוק-mCherry. שים לב במיוחד אם העכברים לפתח משתק של הגפיים התחתונות.</li>
	<li>
להעריך את הגידול באמצעות ויוו הדמיה המערכת 1 x שבוע, לפני הזריקה SWCNT-נגד-MALAT1.
	<ol>
<li>להכין טרי 15 מ"ג/מ"ל D-Luciferin עם 1 x PBS.</li>
		<li>עזים ומתנגד העכברים עם מכשיר אידוי איזופלוריין (3-5% עבור אינדוקציה ו 1 – 3% עבור תחזוקה, בהתאם למצב של העכברים).</li>
		<li>להזריק 150 מ"ג/ק"ג של D-Luciferin ב עכבר כל intraperitoneally, 5 דקות לפני הדמיה; לאחר מכן, תמונה העכברים במצב של שכיבה עם ספקטרום מערכת הדמיה.</li>
		<li>איסוף תמונות רציפים של העכברים כל 2 דקות, עד רוויה הפריה חוץ גופית. להתאים את מרווח הזמן לפי ספיגת/האות D-Luciferin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>השתמש CO2 להקריב העכברים ברגע הסיום של הניסוי הוא הגיע.</li>
	<li>
מאז זה מודל המופץ מ מ, תהליך העכברים כדלקמן.
	<ol>
<li>שוקלים את העכבר לפני ניתוח.</li>
		<li>לאסוף דם היקפיים מכל הלב עבור וזמינותו ספירת דם (CBC) המבוצעת על ידי מכונה מונה תאי הדם. את ספירת תאי דם לבנים, תאי דם אדומים, כמו גם היחס של לימפוציטים, הן המדדים העיקריים.</li>
		<li>לבודד את הטחול, שוקל אותה. לחשב את היחס בין משקל גוף/טחול; שקול > 0.5% כמו הגדלת טחול.</li>
		<li>לאסוף את הרקמות של מח העצם, הטחול, לימפה, כליות, ואת הרקמה עם גרורות לעין.</li>
		<li>לאסוף את עמוד השדרה, אם העכבר של שיתוק של הגפיים התחתונות.</li>
		<li>חלץ RNA וחלבון בין דגימות מח עצם.</li>
		<li>לתקן את כל הרקמות הנותרים בפורמלין.</li>
		<li>עבור decalcification, לטבול את הדגימות עצם תמיסת EDTA 0.25 M (pH 8.0) 5 ימים לאחר 24 שעות של קיבעון.</li>
		<li>לטבול כל דוגמאות ב 75% אלכוהול לאחסון לטווח ארוך.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להשוות את עוצמת האות של לוציפראז באותן נקודות זמן לשתי קבוצות. בין שתי הקבוצות, את תאריכי ההקרבה של כל עכבר ולחשב את עקומות הישרדות של שתי הקבוצות עם התוכנה. הערה: כל ההליכים מסוכמות באיור1.</li>
</ol>

<ol><li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNase+non-sensitive+and+endocytosis+independent+siRNA+delivery+system%3A+delivery+of+siRNA+into+tumor+cells+and+high+efficiency+induction+of+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">RNase non-sensitive and endocytosis independent siRNA delivery system: delivery of siRNA into tumor cells and high efficiency induction of apoptosis.</a> Nanoscale. 5 (16), 7256-7264 (2013).</li>
<li>Murakami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Water-dispersed+single-wall+carbon+nanohorns+as+drug+carriers+for+local+cancer+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Water-dispersed single-wall carbon nanohorns as drug carriers for local cancer chemotherapy.</a> Nanomedicine (Lond). 3 (4), 453-463 (2008).</li>
<li>Kam, N. W., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotubes+as+intracellular+protein+transporters%3A+generality+and+biological+functionality%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotubes as intracellular protein transporters: generality and biological functionality.</a> Journal of the American Chemical Society. 127 (16), 6021-6026 (2005).</li>
<li>Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionalization+of+carbon+nanotubes+via.+cleavable+disulfide+bonds+for+efficient+intracellular+delivery+of+siRNA+and+potent+gene+silencing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Functionalization of carbon nanotubes via. cleavable disulfide bonds for efficient intracellular delivery of siRNA and potent gene silencing.</a> Journal of the American Chemical Society. 127 (36), 12492-12493 (2005).</li>
<li>Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotubes+as+intracellular+transporters+for+proteins+and+DNA%3A+an+investigation+of+the+uptake+mechanism+and+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition+in+English%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotubes as intracellular transporters for proteins and DNA: an investigation of the uptake mechanism and pathway.</a> Angewandte Chemie International Edition in English. 45 (4), 577-581 (2006).</li>
<li>Ntziachristos, P., Abdel-Wahab, O., Aifantis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+concepts+of+epigenetic+dysregulation+in+hematological+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Immunology%22%5BJournal%5D)">Emerging concepts of epigenetic dysregulation in hematological malignancies.</a> Nature Immunology. 17 (9), 1016-1024 (2016).</li>
<li>Evans, J. R., Feng, F. Y., Chinnaiyan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bright+side+of+dark+matter%3A+lncRNAs+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">The bright side of dark matter: lncRNAs in cancer.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (8), 2775-2782 (2016).</li>
<li>Ronchetti, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+lncRNA+transcriptional+fingerprints+characterize+progressive+stages+of+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Distinct lncRNA transcriptional fingerprints characterize progressive stages of multiple myeloma.</a> Oncotarget. 7 (12), 14814-14830 (2016).</li>
<li>Wong, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+silencing+of+a+long+non-coding+RNA+KIAA0495+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Cancer%22%5BJournal%5D)">Epigenetic silencing of a long non-coding RNA KIAA0495 in multiple myeloma.</a> Molecular Cancer. 14, 175(2015).</li>
<li>Schmidt, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+long+noncoding+MALAT-1+RNA+indicates+a+poor+prognosis+in+non-small+cell+lung+cancer+and+induces+migration+and+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thoracic+Oncology%22%5BJournal%5D)">The long noncoding MALAT-1 RNA indicates a poor prognosis in non-small cell lung cancer and induces migration and tumor growth.</a> Journal of Thoracic Oncology. 6 (12), 1984-1992 (2011).</li>
<li>Ji, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALAT-1%2C+a+novel+noncoding+RNA%2C+and+thymosin+beta4+predict+metastasis+and+survival+in+early-stage+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">MALAT-1, a novel noncoding RNA, and thymosin beta4 predict metastasis and survival in early-stage non-small cell lung cancer.</a> Oncogene. 22 (39), 8031-8041 (2003).</li>
<li>Luo, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+and+genomic+analysis+of+human+hepatocellular+carcinomas+and+hepatoblastomas%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic and genomic analysis of human hepatocellular carcinomas and hepatoblastomas.</a> Hepatology. 44 (4), 1012-1024 (2006).</li>
<li>Guffanti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transcriptional+sketch+of+a+primary+human+breast+cancer+by+454+deep+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">A transcriptional sketch of a primary human breast cancer by 454 deep sequencing.</a> BMC Genomics. 10, 163(2009).</li>
<li>Cho, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MALAT1+long+non-coding+RNA+is+overexpressed+in+multiple+myeloma+and+may+serve+as+a+marker+to+predict+disease+progression%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">MALAT1 long non-coding RNA is overexpressed in multiple myeloma and may serve as a marker to predict disease progression.</a> BMC Cancer. 14, 809(2014).</li>
<li>Handa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+non-coding+RNA+MALAT1+is+an+inducible+stress+response+gene+associated+with+extramedullary+spread+and+poor+prognosis+of+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Haematology%22%5BJournal%5D)">Long non-coding RNA MALAT1 is an inducible stress response gene associated with extramedullary spread and poor prognosis of multiple myeloma.</a> British Journal of Haematology. 179 (3), 449-460 (2017).</li>
<li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+MALAT1%2FPARP1%2FLIG3+complex+induces+DNA+damage+and+apoptosis+in+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Targeting the MALAT1/PARP1/LIG3 complex induces DNA damage and apoptosis in multiple myeloma.</a> Leukemia. , (2018).</li>
<li>Lennox, K. A., Behlke, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+localization+of+long+non-coding+RNAs+affects+silencing+by+RNAi+more+than+by+antisense+oligonucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Cellular localization of long non-coding RNAs affects silencing by RNAi more than by antisense oligonucleotides.</a> Nucleic Acids Research. 44 (2), 863-877 (2016).</li>
<li>Kam, N. W., O'Connell, M., Wisdom, J. A., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+nanotubes+as+multifunctional+biological+transporters+and+near-infrared+agents+for+selective+cancer+cell+destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Carbon nanotubes as multifunctional biological transporters and near-infrared agents for selective cancer cell destruction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (33), 11600-11605 (2005).</li>
<li>Zeineldin, R., Al-Haik, M., Hudson, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+polyethylene+glycol+integrity+in+specific+receptor+targeting+of+carbon+nanotubes+to+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Role of polyethylene glycol integrity in specific receptor targeting of carbon nanotubes to cancer cells.</a> Nano Letters. 9 (2), 751-757 (2009).</li>
<li>Amodio, N., D'Aquila, P., Passarino, G., Tassone, P., Bellizzi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+modifications+in+multiple+myeloma%3A+recent+advances+on+the+role+of+DNA+and+histone+methylation%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opinion+on+Therapeutic+Targets%22%5BJournal%5D)">Epigenetic modifications in multiple myeloma: recent advances on the role of DNA and histone methylation.</a> Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21 (1), 91-101 (2017).</li>
<li>Ahmad, N., Haider, S., Jagannathan, S., Anaissie, E., Driscoll, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA+theragnostics+for+the+clinical+management+of+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">MicroRNA theragnostics for the clinical management of multiple myeloma.</a> Leukemia. 28 (4), 732-738 (2014).</li>
<li>Amodio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drugging+the+lncRNA+MALAT1+via.+LNA+gapmeR+ASO+inhibits+gene+expression+of+proteasome+subunits+and+triggers+anti-multiple+myeloma+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Drugging the lncRNA MALAT1 via. LNA gapmeR ASO inhibits gene expression of proteasome subunits and triggers anti-multiple myeloma activity.</a> Leukemia. , (2018).</li>
<li>Highleyman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+approves+fomivirsen%2C+famciclovir%2C+and+Thalidomide.+Food+and+Drug+Administration%5BTitle%5D)+AND+%22BETA%22%5BJournal%5D)">FDA approves fomivirsen, famciclovir, and Thalidomide. Food and Drug Administration.</a> BETA. 5, (1998).</li>
<li>Smith, R. J., Hiatt, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+new+drugs+for+homozygous+familial+hypercholesterolemia%3A+managing+benefits+and+risks+in+a+rare+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Two new drugs for homozygous familial hypercholesterolemia: managing benefits and risks in a rare disorder.</a> JAMA Internal Medicine. 173 (16), 1491-1492 (2013).</li>
<li>Aartsma-Rus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FDA+Approval+of+Nusinersen+for+Spinal+Muscular+Atrophy+Makes+2016+the+Year+of+Splice+Modulating+Oligonucleotides%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acid+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">FDA Approval of Nusinersen for Spinal Muscular Atrophy Makes 2016 the Year of Splice Modulating Oligonucleotides.</a> Nucleic Acid Therapeutics. 27 (2), 67-69 (2017).</li>
<li>Nelson, S. F., Miceli, M. C. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28399245">FDA Approval of Eteplirsen for Muscular Dystrophy.</a> The Journal of the American Medical Association. 317 (14), 1480(2017).</li>
<li>Liu, Z., Sun, X., Nakayama-Ratchford, N., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramolecular+chemistry+on+water-soluble+carbon+nanotubes+for+drug+loading+and+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22American+Chemical+Society+Nano%22%5BJournal%5D)">Supramolecular chemistry on water-soluble carbon nanotubes for drug loading and delivery.</a> American Chemical Society Nano. 1 (1), 50-56 (2007).</li>
<li>Ali-Boucetta, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiwalled+carbon+nanotube-doxorubicin+supramolecular+complexes+for+cancer+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+communications+%28Cambridge%29%22%5BJournal%5D)">Multiwalled carbon nanotube-doxorubicin supramolecular complexes for cancer therapeutics.</a> Chemical communications (Cambridge). (4), 459-461 (2008).</li>
<li>Bianco, A., Kostarelos, K., Partidos, C. D., Prato, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15672140">Biomedical applications of functionalised carbon nanotubes.</a> Chemical communications. (5), Cambridge. 571-577 (2005).</li>
<li>Hadidi, N., Kobarfard, F., Nafissi-Varcheh, N., Aboofazeli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+single-walled+carbon+nanotube+solubility+by+noncovalent+PEGylation+using+experimental+design+methods%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Nanomedicine%22%5BJournal%5D)">Optimization of single-walled carbon nanotube solubility by noncovalent PEGylation using experimental design methods.</a> International Journal of Nanomedicine. 6, 737-746 (2011).</li>
<li>Padilla-Parra, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+imaging+of+endosome+acidification+and+single+retrovirus+fusion+with+distinct+pools+of+early+endosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Quantitative imaging of endosome acidification and single retrovirus fusion with distinct pools of early endosomes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (43), 17627-17632 (2012).</li>
<li>Wu, H., Zhu, L., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((pH-sensitive+poly%28histidine%29-PEG%2FDSPE-PEG+co-polymer+micelles+for+cytosolic+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">pH-sensitive poly(histidine)-PEG/DSPE-PEG co-polymer micelles for cytosolic drug delivery.</a> Biomaterials. 34 (4), 1213-1222 (2013).</li>
<li>Oishi, M., Nagatsugi, F., Sasaki, S., Nagasaki, Y., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smart+polyion+complex+micelles+for+targeted+intracellular+delivery+of+PEGylated+antisense+oligonucleotides+containing+acid-labile+linkages%5BTitle%5D)+AND+%22Chembiochem%22%5BJournal%5D)">Smart polyion complex micelles for targeted intracellular delivery of PEGylated antisense oligonucleotides containing acid-labile linkages.</a> Chembiochem. 6 (4), 718-725 (2005).</li>
<li>Dong, H., Ding, L., Yan, F., Ji, H., Ju, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+polyethylenimine-grafted+graphene+nanoribbon+for+cellular+delivery+of+locked+nucleic+acid+modified+molecular+beacon+for+recognition+of+microRNA%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The use of polyethylenimine-grafted graphene nanoribbon for cellular delivery of locked nucleic acid modified molecular beacon for recognition of microRNA.</a> Biomaterials. 32 (15), 3875-3882 (2011).</li>
<li>Arunachalam, B., Phan, U. T., Geuze, H. J., Cresswell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enzymatic+reduction+of+disulfide+bonds+in+lysosomes%3A+characterization+of+a+gamma-interferon-inducible+lysosomal+thiol+reductase+%28GILT%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Enzymatic reduction of disulfide bonds in lysosomes: characterization of a gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase (GILT).</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (2), 745-750 (2000).</li>
<li>Lelimousin, M., Sansom, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+perturbation+by+carbon+nanotube+insertion%3A+pathways+to+internalization%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Membrane perturbation by carbon nanotube insertion: pathways to internalization.</a> Small. 9 (21), 3639-3646 (2013).</li>
<li>Thomas, M., Enciso, M., Hilder, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insertion+mechanism+and+stability+of+boron+nitride+nanotubes+in+lipid+bilayers%5BTitle%5D)+AND+%22J+Phys+Chem+B%22%5BJournal%5D)">Insertion mechanism and stability of boron nitride nanotubes in lipid bilayers.</a> J Phys Chem B. 119 (15), 4929-4936 (2015).</li>
<li>Jin, H., Heller, D. A., Strano, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-particle+tracking+of+endocytosis+and+exocytosis+of+single-walled+carbon+nanotubes+in+NIH-3T3+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Single-particle tracking of endocytosis and exocytosis of single-walled carbon nanotubes in NIH-3T3 cells.</a> Nano Letters. 8 (6), 1577-1585 (2008).</li>
<li>Jin, H., Heller, D. A., Sharma, R., Strano, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-dependent+cellular+uptake+and+expulsion+of+single-walled+carbon+nanotubes%3A+single+particle+tracking+and+a+generic+uptake+model+for+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22American+Chemical+Society+Nano%22%5BJournal%5D)">Size-dependent cellular uptake and expulsion of single-walled carbon nanotubes: single particle tracking and a generic uptake model for nanoparticles.</a> American Chemical Society Nano. 3 (1), 149-158 (2009).</li>
<li>Ruggiero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paradoxical+glomerular+filtration+of+carbon+nanotubes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Paradoxical glomerular filtration of carbon nanotubes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (27), 12369-12374 (2010).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

הראיות הוכיחו כי lncRNAs לקחת חלק מרכזי בויסות פיזיולוגיים רבים ושגרות pathophysiological ב סרטן, כולל7,מ מ8,9; יש להם פוטנציאל להיות ממוקד לטיפול בסרטן, אשר יכול להתממש מאת antisense oligonucleotides20,21,22. המזון והתרופות האמריקני (FDA) אישר מספר תרופות antisense oligonucleotide, כולל fomivirsen עבור רטיניטיס cytomegalovirus<sup clas...

SWCNT הוא nanomaterial חדשניים שיכולים לספק סוגים שונים של תרופות, כגון חלבונים, מולקולות קטנות, חומצות גרעין, stably וביעילות עם סבילות אידיאלי, רעילות מינימלית חוץ גופית1 וויוו2. SWCNT functionalized יש נהדר מסיסות הביו ומים, יכול לשמש הסעות עבור מולקולות קטנות יותר, והוא מסוגל לשאת להן לחדור את קרום התא3,4,5.
lncRNAs הם מקבץ של RNA (> 200 nt) זה משוקלטים מן הגנום ל mRNA אבל לא ניתן היה לתרגם את החלבונים. הוכחה גוברת הראו כי lncRNAs להשתתף ברגולציה של ביטוי גנים6 , מעורבים החניכה, התקדמות של רוב סוגי סרטן, כולל מ מ7,8,9. MALAT1 הוא תעתיק noncoding גרעיני מועשר 2 (NEAT2), מאוד שנשמרת lncRNA10. MALAT1 מזוהה בתחילה ריאות שאינם קטנים התא גרורתית סרטן (NSCLC)11, אבל יש כבר overexpressed רבים גידולים5,12,13; הוא נחשב לאחד lncRNAs ביטוי ביותר, הוא מתואם עם פרוגנוזה גרועה מ מ8,14. רמת הביטוי של MALAT1 גבוה משמעותית בחולים קורס קטלני extramedullary מ"מ לעומת אלו שאובחנו רק מ מ15.
במחקר הקודם, יש לנו אישר כי אנטי-MALAT1 oligos robustly לגרום נזק לדנ א אפופטוזיס מ מ16 באמצעות gapmer DNA antisense oligonucleotides מיקוד MALAT1 (אנטי-MALAT1) בתאים מ מ. ה-DNA gapmer המורכב antisense DNA, מקושרים על ידי 2'-הביתה-RNAs, אשר יכול לבקש MALAT1 המחשוף מאת RNase H פעילות פעם מאוגד17. יעילות משלוח ויוו antisense oligos עדיין מגבילה את השימוש הקליני.
כדי לבדוק את המשלוח אפקט של SWCNT אנטי-MALAT1 gapmer oligos, gapmer אנטי-MALAT1 ה-DNA היא מצומדת כדי DSPE-PEG2000-אמין functionalized SWCNT. SWCNT-נגד-MALAT1 מכן מוזרק לווריד מודל העכבר המופץ מ מ; עיכוב בולט הוא ציין לאחר ארבעה טיפולים.

<table><tbody><tr><td>SWCNTs</td><td>Millipore-Sigma</td><td>704113</td><td></td></tr><tr><td>DSPE-PEG2000-Amine</td><td>Avanti Polar Lipids</td><td>880128</td><td></td></tr><tr><td>סוניקטור אמבטיה</td><td>VWR</td><td>97043-992</td><td></td></tr><tr><td>4 מ"ל מסנן צנטריפוגלי</td><td>Millipore-Sigma</td><td>Z740208-8EA</td><td></td></tr><tr><td>UV/VIS ספקטרומטר</td><td>תרמו פישר מדעי</td><td>accuSkan GO UV/Vis ספקטרופוטומטר</td> <td>מיקרופלייטמקדם הכחדה של 0.0465 ליטר/מ"ג/ס"מ ב-808 ננומטר</td></tr><tr><td>Sulfo-LC-SPDP</td><td>ProteoChem</td><td>c1118</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת DTT</td><td>Millipore-Sigma</td><td>43815</td><td></td></tr><tr><td>NAP-5 עמודה</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0853-01</td><td></td></tr><tr><td>in vivo מערכת הדמיה</td><td>PerkinElmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NOD. CB17-Prkdcscid / J עכברים</td><td>מעבדת צ'ארלס ריבר</td><td>250</td><td></td></tr><tr><td>ציטומטר זרימה</td><td>Becton Dickinso</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine</td><td>Invitrogen</td><td>11668019</td><td>Lipofectamine2000</td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי (FBS)</td> <td>Invitrogen</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>RMPI-1640 בינוני</td><td>Invitrogen</td><td>11875-093</td><td></td></tr><tr><td>MALAT1-QF:</td> <td>מסונתז על ידי IDT פלוגה</td><td></td><td>5'- GTTCTGATCCCGCTGCTATT - 3'</td></tr><tr><td>MALAT1-QR:</td> <td>מסונתז על ידי חברת</td><td></td> IDT <td>5'- TCCTCAACACTCAGCCTTTATC - 3'</td></tr><tr><td>GAPDH-QF:</td> <td>מסונתז על ידי IDT Company</td><td></td><td>5'- CAAGAGCAAGAGGAGAGAGAGAG - 3'</td></tr><tr><td>GAPDH-QR:</td> <td>מסונתז על ידי חברת</td><td></td> IDT <td>5'- CTACATGGCAACTGTGAGGAG - 3'</td></tr><tr><td>PCR כמותי באמצעות SYBR Green PCR master mix</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A25780</td><td></td></tr><tr><td>RevertAid ערכת סינתזת cDNA מעמד ראשון</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>K1621</td><td></td></tr><tr><td>anti-MALAT1</td><td>מסונתז על ידי IDT Company</td><td></td><td>5'-mC*mG*mA*mA*mA*mA*C*A*T*T*<T*BR/> *G*G*C*A*C*A*mC*mA*mG*mC*mA-3'</td></tr><tr><td>ערכת בדיקת כדאיות תא</td><td>Promega Corporation</td><td>G7570</td><td>CellTiter-GloLuminescent ערכת בדיקת כדאיות תאים</td></tr><tr><td>accuSkan GO UV/Vis ספקטרופוטומטר מיקרופלייט</td><td>תרמו פישר</td> מסנן צנטריפוגלי מדעי <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Millipore-Sigma</td><td>UFC910008</td><td></td></tr><tr><td>תוכנת SPSS</td><td>IBM</td><td>גרסה 24.0</td><td></td></tr><tr><td>D-Luciferin</td><td>Millipore-Sigma</td><td>L9504</td><td></td></tr></tbody></table>

דיכוי צמיחת תאים מיאלומה in vivo על ידי ננו-צינורית פחמן קיר אחד (swcnt)-נמסר malat1 antisense oligos

Repression of Multiple Myeloma Cell Growth In Vivo by Single-wall Carbon Nanotube (SWCNT)-delivered MALAT1 Antisense Oligos

ננו-צינורית פחמן קיר אחד (SWCNT) הוא סוג חדש של ננו-חלקיק, אשר שימש כדי לספק מספר סוגי סמים לתוך תאים, כגון חלבונים, oligonucleotides, תרופות סינתטיות מולקולה קטנה. SWCNT המימדים הניתנות להתאמה אישית, שטחי אזור גדול, באפשרותך לאגוד בגמישות עם סמים דרך שינויים שונים על פני השטח שלו; לכן, זה מערכת אידיאלי להעברת סמים לתוך התאים. זמן noncoding RNAs (lncRNAs) הם מקבץ של יותר מ 200 noncoding RNA nt, אשר לא יכול להיות מתורגם לחלבון אבל יש תפקיד חשוב בתהליכים ביולוגיים, הקשורים pathophysiological. גרורות-הקשורים ריאות אדנוקרצינומה התעתיק 1 (MALAT1) הוא lncRNA שנשמרת מאוד. הוכח כי רמות MALAT1 גבוהות קשורות על פרוגנוזה גרועה סוגי סרטן שונים, לרבות מיאלומה נפוצה (מ מ). נחשפו MALAT1 מווסת את תיקון ה-DNA ומוות תא מ מ; לפיכך, MALAT1 יכול להיחשב מטרה טיפולית עבור מ מ. עם זאת, oligo antisense מסירת יעיל כדי לעכב/נוקאאוט MALAT1 ויוו היא עדיין בעיה. במחקר זה, לנו לשנות את SWCNT עם פג-2000 ו נזווג oligo anti-MALAT1 אליו לבדוק את המשלוח של מתחם זה במבחנה, תזריק את זה דרך הווריד למודל בעכבר של מ מ המופץ, להתבונן על עיכוב משמעותי של התקדמות מ מ, אשר מציינת SWCNT הזה הוא הסעה משלוח אידיאלי עבור gapmer אנטי-MALAT1 ה-DNA.

כדי להדגים את השפעת עיכוב anti-MALAT1 gapmer-DNA מ מ, אנו הפיל את הביטוי של MALAT1, השתמש בה תאים H929 ו- MM.1S. ארבעים ושמונה שעות לאחר מכן, התאים שנאספו לניתוח של יעילות דפיקה למטה, מצב אפופטוזיס בתאים transfected עם אנטי-MALAT1 gapmer או פקד ה-DNA. לרביעיית-PCR התוצאות הראו כי ה-DNA gapmer אנטי-MALAT1 הפיל את הביטוי MALAT1 בתאים H929 ו- MM.1S ביעילות (איור 2א). המצב של אפופטוזיס נקבע על ידי cytometry זרימה, אשר חשף MALAT1 ולמטה מוסדר המושר...

כתב יד זה מתאר את הסינתזה של ננו-צינורית פחמן קיר אחד (SWCNT)-מצומדת MALAT1 antisense gapmer דנ א oligonucleotide (SWCNT-נגד-MALAT1), אשר מדגים מסירת SWCNT אמין, חזק טיפולית והשפעת anti-MALAT1 במבחנה, ויוו. שיטות להשתמש של סינתזה, שינוי, ההטיה, הזרקה של SWCNT-נגד-MALAT1 מתוארים.

דיכוי צמיחת תאים מיאלומה In Vivo על ידי ננו-צינורית פחמן קיר אחד (SWCNT)-נמסר MALAT1 Antisense Oligos

The single-wall carbon nanotube (SWCNT) is a new type of nanoparticle, which has been used to deliver multiple kinds of drugs into cells, such as ...

השיטה בה אנו משתמשים כאן יכולה לעזור לארוז אוליגונוקלאוטיד עם ננו-צינורית פחמן חד-קירית, שהיא סוג חדש של חלקיקים לאספקת תרופות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא אספקה יעילה יותר של תרופות oligonucleotide לתאים ב vivo. ההשלכות של טכניקה זו להרחיב לחקור מיאלומה נפוצה, כי זה הציג חלקיקים כדי לשפר את המסירה של תרופות oligonucleotide.באמצעות שיטה זו יכול לספק תובנה לתוך הטיפול מיאלומה נפוצה. זה יכול להיות מיושם גם על מחלות אחרות, נדנוד עם מטען אחר, כגון חלבונים ומולקולות קטנות. ראשית, מערבבים מיליגרם אחד של צינוריות פחמן חד-קיר, חמישה מיליגרם של DSPE-PEG 2000 אמין, וחמישה מיליליטר של מים מעוקרים ללא גרעין בבקבוקון זכוכית 20 מיליליטר.Sonicate הבקבוקון ב sonicator מרבה מים ברמת כוח של 90 וואט במשך שעה אחת בטמפרטורת החדר. לאחר sonication, צנטריפוגה הבקבוקון ב 24, 000 פעמים g במשך שש שעות. ואז לאסוף את הפתרון על טבעי.הוסף מיליליטר אחד של פתרון ננו-צינורית פחמן חד-קיר למכשיר סינון צנטריפוגלי צנטריפוגלי של 100 קילודלטון ואחריו ארבעה מיליליטר של מים מעוקרים ללא גרעין. צנטריפוגה במשך 10 דקות ב 4, 000 פעמים גרם בטמפרטורת החדר כדי להסיר את המין העודף. הוסף 0.5 מיליגרם של Sulfo-LC-SPDP ל 450 microliters של ננו-צינורית פחמן חד-קיר פונקציונלי אמין.לאחר מכן הוסיפו 50 מיקרוליטרים של 10x PBS, והדקירה במשך שעתיים בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, מוסיפים את תערובת התגובה למכשיר מסנן צנטריפוגלי כתוצאה מחיתוך משקל מולקולרי של 100 קילודלטון, ואחריו ארבעה מיליליטר של מים נטולי גרעין. צנטריפוגה המדגם במשך 10 דקות ב 4, 000 פעמים גרם בטמפרטורת החדר כדי להסיר את עודף Sulfo-LC-SPDP.לאסוף את Sulfo-LC-SPDP-מטופלים אמין חד קיר פחמן nanotube פתרון נשאר במסנן, ולדלל אותו עם 500 microliters של פתרון אנטי MALAT1-Cy3 שהוכן בעבר. ואז להדגים את המדגם בארבע מעלות צלזיוס לילה. כדי להשיג את התוצאות הטובות ביותר של השוואה, סדר באופן אקראי 14 עכברים לקבוצות ניסוי או בקרה עם שבעה בכל קבוצה, ועם יחס זכר-לנקבה זהה בכל קבוצה.לאחר מכן, נקו את ספסל הניתוח וערקו אותו ב-70% אלכוהול אתיל. השתמש במנורת חימום כדי לחמם את אחד העכברים כדי לעזור לווריד הזנב להופיע. לרסן את העכבר כראוי עם מרסן הזרקת זנב.הזרקת MM.1S-luc/mCherry תאים ב 50 microliters של PBS דרך וריד הזנב. לחץ על אתר ההזרקה עם ספוגית אלכוהול במשך 30 שניות. לאחר מכן סמן את העכבר המוזרק והחזר אותו לכלוב נקי.ביום השביעי, לאחר הזרקת תא MM1S, להזריק 50 microliters של PBS המכיל ננו-צינור פחמן חד קיר אנטי MALAT1 לתוך וריד הזנב של העכבר. לאחר מכן לחץ על אתר ההזרקה עם ספוגית אלכוהול במשך 30 שניות. שימו לב לדימום המקומי על הזנב ולהתנהגות הכללית של העכבר למשך דקה אחת, ואז החזירו אותו לכלוב נקי.שימו לב שוב לכל העכברים המוזרקים לפני החזרת הכלוב למדף כדי לוודא שהזריקות נסבלות היטב. לשקול כל עכבר לפני הניתוח. לאסוף דם היקפי מהלב עבור בדיקת ספירת דם מלאה שבוצעה על ידי מכונת מונה תאי דם.לאחר מכן, לאסוף את הרקמות של מח העצם, הטחול, בלוטות הלימפה, הכליה, ואת הרקמה עם גרורות גלוי. יש לחלץ RNA וחלבון מדגימות מח העצם. לתקן את כל הרקמות הנותרות בפורמלין.לאחר 24 שעות של קיבעון, לטבול את דגימות העצם בתתברית EDTA 0.5-טוחן במשך חמישה ימים עבור decalcification. לאחר מכן לטבול את כל הדגימות ב 75% אתיל אלכוהול לאחסון לטווח ארוך. תוצאות ה-QRT PCR הראו כי דנ"א נגד MALAT1 gapmeR הפיל את הביטוי MALAT1 וגרם לאפופטוזיס באופן משמעותי בתאי H929 ו- MM.1S.פחמן חד-קיר ננו-צינורית נגד MALAT1-Cy3 נמסר לתוך הגרעין של תאי MM, והדחיק באופן משמעותי את רמת MALAT1 אנדוגני הן בתאי H929 ו MM.1S. הכדאיות של תא BMEC-1 אין הבדל משמעותי לאחר טיפול של צינור פחמן חד קיר אנטי MALAT1-Cy3 או שליטה במינונים שונים ונקודות זמן. זה מציין כי הרעילות של פחמן חד קיר ננו-צינורית אנטי MALAT1-Cy3 יש רעילות מוגבלת ומקובלת לתאים נורמליים במינון גבוה.מודל עכבר אנושי המופץ על ידי MM הוקם כדי להעריך את השפעות הטיפול של פחמן חד קיר nanotube אנטי MALAT1 ב vivo. אותות לוציפרון של עכברים בקבוצת הטיפול נגד MALAT1 פחמן חד קיר היו נמוכים להפליא בהשוואה לשליטה לאחר 21 ימים של טיפול. מתוצאות אלה, הגיע למסקנה כי טיפול ננו-צינור פחמן חד-קיר נגד MALAT1 באמצעות הזרקה תוך וררית יכול לספק את האוליגוס נגד MALAT1 לתאי הגידול ביעילות.לא נצפו תופעות לוואי משמעותיות של הטיפול, מה שמצביע על כך שהזרקת ננו-צינורית פחמן חד-קירית נגד MALAT1 היא טיפול בטוח לעכברים. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי הרכב מולקולת התא ישפיע על המסירה, היעילות, ואת ההשפעה הטיפולית של תרופות oligonucleotide. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כמו תיוג חלבונים או מולקולות קטנות על מנת לענות על שאלות נוספות.כמו להשתמש בננו-צינוריות פחמן חד-קיר כדי לספק תרופות אחרות.

repression-multiple-myeloma-cell-growth-vivo-single-wall-carbon

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

תאים אנושיים מסוג מיאלומה נפוצה (MM) דורשים מייקרו-הסביבה התומכת של תאי mesenchymal ורכיבי מטריצה ​​תאיים להישרדות ושגשוג. הקמנו in vivo מודל עובר עוף עם תאי מיאלומה וmesenchymal אדם engrafted ללמוד השפעות של תרופות לסרטן על צמיחת גידול, פלישה ואנגיוגנזה.

הקמת מודל xenograft מיאלומה נפוצה אדם בעוף לחקר צמיחת גידול, פלישה ואנגיוגנזה

כאן, אנו מתארים שיטה של מיקרוסקופיה ארוכת טווח כדי לעקוב לאורך תאים בודדים בתגובה לטיפולים אנטי-סרטניים.

מבעד למראה: זמן לשגות מיקרוסקופית ו מעקב אורך של תאים בודדים כדי ללמוד Therapeutics אנטי-סרטניות

כאן נתאר את המסירה של microRNA באמצעות serotype של וירוס רקומביננטי adeno-הקשורים 9 במודל של עכברים של מחלה עצב-שריר. ניהול היקפיים יחידה בעכברים כתוצאה miRNA מתמשכת ביטוי שריר, מוטורי לגלוקוז, מתן הזדמנות טיפולית פוטנציאל vivo בתוךותפקוד miRNA של המחקר.

משלוח מערכתית של MicroRNA באמצעות וירוס רקומביננטי Adeno-הקשורים Serotype 9 לטיפול מחלות נוירומוסקולריות אצל מכרסמים

כאן נשתמש זוהרים, רנטגן, והדמיה פליטת פוזיטרונים טומוגרפיה/שחושב טומוגרפיה ללמוד איך מעכבים פעילות mTOR משפיעה על engrafted-מח עצם מיאלומה גידולים במודל xenograft. דבר זה מאפשר ניתוחים פיזיולוגית הרלוונטיים, לא פולשנית, והן עם מודאלים מרובים של מיאלומה נגד ההשפעה של טיפולים מיקוד engrafted מח עצם מיאלומה גידולים ויוו.

הדמיה עם מודאלים מרובים זוהרים, פליטת פוזיטרונים טומוגרפיה/חישובית טומוגרפיה של מיאלומה נפוצה מח עצם Xenografts בעכברים ליקר ביצים

פרוטוקול זה מתאר מבע ו אורתובנושא מודלים העכבר של בלוטת התריס האנושית tumorigenesis כפלטפורמה לבדוק טיפולים מעכבי מבוססי-אורנה. גישה זו אידיאלית כדי ללמוד את הפונקציה של RNAs ללא קידוד והפוטנציאל שלהם כמטרות טיפוליות חדשות.

ב Vivo עיכוב של מיקרואורנה כדי להקטין את צמיחת הגידול בעכברים

miRNA הרפוי יש פוטנציאל משמעותי בוויסות התקדמות סרטן. המודגמות כאן גישות אנליטיות משמשים לצורך זיהוי הפעילות של טיפול miRNA קומבינטורית להפסקת מחזור התא, אנגיוגנזה.

ניתוח של miRNA קומבינטורית טיפולים כדי להסדיר מחזור התא, אנגיוגנזה

עבודה זו מתארת את הסינתזה והאפיון של המבוסס על המוח, bifunctional הומו-protac כגישה הרומן כדי לגרום אובילינציה והשפלה של E3 אוביקוויב ליגאז המוח (crbn), המטרה של תלידומיד אנלוגיים gs.

הפעלה כימית של ה-E3 אוביקוויב Ligase הומו מבוסס על ידי Pomalidomide מבוססי ההומו-פרוטואקס

כאן, אנו מתארים שיטה להעברת תרופות למערכת העצבים המרכזית העכברוש על ידי שתילת קטטר לתוך החלל המותני הפנימי של עמוד השדרה. אנו מתמקדים במסירת מחלת האנטי-הגיונית, למרות ששיטה זו מתאימה גם לאספקה של שיטות טיפוליות אחרות.

משלוח פנימי של אנטי-סנס וליגונו, במערכת העצבים המרכזית של חולדה

כאן, אנו מתארים את הפרוטוקול לאספקה in vivo של ננו-חלקיקי תחמוצת ברזל מגנטיים הנושאים אוליגומרים של RNA לסרטן שד גרורתי במודלים של בעלי חיים, ומספקים גישה בת קיימא מבחינה קלינית להשתקה טיפולית של חומצות גרעין אונקוגניות.

ניטור הצטברות ננו-תרופות בגרורות סרטן השד בעכברים

מחסום הדם-מוח הוא משוכה משמעותית במתן טיפולים לגליובלסטומה, מחלה שאין לה תרופה. כאן, אנו מדווחים על פלטפורמת ננו טיפולית של תחמוצת ברזל מונחית תמונה in vivo שיכולה לעקוף את המחסום הפיזיולוגי הזה בזכות גודלו ולהצטבר בגידול.

העברת ננו-חלקיקים של מטען אוליגונוקלאוטיד במודל בעלי חיים רב-צורניים מסוג גליובלסטומה

למדו שיטת משלוח תרופות באמצעות ננו-צינוריות פחמן קיר אחד לטיפול במיאלומה נפוצה. טכניקה זו משפרת את יעילות הדיכוי התאי ומציעה פוטנציאל ליישומים נוספים ברפואה.

דיכוי צמיחת תאים מיאלומה In Vivo על ידי ננו-צינורית פחמן קיר אחד (SWCNT)-נמסר MALAT1 Antisense Oligos

גלה סרטונים נוספים