Name: חילוץ וניתוח של פרופוליס ירוק מטייוואן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: למדו פרוטוקול לחילוץ פרופוליס ירוק מטייוואן באמצעות אתנול כממס. השיטה מאפשרת אפיון פעילות אנטיבקטריאלית והערכת איכות אמינה וניתנת לשחזור של תרכובות טבעיים בביוכימיה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

כתב יד זה נערך על-ידי עריכה אקדמית וואלאס.

1. הכנת תרכובות אתנול, חילוץ
<ol><li>שוקלת 10 גרם של קפואים פרופוליס ירוק מטייוואן, אשר נאסף מתוך כוורות בטייוואן ממאי עד יולי, לטחון אותו באמצעות את מטחנת תבלינים. לאשר כי כל פיסות פרופוליס ירוק מטייוואן הם הקרקע לאבקה בסדר בלי שום חלקיקים גדולים.</li>
	<li>להוסיף 100 מ של ריכוזים שונים של אתנול (60%, 70%, 80%, 95% ו- 99.5%) ומים נפרדים מבחנות ולערבב כל ריכוז עם 10 גרם פרופוליס הקרקע.</li>
	<li>דגירה 25 ° c, לנער את הבקבוק בהישג 250 סל"ד במשך 48 שעות.</li>
	<li>לסנן את תמציות אתנול דרך מסנן נייר עם גודל הנקבוביות 25 μm.</li>
	<li>לשקם את filtrates כדי שלהם לאמצעי האחסון המקורי (100 מ"ל) עם אתנול 95% באמצעות על סטריליות.</li>
	<li>חנות שהאתנול תמציות ב-20 ° C. הערה: הפרוטוקול אפשר לעצור כאן.</li>
</ol>2. הכנה של אתנול תמציות HPLC
<ol><li>רכז 10 מ"ל אתנול תמציות בשל התאיידות ואקום ב 40 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.</li>
	<li>אופים את העניין יבש ב 45 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות ביממה.</li>
	<li>לשקם את העניין יבש עם 10 מ"ל אתנול 95%.</li>
	<li>מסנן 1 מ"ל אתנול תמציות באמצעות מסנן סטרילי מזרק עם גודל הנקבוביות 0.45 מיקרומטר.</li>
	<li>לסנן מחדש תמציות אתנול באמצעות מסנן סטרילי מזרק עם גודל הנקבוביות 0.22 מיקרומטר. פילטרט של שנאספו, ניתן ישירות לנתח באמצעות HPLC.</li>
</ol>3. ניתוח התוכן Propolin באמצעות HPLC
<ol><li>
הקמתה של עקומות סטנדרטית של propolins
	<ol>
<li>להכין 1 ליטר בשלב ניידים של פתרון מתנול: מים 88.8:11.2 (וי/v).</li>
		<li>להכין דילולים טורי של propolin ריכוז רגיל (C, D, F ו- G) (15.625 מ"ג/מ"ל, 31.25 מ"ג/מ"ל, 62.5 מ"ג/מ"ל ו- 125 מ"ג/מ"ל, בהתאמה) באמצעות הפתרון שלב ניידים כמו הממס.</li>
		<li>מזריקים µL 20 של ריכוזים סטנדרטי propolin לתוך העמודה הפוכה-פאזי, ברצף של ריכוז נמוך לריכוז גבוה.</li>
		<li>הגדר את העמודה HPLC של 30 מעלות צלזיוס, קצב הזרימה כדי 1 mL/min.</li>
		<li>הגדר אורך הגל של הגלאי UV 280 ננומטר וזמן מקליט את 20 דקות.</li>
		<li>לנתח את הסטנדרטים לפחות 3 x.</li>
		<li>להתוות את התגובה מדידה (ציר y) נגד הריכוז (ציר x) באמצעות חישוב גיליון תוכנה, וליצור עיקול רגיל עם חמוציות או ערך R בריבוע.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
ניתוח של אתנול לחלץ s
	<ol>
<li>מזריקים µL 20 של תמציות אתנול המתקבל שלב 2.5 לתוך העמודה הפוכה-פאזי.</li>
		<li>הגדר את העמודה HPLC של 30 מעלות צלזיוס, קצב הזרימה כדי 1 mL/min.</li>
		<li>הגדר אורך הגל של הגלאי UV 280 ננומטר וזמן מקליט את 20 דקות.</li>
		<li>לנתח את הסטנדרטים לפחות 3 x.</li>
		<li>חשב את ריכוז propolin תמצית אתנול, באמצעות המשוואה עבור העקומה הסטנדרטי המתקבל שלב 3.1.7 המשתמשת האזור שיא עבור כל propolin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. הריכוז המעכב המינימלי וניתוח ריכוז אחרים מינימום
הערה: השיטה microdilution משמש כדי להעריך את היעילות אנטיבקטריאלי של אתנול, חילוץ propolins של פרופוליס ירוק מטייוואן.
<ol><li>
הכנת מבחן אורגניזמים
	<ol>
<li>להפשיר את זני חיידקים, Staphylococcus aureus ו- Escherichia coli, , תרבות אותם tryptic סויה מרק, מרק מזין, בהתאמה, ב 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות ביממה.</li>
		<li>המעבר של S. aureus באמצעות ציר סויה tryptic ו- e. coli באמצעות נזיד מזין עבור שני דורות, ואז לחשב את המושבה יוצרי יחידות על ידי ספירת מושבות בודדות על צלחת אגר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הכנה של אתנול תמציות עבור בדיקות אנטיבקטריאלי
	<ol>
<li>לרכז את תמציות אתנול המתקבל שלב 1.5 על ידי אידוי ואקום ב 40 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.</li>
		<li>לשקם את העניין יבש עם דימתיל סולפוקסיד (דימתיל סולפוקסיד) ולהתאים את הריכוז של התמצית כדי 12.8 מ"ג/מ"ל.</li>
		<li>לגרום לדילול טורי (ריכוזים: 5, 10, 20, 40, 80, 160, 320 ו µg 640/mL) של אתנול תמציות באמצעות המרק.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הריכוז המעכב המינימלי בדיקות
	<ol>
<li>להוסיף 10 µL של תמציות אתנול מדולל החל 0.156 וכלה µg 640.0/mL לתוך צלחת 96-ובכן.</li>
		<li>באמצעות ציר, לכוונן את עוצמת הקול כדי 100 µL, ולתחזק דימתיל סולפוקסיד 5% על כל דילולים.</li>
		<li>לחסן µL 100 התרבות חיידקי (1 x 106/mL) המשקולת 96-ובכן.</li>
		<li>תרבות inoculum המכילים ריכוזים שונים של אתנול תמציות ב 37 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות.</li>
		<li>לנתח את התפתחות חיידקים על פי צפיפות אופטית (microplate קורא) עכירות ושימוש ב- 590 nm לקביעת הריכוז המעכב המינימלי (MIC).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
ריכוז אחרים מינימום בדיקות
	<ol>
<li>לחסן µL 10 של תרבות נוזלי מכל קידוח של הבדיקה מיקרופון זה הציג אין צמיחה על גבי צלחת אגר.</li>
		<li>דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות ביממה.</li>
		<li>לקבוע את פעילות אחרים על-ידי זיהוי הריכוז הנמוך ביותר שגילה אין התפתחות חיידקים גלוי. ריכוז שלגמרי מבטלת צמיחת תאים נחשב ריכוז חיידקי מינימלי (MBC).</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Zabaiou, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+properties+of+propolis+extracts%3A+Something+new+from+an+ancient+product%5BTitle%5D)+AND+%22Chemistry+and+Physics+of+Lipids%22%5BJournal%5D)">Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product.</a> Chemistry and Physics of Lipids. 207 (Pt B), 214-222 (2017).</li>
<li>Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis%3A+Recent+advances+in+chemistry+and+plant+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Apidologie%22%5BJournal%5D)">Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin.</a> Apidologie. 31 (1), 3-15 (2000).</li>
<li>Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Botanical+origin+and+chemical+composition+of+Brazilian+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50 (9), 2502-2506 (2002).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytotoxic+prenylflavanones+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Natural+Products%22%5BJournal%5D)">Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis.</a> Journal of Natural Products. 66 (4), 503-506 (2003).</li>
<li>Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+radical+scavenging+activity%2C+cytotoxic+effects+and+apoptosis+induction+in+human+melanoma+cells+by+Taiwanese+propolis+from+different+sources%5BTitle%5D)+AND+%22Evidence-Based+Complementary+and+Alternative%22%5BJournal%5D)">Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 1 (2), 175-185 (2004).</li>
<li>Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+of+human+melanoma+cells+induced+by+the+novel+compounds+propolin+A+and+propolin+B+from+Taiwanese+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis.</a> Cancer Letters. 24 (1-2), 218-231 (2007).</li>
<li>Huang, W. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolin+G%2C+a+prenylflavanone%2C+isolated+from+Taiwanese+propolis%2C+induces+caspase-dependent+apoptosis+in+brain+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (18), 7366-7376 (2007).</li>
<li>Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+activity+of+propolins+from+Taiwanese+green+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (2), 761-768 (2018).</li>
<li>Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+antimicrobial+activity+of+European+propolis%5BTitle%5D)+AND+%22Zeitschrift+f%C3%BCr+Naturforschung%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis.</a> Zeitschrift für Naturforschung. 55 (1-2), 70-75 (2000).</li>
<li>Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+effect+on+Brazilian+propolis+antibacterial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity.</a> Journal of Ethnopharmacology. 73 (1-2), 243-249 (2000).</li>
<li>Chen, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Taiwanese+propolis+collected+from+different+locations+and+seasons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Science+of+Food+and+Agriculture%22%5BJournal%5D)">Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons.</a> Journal of the Science of Food and Agriculture. 88 (3), 412-419 (2008).</li>
<li>Grange, J. M., Davey, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+properties+of+propolis+%28bee+glue%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Royal+Society+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antibacterial properties of propolis (bee glue).</a> Journal of the Royal Society of Medicine. 83 (3), 159-160 (1990).</li>
<li>Kujumgiev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial%2C+antifungal+and+antiviral+activity+of+propolis+from+different+geographic+origins%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins.</a> Journal of Ethnopharmacology. 64 (3), 235-240 (1999).</li>
<li>Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+effect+of+ethanol+extract+of+propolis+and+antibiotics+in+the+growth+of+Staphylococcus+aureus%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Research%22%5BJournal%5D)">Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus.</a> Drug Research. 43 (5), 607-609 (1993).</li>
<li>Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+and+DPPH+free+radical-scavenging+activities+of+the+ethanol+extract+of+propolis+collected+in+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Food+and+Drug+Analysis%22%5BJournal%5D)">Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 11 (4), 277-282 (2003).</li>
<li>Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+activity+of+some+commercial+extracts+of+propolis+prepared+with+different+solvents%5BTitle%5D)+AND+%22Phytotherapy+Research%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents.</a> Phytotherapy Research. 10 (4), 335-336 (1996).</li>
<li>Cunha, I. B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+that+influence+the+yield+and+composition+of+Brazilian+propolis+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Brazilian+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts.</a> Journal of the Brazilian Chemical Society. 15 (6), 964-970 (2004).</li>
<li>Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraction+properties+of+propolis+with+ethanol+concentration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Apicultural+Research%22%5BJournal%5D)">Extraction properties of propolis with ethanol concentration.</a> Journal of Apicultural Research. 30 (3), 211-216 (2015).</li>
<li>Park, Y. K., Ikegaki, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+water+and+ethanolic+extracts+of+propolis+and+evaluation+of+the+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Bioscience%2C+Biotechnology%2C+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations.</a> Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62 (11), 2230-2232 (1998).</li>
<li>Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propolis+oil+extract%3A+quality+analysis+and+evaluation+of+its+antimicrobial+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Natural+Product+Research%22%5BJournal%5D)">Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity.</a> Natural Product Research. 25 (15), 1463-1468 (2011).</li>
<li>Machado, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+biological+activity+of+extracts+obtained+by+supercritical+extraction+and+ethanolic+extraction+of+brown%2C+green+and+red+propolis+derived+from+different+geographic+regions+in+brazil%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil.</a> PLoS One. 11 (1), e0145954(2016).</li>
<li>Monroy, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brazilian+green+propolis+extracts+obtained+by+conventional+processes+and+by+processes+at+high+pressure+with+supercritical+carbon+dioxide%2C+ethanol+and+water%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Supercritical+Fluids%22%5BJournal%5D)">Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water.</a> The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).</li>
<li>Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+validated+spectrophotometric+method+for+quantification+of+prenylated+flavanones+in+pacific+propolis+from+Taiwan%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemical+Analysis%22%5BJournal%5D)">A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan.</a> Phytochemical Analysis. 21 (2), 186-191 (2010).</li>
<li>Chen, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taiwanese+green+propolis+ethanol+extract+delays+the+progression+of+type+2+diabetes+mellitus+in+rats+treated+with+streptozotocin%2Fhigh-fat+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet.</a> Nutrients. 10 (4), e503(2018).</li>
</ol>

המחברים יש ריהצהל.

מחקר דיווחו כי השרייה, שאורכה, באמצעות ריכוזים שונים של אתנול, יכול לשמש עבור חילוץ פרופוליס ברזילאי17; עם זאת, התהליך היה זמן רב17. זה לקח לפחות 10 ימים כדי לחלץ את תרכובות ביו, כגון תוכן בעל תאים פנוליים, פרופוליס ברזילאי17. לחלופין, הפקת אתנול בשילוב עם חימום 37 ° C, 50 ° C או 70 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות הוצע לחילוץ פרופוליס ברזילאי19,21,22. נקבע כי תרכו...

פרופוליס הוא תערובת שרפי הטבעי המיוצר על ידי דבורה המין בומבוס. פרופוליס כבר בשימוש נרחב מאז ימי קדם בפולק תרופות. מחקר דיווח לאחרונה שכי הפרופוליס הינו מועיל למניעת זיהומים חיידקים, דלקת1. מחקרים רבים הראו כי תרכובות ביו הראשי של פרופוליס הם פלבנואידים, בעל תאים פנוליים אסטרים חומצה, prenylated p-חומצות coumaric ו- diterpenic חומצות2,3. עד כה, זוהו prenylated 10 flavanone נגזרות של פרופוליס ירוק מטייוואן באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים (HPLC)4,5,6,7. הנפוץ ביותר בקרב אלה הם propolins C, D, F ו- G5,7. השפעות ביולוגיות ניכר של פרופוליס ירוק מטייוואן נמצאים בקורלציה עם שלה תכולה גבוהה של propolins8.
הריכוזים של תרכובות ביו בפרופוליס משתנים במידה רבה בהתאם העונה והמיקום הגיאוגרפי שממנו מתקבל פרופוליס. פרופוליס האירופית מכיל בעיקר פלבנואיד אגליקון ו בעל תאים פנוליים חומצות9. תרכובות ביו העיקריים של פרופוליס מברזיל הם prenylated p-חומצות coumaric, כגון artepillin C10. מחקר הוכיח כי העונה הוא גורם קריטי בקביעת התכנים propolin הכולל פרופוליס ירוק מטייוואן11. התוכן propolin הטייוואנית פרופוליס ירוק הוא הגבוה ביותר בחודשי הקיץ (מאי - יולי), הנמוך ביותר חורף11. המאפיין אנטיבקטריאלי של פרופוליס נחשב באופן נרחב כדי להיות מחוון פעילות ביולוגית. בדרך כלל, הדגימות של פרופוליס שנאספו מאזורים שונים שכישוריי אנטיבקטריאלי נכס דומה; לדוגמה, זה בדרך כלל יעילה כנגד כמעט כל חיידקים גראם חיוביים ותערוכות השפעה אנטי-בקטריאלי מוגבלת נגד חיידקים גראם שליליים10,12,13. האינטראקציות סינרגטי בין פלבנואידים ב פרופוליס היו הפגינו יש השפעה אנטי-בקטריאלית של14. באופן דומה, פרופוליס ירוק מטייוואן דווח להשפיע מיקרוביאלית כנגד חיידקים גראם חיוביים15. יתר על כן, מחקר זיהה גם אפקט מיקרוביאלית של פעולת הגומלין בין propolins פרופוליס ירוק מטייוואן8.
האפיון של תרכובות ביו של פרופוליס קשה בגלל ההרכב הכימי שלה יכולה להשתנות, בהתאם למקורו של המקור. לכן, זה הכרחי ליצור שיטה אפשרית הדיר לקביעת איכות פרופוליס ירוק מטייוואן. עם זאת, אין נוהל הוקם עבור חילוץ פרופוליס ירוק מטייוואן, אנליזה פונקציונלית עוקבות. מספר שיטות החלות ממיסים אורגניים ואנאורגניים בדרכים שונות הוצעו פרופוליס החילוץ16,17,18,19,20. כי הפרופוליס הינו תערובת lipophilic, מחקרים הראו החילוץ אורגני עדיף אורגניים החילוץ8,18,19. ריכוז propolin הכולל פרופוליס ירוק מטייוואן, שלה תכונות אנטיבקטריאליות הם מחווני מפתח של האיכות של פרופוליס ירוק מטייוואן. לפיכך, מטרת מחקר זה היא להציג פרוטוקול להצפנה באמצעות אתנול כמו הממס כדי לחלץ לאפיין את תכונות אנטיבקטריאליות של פרופוליס ירוק מטייוואן.

<table><tbody><tr><td>אתנול</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>E7023</td><td></td></tr><tr><td>נייר סינון מס' 4</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>WHA1004125</td><td></td></tr><tr><td>מתנול</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>שלב הפוך RP-18 עמודה</td><td>פנומנקס, בע"מ.</td><td>00G-0234-E0</td><td></td></tr><tr><td>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10780</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli</td><td>ATCC</td><td>BCRC 10675</td><td></td></tr><tr><td>מרק סויה טריפטי</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22092</td><td></td></tr><tr><td>מרק תזונתי</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>70122</td><td></td></tr><tr><td>מטחנת</td><td></td><td></td> תבלינים דימתיל סולפוקסיד Sigma-Aldrich D2650 <td></td></tr><tr><td></td><td>Waring</td><td>WSG60K</td><td></td></tr><tr><td>קורא מיקרו-פלטות</td><td>מכשירים מולקולריים</td><td>EMAX PLUS</td><td></td></tr><tr><td>HPLC מערכת</td><td>אידוי</td> ואקום מסדרת <td></td>Agilent <td>1200</td></tr><tr><td></td><td>B&Uuml; CHI</td><td>Rotavapor R-215</td><td></td></tr></tbody></table>

חילוץ וניתוח של פרופוליס ירוק מטייוואן

Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis

פרופוליס ירוק מטייוואן עשיר prenylated פלבנואידים ותערוכות במגוון רחב של פעילויות ביולוגיות, כגון נוגדי חמצון, אנטי בקטריאלי, ואת אלה נגד סרטן. Bioactive תרכובות של פרופוליס ירוק מטייוואן הם propolins, כלומר C, D, F ו- G. הריכוז של propolins ב פרופוליס ירוק מטייוואן משתנה בהתאם העונה והמיקום הגיאוגרפי. לפיכך, חיוני להקים הליך סטנדרטי, הדיר לקביעת האיכות של פרופוליס ירוק מטייוואן. כאן, אנו מציגים פרוטוקול העושה האתנול מבוססי החילוץ, כרומטוגרפיה נוזלית ביצועים גבוהים, ניתוח פעילות נגד חיידקים לאפיון איכות פרופוליס ירוק מטייוואן. שיטה זו מציינת כי 95% ו- 99.5% אתנול עקירות להשיג את היבול המרבי חומר יבש של פרופוליס ירוק מטייוואן, ובכך מניב הריכוזים הגבוהים ביותר של propolins יש תכונות אנטיבקטריאליות. על פי ממצאים אלה, בפרוטוקול הנוכחי נחשבת הדיר לקביעת האיכות של פרופוליס ירוק מטייוואן ואמין.

נציג נתונים חיוביים להפקת אתנול מוצגים בטבלה1. התשואה חומר יבש של פרופוליס ירוק מטייוואן היה קשור באופן חיובי הריכוז של אתנול. תמציות אתנול 95% ו- 99.5% היה החומר היבש הגבוה ביותר תשואה של פרופוליס ירוק מטייוואן. התשואה חומר יבש הנמוכה מפרופוליס ירוק מטייוואן אירעה כאשר המים שימש הממס החילוץ. תוצאות אלו מצביעות על העובדה הממס האורגני, כגון אתנול, מבצעת הטוב לחילוץ פרופוליס ירוק מטייוואן. האות של תקן propolins C, D, F ו- G זוהה, לכמת באמצעות HPLC (איור...

אנו מציגים פרוטוקול להצפנה באמצעות אתנול כמו הממס כדי לחלץ לאפיין פרופוליס ירוק מטייוואן זה מוצגים אנטיבקטריאלי.

Taiwanese green propolis is rich in prenylated flavonoids and exhibits a broad range of biological activities, such as antioxidant, antibacterial, and ...

כאן, אנו מציגים את הפרוטוקול לשימוש באתנול כממס כדי לחלץ ולאפיין פרופוליס ירוק טייוואני המעכב פעילות אנטיבקטריאלית. פרוטוקול זה הוא שיטה אמינה וחוזרת על עצמה לקביעת האיכות של פרופוליס ירוק טייוואני. הליך ההדגמה יהיה צ'ונינג צ'ן ו Yi'Hsuan Chien, דוקטורנטים מהמעבדה שלי.כדי להתחיל, לשקול 100 גרם של פרופוליס ירוק טייוואני. בעזרת מטחנת תבלינים, טוחנים את הפרופוליס ומוודאים שהחתיכות טחונות לאבקה דקה ללא חלקיקים גדולים. מניחים חמישה בקבוקונים ומוסיפים 100 מיליליטר של ריכוזים שונים של אתנול במים לכל אחד מהם.מערבבים 10 גרם של פרופוליס הקרקע לתוך פתרון אתנול בכל בקבוק, ו דגירה ב 25 מעלות צלזיוס עם רועד ב 250 סל"ד במשך 48 שעות. לאחר מכן, השתמש בנייר סינון עם גודל נקבובית 25 מיקרומטר כדי לסנן את תמציות האתנול. באמצעות בקבוקון נפחי, מחדש את filtrates לנפח המקורי שלהם של 100 מיליליטר עם 95%אתנול.לאחסן את התמציות מחדש במינוס 20 מעלות צלזיוס עד מוכן לשימוש. כאשר מוכן להכין את התמציות עבור HPLC, להשתמש אידוי ואקום לרכז 10 מיליליטר של כל תמצית ב 40 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות. אופים את החומר היבש ב 45 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות.לאחר מכן, מחדש כל מדגם של חומר יבש עם 10 מיליליטר של 95% אתנול. באמצעות מסנן מזרק עם גודל נקבובית 0.22 מיקרומטר, לסנן מחדש כל תמצית ולאסוף את הסינון לניתוח ישיר עם HPLC. כדי להתחיל בהקמת עקומה סטנדרטית, הכינו ליטר אחד של מתנול השלב הנייד לפתרון מים ביחס של 88.8 עד 11.2.באמצעות פתרון הפאזה הנייד כממס, הכן דילול סדרתי של הריכוזים הסטנדרטיים של הפרופולין כמתואר בפרוטוקול הטקסט. הזרק 20 מיקרוליטרים של כל ריכוז סטנדרטי לעמודי הפאזה ההפוכים ברצף מהריכוז הנמוך ביותר לגבוה ביותר. לאחר מכן, הגדר את עמודת HPLC ל- 30 מעלות צלזיוס, הגדר את אורך ההיוותר של גלאי ה- UV ל- 280 ננומטר, ואת קצב הזרימה למיליליטר אחד לדקה, ואת זמן המקליט ל- 20 דקות.לנתח את הסטנדרטים לפחות שלוש פעמים. לאחר מכן, השתמש בתוכנת גליון חישוב כדי לחבר את תגובת המדידה כנגד הריכוז וכתוצאה מכך עקומה סטנדרטית עם משוואה נחושה וערך R בריבוע. כדי להתחיל לנתח את התמציות, להזריק 20 microliters של כל תמצית לתוך עמודת הפאזה ההפוכה.הגדר את עמודת HPLC לטמפרטורה של 30 מעלות צלזיוס וקצב זרימה של מיליליטר לדקה. הגדר את אורך ה-UV של גלאי ה-UV ל-280 ננומטר, ואת זמן המקליט ל-20 דקות. לנתח את התמציות לפחות שלוש פעמים.לאחר מכן, להשתמש בעקומה הסטנדרטית כדי לקבוע את הריכוז של פרופולין בכל תמצית אתנול. לאחר הכנת אורגניזמים הבדיקה ותמציות אתנול, להוסיף 10 microliters של תמצית אתנול מדולל, החל 0.156 כדי 640 מיקרוגרם למיליליטר לתוך הבאר של צלחת 96 גם. השתמש במרק כדי לכוונן את עוצמת הקול בכל באר ל-100 מיקרוליטרים כדי לשמור על 5%DMSO בכל הדילולים.לאחר מכן, לחסן 100 microliters של תרבות חיידקית לתוך כל באר של צלחת 96 היטב. תרבות ב 37 מעלות צלזיוס במשך 48 שעות. השתמש בקורא מיקרופלסטיק ב 590 ננומטר כדי לנתח את הצמיחה החיידקית על פי מערבולת ולקבוע את הריכוז המעכב המינימלי.לאחר מכן, לחסן 10 microliters של תרבות נוזלית מכל באר שהפגינו לצמיחה על צלחת אגר. דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות. זהה את הריכוז הנמוך ביותר שלא חשף צמיחה חיידקית נראית לעין כדי לקבוע את פעילות החיידקים.הריכוז שחיסל לחלוטין את צמיחת התאים נחשב לריכוז החיידקים המינימלי. במחקר זה, פרופוליס ירוק טייוואני מופק עם אתנול. תפוקת החומר היבש נראית הגבוהה ביותר כאשר נעשה שימוש בריכוז גבוה של אתנול, והנמוך ביותר כאשר נעשה שימוש במים.תוצאות אלה מצביעות על כך ממס אורגני מבצע בצורה הטובה ביותר במהלך מיצוי זה, כי התשואה קשורה באופן חיובי עם ריכוז אתנול. כמו כן, נראה כי ריכוז הפרופולנים קשור באופן חיובי לריכוז האתנול במהלך החילוץ, כאשר התשואה הגבוהה ביותר של פרופולנים מתקבלת בתמציות האתנול 95%ו-99.5%. ההשפעות האנטיבקטריאליות של תמציות האתנול נגד Aureus S ו- E coli נחקרים לאחר מכן.הריכוז המעכב המינימלי הממוצע עבור S aureus הוא נראה בין 10 ל 20 מיקרוגרם למיליליטר ואת הריכוז החיידקי הממוצע הוא נראה 20 מיקרוגרם למיליליטר. תמציות מים, עם זאת, לא היה כל השפעה אנטיבקטריאלית נגד S aureus. אין השפעה אנטיבקטריאלית נצפתה עבור E coli בעת שימוש או תמציות מים או אתנול.אחד ההליך הניסיוני העיקרי הוא היסחפות האחידות של פרופוליס ירוק טייוואני במהלך שחיקה.

extraction-and-analysis-of-taiwanese-green-propolis

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

ביומסה במפעל מציע משאב מתחדש למספר רב של מוצרים, כוללים דלק, מזון, מזון ומגוון רחב של חומרים. במאמר זה אנו לחקור את המאפיינים של עץ טבק (Nicotiana glauca) ומקורות מתאימים כמו צפצפה לצינור biorefinery.

תמליל והמטבוליט Profiling להערכת של טבק ועץ צפצפה כחומר גלם לתעשייה המבוססת על ביו

קונסורציומים חיידקים בתוך bumble דבורים כוורות להעשיר ולשמר אבקה של דבורה הזחלים. באמצעות רצף הדור הבא, יחד עם המעבדה, המבוסס על שדה ניסויים, כתב יד זה מתאר פרוטוקולים המשמשים כדי לבדוק את ההשערה כי שאריות פטריות לשנות את microbiome אבקה, ודמוגרפיה המושבה, המוביל בסופו של דבר אל המושבה הפסד.

אמפירית, Metagenomic, שיטות חישוביות להאיר את מנגנוני הבריאות דבורה איזה פשרה קוטלי פטריות

הביטוי heterologous ארעי של אנזימים biosynthetic הוחלף נגזר benthamiana טבק העלים להסיט אספקה אנדוגני של 2, 3-oxidosqualene לעבר הייצור של מוצרים בעלי ערך גבוה טריטרפן חדשים. בזאת הוא תיאר נוהל מפורט לייצור מיכשור וציוד בקנה מידה מהירה (5 ימים) של triterpenes, תחליפי ניצול פלטפורמה חזקה זו מבוססת על צמחים.

ארעי ביטוי טבק Benthamiana משאיר לייצור טריטרפן בקנה מידה מפוח

כאן, אנו מעסיקים שיטת החילוץ (PHWE) בלחץ מים חמים, אשר מנצל מכונת אספרסו ביתית שלא שונתה להכיר סטודנטים מוצרים טבעיים כימיה במעבדה. מוצגים שני ניסויים: PHWE של eugenol, acetyleugenol בין שיני PHWE של seselin, (+)-epoxysuberosin מצמח האוסטרלי reflexa קוראה.

העסקת החילוץ בלחץ מים חמים (PHWE) לחקור מוצרים טבעיים כימיה במעבדה לתואר ראשון

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את הזיהום של אלקלואידים פירוליזידין (PAs) בדגימות תה מעשבים המייצרים עשבים בשטחי הרשות הפלסטינית בגינות תה.

מקור ומסלול של זיהום אלקלואיד Pyrrolizidine בדגימות תה

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את השימוש בטכנולוגיית ברקוד DNA לאימות חומרים רפואיים מבוססי צמחים, ואת צמח המרפא Angelica sinensis (אוליב). דילס זוהה כדוגמה.

יישום ברקוד DNA לזיהוי צמחי מרפא

מחקר זה השווה את תכולת הפוליסכרידים של Hippophae rhamnoides subsp. sinensis Rousi ו-Hippophae gyantsensis (Rousi) Y. S. Lian שהושג באמצעות מיצוי מים חמים וכימת באמצעות קולורימטריה של פנול-חומצה גופרתית. חקרנו גם פעילויות נוגדות חמצון במבחנה של פוליסכרידים משני מיני היפופיאה אלה באמצעות ניסויי ניקוי רדיקלים חופשיים 2,2-דיפניל-1-picrylhydrazyl.

מחקר השוואתי על תכולת הפוליסכרידים ופעילויות נוגדות החמצון של Hippophae rhamnoides subsp. sinensis ו-Hippophae gyantsensis

כתב יד זה מתאר כיצד למסך מוטציות thermostabilizing, לטהר את טרנספורטר הסרוטונין האדם, ליצור נוגדנים זיקה גבוהה, ולגבש במתחם טרנספורטר-נוגדן סרוטונין מאוגד -citalopram S תרופה נגד דיכאון. פרוטוקול זה יכול להיות מותאם המחקר של מובילי קרום מאתגר אחרים, קולטנים, ותעלות.

Thermostabilization, ביטוי, טיהור, התגבשות של Transporter סרוטונין האדם Bound כדי<em&gt; S</em&gt; -citalopram

פרוטוקול מיצוי מקיף של שומנים, מטבוליטים חלבונים מ רקמות ביולוגיות באמצעות מדגם אחד מוצג.

שיטה פשוטה הפיצול מופץ לניתוח מקיף של מטבוליטים, שומנים וחלבונים מדגם יחיד

פרוטוקול זה מתאר מתודולוגיה יעיל עבור חילוץ ו כימות של קפאין ב השעיות תא של ערביקה ג ל' ואת תהליך ניסיוני להערכת הפעילות האנזימטית מתרחשת של קפאין סינתאז עם רמת ביטוי הגן המקודד אנזים זה.

מיצוי קפאין, פעילות אנזימטיות, ביטוי גנים של קפאין סינתאז מ המתלים תא צמח

למדו פרוטוקול לחילוץ פרופוליס ירוק מטייוואן באמצעות אתנול כממס. השיטה מאפשרת אפיון פעילות אנטיבקטריאלית והערכת איכות אמינה וניתנת לשחזור של תרכובות טבעיים בביוכימיה.

חילוץ וניתוח של פרופוליס ירוק מטייוואן

גלה סרטונים נוספים