Name: חלבון קינאז C-דלתא מעכב פפטיד ניסוח באמצעות חלקיקי זהב (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: למד שיטת סינתזה של חלקיקי זהב עם חלבון קינאז C-דלתא לטיפול בפציעת ריאה חריפה. השיטה משפרת קליטה תאית ומאפשרת מינון נמוך יותר לטיפול יעיל.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכת על ידי מענקי מחקר קנדי מוסדות הבריאות מחקר (PJT-148847), משרד של מחקר, חדשנות של אונטריו (RE-08-029), קנדה הראשון של מצוינות תכנית המחקר, רפואה על ידי עיצוב באוניברסיטת טורונטו. ד ר Mingyao ליו הוא ג'יימס וכיסא דייוי מרי ב פגיעת ריאות, תיקון והתחדשות.

1. הכנת פפטיד פתרונות
<ol><li>אחזר את פפטידים (P2: CAAAAE, P4: CAAAAW, PKCδi: CSFNSYELGSL) מן המקפיא-20 ° C ו להפשיר בטמפרטורת החדר (RT). הערה: לשמור את הבקבוק סגור כדי למנוע עיבוי על פפטידים לחות.</li>
	<li>שוקלים 0.01 גר' כל פפטיד על microscale. לשים כל פפטיד לתוך צינור חרוטי נפרד 50 מ.</li>
	<li>להוסיף 18.74 מ ל מים (DI) יונים הצינור P2.</li>
	<li>להוסיף 16.93 מ ל מים DI הצינור P4.</li>
	<li>הוסף 8.21 מ של 50% acetonitrile מדולל במים DI אל הצינור PKCδi.</li>
	<li>מערבולת הפתרונות פפטיד בקצרה. לשים צינורות חרוט 50 מ ל sonicator (40 מגה-הרץ) במשך 5 דקות.</li>
	<li>מביאים את הפתרונות פפטיד אבטחה בארון. כל הפתרונות פפטיד מוכן צריך להיות 1 מ מ.</li>
	<li>להעביר 1 מ"ל של כל פתרון פפטיד צינור חרוטי 50 מ. להוסיף 19 מ ל מים DI הצינורות של P2, P4 ולהוסיף מ 19 ל 50% acetonitrile הצינור PKCδi, כך כל אחד מהפתרונות מדולל 50 מיקרומטר ומאוחסנים בצינור משלו.</li>
</ol>2. ניסוח של תל ג/PKCi
<ol><li>פפטידים צריך להתווסף הפתרון תל ג עדיין בזמן BSC</li>
	<li>הוספת μL 475 של P2, 25μL של P4 ו- 500 μL של פתרון δPKCi לתוך צינור 15 מ"ל. להוסיף 9 מ של 20 ננומטר תל ג פתרון (7.0x1011 חלקיק/mL) הצינור 15 מ"ל זהה.</li>
	<li>יציאה הקבינט אבטחה. לעטוף את הצינור 15 מ"ל ברדיד אלומיניום. . תשאיר את זה דולק מטרף-RT בן לילה</li>
	<li>להחזיר את הדגימות אבטחה הקבינט. Aliquot 1 מ"ל של תל ג/PKCi לתוך microtubes 1.5 מ ל כל אחד.</li>
	<li>Centrifuge צינורות מיקרו-ומפרידה למשך 30 דקות ב g x 15,294 ב 4 º C.</li>
	<li>הסר את תגובת שיקוע כל שפופרת תחת אבטחה ארון. הערה: הקפד להסיר את תגובת שיקוע תוך הקפדה כי בגדר תל ג נשאר שלם, הוא לא aspirated.</li>
	<li>מחדש להשעות בגדר של הממס הרצוי על פי הריכוז הנדרש. ממיסים רלוונטי יכול להיות די מים, PBS ו- 0.9% NaCl. הערה: החל מ- 1 מ"ל של תל ג/PKCi, בגדר תל ג מכיל 6.3 x 10 חלקיקים11 , מבוסס על ריכוז תל ג המסופקים על ידי היצרן. כדי לנהל 1.3 x 10 חלקיקים12 ב- 500 µL של 0.9% NaCl, נוסיף 232 µL של 0.9% NaCl לכל אחד שלושה כדורי. לאחר צירוף אותם יחד, ואז לאסוף µL 500 של תל ג/PKCi פתרון. הערה: לערבב את הרצוי ממס לפני דילול בגדר תל ג/PKCi, אחרת תל ג/PKCi צבירה.</li>
</ol>3. הערכה של תל ג/PKCi היברידית מסיסות
<ol><li>שופכים 0.5 מ של פתרון תל ג/PKCi לתוך cuvette אקריל. למקם את cuvette אקריל ספקטרופוטומטרים UV-Vis ובדוק את הקליטה של שיא15.</li>
</ol>

<ol><li>Yusen, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+registry+of+the+International+Society+for+Heart+and+Lung+Transplantation%3A+thirty-first+adult+lung+and+heart-lung+transplant+report--2014%3B+focus+theme%3A+retransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The registry of the International Society for Heart and Lung Transplantation: thirty-first adult lung and heart-lung transplant report--2014; focus theme: retransplantation.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 33 (10), 1009-1024 (2014).</li>
<li>Lee, J. C., Christie, J. D., Keshavjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+graft+dysfunction%3A+definition%2C+risk+factors%2C+short-+and+long-term+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Respiratory+and+Critical%22%5BJournal%5D)">Primary graft dysfunction: definition, risk factors, short- and long-term outcomes.</a> Seminars in Respiratory and Critical. 31 (2), 161-171 (2010).</li>
<li>Chatterjee, S., Nieman, G. F., Christie, J. D., Fisher, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shear+stress-related+mechanosignaling+with+lung+ischemia%3A+lessons+from+basic+research+can+inform+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Shear stress-related mechanosignaling with lung ischemia: lessons from basic research can inform lung transplantation.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 307 (9), 668-680 (2014).</li>
<li>Inagaki, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+protects+against+reperfusion+injury+of+the+ischemic+heart+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Inhibition of delta-protein kinase C protects against reperfusion injury of the ischemic heart in vivo.</a> Circulation. 108 (19), 2304-2307 (2003).</li>
<li>Lincoff, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+delta-protein+kinase+C+by+delcasertib+as+an+adjunct+to+primary+percutaneous+coronary+intervention+for+acute+anterior+ST-segment+elevation+myocardial+infarction%3A+results+of+the+PROTECTION+AMI+Randomized+Controlled+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22European+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Inhibition of delta-protein kinase C by delcasertib as an adjunct to primary percutaneous coronary intervention for acute anterior ST-segment elevation myocardial infarction: results of the PROTECTION AMI Randomized Controlled Trial.</a> European Heart Journal. 35 (37), 2516-2523 (2014).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((deltaV1-1+Reduces+Pulmonary+Ischemia+Reperfusion-Induced+Lung+Injury+by+Inhibiting+Necrosis+and+Mitochondrial+Localization+of+PKCdelta+and+p53%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">deltaV1-1 Reduces Pulmonary Ischemia Reperfusion-Induced Lung Injury by Inhibiting Necrosis and Mitochondrial Localization of PKCdelta and p53.</a> American Journal of Transplantation. 16 (1), 83-98 (2016).</li>
<li>Lin, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derangements+of+post-ischemic+cerebral+blood+flow+by+protein+kinase+C+delta%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Derangements of post-ischemic cerebral blood flow by protein kinase C delta.</a> Neuroscience. 171 (2), 566-576 (2010).</li>
<li>Lin, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+kinase+C+delta+modulates+endothelial+nitric+oxide+synthase+after+cardiac+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cerebral+Blood+Flow+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Protein kinase C delta modulates endothelial nitric oxide synthase after cardiac arrest.</a> Journal of Cerebral Blood Flow Metabolism. 34 (4), 613-620 (2014).</li>
<li>Albini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-tat+protein+is+a+heparin-binding+angiogenic+growth+factor%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">HIV-tat protein is a heparin-binding angiogenic growth factor.</a> Oncogene. 12 (2), 289-297 (1996).</li>
<li>Kim, H., Moodley, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TAT+cell-penetrating+peptide+modulates+inflammatory+response+and+apoptosis+in+human+lung+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Delivery+and+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">TAT cell-penetrating peptide modulates inflammatory response and apoptosis in human lung epithelial cells.</a> Drug Delivery and Translational Research. 5 (3), 275-278 (2015).</li>
<li>Lee, D., Pacheco, S., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+effects+of+Tat+cell-penetrating+peptide%3A+a+multifunctional+Trojan+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Nanomedicine+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Biological effects of Tat cell-penetrating peptide: a multifunctional Trojan horse.</a> Nanomedicine (Lond). 9 (1), 5-7 (2014).</li>
<li>Auffan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+definition+of+inorganic+nanoparticles+from+an+environmental%2C+health+and+safety+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Towards a definition of inorganic nanoparticles from an environmental, health and safety perspective.</a> Nature Nanotechnology. 4 (10), 634-641 (2009).</li>
<li>Ghosh, P., Han, G., De, M., Kim, C. K., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+in+delivery+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles in delivery applications.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 60 (11), 1307-1315 (2008).</li>
<li>Yang, H., Fung, S. Y., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Programming+the+cellular+uptake+of+physiologically+stable+peptide-gold+nanoparticle+hybrids+with+single+amino+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Angewandte+Chemie+International+Edition%22%5BJournal%5D)">Programming the cellular uptake of physiologically stable peptide-gold nanoparticle hybrids with single amino acids.</a> Angewandte Chemie International Edition. 50 (41), 9643-9646 (2011).</li>
<li>Lee, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+delivery+of+a+rationally+designed+intracellular+peptide+drug+with+gold+nanoparticle-peptide+hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Effective delivery of a rationally designed intracellular peptide drug with gold nanoparticle-peptide hybrids.</a> Nanoscale. 7 (29), 12356-12360 (2015).</li>
<li>Cheng, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotechnologies+for+biomolecular+detection+and+medical+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Nanotechnologies for biomolecular detection and medical diagnostics.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 10 (1), 11-19 (2006).</li>
<li>Rosi, N. L., Mirkin, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanostructures+in+biodiagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Nanostructures in biodiagnostics.</a> Chemical Reviews. 105 (4), 1547-1562 (2005).</li>
<li>Saha, K., Agasti, S. S., Kim, C., Li, X., Rotello, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+in+chemical+and+biological+sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Reviews%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles in chemical and biological sensing.</a> Chemical Reviews. 112 (5), 2739-2779 (2012).</li>
<li>Boisselier, E., Astruc, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+in+nanomedicine%3A+preparations%2C+imaging%2C+diagnostics%2C+therapies+and+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Chemical+Society+Reviews%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles in nanomedicine: preparations, imaging, diagnostics, therapies and toxicity.</a> Chemical Society Reviews. 38 (6), 1759-1782 (2009).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+Acid-Dependent+Attenuation+of+Toll-like+Receptor+Signaling+by+Peptide-Gold+Nanoparticle+Hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Amino Acid-Dependent Attenuation of Toll-like Receptor Signaling by Peptide-Gold Nanoparticle Hybrids.</a> ACS Nano. 9 (7), 6774-6784 (2015).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endosomal+pH+modulation+by+peptide-gold+nanoparticle+hybrids+enables+potent+anti-inflammatory+activity+in+phagocytic+immune+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Endosomal pH modulation by peptide-gold nanoparticle hybrids enables potent anti-inflammatory activity in phagocytic immune cells.</a> Biomaterials. 111, 90-102 (2016).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+Acid+Structure+Determines+the+Immune+Responses+Generated+by+Peptide-Gold+Nanoparticle+Hybrids%5BTitle%5D)+AND+%22Particle+%26+Particle+Systems+Characterization%22%5BJournal%5D)">Amino Acid Structure Determines the Immune Responses Generated by Peptide-Gold Nanoparticle Hybrids.</a> Particle & Particle Systems Characterization. 30 (12), 1039-1043 (2013).</li>
<li>Pamies, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggregation+behaviour+of+gold+nanoparticles+in+saline+aqueous+media%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nanoparticle+Research%22%5BJournal%5D)">Aggregation behaviour of gold nanoparticles in saline aqueous media.</a> Journal of Nanoparticle Research. 16 (4), (2014).</li>
<li>Perrault, S. D., Walkey, C., Jennings, T., Fischer, H. C., Chan, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mediating+tumor+targeting+efficiency+of+nanoparticles+through+design%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Letters%22%5BJournal%5D)">Mediating tumor targeting efficiency of nanoparticles through design.</a> Nano Letters. 9 (5), 1909-1915 (2009).</li>
<li>Connor, E. E., Mwamuka, J., Gole, A., Murphy, C. J., Wyatt, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gold+nanoparticles+are+taken+up+by+human+cells+but+do+not+cause+acute+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Gold nanoparticles are taken up by human cells but do not cause acute cytotoxicity.</a> Small. 1 (3), 325-327 (2005).</li>
<li>Kim, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entrapment+of+Hydrophobic+Drugs+in+Nanoparticle+Monolayers+with+Efficient+Release+into+Cancer+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Entrapment of Hydrophobic Drugs in Nanoparticle Monolayers with Efficient Release into Cancer Cells.</a> Journal of the American Chemical Society. 131 (4), 1360(2009).</li>
<li>Sonavane, G., Tomoda, K., Makino, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+colloidal+gold+nanoparticles+after+intravenous+administration%3A+Effect+of+particle+size%5BTitle%5D)+AND+%22Colloids+and+Surfaces+B-Biointerfaces%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of colloidal gold nanoparticles after intravenous administration: Effect of particle size.</a> Colloids and Surfaces B-Biointerfaces. 66 (2), 274-280 (2008).</li>
<li>Balasubramanian, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+gold+nanoparticles+and+gene+expression+changes+in+the+liver+and+spleen+after+intravenous+administration+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of gold nanoparticles and gene expression changes in the liver and spleen after intravenous administration in rats.</a> Biomaterials. 31 (8), 2034-2042 (2010).</li>
<li>Lipka, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biodistribution+of+PEG-modified+gold+nanoparticles+following+intratracheal+instillation+and+intravenous+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Biodistribution of PEG-modified gold nanoparticles following intratracheal instillation and intravenous injection.</a> Biomaterials. 31 (25), 6574-6581 (2010).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף על הפרויקט הזה.

כדי להבטיח ניסוח תקין, חשוב כי הפתרון δPKCi עובר את השלב sonication המתוארות ב 1.6. ΔPKCi פפטיד רצף מכיל moieties הידרופוביות, כך sonicator מסייע המסת PKCi בפתרון 50% acetonitrile. בנוסף, חשוב מאוד לערבב הממס בקפידה, כמתואר בשלב 2.7.  היברידית תל ג/PKCi לא טוב יגובש אם שלבים אלה אינם נעשים כראוי, עקב הצבירה של פפטיד δPKCi23. 
  ניסוח סמים תל ג מספקת מספר יתרונות. קודם כל, להיות מסונתז GNPs בקלות לפי הגדלים מבוקרים היטב, ועד כמה ננומטר ~ 100 ננומטר. בדרך כלל, GNPs בגודל קטן יותר יכול לספק סמי...

השתלת ריאה שומר בחולים עם מחלת ריאות בשלב הסופי1. עם זאת, סיבוכים חמורים לאחר השתלת ריאה נשארים מכשול. בשלבים המוקדמים בעקבות השתלת ריאה, תפקוד שתל העיקרי הוא סיבוך המזיקים ביותר1, את הגורם הראשוני הוא איסכמיה-פגיעה reperfusion (IR)-induced ריאות חריפה פגיעה2.
תחת שימור קר, חילוף החומרים ריאה התורם הוא מוגבל לרמה מאוד נמוכה. עם זאת, מינים חמצן תגובתי, תחמוצת החנקן סינתזה מופעלות עקב הפסקת זרימת הדם3. לאחר ההשתלה, מחזור הדם משוחזר, מינים חמצן תגובתי תחמוצת החנקן שנוצרו במהלך איסכמיה קר לשפר את דלקת מוות תאים, וכתוצאה מכך פגיעה ברקמות.
כדי למנוע פציעה IR, שימש מעכב Cδ קינאז חלבון (PKCδi), לב, מוח, ריאות4,5,6,7,8. מחקרים אלה הראו כי PKCδi ירד אפופטוזיס דלקות במהלך פגיעה reperfusion. זה גם מנעה פגיעה IR ריאתי בחולדות, מודל השתלת ריאות6. PKCδi היא מצומדת בדרך כלל עם חודר לתא פפטיד, TAT, למסירה תאיים. עם זאת, הוכח כי פפטיד TAT לבד יש השפעות ביולוגיות שאינם ספציפיים, כולל קידום של אנגיוגנזה, אפופטוזיס עיכוב של מספר ציטוקינים9,10,11. חלקיקים, חלקיקים קטנים הנע בין 1 ל- 100 ננומטר קוטר12, נחקרו זהה להקל על משלוח סמים13. בפרט, חלקיקי זהב (GNPs) נחשבים כמו לא פולשנית ולא רעילים. לכן, פיתחנו GNPs כמו ספקיות שירות משלוח סמים עבור מבוססת על פפטיד סמים14,15.
ניתן לטפל השטח של GNPs עבור יישומים ספציפיים כגון הכרה מולקולרית16,17, חישה כימית18, הדמיה19ומסירת סמים. פותחה מערכת היברידית תל ג/פפטיד, המכילה 20 ננומטר GNPs, שני פפטידים קצרים (P2: CAAAAE ו- P4: CAAAAW)-יחס 95:5, כדי לשנות את המאפיינים פני שטח של GNPs. פפטיד P2, עם החומצה גלוטמית טעונים שלילית (E) בסוף, מייצב GNPs בתמיסה המימית ומסייעת פפטיד P4, עם טריפטופן הידרופובי (W) בסוף, GNPs הכניסה לתוך תאים14. שאריות ציסטאין (ג) התחנה הסופית N של פפטידים אלה מכיל קבוצה תיול יכול נזווג משטחי זהב14. היברידית פפטיד/תל ג זו שימשה נוסף כדי לספק PKCδi (CSFNSYELGSL). היחס טוחנת אופטימיזציה של P2:P4 כדי PKCδi הוא 47.5:2.5:50. GNPs מצומדת עם PKCδi (תל ג/PKCi) הם יציבים במים מזוקקים, 0.9% NaCl, PBS המכיל אלבומין שור או עוברי סרום שור14. תל ג/PKCi תוך ורידיות הוכח כדי למנוע פגיעה reperfusion-איסכמיה פציעה של ריאות15. מאמר זה מתאר שיטה לגבש תל ג/PKCi, ומתאר כיצד להעריך את המאפיינים physicochemical של תל ג/PKCi. השתמשנו בשיטות דומות על מנת לגבש תרופות אחרות מבוססות-פפטיד מצומדת לתל ג20,21,22. אנו מקווים שמאמר זה ימשוך יותר תשומת לב זה ניסוח רומן למשלוח סמים תאיים.

<table><tbody><tr><td>פפטיד חומצה גלוטמית טעון שלילית (P2)</td> <td>רצף CanPeptide</td><td></td><td>: CAAAAE-NH2 אורך: 6aa שינוי: אמידציה C-terminal כמות: 50 מ"ג טוהר: >95%</td></tr> <tr><td>פפטיד טריפטופן הידרופובי (P4)</td><td>רצף CanPeptide</td><td></td><td>: CAAAAW-NH2 אורך: 6aa שינוי: אמידציה C-terminal כמות: 50 מ"ג טוהר: >95%</td></tr><tr><td>&דלתא; פפטיד PKCi</td><td>CanPeptide</td><td></td><td>רצף: CSFNSYELGSL-NH2 אורך: 11aa שינוי: C-terminal amidation כמות: 50 מ"ג טוהר: >95%</td></tr> <tr><td>צינור חרוטי (50 מ"ל)</td><td>קורנינג מדעי החיים</td><td>3582070</td><td></td></tr><tr><td>צינור חרוטי (15 מ"ל)</td><td>קורנינג מדעי החיים</td><td>3582096</td><td></td></tr><tr><td>אצטוניטריל</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>271004-100 מ"ל</td><td></td></tr><tr><td>סוניקטור</td><td>ברנסון אולטרסאונד קורפ</td><td>ברנסון 2510MTH</td><td></td></tr><tr><td>Microtube</td><td>Diamed.ca</td><td>AD 150-N</td><td></td></tr><tr><td>תמיסת ננו-חלקיקי זהב</td><td>טד פלה</td><td>15705-5</td><td>גודל החלקיקים הוא 20 ננומטר</td></tr><tr><td>שייקר פלטפורמת נדנדה</td><td>VWR international</td><td>40000-304&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוצנטריפוגה</td><td>Eppendorf</td><td>5417R</td><td></td></tr><tr><td>קובטה אקרילית</td><td>SARSREDT</td><td>67.758</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרופוטומטר UV-Vis</td><td>Agilent</td><td>Caty 60 UV-Vis</td><td></td></tr></tbody></table>

חלבון קינאז c-דלתא מעכב פפטיד ניסוח באמצעות חלקיקי זהב

Protein Kinase C-delta Inhibitor Peptide Formulation using Gold Nanoparticles

מעכבי קינאז C-דלתא חלבון (PKCδi) היא תרופה מבטיח למנוע פגיעה איסכמיה-פגיעה reperfusion-induced איברים. זה הוא בדרך כלל מצומדת כדי חודר לתא פפטיד, TAT, למסירה תאיים. עם זאת, TAT הראו פעילות ביולוגית שאינם ספציפיים. חלקיקי זהב (GNPs) יכול לשמש גם ספקיות שירות משלוח סמים ללא רעילות שזוהה. לכן, השתמשנו היברידית תל ג/פפטיד להעביר PKCδi. 2. קצר פפטידים (P2: CAAAAE ו- P4: CAAAAW), ביחס 95:5, שימשו כדי לשנות את המאפיינים משטח של תל ג. GNPs מצומדת עם PKCδi (תל ג/PKCi) יציבים במים מזוקקים, 0.9% NaCl, באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS) המכיל שור אלבומין או סרום שור בעובר. תל ג-PKCi תוך ורידיות הוצגה קודם לכן כדי למנוע פגיעה reperfusion-איסכמיה פציעה של הריאה. מאמר זה מתאר פרוטוקול כדי לגבש תל ג/PKCi ולהעריך את המאפיינים physiochemical של תל ג/PKCi. השתמשנו בשיטות דומות על מנת לגבש תרופות אחרות מבוססות-פפטיד עם תל ג. מאמר זה בתקווה ימשוך יותר תשומת לב הטכנלוגיה משלוח סמים תאיים הרומן ויישומיה ויוו.

צריך לקחת כדי להעריך את המאפיינים ביופיזיקלי של היברידית תל ג/PKCi, כפי תל ג נוטה צבירה של הממס. כאשר תל ג נצבר, הצבע של הפתרון משתנה מוורוד לסגול (איור 1 א'). ספקטרופוטומטרים UV-Vis הוא מסוגל לזהות את השינויים יותר ברגישות. אם תל ג/PKCi לא נצבר הפסגה של קליטה צריך להיות 525 nm (איור 1b). אם התוצר נצבר, הפסגה של ספיגת יוסטו מימין. כמו שיטת חלופית של ניתוח, כאשר אגרגטים יצרו את ΔOptical צפיפות (ΔOD = OD-525 nm - OD-440 ננומטר) פוח...

בעבר השתמשנו היברידית פפטיד nanoparticle זהב להעביר דרך הווריד של פפטיד סינתטי, חלבון קינאז C-דלתא מעכב, אשר מופחת איסכמיה-פגיעה reperfusion-induced ריאות חריפה פציעה. הנה אנחנו מראים את פרוטוקול מפורט של ניסוח סמים. פפטידים תאיים אחרים יכול לנסח באופן דומה.

חלבון קינאז C-דלתא מעכב פפטיד ניסוח באמצעות חלקיקי זהב

Protein kinase C-delta inhibitor (PKC&#948;i) is a promising drug to prevent ischemia-reperfusion-induced organ injury. It is usually conjugated to a ...

מערכת אספקת התרופות הייחודית שלנו, המשתמשת ב-20 חלקיקי זהב ננומטר בשני פפטידים קצרים ספציפיים, יכולה לייצב חלקיקי ננו זהב בת פתרון פיזיולוגי ולשפר את ספיגת התאים שלה, ובכך, לספק ביעילות תרופות מבוססות פפטיד או תרופות אחרות לתאים. ההיברידית פפטיד GNP שלנו קל לסנתז ויציב. באמצעות זהב ננו-חלקיקים פפטיד היברידית כמו נשאי סמים, אנחנו יכולים להעביר תרופות פפטיד לתוך התאים ביעילות בשפע.טיפלנו בפגיעה אצ'מיה-reperfusion בריאות עם GNP שלנו / PKCi היברידית. GNP מביא פפטידים מעכבי PKC לתוך הציטופלסמה. שיטת מסירה זו הצליחה להפחית פגיעה חמורה יותר ריאות באמצעות מינון נמוך יותר של PKCi מאשר שיטות משלוח אחרות.כדי להתחיל בהליך זה, לאחזר את הפפטידים ממקפיא במינוס 20 מעלות צלזיוס, ולהפשיר אותם בטמפרטורת החדר. השתמש בסולם מיקרו כדי לשקול 0.01 גרם של כל פפטיד מופשר, ולהעביר כל פפטיד לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר נפרד. הוסף 18.74 מיליליטר של מים deionized לצינור P2, ו 16.93 מיליליטר של מים deionized לצינור P4.הוסף 8.21 מיליליטר של 50% אצטוניטריל מדולל במים deionized לצינור מעכבי הדלתא PKC. וורטקס פתרונות הפפטיד בקצרה. ואז למקם את הצינורות לתוך sonicator ב 40 מגה הרץ במשך חמש דקות.לאחר מכן, להעביר את הפתרונות לארון biosafety. זה קריטי לשים את הצינור חרוט 50 מ"ל ב sonicator במשך חמש דקות. אם המערכת תדלג על שלב זה, ה- GNP/PKCi יתגבשו צבירה.מעבירים מיליליטר אחד של כל פתרון פפטיד לצינור חרוט חדש של 50 מיליליטר. הוסף 19 מיליליטר של מים deionized לצינורות המכילים P2 ו P4. ולהוסיף 19 מיליליטר של 50% אצטוניטריל לצינור המכיל מעכבי דלתא PKC. הוסף 475 מיליליטר של פתרון P2, 25 מיקרוליטרים של פתרון P4, 500 מיקרוליטרים של פתרון מעכבי הדלתא PKC לצינור 15 מיליליטר.לאחר מכן להוסיף תשעה מיליליטר של פתרון GNP 20 ננומטר לאותו צינור. הסר את הפתרון המשולב מן הארון biosafety ולעטוף את הצינור בנייר אלומיניום. מניחים את הצינור על שייקר לילה.למחרת, תחזיר את הדגימות לארון הביו-בטיחות. העבר aliquots מיליליטר אחד של פתרון GNP / PKCi לתוך צינורות מיקרו 1.5 מיליליטר. צנטריפוגה צינורות מיקרו במיקרו צנטריפוגה ב 15294 פעמים g וב ארבע מעלות צלזיוס במשך 30 דקות.מעבירים את צינורות המיקרו בחזרה לארון ה-biosafety, ומסירים את העל-טבעי מכל צינור, תוך הבטחה שכדור ה-GNP לא יופרע. תן מחדש כל גלולה בממס הרצוי על פי הריכוז הנדרש. כדי להעריך את המבודדות ההיברידית GNP/PKCi, יוצקים 0.5 מיליליטר של פתרון GNP/PKCi לקובטה צבירה.מניחים את הקוט על ספקטרופוטומטר UV-Vis ולבדוק את ספיגת השיא. במחקר זה, מעכבי חלבון קינאז C-delta הוא מצומד עם חלקיקי זהב כדי ליצור GNP / PKCi היברידית. יש לדאוג עם הערכת המאפיינים הביופיזיים של היברידית, כמו חלקיקי זהב נוטים לצבור ממס.כאשר הננו-חלקיקים מצטברים, צבע הפתרון ישתנה וריוד לסגול. הדגימות מנותחות עם ספקטרופוטומטר UV-Vis אשר מסוגל לזהות עם רמה גבוהה של רגישות. אם ההיברידי אינו מצטבר, שיא הספיגה צריך להיות ב 525 ננומטר.אם ה-GNP יצטבר, שיא הספיגה יועבר ימינה. כפי שניתן לראות, כאשר נוצרו אגרגטים, הצפיפות האופטית דלתא פוחתת. בעת גיבוש היברידיות פפטיד GNP, חשוב לזכור את היחס בין פפטידים לפתרון GNP צריך להיות אחד עד תשע.נוסחת GNP/PKCi זו יכולה לשמש לפגיעה בעיסכמיה במערכות איברים שאינן הריאה. כל פפטידים יכולים לצרף GNP אם פפטידים אלה יש שאריות ציסטאין ב N-terminus. משמעות הדבר היא GNP פפטיד היברידית ניתן להשתמש כדי להעביר תרופות פפטיד אחרים לתוך התא.פפטידים שתוכננו באופן רציונלי הם טכנולוגיה חדשה שיכולה להביא אינטראקציה ספציפית בין חלבון לחלבון בתוך תאים אלה. טכניקה זו, שפותחה כאן, יכולה לשמש לאספקת תרופות פפטיד חדשות או לגרסאות מותאמות של תרופות קיימות.

protein-kinase-c-delta-inhibitor-peptide-formulation-using-gold

Research

JoVE Journal

Bioengineering

הנדסה ביולוגית

סוג B ג'לטין מערכת מבוססת nanovectors מהונדסים (גנס) פותחה עבור משלוח גן transfection מערכתית בטיפול בסרטן הלבלב. על ידי שינוי עם קולטן גורם הצמיחה אפידרמיס (EGFR) פפטיד מסוים על פני השטח של nanparticles, הם יכולים למקד על הקולטן EGFR ולשחרר פלסמיד תחת צמצום הסביבה, כגון ריכוזים גבוהים גלוטתיון תאיים.

משלוח ין transfection ב אדם בתאי סרטן הלבלב באמצעות גורם גדילה עוריות קולטן במיקוד לטין מבוסס Nanovectors מתוכנן

אנו מתארים יישום של אסטרטגיית REPLACE למיקוד אינטראקציות חלבון-חלבון. REPLACE היא אסטרטגיה איטרטיבית הכוללת גישות סינתטיות וחישוביות להמרה של מעכבים פפטידיים אופטימליים למולקולות דמויות תרופות.

פיתוח של מעכבי חלבונים אינטראקציות דרך להחליף: בקשה לעיצוב ומעכבי CDK התחרותי הפיתוח ללא ATP

אנו מראים את ההכנה ומתייחסים להיתכנות של כלי רכב סלולריים המכילים ננו-מוטות זהב להדמיה פוטו-אקוסטית של סרטן.

ניתוח הכנת photoacoustic של כלי רכב ניידים המכילים Nanorods הזהב

כמו קולטן קולטן (TLR) איתות משחק תפקיד חשוב פתופיזיולוגיה של מחלות דלקתיות רבות של האדם, ואת הסדרת תגובות TLR על ידי חלקיקי ביו צפוי להיות מועיל בתנאים דלקתיים רבים. תאי ה- THP-1 מבוססי תאים מספקים פלטפורמה סינון רב-תכליתי וחזק לזיהוי מעכבים חדשים של איתות TLR.

הקרנת חלקיקים ביואקטיביים בתאי החיסון Phagocytic עבור מעכבי איתות כמו קולטן איתות

אנו מתארים שיטה של סינתזה ביולוגית חלקיקי זהב 10 ננומטר, functionalized על ידי ציפוי פולי-אתילן גליקול על גבי המשטח. חלקיקים אלה יכולים להיות בשימוש במבחנה , ויוו להעברת הרפוי לחללים הסלולר, חוץ-תאית ננו אשר קשות לגישה עם גדלים nanoparticle קונבנציונלי.

סינתזה של Functionalized 10-nm פולימר מצופה זהב חלקיקים אנדותל הכוונת משלוח סמים

פרוטוקול זה מתאר שיטה יעילה לסנתז את nanoemulsion של המספר המשלים acids-platinum(II) האולאית התייצב עם tripeptide ליזין-טירוזין-פנילאלנין (KYF). הצורות nanoemulsion בתנאים סינתטי קלה באמצעות הרכבה עצמית של KYF, לחשב את המשלים שלו.

Nanoemulsion מיוצב Tripeptide של חומצה אולאית

בפרוטוקול זה, דולסורוביצ'ין טעון AS1411-g-PEI-g-PEG חלקיקי זהב שונה מסונתזים באמצעות תגובות אמיד שלושה שלבים. לאחר מכן, דוסורוביצ'ין נטען ונמסר כדי למקד תאים סרטניים לטיפול בסרטן.

סינתזה של Aptamer-PEI-g-PEG שונה חלקיקי זהב טעון עם וקסורוביצ'ין עבור משלוח תרופות ממוקדות

מחקר זה נועד להציג אסטרטגיה לזיהוי אינטראקציות תרופתיות פפטיד. האסטרטגיה כוללת ביופאנינג של פפטידים קצרים לזיהוי תרופות המבוססים על מיקרו-איזון של גביש קוורץ (QCM), ואחריו ניתוח ביואינפורמטיקה להערכת כמותיות של המידע המתקבל להכרה בסמים וביאור של אתרי איגוד התרופות בחלבונים.

ביו-panning מבוסס Biosensor ואסטרטגיית ניתוח ביואינפורמטיקה לאימות גלובלי של אינטראקציות עם חלבונים תרופתיים

מחקר זה פיתח שיטה לא פולשנית ובזמן אמת להערכת ההתפלגות של ליגנד מוות מתוכנת 1 בכל הגוף, בהתבסס על הדמיה טומוגרפית של פליטת פוזיטרונים של אנטגוניסט D-dodecapeptide [68Ga]. לטכניקה זו יתרונות על פני אימונוהיסטוכימיה קונבנציונלית והיא משפרת את יעילות זיהוי החולים המתאימים אשר יפיקו תועלת מטיפול בחסימת נקודות בקרה חיסוניות.

פיתוח של 68גלייום מסומן D-פפטיד PET Tracer עבור הדמיה מתוכנת מוות-ליגנד 1 ביטוי

מאמר זה מתאר שיטה nanoprecipitation לסנתז פולימר מבוסס חלקיקים באמצעות diblock שיתוף פולימרים. אנו נדון את הסינתזה של diblock שיתוף פולימרים, הטכניקה nanoprecipitation, יישומים פוטנציאליים.

גיבוש חלקיקים פולימריים Diblock באמצעות טכניקה Nanoprecipitation

למד שיטת סינתזה של חלקיקי זהב עם חלבון קינאז C-דלתא לטיפול בפציעת ריאה חריפה. השיטה משפרת קליטה תאית ומאפשרת מינון נמוך יותר לטיפול יעיל.

חלבון קינאז C-דלתא מעכב פפטיד ניסוח באמצעות חלקיקי זהב

גלה סרטונים נוספים