צעד אחר צעד טיהור של מתחמי Macromolecular בעזרת RNA המצורפת ביוטין, מקשר צילום-cleavable

שיטה זו צריכה לעניין חוקרים המנסים לבודד קומפלקסים של חלבוני RNA ולזהות את הרכבם על ידי ספקטרומטריית מסה. אנו מאמינים שהפרוטוקול שלנו יהיה שימושי במיוחד לטיהור קומפלקסים הקיימים בתאים בכמויות מוגבלות ונוטים להתנתק במהלך הליכי טיהור רב שלובים ארוכים. היתרון העיקרי של שיטה זו הוא שהיא כרוכה רק בשלב טיהור אחד ו ניתן להשתמש בה עם אתרי איגוד RNA בכל אורך ורצף.

הדגמת חלק מהצעדים תהיה שיאו-קוי יאנג, שהיא טכנאית מחקר בכירה בקבוצה שלנו. עבור אתרי איגוד ארוכים משמעותית מ- 65 נוקלאוטידים, השג את ה- RNA שנוצר T7 ואת אוליגונוקלאוטיד PCB מתאם כמפורט בפרוטוקול הטקסט. מערבבים 20 picomoles של RNA עם 100 picomoles של אוליגונוקלאוטיד מתאם בצינור 1.5 מיליליטר המכיל 100 microliters של חיץ מחייב.