Name: אוסף מהיר של ניחוח פרחוני וולאטילס באמצעות מרחב ראש שיטה איסוף נדיפות עבור GC-MS מדגם תרמי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-10T12:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 22 s
Description: למדו שיטה מהירה ולא הרסנית לאיסוף נדיפים פרחוניים באמצעות מכשיר נייד לדגימת מרחב ראש. השיטה מקצרת זמן דגימה משעות לעשר דקות ומאפשרת חקר תהליכי האבקה בצמחים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

משרד החקלאות משרד המחקר מספר 6036-22000-028-00D. השימוש בשמות המסחר, המשרד או התאגידים בפרסום זה מיועד למידע ולנוחות של הקורא. שימוש כזה אינו מהווה הסכמה רשמית או אישור של מחלקת החקלאות של ארצות הברית או שירות המחקר החקלאי של כל מוצר או שירות להדרה של אחרים שעשויים להיות מתאימים. בנוסף, מחלקת אוניברסיטת פלורידה ביולוגיה-לואיס ו ורנה ווהן מלגת ביולוגיה של אורכידאה (2017), ומלגת מחקר בוגרת אוניברסיטת פלורידה (2014-2018) סיפקה גם מימון. אנו מודים גם סינדי בנינגטון מאוניברסיטת סטטסון עבור צמח הסחלב בשימוש במהלך הצילומים של וידאו זה.

הערה: אין לענוד בשמים או תחליבים ריחניים ומוצרים במהלך כל אחד מההליכים הללו.
1. בחירת פרח
הערה: פרחים בשימוש יכול להיות גדל באופן טבעי בסביבה או נשמר בתנאים סביבתיים מלאכותיים. הטמפרטורה, הלחות ורמת האור במהלך האיסוף עשויות להשתנות בהתאם לסוג הפרח המסוים המשמש, ולאילו סוגי נתונים נאספים. לדוגמה, הנתונים נאספו במהלך היום ובלילה לאותו פרח כדי לקבוע אם הניחוח משתנה לאורך זמן היום, ונאסף משני הפרחים האתרו והחממה.
<ol><li>בחר בפרח שנפתח בתחילה, כדי לתקנן את זמן איסוף הדגימה. זה שולט לפרח המשתנה ניחוח לאורך זמן.</li>
	<li>בהתאם למשך הזמן הפורח, אם אפשרי, לחכות לפחות 24 שעות לאחר הפריחה כדי לאסוף את המדגם, הגדרת זמן סטנדרטי עבור כל הדגימות.</li>
	<li>אם יש מספר פרחים פורחים על הצמח, לסמן את אחד שישמש עם הסימון קלטת או משהו דומה כדי להבטיח דגימה חוזרת של אותו פרח.</li>
</ol>2. הכנת חומר
<ol><li>השתמש בשקיות התנור (כ-40.5 ס מ × 44.5 ס מ) ובצינורות מצופפי גלי.</li>
	<li>בתחילה, מרתיחים שקיות התנור במים ~ 30 דקות כדי להסיר תרכובות פלסטיק שיורית. לייבוש, אופים בתנור ב 175 ° c.</li>
	<li>לאחר הייבוש השקיות, להוסיף האיחוד המחיצה פוליפרופילן לכל פינה של הקצה הסגור של שקיות התנור. ההחזקות האלה מאפשרות חיבור של צינורות לדחוף פחם מסונן אוויר פנימה ולמשוך את הניחוח מהחלל הקדמי.</li>
	<li>לשטוף את כל התיקים והצינורות עם 75% אתנול. בואו להתייבש באוויר לאחר שטיפה.</li>
	<li>לאחר שקיות התנור התייבשו, אופים שקיות וצינורות בתנור בחום נמוך, כ-74-85 ° c למשך 30 דקות.</li>
</ol>3. איסוף נדיפות
הערה: כפפות ניאופרן סטרילי צריך להיות שחוקים לאורך תהליך זה, כאשר הפנייה לשקית או מחסניות מסנן יכול לזהם את הדגימות.
<ol><li>מכסים את הפרח שנבחר עם שקית תנור אפוי. החזק את השקית יחד עם מיקוד פלסטיק מתחת לפרח כדי למנוע זרימת אוויר לא רצויה לתוך השקית.</li>
	<li>חברו צינור משקע האוורור של ציוד האיסוף וחברו אותו לאחד האיגודים המחיצה על שקית התנור.</li>
	<li>על האיחוד המחיצה האחרת, לצרף מחסנית מסנן זכוכית המכילה היפומים נקבובי הפולימר.</li>
	<li>חבר צינורית שניה לציוד הגבייה בכניסת הוואקום. התחבר לקצה הצינור השני אל מחסנית מסנן האוסף הנדיף של הזכוכית.</li>
	<li>הפעל הן משאבת האוויר ואקום באותו זמן להגדיר ב ~ 0.05 L/min. החלל הקדמי סביב הפרח יתמלא באוויר, אך לא יהיה מנופח מדי. המערכת תמשוך אוויר מן השק דרך המסנן, לוכדת את הוולאטילס פרחוני.</li>
	<li>לאפשר למכונה לרוץ 10 דקות ולאחר מכן לכבות הן משאבת האוויר ואקום. הערה: מינים של פרחים שמייצרים/פולטים כמות קטנה יותר של ניחוח ייתכן שיהיה צורך לדגום למשך פרק זמן ארוך יותר.</li>
	<li>פירוק הצינורות ומחסנית מסנני הזכוכית. מניחים את המסנן לתוך בקבוקון זכוכית עם כובע בורג. כשהמכסה מופעל, אטום את המבחנה. עם סרט הדבקה של הצינור</li>
	<li>החנות דגימות במקפיא עד שנותחו באמצעות GC-MS.</li>
	<li>חזור על תהליך זה עם שקית ומסנן זכוכית נקיים, הפעם עם שקית תנור ריקה, כדי לאסוף דגימת אוויר ריקה כפקד. זה מאפשר כל רקע והכל שנאסף להיות מזוהה. הערה: האוסף החוזר צריך להיעשות בערך באותו הזמן בכל יום, כמו פרחים מסוימים לייצר רמות ניחוח שונות במהלך היום.</li>
</ol>4. GC-MS
<ol><li>הסר את מחסנית מסנן זכוכית מן המקפיא ומקום לתוך GC-MS בנמל מזרק.</li>
	<li>שחרור ראש שטח וולאטילס שנאסף על מלכודת נקבובי הפולימר מתוך adsorbent על ידי חימום במלכודת אוסף תרמי (TCT) כדי 220 ° צ' עבור 8 דקות בתוך זרימה של גז הליום (קצב: 1.2 mL/min).</li>
	<li>לאסוף תרכובות desorbed ביחידת TCT קר המלכודת ב-130 ° c. הטמפרטורה המלכודת הקרה מוסדר על ידי התוכנית GC-MS.</li>
	<li>פלאש חום היחידה TCT המלכודת הקרה כדי להזריק את התרכובות לתוך העמודה קפילר של גז chromatograph שאליו יחידת TCT קר המלכודת היה מחובר. השיטה עבור TCT מתחילה ב-20 ° c ומסתיימת ב 150 ° c.</li>
	<li>התוכנית GC-MS לעלות מ 40 ° צ' עד 280 ° c ב 15 ° c/min, עם החזקת 5 דקות ב 40 ° c.</li>
</ol>5. ניתוח נתונים
<ol><li>לצורך זיהוי, השווה את הספקטרום ההמוני של המדגם לאלה מספריות ספקטרום מסה (מחלקה לאקולוגיה כימית, אוניברסיטת גוטברג, שבדיה11), כמו גם זמני שמירה של הוולאטילס לתקופות של תקנים אותנטיים מורכבים12.</li>
	<li>השוו כרומאטוגרמות של שנאסף וולאטילס כדי לזהות פסגות משותפות.</li>
	<li>לאחר זיהוי השיא volatiles, השתמש Pherobase (מאגר נתונים מקוון של כימיקלים ופרומונים) כדי לקבוע אם הם כבר תוארו בעבר ניחוחות פרחים10.</li>
</ol>

<ol><li>Knudsen, J. T., Tollsten, L., Bergstrom, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Floral+scents-+A+checklist+of+volatile+compounds+isolated+by+head-space+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Phytochemistry%22%5BJournal%5D)">Floral scents- A checklist of volatile compounds isolated by head-space techniques.</a> Phytochemistry. 33, 253-280 (1993).</li>
<li>Dudareva, N. A., Pichersky, E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDudareva%2C+NA+%22Biology+of+floral+scent%22">Biology of floral scent</a>. , CRC Taylor and Francis. Boca Raton, FL. (2006).</li>
<li>Altenburger, R., Matile, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rhythms+of+fragrance+emission+in+flowers%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Rhythms of fragrance emission in flowers.</a> Planta. 174, 242-247 (1988).</li>
<li>Dodson, C. H., Dressler, R. L., Hills, H. G., Adams, R. M., Williams, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biologically+active+compounds+in+orchid+fragrances%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Biologically active compounds in orchid fragrances.</a> Science. 164, 1243-1249 (1969).</li>
<li>Theis, N., Raguso, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+pollination+on+floral+fragrance+in+thistles%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">The effect of pollination on floral fragrance in thistles.</a> Journal of Chemical Ecology. 31 (11), 2581-2600 (2005).</li>
<li>Heath, R. R., Manukian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+evaluation+of+systems+to+collect+volatile+semiochemicals+from+insects+and+plants+using+a+charcoal-infused+medium+for+air+purification%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chemical+Ecology%22%5BJournal%5D)">Development and evaluation of systems to collect volatile semiochemicals from insects and plants using a charcoal-infused medium for air purification.</a> Journal of Chemical Ecology. 18, 1209-1226 (1992).</li>
<li>Cancino, A., Damon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+floral+fragrance+components+of+species+of+Encyclia+and+Prosthechea+%28Orchidaceae%29+from+Soconusco%2C+southeast+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22Lankesteriana%22%5BJournal%5D)">Comparison of floral fragrance components of species of Encyclia and Prosthechea (Orchidaceae) from Soconusco, southeast Mexico.</a> Lankesteriana. 6, 83-139 (2006).</li>
<li>Cancino, A., Damon, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fragrance+analysis+of+euglossine+bee+pollinated+orchids+from+Soconusco%2C+south-east+Mexico%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Species+Biology%22%5BJournal%5D)">Fragrance analysis of euglossine bee pollinated orchids from Soconusco, south-east Mexico.</a> Plant Species Biology. 22, 129-134 (2007).</li>
<li>Sadler, J. J., Smith, J. M., Zettler, L. W., Alborn, H. T., Richardson, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fragrance+composition+of+Dendrophylax+lindenii+%28Orchidaceae%29+using+a+novel+technique+applied+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Environmental+Science%22%5BJournal%5D)">Fragrance composition of Dendrophylax lindenii (Orchidaceae) using a novel technique applied in situ.</a> European Journal of Environmental Science. 1, 137-141 (2011).</li>
<li>Ray, H. A., Stuhl, C. J., Gillett-Kaufman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Floral+fragrance+analysis+of+Prosthechea+cochleata+%28Orchidaceae%29%2C+an+endangered+native%2C+epiphytic+orchid%2C+in+Florida%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Signaling+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Floral fragrance analysis of Prosthechea cochleata (Orchidaceae), an endangered native, epiphytic orchid, in Florida.</a> Plant Signaling and Behavior. , (2018).</li>
<li>National Institute of Standards and Technology. U.S. Department of Commerce. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.nist.gov/">https://www.nist.gov/</a> (2019).</li>
<li>The Pherobase: Databse of Pheromones and Semiochemicals. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.pherobase.com/">http://www.pherobase.com/</a> (2019).</li>
</ol>

המחברים אינם מצהירים על ניגודי אינטרסים.

למרות שטכניקה זו היא בעלת ערך רב מאוד עבור מהירות הדגימה והניידות שלה, מגבלה אחת משתמשת בו עבור מינים אפיפטיים, או הגדלים על עצים ולא מהקרקע. במחקר המקורי10, אחד הפרחים שנדגמו היה אפיטיק. מכיוון שהמכונה כבדה מכדי להיתלות בחופשיות, יש לעשות בסיס יציב ומוגבה לדגימה. בנוסף, ניתן לחבר את המחשב לשקע חשמל או לסוללה מופעל, כך שאם יש דגימת שדה ממושכת, חייב להיות מקור כוח להטעין את הסוללות כאשר המחשב אינו בשימוש.
השיטות כאן מאפשרות לדגימה בלתי הרסנית באתרו, עם דגימה חוזרת מהירה ...

פרחים בדרך כלל לייצר ניחוח המשמש למשיכת מאביקים. ניחוחות אלה מורכב של תרכובות כימיות רבות מתנהגים יחד כמו תערובת פרחונית1,2,3. ללא ניחוחות אלה, פרחים יהיה פחות סביר להעביר את המידע הגנטי שלהם באמצעות המאביקים. ניחוח פרחוני תועד במשפחות צמחים פורחים רבים, עם ורצ להיות אחת המשפחות הנפוצות יותר למדו4. כדי להבין את התפקיד של ניחוח פרחוני באבקה, חשוב לאסוף ולנתח את תרכובות כימיות הנפלטים מן הפרחים בזמנים שונים של היום, במהלך מספר ימים לשבועות פורח פרחים פתוחים, כמו ניחוח יכול להשתנות לאורך זמן5.
פרוטוקול מוקדם לסוג זה של דגימה פותחה על ידי הית ו מאנוקיאן6. המטרה של שיטות הדגימה שלהם הייתה להפחית את הלחץ על הדגימה (למשל, צמחים, חרקים) שנחקרו. עיתונים קודמים תועדו כי הליכים הרסניים למפעל נדרשו, כגון הסרת פרחים פורחים על מנת לאסוף את הבושם. יותר לאחרונה הפרסומים ניחוח פרחוני על ידי cancino ו דיימון7, 8 השתמשו בשיטות דומות. מחקר זה לשים את הפרחים בתאי זכוכית והעביר אוויר מטוהרים עליהם; אז תרכובות ניחוח מן החדר נספג על adsorbents פולימר נקבובי ברור פיפטות פסטר. הניחוחות נאספו לפחות שעתיים במהלך המחקר הזה. Sadler ואח '9 ביצע מחקרים בניחוח פרחוני על סחלב אפיטי בדרום פלורידה, בדומה למחקר המקורי10. שוב, מחקר זה דרש את הפרחים להיות שנדגמו במשך יותר משעתיים כדי לאסוף את הבושם ניחוח, עם ניחוח שנאסף על adsorbent נקבובי מכופף. הנייר כאן מציג שיטה שאינה הרסנית המאפשרת דגימה מהירה הרבה יותר, הנמשכת רק 10 דקות. כמו כן, במקום להשתמש בתנור חדר זכוכית שקיות אפייה משמשים, אשר מאפשרים תנועה גמישה יותר של החדר ולהפחית את הסיכויים של נזק לפרחים. תיקים אלה מגיעים במספר גדלים המאפשרים אפשרות לבחור את גודל השקית שתתאים בקלות לדגימות בודדות מבלי לפגוע במדגם או בחומר שמסביב. Adsorbent בשימוש במחקר זה היה Tenax נקבובי מפולימר Adsorbent. זה שונה Porapak, בגלל המדגם יכול להיות thersorbed על העמודה GC-MS לניתוח, ביטול השימוש של ממיס כימית.
השיטות במחקר זה לספק דרך במהירות לדגום וולאטילס ניחוח המיוצר על ידי פרחים, ניתן להשתמש כדי לדגום אנטימיקרוביאלים מדגימות אחרות, כמו גם, כמו פרומונים חרקים, או וולאטיקלס פטריות. הזמן המוקצב לדגימה משמעו שיש פחות לחץ על המדגם והיכולת לאסוף דגימות רבות בפרק זמן קצר. לדוגמה, ב-Sadler et al.9, הפרח היה רק ריחני בלילה, כך רק שניים או שלושה דגימות ניתן לאסוף בכל לילה. עם השיטה כאן, ניתן לקחת דגימות כל הלילה במרווחים של 15-20 דקות מאותו פרח. בנוסף, על-ידי שימוש בשקיות במקום בתאי זכוכית, ניתן להשעות את החלל הקדמי בצורה קלה יותר לדיגום בשטח באוסף באתרו בסכנת הכחדה או מאיימת על מינים צמחיים. באמצעות השיטה המוצגת כאן, הצלחנו לדגום פרחים 1.5 עד 2 מטר מעל הקרקע. שיטות אלה שימושיות במידה רבה עבור אוסף הבושם במעבדה ובתחום, ומספקת לחוקרים טכניקת דגימה מהירה ובלתי הרסנית למדגם.

<table><tbody><tr><td>Bulkhead</td><td>Union Cole-Palmer</td><td>UX-06390-10</td><td></td></tr><tr><td>צינורות FEP</td><td>Cole-Palmer</td><td>UX-06407-60</td><td></td></tr><tr><td>כרומטוגרפיה גז</td><td>Hewlett Packard</td><td>6890</td><td></td></tr><tr><td>צמר זכוכית, סילאני</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>20411</td><td></td></tr><tr><td>תוחם כניסה</td><td>Agilent</td><td>5062-3587</td><td></td></tr><tr><td>ספקטרומטר מסה</td><td>Hewlett Packard</td><td>5973</td><td></td></tr><tr><td>שקית תנור ריינולדס</td> מוצרי <td>צריכה ריינולדס</td><td>טורקיה גודל</td><td></td></tr><tr><td>Tenax נקבובי פולימר סופח</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>11982</td><td></td></tr></tbody></table>

אוסף מהיר של ניחוח פרחוני וולאטילס באמצעות מרחב ראש שיטה איסוף נדיפות עבור gc-ms מדגם תרמי

Rapid Collection of Floral Fragrance Volatiles using a Headspace Volatile Collection Technique for GC-MS Thermal Desorption Sampling

בריחות של משפחות פרחים רבות שנדגמו והבולנים נותחו. ידיעת תרכובות המרכיבים את הניחוחות יכול להיות צעד חשוב לשימור של פרחים מאוימים או בסכנת הכחדה. כי ניחוח פרחוני הוא קריטי למשיכת המאביקים, שיטה זו יכולה לשמש כדי להבין טוב יותר או אפילו לשפר את האבקה. אנו מציגים פרוטוקול באמצעות מסנן אוויר נייד ואקום לאסוף ניחוח פרחוני volatiles, אשר מנותח לאחר מכן על ידי GC-MS. על-ידי שימוש בשיטה זו, ניתן לדגום את הבושם באמצעות שיטה שאינה הרסנית עם מכונה שהיא מועברת בקלות. מתודולוגיה זו משתמשת הליך דגימה מהירה, חיתוך זמן הדגימה למטה מ 2-3 שעות עד כ 10 דקות. באמצעות GC-MS, תרכובות הניחוח ניתן לזהות בנפרד, מבוסס על סטנדרטים אותנטיים. השלבים המשמשים לאיסוף נתונים ניחוח ושליטה מוצגים, מתוך הגדרת חומרים לאיסוף פלט הנתונים.

נתוני הנציג מתוך ה-GC-MS מוצגים כרומוטוגרמה באיור 1. בנוסף ל chromatogram, קובץ נתונים של תוצאות מסופק גם (קובץ משלים 1). קובץ נתונים זה מספק את זמן השמירה עבור כל שיא (RT), וזיהוי של התרכובת המהווה שיא (ספריה/מזהה). פסגות בין 10:00 ו 15:00 דקות הם volatiles פרחוני, בשל המשקל המולקולרי של תרכובות10. המספרים שמעל הפסגות מסמלים את זמני ההחזקה של התרכובות המזוהות אשר מוזכרים בקובץ הנתונים של התוצאות (קובץ משלים 1). על ידי קבלת כרומטוגרמה...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לאיסוף ניחוח פרחוני אנטימיקרוביאלים מפרחים פורחים, באמצעות הליך דגימה לא הרסני.

אוסף מהיר של ניחוח פרחוני וולאטילס באמצעות מרחב ראש שיטה איסוף נדיפות עבור GC-MS מדגם תרמי

Fragrances of many flower families have been sampled and the volatiles analyzed. Knowing the compounds that make up the fragrances can be an important ...

בגלל ניחוח פרחוני הוא קריטי למשיכת מאביקים, שיטה זו יכולה לשמש כדי להבין טוב יותר או אפילו לשפר את האבקה של מיני פרחים מקומיים. בשיטה זו, נדיפות ניחוח נדגמים בשיטה לא הרסנית עם מכונה מועברת בקלות. מתודולוגיה זו משתמשת דגימה מהירה, חיתוך זמן דגימה מ 2-3 שעות עד 10 דקות.שיטות אלה מספקות דרך לדגום במהירות נדיפים המיוצרים על ידי פרחים ו ניתן להשתמש בהם כדי לדגום נדיפים מדגימות אחרות גם כן, כגון פרומונים חרקים. כדי להתחיל, בחר פרח שלא נפתח בתחילה, וסמן את הפרח בקלטת סימון כדי להבטיח דגימה חוזרת ונשנית של אותו פרח. מרתיחים שקיות תנור במים במשך 30 דקות כדי להסיר תרכובות פלסטיק שיורית.לייבוש, אופים בתנור ב 175 מעלות צלזיוס במשך 60 דקות. לאחר השקיות התייבשו, להוסיף איחוד מחיצה פוליפרופילן לכל פינה של הקצה הסגור של שקיות התנור. שוטפים את כל השקיות והצינורות עם 75% אתנול ונותנים להם להתייבש באוויר.לאחר מכן, אופים את השקיות ואת הצינורות בתנור בחום נמוך, בין 74 ל 85 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות. בהתאם למשך זמן הפריחה, אם אפשר לחכות לפחות 24 שעות לאחר הפריחה כדי לאסוף את המדגם. מכסים את הפרח הנבחר בשקית תנור אפויה.Cinch את התיק יחד בחוזקה עם עניבת רוכסן פלסטיק מתחת לפרח כדי למנוע זרימת אוויר לא רצויה לתוך התיק. לובש כפפות ניאופרן סטריליות, לחבר צינור משקע האוויר של ציוד האיסוף ולחבר אותו לאחד האיגודים bulkhead על שקית התנור. באיחוד bulkhead השני, לחבר מחסנית מסנן זכוכית המכילה ספח פולימר דייסה.חבר צינור שני לציוד האיסוף על קלט הוואקום. חבר את קצה הצינור השני אל מחסנית מסנן האיסוף הנדיף מזכוכית. הפעל הן את משאבת האוויר והן את הוואקום בו זמנית והגדיר 0.05 ליטר לדקה.חלל הראש סביב הפרח מלא באוויר אך לא מנופח יתר על המידה. המערכת מושכת אוויר מהשקית דרך המסנן, לוכדת את הנדיפים הפרחוניים. אפשר למכונה לפעול במשך 10 דקות.ואז לכבות גם את משאבת האוויר וגם את הוואקום. לפרק את הצינורות ואת מחסנית מסנן הזכוכית. מניחים את המסנן לתוך בקבוקון זכוכית בורג על כובע.לאטום את הבקבוקון עם קלטת הליך משנה של צינור PTFE. אחסן את הדגימה במקפיא עד לניתוח GCMS. חזור על תהליך זה עם שקית תנור ריקה כדי לאסוף דגימת אוויר ריקה כפקד.עבור שכפולים עקביים של אותם volatiles, לחזור על אוסף מדגם באותו זמן בכל יום, כמו פרחים מסוימים לייצר רמות ניחוח משתנות במהלך היום. ראשית, הסר את מחסנית מסנן הזכוכית מהמקפיא והכנס אותה ל- GCMS ליציאת המזרק. כדי לשחרר נדיפות שטח ראש שנאספו על ספיח פולימרי נקבובי מן ספיח, לחמם את מלכודת איסוף תרמי ל 220 מעלות צלזיוס במשך שמונה דקות בתוך זרימה של גז הליום ב 1.2 מיליליטר לדקה.השווה כרומטוגרמות של נדיפים שנאספו כדי לזהות פסגות חוזרות נפוצות. לאחר זיהוי נדיפות השיא, השתמש Pherobase כדי לקבוע אם הם תוארו בעבר ניחוחות פרחוניים. במחקר זה, נתונים מייצגים של GCMS מוצגים כרומטוגרמה.פסגות בין 10 ל 15 דקות הן נדיפים פרחוניים. הנדיפים שנאספו היו התייחסו Pherobase כדי לקבוע אם הם תוארו בעבר ניחוח פרחוני. לדוגמה, מספר מורכב 21, עם זמן שמירה של 10.311 זוהה כ benzaldehyde.Benzaldehyde ניתן לחיפוש על Pherobase עם רשימה של כל מיני הפרחים, מאורגן על ידי משפחת הצמח, שממנו תרכובת ניחוח זוהה. מיני הסחלב מוצגים כאן, שממנו נקבע כי בנזלדהיד נוכח בניחוח הפרחוני. השיטות הקודמות לקחו שעתיים עד ארבע שעות לדגימה.השימוש בממס להסרת הדגימה מהמסנן יגרום לשיא ממס ב- GCMS. זה יסתיר את התרכובות מאפס ל-3.5 דקות. שיטה זו מאפשרת לראות את כל התרכובות.

rapid-collection-floral-fragrance-volatiles-using-headspace-volatile

Research

JoVE Journal

Biochemistry

ביוכימיה

השיטה הפשוטה היא ובלבד מאפשר מיצוי ניתוח מהיר של הורמונים צמחיים מרובים דגימות רקמה קטנות. הליך משתמשת מיצוי שלב אדי כצעד טיהור חגיגית. דוגמאות מנותחות על ידי GC / MS עם יינון כימי שמייצר בעיקר (M 1) יונים +.

ניטור הורמונים צמחיים במהלך התגובות מתח

משני יינון electrospray ספקטרומטריית מסה (SESI-MS) מאפשרת זיהוי של תרכובות אורגניות נדיפות (VOCs) ללא צורך המקדים כל המדגם. פרוטוקול זה מספק הוראות לאפיון (בתוך דקות) המהירה של VOCs חיידקי באמצעות SESI-MS.

נדיפים חיידקית משנית אפיון באמצעות Ionization electrospray ספקטרומטריית מסה (SESI-MS)

השיטה המהירה לניתוח מתחם נדיפים בפרי מתואר. התרכובות נדיפים הנמצאים אמיץ של homogenate המדגם מופרדות במהירות זוהה עם כרומטוגרפיה אולטרה מהיר גז (GC) יחד עם גל משטח אקוסטי (SAW) חיישן. נוהל לטיפול נתונים וניתוח נדון גם.

פרי ניתוח נדיפים באמצעות האף האלקטרוני

רמזי ריח לתווך התנהגויות רבות ושונות בחרקים, ולעתים קרובות הם תערובות מורכבות מורכבות מעשרות עד מאה תרכובות נדיפות. שימוש בגז כרומטוגרפיה עם הקלטה רבה ערוצית באונת מחושי החרקים, אנו מתארים שיטה לזיהוי של תרכובות ביו.

זיהוי נדיפים חוש ריח באמצעות קלטות כרומטוגרפיה-Multi-יחידת גז (GCMR) באונת מחושי החרקים

עקוב אחר אדים של חומר נפץ TNT וRDX שנאספו בצינורות desorption תרמית מלא סופגים נותחו באמצעות מערכת desorption טמפרטורה מתוכנת מצמידים את GC עם גלאי לכידת אלקטרון. הניתוח אינסטרומנטלית בשילוב עם שיטה בתצהיר נוזלית ישירה כדי להפחית את השונות מדגם וחשבון לסחיפת מכשור והפסדים.

כמותי איתור של אדי נפץ Trace ידי טמפרטורת מתוכנת Desorption גלאי גז לכידת כרומטוגרפיה-אלקטרונים

עובדים מינור של המין נמלה Colobopsis explodens ביתר כדי לבודד את התוכן כמו שעווה המאוחסן שלהם מאגרים בלוטת mandibular מתעצם הממס-מיצוי הבאים וניתוח על ידי גז כרומטוגרפיה-ספקטרומטריית. ביאור וזיהוי של המרכיבים נדיף בתוכנות קוד פתוח MetaboliteDetector מתואר גם.

בידוד של בלוטת Mandibular תוכן המאגר של אפור פרווה "פיצוץ של הנמלים (Formicidae) לניתוח Volatilome על ידי GC-MS ו- MetaboliteDetector

פיתחנו מתודולוגיה יעילה לדגימה וניתוח של אותות ריח כדי להבין כיצד ניתן להשתמש בהם בתקשורת בין בעלי חיים. במיוחד, אנו משתמשים במיקרו-אינטרנצ'רציה מוצקה של מרחב הראש יחד עם ספקטרומטריית גז כרומטוגרפיה-מסה כדי לנתח את הרכיבים הנדיפים של ריחות בעלי חיים וסימוני ריח.

דגימה וניתוח של אותות ריח בעלי חיים

סה"כ אידוי שלב מוצק Microextraction (TV-SPME) מאדה לחלוטין מדגם נוזלי בעוד analytes הם ספוגים על סיב SPME. זה מאפשר חלוקה למחיצות של האנליט בין אדי הממס בלבד לבין ציפוי סיבי SPME.

ספקטרומטריית כרומטוגרפיה-מסה של גז בשילוב עם מיקרו-אקסטרציה מוצקה של אידוי מוחלט ככלי משפטי

פלטפורמת מיקרו-פרוצדורה-גז-כרומטוגרפיה של מרחב ראש-פאזה מוצקה מתוארת כאן לזיהוי וכימות מהירים, אמינים ואוטומטיים למחצה של נדיפים בפירות דומדמניות שחורות בשלים. טכניקה זו יכולה לשמש כדי להגדיל את הידע על ארומה פירות ולבחור cultivars עם טעם משופר לצורך הרבייה.

יצירת פרופילים של תרכובות נדיפות בפרי דומדמניות שחורות באמצעות מיקרו-קסטרה של שלב מוצק Headspace בשילוב ספקטרומטריית גז כרומטוגרפיה-מסה

פרוטוקול זה מתאר מיצוי של תרכובות אורגניות נדיפות מדגימה ביולוגית בשיטת מיצוי סורבנט בסיוע ואקום, כרומטוגרפיית גז בשילוב עם ספקטרומטריית מסה באמצעות מסילת הכנת דגימות Entech וניתוח נתונים. הוא מתאר גם תרבית של דגימות ביולוגיות ובדיקת איזוטופים יציבה.

לכידת תרכובות אורגניות נדיפות מיקרוביאליות המיוצרות באופן פעיל מדגימות הקשורות לבני אדם עם מיצוי סורבנט בסיוע ואקום

מוצגת כאן שיטה להעשרה וניתוח המרכיבים הנדיפים של תמציות תה באמצעות אידוי טעמים בסיוע ממס ומיצוי ממס ולאחר מכן ספקטרומטריית מסה כרומטוגרפית גז, שניתן ליישם על כל סוגי דגימות התה.

ניתוח ארומת תה המבוסס על העשרת אידוי טעמים בסיוע ממס

למדו שיטה מהירה ולא הרסנית לאיסוף נדיפים פרחוניים באמצעות מכשיר נייד לדגימת מרחב ראש. השיטה מקצרת זמן דגימה משעות לעשר דקות ומאפשרת חקר תהליכי האבקה בצמחים.

אוסף מהיר של ניחוח פרחוני וולאטילס באמצעות מרחב ראש שיטה איסוף נדיפות עבור GC-MS מדגם תרמי

גלה סרטונים נוספים