בניית גיליון מרובה שכבות תאי גזע Mesenchymal עם מערכת תרבות דינמית תלת-ממד

טיפול בתאי גזע דווח בהרחבה כטיפול מבטיח למחלות רבות. וטכניקות גיליון התא פותחו על מנת לשפר את שימור התא ואת ההישרדות בתוך המטרות, מדי. במהלך בניית יריעות תאים, אספקת התזונה הלא מספקת נותרה בעיה מרכזית לאובדן תפקוד תאי הגזע, והיא נכס תא גזע לא משביע רצון שסוף סוף יהשפיע על ההשפעות הטיפוליות ב-vivo.

מטרתנו להכין מוצר זמין גיליון תאי גזע רב שכבתיים, הצוות שלנו פיתח את מוטות תאיים, פריקריום ופיגום יריעות תאים. בהתבסס על הפיגום המתנע תאים רב שכבתיים ייבנה במהירות עם מימן nonapeptide מערכת חיסון דינמיקה משמש כדי להבטיח את אספקת התזונה של תא הגזע במבחנה. מוציאים פיגום DBP מיובש ומכניסים אותו למרכז הבסיס השחור.

שים טבעת מתח לבן על פיגום DBP, והדבק אותו במנשא הרקמות. ודא פיגום DBP קבוע לחלוטין במנשא הרקמות. הוסיפו 100 מדיומים לתרבות המיקרוליטרים על פיגום ה-DBP.

מכניסים את הפיגום לחממה של 37 מעלות, ומאפשרים לו להשרות במשך 15 דקות. מוציאים את התאים מהאינקובטור, מסירים את מדיומים תרבותיים מצלחת התרבות, שוטפים בעדינות את התאים עם שני מיליליטר של PBS חם. מוציאים את כל ה-PBS מצלחת התרבות, ומוודאים שלא נשאר נוזל.

מוסיפים שני מיליליטר לתווית טריפסין של 1.25% לצלחת, ומטגירה את התאים במשך שלוש דקות. לעצור את אפקט טריפסין על ידי הוספת שני מיליליטר תרבות בינונית. שוטפים בעדינות את התאים מהצלחת.

העבר את מתלי התא בצינור צנטריפוגלי חדש של 15 מיליליטר. Centrifugate התאים ב 220 פעמים כבידה במשך חמש דקות, ולקבל מים התא. הסר את העל-טבעי, ומחק את מסיסת התאים.

השהה מחדש את התאים עם פתרון 10%sucrose של שלושה מיליליטר. שאף 10 microliters תא השעיה, ואת מספר תא התוכן קורא המוציטמטר, לחלץ שלושה מיליון תאים ולהעביר בצינור צנטריפוגלי 1.5 מיליליטר החדש שלך. Centrifugate את התאים ב 220 פעמים שורש ריבועי במשך חמש דקות, להסיר לחלוטין את supernatants ולקבל את מעים התאים.

הכינו 20 מיקרוליטרים 10%פתרון סוכרוז. בעדינות להשעות את התאים ולקבל השעיה אחידה. מוסיפים 20 מיקרוליטר פפטיד הידרו ג'ל בחלק העליון של ההשעיה בעדינות לערבב את ג'ל הידרו פפטיד, ואת התאים מתלים עם T, להוציא את פיגום DBP, עוזב את נושאת הרקמות, ולאחר מכן בעדינות לשאוף את החציון חשבון עם T.Aspirate את התערובת את התערובת ולהוסיף באופן שווה על פיגום DBP.

מוסיפים מיליליטר סידן לתחתית נושאת הרקמות. מוסיפים בעדינות ארבעה מיליליטר מדיום תרבותי בצלחת התרבות ולאחר מכן מגיחים את גיליון התא. שים את התאים באינקובטור במשך שעתיים תן לו תרבות.

מערכת תדלוק דינמית כוללת מיכל תרבות תדלוק גז החלפת גרגר בקבוק זכוכית. הרכבות הן מערכות חיסון דינמיות כפי שהדמות מוצגת. מוסיפים שני חציוני תרבות הידרו מיליליטר בבקבוק הזכוכית.

מכניסים את גיליון התא לתא של מיכל התרבות, מוסיפים חציוני תרבות של שלושה מיליליטר במיכל, מכניסים את מערכות החיסון הדינמיות לאנקובטורים ומתחילים לשאוב. פתח את מיכל התרבות בהפוגה הדו-קוטבית. מוציאים את גיליון התא ממכל התרבות ומכניסים אותו לצלחת תרבות.

השתמש במלקחיים אחד כדי לשתק את נושאת הרקמות ולהשתמש בשני מלקחיים אחרים כדי להפריד את טבעת המתח הלבן מהבסיס השחור. לבסוף, השג את גליון התאים הרב-שכבתי. פיגום DBP שקוף.

המצילים של SEM מראים שהמכללות שנתפסו והרכיבים שמורים לחלוטין. יריעות התא ניתן להשיג מוחזק על ידי מדפים לשימור קצר. גיליון תאים אלה יכולים להיות מועברים לצינור cylindriform 1.5 מיליליטר.

כמודל למשל החל עם מראה תאים של BMFC חיובי מאוד עבור תאי גזע סמן CD 9O ואת תקליטור 29. לאחר בניית התא BMFC של עזיבת גיליון התא נשאר רמות הרחבה גבוהות של CD 90 ואת תקליטור 29. בניית מבנה התא הרב-שכבתי היא השלב הקריטי של הפרוטוקול.

זמן המחבת דורש ארבעה הידרו ג'ל כאשר ערך PH משתנה מ- SA לנייטרלי, ולכן, חשוב לשטוף את התא עם פתרון סוכרוז כדי להסיר את היונים פני השטח. כמו כן, יחס הנפח של המתלים התא panthihydrogel הוא לא חבר טוב לבניית מבנה רב שכבתי זמני. לאחר היווצרות מבנה תאי גזע תלת-מימדי, תראה את מערכת החיסון הדינמית חשובה לייצוב המבנה הרב שכבתי, כמו גם לשמירה על הוויאציות של תאי הגזע.

החדירה הדינמית של חציון התרבות יכולה להקל על תאי גזע להתרבות ולהסיק הקשר תאים בתוך המבנה הרב שכבתי גם את מדיחום התרבות הדינמית צריך להיות מותאם על פי סוגים שונים של תאי גזע.