Name: השראת והערכה של מודל מאתר של קוצר ראייה ניסיוני (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-22T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 20 s
Description: למדו שיטה סטנדרטית להשראת קוצר ראייה ניסיוני בעכברים באמצעות משקפיים מותאמים. הפרוטוקול מאפשר מדידות מדויקות של שבירה ואורך ציר העין לחקר מנגנוני המחלה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים מ. ת Pardue על ייעוץ SDOCT, פ Schaeffel לקבלת ייעוץ על המידות של שבירה, עקמומיות הקרנית, מר Sanshouo יצירה מחדש את נתוני מסגרת תלת מימדי, Miyauchi מ; ק' Tsubota; י' טאנאקה; ס קונדו; ג נאיה; מ יבאקי; י' Miwa; י' Hagiwara; א אישידה; י' טומיטה; י' Katada; אי Yotsukura; ק' טקהאשי; י' וואנג דיונים קריטיים. עבודה זו נתמך על ידי מענקים inAid למחקר מדעי (KAKENHI, מספר 15K 10881) משרד החינוך, תרבות, ספורט, מדע, טכנולוגיה (MEXT) כדי TK. עבודה זו נתמכת גם המענק לחקר קוצר ראייה מן המעבדה Tsubota, inc. (טוקיו יפן).

כל ההליכים אושרו על ידי ועדת האתיקה על החיה מחקר של בית הספר לרפואה של אוניברסיטת קאיו דבקה המשפט ארוו שימוש בבעלי חיים של לרפואת עיניים ומחקר החזון, המוסדיים הנחיות על ניסויים בבעלי חיים-קאיו ואוניברסיטת המחקר בעל חיים: דיווח ב- Vivo ניסויים (יגיעו) הנחיות השימוש בבעלי חיים במחקר.
1. הרכבת את המשקפיים עבור עכברים
<ol><li>הכנת החלקים הדרושים להרכבת של המשקפיים (איור 1 א'). עבור כל עכבר, להכין כל שמקיפים: מקל אחד ניילון נישאת על הראש, אחד גבוה יותר, טיטניום נמוך אחד מסגרת, שתי עדשות עם כוחות תקין על פי מטרת הניסוי, אחד בורג בגודל M1.4 עם אורך 10 מ מ, ביצה אחת לזיון גודל M1.4, ואחד רגיל מכונת כביסה לזיון בגודל M1.4 עם העובי של 0.3 מ מ, ציפורן מלאכותית שתי עצות (טבלה של חומרים). הערה: קיימים שני סוגי מסגרות בגבהים שונים. עבור עכבר אחד, אחד גבוה יותר מסגרת ומסגרת נמוך אחד משמשים כערכה. צריך לשים מסגרות גבוה מעל התחתונות כדי להפוך את שדות ראייה סימטרית. מסגרות ועדשות במיוחד מתוכננים ומיוצרים על ידי קבוצת מחקר של המחברים. אלה זמינים על-ידי פנייה המחברים המתאימים של מאמר זה. חלקים אחרים ניתן למצוא בחנויות כלי הקמעונאי.</li>
	<li>להרכיב מסגרת העין ימינה ושמאלה בנפרד.<ol>
<li>לארגן את קצה הציפורן להתמודד עם הכיוון מחוץ להשגת האפקט המגן הטוב ביותר. להתאים את הזווית בין קצה הציפורן למסגרת להיות בערך 130° כדי להימנע מטשטשים את שדה הראייה העכבר (איור 1b). דבקים העצות ציפורן מלאכותית על המסגרת באמצעות דבק דבק מגע. הערה: ציפורן עצות שיסייעו לך להגן על העדשה שמשטח על ידי העכבר. הכיוון של העצות הציפורן חייב להיות הפוך כי המסגרת גבוהה יותר לבין המסגרת התחתונה משמשים עבור עין ימין ועין שמאל, בהתאמה.</li>
		<li>מחכים לפחות 12 שעות לאפשר את דבק יבש לחלוטין, מכן השתמשו מקוצץ ציפורניים כדי להתאים את צורת הציפורן טיפים להיות על 1 ס"מ × 1 ס"מ על ידי חיתוך, קיצוץ.</li>
		<li>דבקים העדשה על המסגרת באמצעות דבק דבק מגע. לשים את העדשה אל המסגרת בעבודת יד והחזק את המסגרת אופקית. להזריק את דבק cyanoacrylate מהקצה של העדשה ותנו התפשטות דבק על ידי מתח. הערה: החומר לשחוק את העדשה להשפיע על השקיפות שלה, כדי לוודא שהדבק רק נוגע החלק ההיקפי של העדשה. להשתמש עדשה פלאנו כוחן 0 (D) כפקד ומינוס העדשה כדי לגרום קוצר ראייה. ההשפעה של כוחות שונים של מינוס עדשות (–10 D כדי –50 D) כבר תיאר במקום אחר4. כדי להגדיל את התמריץ קוצר ראייה, עדשות –30 D מומלצת גרימת קוצר ראייה. FDM יכולה גם להיגרם עם מכשיר זהה פשוט על ידי שינוי העדשה לתוך הכיפה של 1.5 mL microtube כמו מפזר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להדק את הבורג לתוך המקל ניילון עם למכונת הכביסה מן הצד השטוח של המקל. להכין את עין משקפיים ומקלות לפני הניסוי בהתאמה, במניה להמשך השימוש (איור 1 c). הערה: הפרוטוקול אפשר לעצור כאן.</li>
</ol>2. מדידות של שבירה, AL בסיסית.
<ol><li>החל טיפה אחת של הסוכן mydriatic המכילה 5 מ"ג/מ"ל tropicamide ו 5 מ"ג/מ"ל הידרוכלוריד phenylephrine בכל צד של העין להתרחב התלמיד. המתן לפחות 5 דקות לפני הרדמה כללית. הערה: להתרחב התלמיד תחת כללי הרדמה יגרום קטרקט הפיך אשר משפיע על המדד לאחר מכן. תמיד מתרחבים התלמיד לפני הרדמה כללית והמתן לפחות 5 דקות. טיפה אחת (כ- 0.05 מ"ל) של סוכן mydriatic מספיקה להרחבת האישון של העין העכבר, בעוד הסוכן עוד יעשה שום נזק אל השלבים הבאים.</li>
	<li>לשים את העכבר בהרדמה כללית. לאחוז העור האחורי של העכבר בעדינות כדי למנוע את העכבר הקפצת את העין עד אותו לגמרי מרדימים. לשפוט את העומק של הרדמה כללית יספיק אם העכבר לא זז כאשר זה שם על השולחן באופן חופשי. הערה: שילוב של midazolam (40 μg/100 μL), medetomidine (7.5 μg/100 μL) ו- butorphanol tartrate (μL μg/100 50) משמש כאן בשביל הרדמה כללית עבור עכברים עם נפח של הזרקת בקרום הבטן 0.01 מ ל/g. באופן כללי, פחות מ 5 דקות יש צורך עכברים להירדם. זמן רב של הרדמה כללית גורמת נמוכה טמפרטורת הגוף, קצב לב איטי. כדי למנוע את השפעת הרדמה כללית למדידה, גימור כל המדידות בתוך 10 דקות לאחר ההזרקה של הרדמה פוטנציאליים מומלץ. Butorphanol הניתנים קוקטייל הרדמה לספק כ- 4 שעות של שיכוך כאבים. המתכון הנכון הרדמה כללית מאי שונים על ידי מוסדות.</li>
	<li>למדוד את השבירה של העין העכבר באמצעות9,4,photorefractor אינפרא-אדום14. התאם את הכיוון של אחת העיניים העכבר כדי לשמור את התמונה Purkinje הראשונה במרכז האישון ולמדוד את השבירה לאורך הציר האופטי. לאחר המדידה, למדוד את העין הנגדית עם אותם הליכים (איור 2 א). הערה: הערך שנמדד עבור השבירה מושפעת מאד המיקום של העין העכבר לאורך הציר האופטי. ודא שהתמונה הראשונה Purkinje מיושר בתוך ±3 מעלות מהמרכז של התלמיד. עבודה, שעליו מונחים בתחום ספקטרלי אופטית קוהרנטית טומוגרפיה (SD-אוקטובר) המערכת עשוי לשמש עבור כוונון עדין של הכיוון של התלמיד שבירה מדידות4.</li>
	<li>למדוד מלאכותית של העין העכבר באמצעות15,164,מערכת SD-אוקטובר. להגדיר מלאכותית כמו המרחק בין הקודקוד הקרנית לגבול המבריקים ליד העצב (איור 2b). הערה: דומה עם המדידה של השבירה, מלאכותית מושפעת מאד הכיוון של העין העכבר. ניתן לאשר הקודקוד הקרנית, כמו נקודת השתקפות על פני הקרנית. הגבול של הצד הרשתית יהיה מאוד מעורפל בנקודת עצב אופטי. להתאים הכיוון קצת לתת את הגבול יהיה מספיק ברור למדידת אבל לא רחוק מדי מן העצב האופטי.</li>
</ol>3. קיבוע של המסגרת על גבי הגולגולת העכבר.
<ol><li>החל טיפה אחת של 0.1% נתרן מטוהרים היאלורונית העין טיפה כדי למנוע יובש על כל עין. הערה: העין טיפה על פני עין ישפיע הדבר על הערכים של שבירה ומדידות אורך צירית. אל תשתמש הטיפה בעין לאחר ההרדמה עד כל המדידות נעשות.</li>
	<li>לשים את הסנטר של העכבר anesthetized על גבי מדרון מחימר או כל דבר יכול לשמש כרית כדי להפוך את המטוס ישיר הגולגולת להיות אופקית.</li>
	<li>לחטא את השיער, הקרקפת בין האוזניים והעיניים באמצעות מטלית כותנה עם 70% אתנול.</li>
	<li>לחתוך את העור בין האוזניים והעיניים לחשוף את הגולגולת עבור 0.8 ס מ2 באמצעות מספריים כירורגיים פינצטה. השתמש ספוגית כותנה של נוזלים איכול שיניים להסרת קרום העצם. לחטא מספריים כירורגיים של פינצטה עם 70% אתנול לפני הניתוח של כל עכבר. הערה: מסיכה לשיער, לובש כפפות סטריליות עשוי להידרש.  בדוק להוראות הוועדה הרלוונטית טיפול בבעלי חיים לפני הליך זה. ברוב המקרים, ניתן למצוא את הנוזל איכול שיניים כאחת הקבצים המצורפים במערכת עצמית לרפא שיניים דבק. אם הנוזל איכול שיניים אינה זמינה, השתמש 70% אתנול.</li>
	<li>להרכיב קבוצת מסגרות ללא עדשה כדי לסייע לתקן את המקל על המיקום הנכון. לשים את המסגרות על הראש העכבר. בזהירות להתאים את המיקום של המסגרות כדי לוודא שבשתי העיניים הן באמצע המסגרת הריקה.</li>
	<li>השתמש עצמית לרפא שיניים דבק מערכת כדי לחבר את המקל על הראש העכבר. להיזהר לא לתת את הנוזל של הזרם מערכת adhere לתוך העין העכבר. הערה: השיטה לשימוש עצמי לרפא שיניים דבק המערכת היא שונה בין מוצרים. להפנות ההוראות בקפידה. התראה: חלק ריאגנטים במערכת דבק שיניים עלול להיות רעיל.</li>
	<li>לחכות בערך 5 דקות, להוריד את המסגרת ואת האגוז בזהירות מבלי לשנות את המיקום של הסטיק (איור 3 א).</li>
	<li>להזריק 0.75 mg/kg הידרוכלוריד atipamezole intraperitoneally כדי לסייע העכבר ההתאוששות מן ההרדמה במהירות רבה יותר. לשים את העכבר לכלוב בודדים עד החלים לחלוטין. אין להשאיר את העכבר ללא השגחה עד זה שהכרתו מספיק כדי לשמור על recumbency בחזה ובצלעות. ניתן להשהות את הפרוטוקול פה.</li>
</ol>4. ייזום של אינדוקציה של קוצר ראייה ותחזוקה אחר כך
<ol><li>המתן לפחות 24 שעות לאחר הניתוח לשחרר את העכבר להתאושש לחלוטין מן ההרדמה. לאחוז את המקל והניח על המסגרות עם עדשות. לנוכח התמריץ מתחיל בנקודת זמן זו (איור 3b). הערה: כדי למזער את אי הנוחות במהלך ההתאוששות מן ההרדמה ולתת מספיק זמן עבור מערכת דבק שיניים והקרשה, מומלץ לשים על המסגרת לאחר העכברים החלים לחלוטין מן ההרדמה. הבטון שרף של מערכת דבק יכסה במלואם את החתך של הקרקפת. לכן, אין טיפול לאחר ניתוח מיוחד דרוש למניעת זיהום, כאב לאחר ניתוח ameliorating. מיד אחרי הפעם הראשונה לשים על המסגרת, עכברים נגמר מודעת לקיומו של העדשה, לשרוט את זה הרבה. התנהגות דוחה יחזור לשגרה אחרי כמה שעות. ניתן לשמור העכברים עם עדשות עם צפיפות אותו לעכברים נורמלים.</li>
	<li>להסיר את המסגרת ולנקות עדשות, עצות הציפורן עם ספוגיות כותנה לפחות פעמיים בשבוע כדי לשמור על השקיפות של העדשה. הערה: אין צורך לשים את העכבר בהרדמה עבור הסרת לשים על המסגרת. מספקים תמיכה עבור העכברים לשבת על, במקום אותם כאן בזמן עבודה עם אותם להפחית מצוקה.<ol>
<li>אם המדידה ביניים הכרחי, לשים את העכבר תחת הרדמה, למדוד את העכבר כאמור תיאר. לנוכח התמריץ ניתן המשיך אחרי העכבר מתאושש מההרדמה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לנקות את הכלוב לפחות פעמיים בשבוע. הערה: זה יעזור לשמור על עדשות בהירות. לשים רשת בין העכבר בתחתית הכלוב כדי filtrate את שאריות האוכל שלהם עשוי גם להיות שימושי.</li>
	<li>נטר את משקל הגוף וההתנהגות ברוטו. להשוות אותם עם אותו גיל עכברים שלא נגעו במהלך התהליך הניסויי לגמרי. הערה: מלבד כמה התנהגויות של גירוד, ללא שינוי משמעותי כולל את משקל הגוף נמצא בין עכברים בניסוי עם עכברים שלא טופלו.</li>
</ol>

<ol><li>Dolgin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+myopia+boom%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">The myopia boom.</a> Nature. 519 (7543), 276-278 (2015).</li>
<li>Ohno-Matsui, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathologic+Myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Asia-Pacific+Journal+of+Ophthalmology+%28Philadelphia%2C+Pa%29%22%5BJournal%5D)">Pathologic Myopia.</a> Asia-Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia, Pa). 5 (6), 415-423 (2016).</li>
<li>Morgan, I. G., Ashby, R. S., Nickla, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Form+deprivation+and+lens-induced+myopia%3A+are+they+different%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+%26+Physiological+Optics%22%5BJournal%5D)">Form deprivation and lens-induced myopia: are they different.</a> Ophthalmic & Physiological Optics. 33 (3), 355-361 (2013).</li>
<li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+murine+model+of+experimental+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">A highly efficient murine model of experimental myopia.</a> Scientific Reports. 8 (1), 2026(2018).</li>
<li>Torii, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Violet+Light+Exposure+Can+Be+a+Preventive+Strategy+Against+Myopia+Progression%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">Violet Light Exposure Can Be a Preventive Strategy Against Myopia Progression.</a> EBioMedicine. 15, 210-219 (2017).</li>
<li>Smith, E. L. 3rd, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Long-Wavelength+Lighting+on+Refractive+Development+in+Infant+Rhesus+Monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Effects of Long-Wavelength Lighting on Refractive Development in Infant Rhesus Monkeys.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 56 (11), 6490-6500 (2015).</li>
<li>Gawne, T. J., Siegwart, J. T., Ward, A. H., Norton, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+wavelength+composition+and+temporal+modulation+of+ambient+lighting+strongly+affect+refractive+development+in+young+tree+shrews%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">The wavelength composition and temporal modulation of ambient lighting strongly affect refractive development in young tree shrews.</a> Experimental Eye Research. 155, 75-84 (2017).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+quantitative+profiling+of+differential+retinal+protein+expression+in+lens-induced+myopia+in+guinea+pig+using+fluorescence+difference+two-dimensional+gel+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+Reports%22%5BJournal%5D)">Early quantitative profiling of differential retinal protein expression in lens-induced myopia in guinea pig using fluorescence difference two-dimensional gel electrophoresis.</a> Molecular Medicine Reports. , (2018).</li>
<li>Schaeffel, F., Burkhardt, E., Howland, H. C., Williams, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+refractive+state+and+deprivation+myopia+in+two+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Optometry+and+Vision+Science%22%5BJournal%5D)">Measurement of refractive state and deprivation myopia in two strains of mice.</a> Optometry and Vision Science. 81 (2), 99-110 (2004).</li>
<li>Tkatchenko, T. V., Shen, Y., Tkatchenko, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+experimental+myopia+has+features+of+primate+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Mouse experimental myopia has features of primate myopia.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 51 (3), 1297-1303 (2010).</li>
<li>Faulkner, A. E., Kim, M. K., Iuvone, P. M., Pardue, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Head-mounted+goggles+for+murine+form+deprivation+myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Head-mounted goggles for murine form deprivation myopia.</a> Journal of Neuroscience Methods. 161 (1), 96-100 (2007).</li>
<li>Gu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Head-Mounted+Spectacle+Frame+for+the+Study+of+Mouse+Lens-Induced+Myopia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">A Head-Mounted Spectacle Frame for the Study of Mouse Lens-Induced Myopia.</a> Journal of Ophthalmology. 2016, 8497278(2016).</li>
<li>Siegwart, J. T. Jr, Norton, T. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Goggles+for+controlling+the+visual+environment+of+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Goggles for controlling the visual environment of small animals.</a> Laboratory Animal Science. 44 (3), 292-294 (1994).</li>
<li>Tkatchenko, T. V., Tkatchenko, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ketamine-xylazine+anesthesia+causes+hyperopic+refractive+shift+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Ketamine-xylazine anesthesia causes hyperopic refractive shift in mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 193 (1), 67-71 (2010).</li>
<li>Chou, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+elongation+of+eye+size+in+DBA%2F2J+mice+compared+with+C57BL%2F6J+mice%3A+in+vivo+analysis+with+whole-eye+OCT%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Postnatal elongation of eye size in DBA/2J mice compared with C57BL/6J mice: in vivo analysis with whole-eye OCT.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 52 (6), 3604-3612 (2011).</li>
<li>Park, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+axial+length+measurements+in+mouse+eyes%5BTitle%5D)+AND+%22Optometry+and+Vision+Science%22%5BJournal%5D)">Assessment of axial length measurements in mouse eyes.</a> Optometry and Vision Science. 89 (3), 296-303 (2012).</li>
</ol>

העיצוב של מוכספת העכבר הוחל לקבלת פטנט (יישום מס 201741349).

כדי לוודא את המשקפיים כדי לתקן stably על הראש העכבר, מספר פעולות של פרוטוקול זה צריך לשלם תשומת לב רבה. קרום העצם להסירו לחלוטין לפני באמצעות מערכת דבק דנטלי. הדם על הגולגולת גם צריך לנקות בזהירות. בעת כוונון עדין קצת קבילה מייד לאחר היישום של הדבק, אל תזיז את המקל לעתים קרובות לפני שהמערכת דבק מתייבש. מלא את ההוראות של מערכת דבק בזהירות, במיוחד את היחס של כל רכיב של התערובת הסופית. מתי לתפוס את העכבר במהלך קיום של המשקפיים או את המידות להמשך טיפול לאחר הניתוח, לא תופסים את המקל עם הגופה של העכבר יחד. התנועה היחסית בין ה...

השכיחות של קוצר ראייה גדל באופן דרמטי לאחרונה, ואילו המנגנון של התפתחות והתקדמות שלה עדיין במידה רבה unknow1. פנוטיפ האופיינית ביותר של קוצר ראייה הוא התארכות של אורך צירית (אי אל), אשר מגביר את הסיכון לסיבוכים ברשתית או אפילו עיוורון2. כדאי להבין בפתוגנזה של קוצר ראייה ולפתח טיפולים יעילים, חזקים מודלים בעלי חיים קצר והערכה פנוטיפ יציב יש צורך.
בקצרה, שתי שיטות קיימות עבור גרימת קצר הברית בבעלי חיים: טופס-מניעת קוצר ראייה (FDM), קוצר ראייה עדשות-induced (LIM)3. לשעבר מקומות רשתות ומפזרים מול העין או sutures העפעף כדי לטשטש את התמונה, מה שמשפיע על התפתחות תקינה של גלגל העין, וכתוצאה מכך הפנוטיפ קוצר ראייה. המקומות האחרונים מינוס עדשות מול העין כדי להעביר את נקודת המוקד מאחורי הרשתית. הרשתית מזהה את המשמרת של המוקד, מאריך את גלגל העין כדי ליישר מחדש את הרשתית ואת מוקד. עבור FDM, לאחר העפעף סגור או מפזר תוקנה מול העין, אין כמעט תחזוקה נוספת נדרשת. עבור לים, העדשה צריך להיות המריא לניקוי כדי לשמור אותו לשקוף. לפיכך, FDM קל יחסית לבצע להיגרם טכנית. עם זאת, מנגנוני FDM ו- LIM שונים, באיזו שיטת מחקה את קוצר ראייה-אנוש כדאי עדיין תחת הדיון3. אחד היתרונות של LIM הוא פנוטיפ חזק יותר בהשוואה FDM, לפחות במקרה של עכברים4.
חיות שנוצלו להשראת קוצר ראייה כוללים בנות5, קופים6, חדפי־עצים7, שרקנים8ועכברים4. בהתחשב האפשרות של מניפולציה גנטית, שופע נוגדנים זמינות ועלות נמוכה לגידול, עכברים יכול להיות הבחירה הראשונה כמודל בעלי חיים של קוצר ראייה. לעומת אחרים חיות גדולות, תיקון עדשות או רשתות ומפזרים מול העין העכבר זאת, יחסית קשה במיוחד עבור עכברים צעירים כגון זכות לאחר הגמילה. על הניסויים צריכים אקטואלי והתרופות האמריקני או מדידות העין ביניים מרובות, זה גם הכרחי עבור מסגרת להיות נשלף. אתגר נוסף הוא שינוי מורפולוגי קטן של עכבר גלגל העין, אשר צריך טכניקה מתוחכמת והתקנים להעריך. עד כה, שייצור שונות ומדידת פרוטוקולים המשמשים בקבוצות מחקר שונים מקשה להשוות באופן חוזר את התוצאות מעבר מעבדות. פרוטוקול סטנדרטי עם פרטי נדרש.
עבודות קודמות תיאר בשיטות מרובות כדי לתקן עדשות או רשתות ומפזרים מול העין העכבר, כגון הדבקה9, תפרים10 ו-11,מסגרת goggle נישאת על הראש12. אנחנו בשילוב קיימים goggle נישאת על הראש טכניקה11,12,13 מסגרת שעוצבו לאחרונה שלנו לפתח פרוטוקול ameliorated להשראת עמיד ויעיל ניסיוני. קוצר ראייה בעכברים. הפרוטוקול ניתן ליישם עכברים צעירים מיד לאחר הגמילה ביום כמחנכת 21 (p21). אנחנו גם אופטימיזציה התהליכים להערכת יציב ומדויק של פנוטיפים כולל שבירה, AL. אנו מקווים פרוטוקול מתוקננת זה יכול לעזור ליצור עכברים קצר מודל נגיש בקלות רבה יותר למחקר קוצר ראייה.

<table><tbody><tr><td>בורג</td><td>NBK</td><td>SNZS-M1.4-10</td><td></td></tr><tr><td>מכונת כביסה</td><td>MonotaRO</td><td>42166397</td><td></td></tr><tr><td>אגוז</td><td>MonotaRO</td><td>42214243</td><td></td></tr><tr><td>מקל</td><td>DMM הפוך</td><td>אף אחד לא</td><td>תוכנן על ידי יצרנים ופלט על ידי מדפסת התלת מימד שנשכרה מ-DMM Make.</td></tr><tr><td>מסגרת</td><td>DMM Make</td><td>אף אחד לא</td><td>תוכנן על ידי יוצרים ופלט על ידי מדפסת התלת מימד שנשכרה מ- DMM Make.</td></tr><tr><td>עדשות</td><td>עדשות מגע קשת בענן</td><td>ללא</td><td>התאמה אישית לשימוש עכברים על ידי החברה</td></tr><tr><td>דבק ציאנואקרילט</td><td>בסדר דגם</td><td>MP 20 גרם</td><td></td></tr><tr><td>דבק שיניים שרף צמנט</td><td>SUN MEDICAL</td><td>סופר בונד</td><td>מכיל את נוזל התחריט המשמש להסרת הפריאוסטאום של גולגולת העכבר</td></tr><tr><td>פוטורפרקטור אינפרא אדום</td><td>מרכז העברת סטיינבייס</td><td>ללא</td><td>עוצב והוצע על ידי ד"ר פרנק שפל מאוניברסיטת T&uuml; bingen</td></tr><tr><td>תחום ספקטרלי OCT</td><td>Leica</td><td>R4310</td><td></td></tr><tr><td>Tropicamide, תמיסת פנילפרין הידרוכלוריד</td><td>Santen</td><td>Mydrin-P</td><td></td></tr><tr><td>midazolam</td><td>Sandoz K.K.</td>רכיבי <td>SANDOZ</td><td>לחומר ההרדמה</td></tr><tr><td>מדיטומידין&nbsp;</td><td>רכיבי Orion Corporation</td><td>Domitor</td><td>לחומר ההרדמה</td></tr><tr><td>butorphanol tartrate&nbsp;</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>Vetorphale</td><td>רכיבים להרדמה</td></tr><tr><td>0.1% נתרן היאלורונאט מטוהר</td><td>Santen</td><td>Hyalein</td><td></td></tr><tr><td>atipamezole hydrochloride</td><td>Zenoaq</td><td>antisedan</td><td></td></tr></tbody></table>

השראת והערכה של מודל מאתר של קוצר ראייה ניסיוני

Inducement and Evaluation of a Murine Model of Experimental Myopia

דגם מאתר של קוצר ראיה יכול להיות כלי רב עוצמה עבור מחקר קוצר ראייה בגלל מניפולציה גנטית יחסית קל. דרך אחת כדי לגרום קוצר ראיה אצל בעלי חיים היא לשים ברור מינוס עדשות מול העיניים במשך שבועות (עדשה-induced קוצר ראייה, LIM). עם זאת, הפרוטוקולים הקיימים השראת ולהערכה משתנים מעבדה מעבדה. כאן, אנחנו תיאר שיטה מעשית מאוד לשחזור לזירוז LIM בעכברים באמצעות החדש תוכנן משקפיים. התיקונים שיטה העדשה stably מול העין העכבר בעת מאפשרת העדשה שיוציאו אותך לניקוי או אקטואלי סמים המינהל. גן # מושגים בסיסיים חזקים ויעילים, הסטיה היא קטנה. השיטה המתוארת כאן ניתן ליישם עכברים מיד לאחר הגמילה אשר מרחיב את המשך אפשרי לניסויים. אנחנו גם נתנו טכני מייעץ להשגת תוצאות לשחזור שבירה ומדידות אורך צירית. אנו מקווים פרוטוקול צעד אחר צעד המתוארים כאן, במאמר מפורט יכול לעזור החוקרים לבצע ניסויים קוצר ראייה עם קוצר ראייה בצורה חלקה יותר ולהפוך את הנתונים דומים ברחבי מעבדות.

At, בדוק תחילה אם כל החלקים הדרושים מוכנים (איור 1 א'). דוגמה של פיסת משקפיים שהורכב מוצג איור 1b. מלבד הגוף העיקרי של המסגרות, האגוז, כל החלקים האחרים הם חד פעמיים על העכבר כל ערכה של משקפיים שהושלם מוצג באיור 1 c. לשנות את הזווית בין שתי המסגרות כדי להתאים את העכבר עם גילאים שונים.
דוגמה של המדידה שבירה מוצג באיור 2a<...

ב פרוטוקול זה, אנו מתארים את תהליך מלא של משקפיים השראת בעכברים באמצעות החדש תוכנן ניסיוני. קוצר ראייה, הטכניקה הדרושה להשגת תוצאות לשחזור ויציבה במדידות פרמטרים עינית.

Murine model of myopia can be a powerful tool for myopia research because of the comparatively easy genetic manipulation. One way to induce myopia in ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח על גרימת והערכה של קוצר ראייה הנגרמת על ידי עדשה בעכברים. כגון כיצד לייצב עדשות. השלב מספר אחת העיקרי של טכניקה זו הוא כי כל השלבים כבר אופטימיזציה סטנדרטית המאפשרת רכישה של תוצאות מדויקות, לשחזור דומה על פני מעבדות.בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו הוא מאבק שכן קשה מאוד להדביק את המשקפיים על ראשי העכבר באופן הדוק ללא כל תרגול. עבור כל עכבר, הכן את הפעולות הבאות. מקל ניילון אחד רכוב על הראש.מסגרת טיטניום אחת גבוהה יותר ותחתון אחד. שתי עדשות עם הכוחות המתאימים בהתאם למטרת הניסוי. בורג אחד בגודל M1.4 באורך 10 מ"מ.אגוז אחד לבורג בגודל M1.4. מכונת כביסה רגילה אחת לבורג בגודל M1.4 בעובי 0.3 מילימטר. ושני טיפים מלאכותיים לציפורניים.כדי להרכיב את מסגרת המשקפיים הנכונה, לסדר קצה הציפורן לפנות לכיוון החיצוני כדי להשיג את האפקט המגן הטוב ביותר. בנוסף, התאימו את הזווית בין קצה הציפורן למסגרת ל-130 מעלות כדי להימנע מהסוות שדה ראיית העכבר. באמצעות דבק cyanoacrylate, לדבוק קצה הציפורן המלאכותית למסגרת ולאפשר דבק 12 שעות להתייבש לחלוטין.השתמש קוצץ ציפורניים כדי לקצץ את קצה הציפורן דבק במלואו על אחד על אחד סנטימטר צורה ולהניח את העדשה על המסגרת. להזריק את דבק cyanoacrylate מקצה העדשה ולתת דבק להתפשט על ידי מתח פני השטח. כאשר דבק יבש, להדק את הבורג לתוך מקל נייל

inducement-and-evaluation-of-a-murine-model-of-experimental-myopia

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

סרטון זה מדגים שיטה לגרימת דלקת בפני השטח של העין ותפקוד לקוי של בלוטת המייבומיאן במודל מורין. גירוי המערכת החיסונית של העכבר באמצעות אימונוגן ולאחר מכן רסטימולציה עם אותו אימונוגן מקדם דלקת פני העין, הגורמת לסתימת הפרשת בלוטת המייבומיאן דרך aggNET המיוצר על ידי נויטרופילים ומובילה למחלת עין יבשה.

שיטה לגרימת דלקת פני העין במודל מורין

בסרטון זה, חולדה מורדמת עוברת הליך עיניים שבו מוזרקים חרוזים מגנטיים לתוך החדר הקדמי תחת שדה מגנטי כדי לחסום את הזווית האירידו-קרנית. חסימה זו חוסמת את הרשת הטרבקולרית, מונעת ניקוז הומור מימי ומובילה ללחץ תוך עיני מוגבר, הפוגע בתאי הגנגליון ברשתית ובעצב הראייה. זה מפתח מצב דמוי גלאוקומה.

אינדוקציה ניסיונית של גלאוקומה באמצעות חסימת זווית אירידו-קרנית במודל עכבר

מקור: Jiang, X., et al. השראה והערכה של מודל עכברי של קוצר ראייה ניסיוני. J. Vis. Exp. (2019)סרטון זה מדגים הליך לגרימת קוצר ראייה בעכבר באמצעות התקנה של מסגרת עדשה מותאמת אישית. המסגרת מאובטחת לגולגולת החשופה עם דבק דנטלי, ועדשות קעורות מוחדרות כדי להזיז את נקודת המוקד מאחורי הרשתית. הגדרה זו מגרה את התארכות גלגל העין המובילה לקוצר ראייה.

פיתוח קוצר ראייה במודל עכבר באמצעות דה-מיקוד המושרה על ידי עדשה

לחץ תוך עיני מוגבר כרוני הנגרם באמצעות טיפול לייזר של meshwork trabecular בעיני עכבר. לחץ התוך עיני (IOP) הוא גבוה למשך מספר חודשים לאחר טיפול לייזר. הירידה של חדות ראייה ורגישות לקונטרסט של חיות ניסוי מנוטרת באמצעות בדיקת optomotor.

מודל עכבר לייזר המושרה של לחץ תוך עיני מוגבר כרוני לאפיון פגמים חזותיים

אנו מציגים שיטה להשראת לחץ תוך עיני מוגבר (IOP), על ידי הזרקת מיקרוספירות מגנטיות לעין העכברוש, כדי ליצור מודל של גלאוקומה. זה מוביל לעליית לחץ חזקה, ולמוות עצבי נרחב. פרוטוקול זה קל לביצוע, אינו דורש זריקות חוזרות ומייצר עליות IOP יציבות לאורך זמן.

ניסוי הגלאוקומה נגרמת על ידי הזרקת Ocular של מיקרוסכמות מגנטית

אנו מדגימים את השפעת crosslinking scleral עם ריבופלאבין ו UVA על עין ארנב התארכות צירית. התארכות Axial הושרה 13 יום בן ארנבי ניו זילנד (זכר ונקבה) על ידי תפירת עפעפי עין זכותם (tarsorrhaphy).

Scleral Cross-linking שימוש ריבופלבין ו-סגול-קרינה למניעת Axial קוצר ראיה במודל הארנב

כאן, אנו מציגים את פרוטוקול הניאו-וסקולריזציה הכורואידלית (CNV) המושרה על ידי לייזר עכבר, מודל ניסיוני המשחזר את סימני ההיכר של כלי הדם של ניוון מקולרי הקשור לגיל ניאו-וסקולרי (AMD). לאחר שליטה, הוא יכול לגרום באופן אמין ויעיל ל-CNV כמערכת מודל לבדיקת אמצעים ניסיוניים שונים.

מודל עכבר לneovascularization Choroidal מושרה לייזר

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לגרום ליתר לחץ דם עינית בעין murine שתוצאתו אובדן תאי הגנגליון ברשתית כפי שנצפה גלאוקומה. microbeads המגנטי מוזרק לתוך החדר הקדמי ומשך לזווית iridocorneal שימוש במגנט כדי לחסום את היצוא של הומור מימי.

לחסימה Microbead מגנטי דגם כדי לגרום Ocular Hypertension-Dependent גלאוקומה עכברים

יתר לחץ דם כרוני עינית הנגרמת על-ידי החלת בתפר circumlimbal אצל חולדות ועכברים, שמוביל התדרדרות תפקודית ומבניים של תאי גנגליון עקבית עם גלאוקומה.

דגם של גלאוקומה המושרה על ידי תפרים Circumlimbal אצל חולדות ועכברים

כאן, אנו מתארים את השימוש בטומוגרפיית קוהרנטיות אופטית בתחום ספקטרלי (SD-OCT) כדי לדמיין מבנים ברשתית ובעין in vivo במודלים של ניוון רשתית, גלאוקומה, רטינופתיה סוכרתית וקוצר ראייה.

הערכות מבניות In vivo של מחלות עיניים במודלים של מכרסמים באמצעות טומוגרפיה קוהרנטית אופטית

דלקת במשטח העין פוגעת ברקמות פני השטח של העין ופוגעת בתפקודים חיוניים של העין. הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה להשראת דלקת עיניים ולאיסוף רקמות פגועות במודל עכברי של תפקוד לקוי של בלוטת Meibomian (MGD).

אינדוקציה של דלקת פני השטח של העין ואיסוף של רקמות מעורבות

למדו שיטה סטנדרטית להשראת קוצר ראייה ניסיוני בעכברים באמצעות משקפיים מותאמים. הפרוטוקול מאפשר מדידות מדויקות של שבירה ואורך ציר העין לחקר מנגנוני המחלה.

השראת והערכה של מודל מאתר של קוצר ראייה ניסיוני

גלה סרטונים נוספים