אוסף מהיר של ניחוח פרחוני וולאטילס באמצעות מרחב ראש שיטה איסוף נדיפות עבור GC-MS מדגם תרמי

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לאיסוף ניחוח פרחוני אנטימיקרוביאלים מפרחים פורחים, באמצעות הליך דגימה לא הרסני.

בגלל ניחוח פרחוני הוא קריטי למשיכת מאביקים, שיטה זו יכולה לשמש כדי להבין טוב יותר או אפילו לשפר את האבקה של מיני פרחים מקומיים. בשיטה זו, נדיפות ניחוח נדגמים בשיטה לא הרסנית עם מכונה מועברת בקלות. מתודולוגיה זו משתמשת דגימה מהירה, חיתוך זמן דגימה מ 2-3 שעות עד 10 דקות.

שיטות אלה מספקות דרך לדגום במהירות נדיפים המיוצרים על ידי פרחים ו ניתן להשתמש בהם כדי לדגום נדיפים מדגימות אחרות גם כן, כגון פרומונים חרקים. כדי להתחיל, בחר פרח שלא נפתח בתחילה, וסמן את הפרח בקלטת סימון כדי להבטיח דגימה חוזרת ונשנית של אותו פרח. מרתיחים שקיות תנור במים במשך 30 דקות כדי להסיר תרכובות פלסטיק שיורית.

לייבוש, אופים בתנור ב 175 מעלות צלזיוס במשך 60 דקות. לאחר השקיות התייבשו, להוסיף איחוד מחיצה פוליפרופילן לכל פינה של הקצה הסגור של שקיות התנור. שוטפים את כל השקיות והצינורות עם 75% אתנול ונותנים להם להתייבש באוויר.

לאחר מכן, אופים את השקיות ואת הצינורות בתנור בחום נמוך, בין 74 ל 85 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות. בהתאם למשך זמן הפריחה, אם אפשר לחכות לפחות 24 שעות לאחר הפריחה כדי לאסוף את המדגם. מכסים את הפרח הנבחר בשקית תנור אפויה.

Cinch את התיק יחד בחוזקה עם עניבת רוכסן פלסטיק מתחת לפרח כדי למנוע זרימת אוויר לא רצויה לתוך התיק. לובש כפפות ניאופרן סטריליות, לחבר צינור משקע האוויר של ציוד האיסוף ולחבר אותו לאחד האיגודים bulkhead על שקית התנור. באיחוד bulkhead השני, לחבר מחסנית מסנן זכוכית המכילה ספח פולימר דייסה.

חבר צינור שני לציוד האיסוף על קלט הוואקום. חבר את קצה הצינור השני אל מחסנית מסנן האיסוף הנדיף מזכוכית. הפעל הן את משאבת האוויר והן את הוואקום בו זמנית והגדיר 0.05 ליטר לדקה.

חלל הראש סביב הפרח מלא באוויר אך לא מנופח יתר על המידה. המערכת מושכת אוויר מהשקית דרך המסנן, לוכדת את הנדיפים הפרחוניים. אפשר למכונה לפעול במשך 10 דקות.

ואז לכבות גם את משאבת האוויר וגם את הוואקום. לפרק את הצינורות ואת מחסנית מסנן הזכוכית. מניחים את המסנן לתוך בקבוקון זכוכית בורג על כובע.

לאטום את הבקבוקון עם קלטת הליך משנה של צינור PTFE. אחסן את הדגימה במקפיא עד לניתוח GCMS. חזור על תהליך זה עם שקית תנור ריקה כדי לאסוף דגימת אוויר ריקה כפקד.

עבור שכפולים עקביים של אותם volatiles, לחזור על אוסף מדגם באותו זמן בכל יום, כמו פרחים מסוימים לייצר רמות ניחוח משתנות במהלך היום. ראשית, הסר את מחסנית מסנן הזכוכית מהמקפיא והכנס אותה ל- GCMS ליציאת המזרק. כדי לשחרר נדיפות שטח ראש שנאספו על ספיח פולימרי נקבובי מן ספיח, לחמם את מלכודת איסוף תרמי ל 220 מעלות צלזיוס במשך שמונה דקות בתוך זרימה של גז הליום ב 1.2 מיליליטר לדקה.

השווה כרומטוגרמות של נדיפים שנאספו כדי לזהות פסגות חוזרות נפוצות. לאחר זיהוי נדיפות השיא, השתמש Pherobase כדי לקבוע אם הם תוארו בעבר ניחוחות פרחוניים. במחקר זה, נתונים מייצגים של GCMS מוצגים כרומטוגרמה.

פסגות בין 10 ל 15 דקות הן נדיפים פרחוניים. הנדיפים שנאספו היו התייחסו Pherobase כדי לקבוע אם הם תוארו בעבר ניחוח פרחוני. לדוגמה, מספר מורכב 21, עם זמן שמירה של 10.311 זוהה כ benzaldehyde.

Benzaldehyde ניתן לחיפוש על Pherobase עם רשימה של כל מיני הפרחים, מאורגן על ידי משפחת הצמח, שממנו תרכובת ניחוח זוהה. מיני הסחלב מוצגים כאן, שממנו נקבע כי בנזלדהיד נוכח בניחוח הפרחוני. השיטות הקודמות לקחו שעתיים עד ארבע שעות לדגימה.

השימוש בממס להסרת הדגימה מהמסנן יגרום לשיא ממס ב- GCMS. זה יסתיר את התרכובות מאפס ל-3.5 דקות. שיטה זו מאפשרת לראות את כל התרכובות.