Name: הזרקת הלחי מודל עבור מדידה בו של כאב התנהגויות הקשורות בגירוד (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-27T12:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 59 s
Description: למדו את מודל הזרקת הלחי בעכברים למדידה בו-זמנית של כאב וגירוד. שיטה זו מאפשרת הבחנה ברורה בין התנהגויות הקשורות לכאב ולגירוד במחקר נוירולוגי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו אסירי תודה לג ' סטיבן שימדע ורוברט ה. למוט (בית הספר לרפואה של אוניברסיטת ייל, קונטיקט) מתוך שיטות העיבוד של הטכניקה. אנו מודים גם למר קנטארו מיאקי על יצירת איורים לעכבר. מחקר זה היה נתמך על ידי מענק סיוע למחקר מדעי מן המשרד לחינוך, תרבות, ספורט, מדע וטכנולוגיה ביפן (Nos. 15H02501 ו 15H02501 כדי ת, ו-No. 16K21691 ל-$) ו-Uehara הזיכרון קרן (ל. ק. ה). אנו מעריכים את המבוא של שיטת הזרקת הלחי ע י פרופ ' למוט באוניברסיטת ייל.

כל ההליכים הכרוכים בטיפול ובשימוש בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול בבעלי חיים של המכון הלאומי למדעי הטבע (16a074), ובוצעו בהתאם להנחיות של המכון הלאומי ל . מדעים פיזיולוגיים
הערה: הפרוטוקול המקורי דווח על ידי סטיבן ג. שימדע ורוברט ה. לה-מוט4, והדו הנוכחי מתאר שיטות אלה עם מספר שינויים, כולל הוספת מסך כדי למנוע מבעלי חיים לראות זה את זה, העדר ראי, מספר העכברים לכל הקלטה, מתח העכבר, גודל הכלוב וזמן ההקלטה.
1. מודל הזרקת לחי
<ol><li>
הכנת הניסוי
	<ol>
<li>כלוב<ol>
<li>הגדר ארבעה כלובים תחת מצלמה כמוצג באיור 1. הגדר מסך כדי למנוע מעכברים לראות זה את זה. שים את כל העכבר על כל כלוב ולהגדיר מכסה אקריליק כדי למנוע בריחה של עכברים. שים לב כי יש לבצע הקלטות בסביבה שבה הטמפרטורה, הלחות והקול נשלטים. הערה: התנהגויות ניתן גם להקליט ללא מכסה אם הכלוב הוא גבוה מספיק.</li>
		</ol>
</li>
		<li>מחט ומזרק<ol>
<li>השתמש במחט של 29 גרם או 30 גרם המצורפת למזרק 0.5 mL להזרקה של חומרי בדיקה. אם פתרון חומר הבדיקה הוא מאוד צמיגה, מחטים גדולים יותר נדרשים. עם זאת, אנא שימו לב כי מחטים גדולות מהוות תופעות לוואי פיזיות נוספות. הערה: ניתן להשתמש במחט המחוברת למזרק עם צינורית פוליאתילן.</li>
		</ol>
</li>
		<li>מצלמת וידאו<ol>
<li>השתמש במצלמת וידאו עם שיעורי מסגרת גדולה מספיק (30-60 מסגרות/s) עם רזולוציה גבוהה יחסית עבור המדידה של התקפי שריטות ומנגב התנהגויות.</li>
		</ol>
</li>
		<li>תוכנה לניתוח וידאו<ol>
<li>השתמש בתוכנת עריכת וידאו עבור הפעלת וידאו וניתוח. שים לב שמצב הפעלה מהירה ומצב השמעה של מסגרת אחרי מסגרת נחוצים לניתוח מדויק.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig1.jpg"> איור 1: מצלמת וידאו והגדרת כלוב. ארבעה כלובים אקריליים עם מכסים אקריליק, למניעת בריחה מהעכברים, והמסך למניעת גירוד מדבק משמשים. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<ol start="2"><li>
הזרקה והקלטה
	<ol>
<li>יום אחד לפני הניסוי, לגלח את הפרווה על הלחי של העכבר עם קוצץ שיער (סרט 1). לפני הגילוח, לא לרסן את העכברים. הערה: תקליטור 1 או C57BL/6 השתמשו בעיקר במודל זה4,5. במאמר זה, זכר 6-12 בשבוע הישן C57BL/6N עכברים שימשו. שימו לב כי רגישות הכימיקלים יכול להיות שונה בין זנים העכבר השונים3,6,7.</li>
		<li>יום אחד לאחר גילוח, להזיז את העכבר לכלוב ההקלטה עבור 1 h כדי לסדר אותו לתנאי ההקלטה. אם נעשה שימוש ביישום מקומי, החילו אותו במהלך תקופת הסתגלות זו. הערה: בדוח זה, 10 μL של 2% (w/v) מלחים דיפנהידרכלוריד בתמיסת מלח שהוחלו על המריחה לפני הקלטה 30 דקות לפני ההקלטה.</li>
		<li>הגדר מצלמת וידאו מעל הכלוב, ולהתחיל את הקלטת וידאו לפני הזרקת חומר הבדיקה. הכנס 10 μL פתרון של החומר בדיקה בתוך הלחי המגולחים תחת תנאים ער (סרט 2). לאחר הזריקה, להחזיר את העכבר לכלוב ההקלטה. הערה: בדוח זה, 50 μg/10 μL היסטמין, 40 μg/10 μL קפסאיצין או רכב (7% רצף ה80 בתמיסת מלח) שימשו כחומרי בדיקה.</li>
		<li>סגור את המכסה של הכלוב והמשך להקליט וידאו במשך 30 דקות. הערה: זמן ההקלטה הכולל יהיה תלוי בתנאים הניסיוניים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
אנליזה התנהגותית
	<ol>
<li>הרוזן התקפי שריטות וניגוב התנהגויות, בהתאמה. עכברים להרים רגל האחוריות לעבר הלחי ולגרד מספר פעמים על אחת או כמה שניות, ואז לשים את הרגל למטה. סידרה זו של פעולות נספרות כתחרות שריטות אחת. אין לספור שריטות של אזורים אחרים. עכברים משתמשים בשביל אחד. לניגוב ולשני הצדדים לטיפוח יש להבדיל בין פעולות אלה. רק ניגוב התנהגויות נספרות כהתנהגויות הקשורות לכאב. הערה: כל פעולה מוצגת באיור 2, בסרט 3, בסרט 4 ובסרט 5.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig2.jpg"> איור 2: פעילות עכבר טיפוסית במהלך ההקלטה. פאנלים A-C הם איורים המייצגים מנגב התנהגות עם הזכות זרוע (א), גירוד התנהגות עם הרגל הימנית השמאלית (ב) והתנהגות לטפח עם שני זרוע (ג). עכברים להרים רגל האחוריות לעבר הלחי ולגרד מספר פעמים על אחת או כמה שניות, ואז לשים את הרגל למטה. סידרה זו של פעולות נספרות כתחרות שריטות אחת. אין לספור שריטות של אזורים אחרים. עכברים משתמשים בשביל אחד. לניגוב ולשני הצדדים לטיפוח יש להבדיל בין פעולות אלה. רק ניגוב התנהגויות נספרות כהתנהגויות הקשורות לכאב. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
2. מודל הזרקת הצוואר
<ol><li>
הזרקה והקלטה
	<ol>
<li>יום אחד לפני הניסוי, לגלח את הפרווה על העורף של הצוואר של העכבר עם קוצץ שיער לאחר כ 5% השאיפה isofלאנה עבור 2-3 דקות.</li>
		<li>יום אחד לאחר גילוח, להזיז את העכבר לכלוב ההקלטה עבור 1 h כדי לסדר אותו לתנאי ההקלטה.</li>
		<li>הגדר מצלמת וידאו מעל הכלוב (איור 1), והתחל את הקלטת הווידאו לפני הזרקת החומר לבדיקה. הכנס 10 μL פתרון של חומר המבחן בתוך הצוואר מגולח תחת תנאים ער. לאחר הזריקה, להחזיר את העכבר לכלוב ההקלטה. הערה: במאמר זה, 50 μg/10 μL היסטמין, 10 μg/10 μL או 40 μg/10 μL קפסאיצין, או רכב (7% רצף ה80 בתמיסת מלח) שימשו כחומרי בדיקה.</li>
		<li>סגור את המכסה של הכלוב והמשך להקליט וידאו במשך 30 דקות. הערה: זמן ההקלטה הכולל יהיה תלוי בתנאים הניסיוניים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
אנליזה התנהגותית
	<ol>
<li>לספור התנהגויות שריטות. עכברים מרימים רגל לעבר הצוואר ושריטות מספר פעמים על אחת או כמה שניות, ואז להניח את הרגל. סידרה זו של פעולות נספרות כתחרות שריטות אחת. אין לספור שריטות של אזורים אחרים. הערה: הפעולה של גירוד דומה לזה במודל הזרקת הלחי, אלא שמיקום השריטות מוזז לצוואר.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Ikoma, A., Steinhoff, M., Stander, S., Yosipovitch, G., Schmelz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neurobiology+of+itch%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The neurobiology of itch.</a> Nature Reviews Neuroscience. 7 (7), 535-547 (2006).</li>
<li>Kuraishi, Y., Nagasawa, T., Hayashi, K., Satoh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scratching+behavior+induced+by+pruritogenic+but+not+algesiogenic+agents+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Scratching behavior induced by pruritogenic but not algesiogenic agents in mice.</a> European Journal of Pharmacology. 275 (3), 229-233 (1995).</li>
<li>Kuraishi, Y., Yamaguchi, T., Miyamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Itch-scratch+responses+induced+by+opioids+through+central+mu+opioid+receptors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Science%22%5BJournal%5D)">Itch-scratch responses induced by opioids through central mu opioid receptors in mice.</a> Journal of Biomedical Science. 7 (3), 248-252 (2000).</li>
<li>Shimada, S. G., LaMotte, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+differentiation+between+itch+and+pain+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Behavioral differentiation between itch and pain in mouse.</a> Pain. 139 (3), 681-687 (2008).</li>
<li>Kittaka, H., Uchida, K., Fukuta, N., Tominaga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysophosphatidic+acid-induced+itch+is+mediated+by+signalling+of+LPA5+receptor%2C+phospholipase+D+and+TRPA1%2FTRPV1%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Lysophosphatidic acid-induced itch is mediated by signalling of LPA5 receptor, phospholipase D and TRPA1/TRPV1.</a> The Journal of Physiology. 595 (8), 2681-2698 (2017).</li>
<li>Maekawa, T., Nojima, H., Kuraishi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Itch-associated+responses+of+afferent+nerve+innervating+the+murine+skin%3A+different+effects+of+histamine+and+serotonin+in+ICR+and+ddY+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Japanese+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Itch-associated responses of afferent nerve innervating the murine skin: different effects of histamine and serotonin in ICR and ddY mice.</a> The Japanese Journal of Pharmacology. 84 (4), 462-466 (2000).</li>
<li>Inagaki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scratching+behavior+in+various+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Skin+Pharmacology+and+Applied+Skin+Physiology%22%5BJournal%5D)">Scratching behavior in various strains of mice.</a> Skin Pharmacology and Applied Skin Physiology. 14 (2), 87-96 (2001).</li>
<li>Inami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topical+surfactant-induced+pruritus%3A+involvement+of+histamine+released+from+epidermal+keratinocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Topical surfactant-induced pruritus: involvement of histamine released from epidermal keratinocytes.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 344 (2), 459-466 (2012).</li>
<li>Vos, B. P., Hans, G., Adriaensen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+assessment+of+facial+pain+in+rats%3A+face+grooming+patterns+after+painful+and+non-painful+sensory+disturbances+in+the+territory+of+the+rat%27s+infraorbital+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Behavioral assessment of facial pain in rats: face grooming patterns after painful and non-painful sensory disturbances in the territory of the rat's infraorbital nerve.</a> Pain. 76 (1-2), 173-178 (1998).</li>
<li>Yeo, J. F., Ong, W. Y., Ling, S. F., Farooqui, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebroventricular+injection+of+phospholipases+A2+inhibitors+modulates+allodynia+after+facial+carrageenan+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Intracerebroventricular injection of phospholipases A2 inhibitors modulates allodynia after facial carrageenan injection in mice.</a> Pain. 112 (1-2), 148-155 (2004).</li>
<li>Yeo, J. F., Ling, S. F., Tang, N., Ong, W. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antinociceptive+effect+of+CNS+peroxynitrite+scavenger+in+a+mouse+model+of+orofacial+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Antinociceptive effect of CNS peroxynitrite scavenger in a mouse model of orofacial pain.</a> Experimental Brain Research. 184 (3), 435-438 (2008).</li>
<li>Hashimoto, T., Ohata, H., Momose, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Itch-scratch+responses+induced+by+lysophosphatidic+acid+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Itch-scratch responses induced by lysophosphatidic acid in mice.</a> Pharmacology. 72 (1), 51-56 (2004).</li>
<li>Kremer, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysophosphatidic+acid+is+a+potential+mediator+of+cholestatic+pruritus%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Lysophosphatidic acid is a potential mediator of cholestatic pruritus.</a> Gastroenterology. 139 (3), 1008-1018 (2010).</li>
<li>Alemi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+TGR5+receptor+mediates+bile+acid-induced+itch+and+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">The TGR5 receptor mediates bile acid-induced itch and analgesia.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (4), 1513-1530 (2013).</li>
<li>Nieto-Posadas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysophosphatidic+acid+directly+activates+TRPV1+through+a+C-terminal+binding+site%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Chemical+Biology%22%5BJournal%5D)">Lysophosphatidic acid directly activates TRPV1 through a C-terminal binding site.</a> Nature Chemical Biology. 8 (1), 78-85 (2011).</li>
<li>Akiyama, T., Carstens, M. I., Carstens, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+itch-+and+pain-related+behavioral+responses+and+%C2%B5-opoid+modulation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Dermato-Venereologica%22%5BJournal%5D)">Differential itch- and pain-related behavioral responses and µ-opoid modulation in mice.</a> Acta Dermato-Venereologica. 90 (6), 575-581 (2010).</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

במאמר זה, מודל הזרקת הלחי הוא הציג והוכח להיות שימושי ניתוח של כאב והתנהגויות הקשורות בגירוד.
דוח קודם הראה כי חומרים אלגברית לגרום התנהגויות גירוד בתוך מודל הזרקת צוואר העכבר4. לעומת זאת, קפסאיצין הפחתת התנהגויות שריטות בניסויים אחרים בהזרקה בצוואר (איור 3). לכן, השפעת הכאב על התנהגות הגירוד נותרת בלתי ברורה. לכן יש לפתח שיטה לחקור בו את הכאב והגירוד באמצעות בדיקות התנהגותיות. באמצעות מודל הזרקת הלחי, ניתן להעריך את השפעת החומר על הכאב והגירוד.
בעבר דווח כי LPA תאיים ישירות מפעיל TRPV1 ו TRPA1 כמנגנון של גירוד LPA המושרה5. בהתאם לכך, הגירוד המושרה. יכול להיות היסטמין עצמאי המחקר הקודם הראה גם כי מודל הזרקת הלחי יכול לשמש להערכת היסטמין-עצמאי גירוד16. לכן, ניתן להשתמש במודל זה עבור גירוד תלוי-היסטמין ובלתי תלוי.
אחד השלבים הקריטיים בניסוי זה הוא הזריקה. מכיוון שזהו מבחן התנהגותי חריף, לא ניתן להשתמש בהרדמה בשלב ההזרקה מאחר שהיא עלולה להשפיע על התנהגויות אלה. לכן, העכבר צריך להיות מאובטח על מנת לבצע זריקה מדויקת. כאשר החסימה על בעל החיים אינה מאובטחת, במיוחד בעת הזרקת algogens חזקים, העכברים עשויים להיאבק, המובילים לנפח הזרקה מדויק ולעומק, ולאחריו קושי לפרש את התוצאות. בעת טיפול בעכבר, משוך את העור על העורף בין האגודל לאצבע כדי לעכב את התנועה של העכבר.
צעד קריטי נוסף. הוא ניתוח התנהגותי מכיוון שגירוד מהיר מאוד, הסרטון צריך להיות מצופה היטב. יתר על כן, ניגוב יכול להיות קשה להבדיל מלטפח. לכן, השימוש בכימיקלים בשליטה חיובית כגון קפסאיצין מומלץ במהלך הניסוי הראשון. תנאי הקלטה והפעלה חוזרת יכולים להשפיע גם על ספירה של שני התנהגויות. אם קשה להתבונן באופן ברור בהתנהגויות, ניתן להשתמש במראות סביב הכלובים כדי לשפר את זוויות הצפייה4.
יצוין כי מודל הזרקת הלחי עשוי להראות דיוק כמותי מופחתת עבור כימיקלים נבדק מאשר במודל הזרקת הצוואר. כפי שמוצג באיור 3 ואיור 4, אותה כמות של היסטמין המושרה יותר התנהגויות גירוד במודל הצוואר מאשר במודל הלחי, והראה וריאציה קטנה יותר במודל הזרקת הצוואר. לאחר שחומר נבדק הוכח להיות מתחצפת עם אפקטים אלגברית נמוך עם המודל הזרקת הלחי, מודל הזרקת הצוואר מומלץ לניתוח כמותי נוסף. גם עם מגבלות אלה, מודל הזרקת הלחי שימושי להערכה מדויקת של חומרי בדיקה, במיוחד בתחום המחקר בגירוד.

גירוד במקור התאפיין בתחושה שגורמת לגירוד התנהגויות להסרת חומרים מזיקים ממשטח העור. עם זאת, גירוד כבר המוקד של טיפולים עבור תחושות לא נעימות שנגרמו על ידי מחלות רבות כגון דרמטיטיס אטופיק, נגעים נוירוגניים, ו כולאוסטזיס1. במקרים אלה, גירוד הוא תחושה קשה ובלתי נעימה דומה לכאב. לכן, גירוד מייצג יעד מחקרי חשוב. התנהגות גירוד היא האינדיקטור העיקרי לגירוד בניסויים בבעלי חיים, והתנהגויות שריטות יכולות להיגרם בעכברים על ידי הזרקת פרוריטוגנס לתוך העור על צווארו2,3. עם זאת, מחקר הקודם הראה כי קפסאיצין, algogen, גם מעורר התנהגויות גירוד הזרקת צוואר מודל4, מה שמקשה להפלות את הגירוד מן הכאב במודל זה.  לעומת זאת, זה נמצא כי קפסאיצין מופחתת התנהגויות גירוד במודל הזרקת צוואר, המציין כי השפעת הכאב על התנהגויות גירוד הוא מסובך והוא תלוי בתנאים ניסיוני.  לכן, מדידות בו של כאב והתנהגויות הקשורות לגירוד יאפשרו את הניתוח המדויק של הפרוריטוגנים והalgogens. סטיבן ג. שימדע ורוברט ה. למוטה הצליחו לשנות את מדידות הכאב וההתנהגויות הקשורות בו באמצעות שינוי אתר ההזרקה מהצוואר ועד ללחי4. במודל הזרקת הלחי, קפסאיצין המושרה ניגוב, אבל לא התנהגויות גירוד, בעוד היסטמין, התחריטוגן, רק התנהגויות גירוד המושרה. לכן, מודל זה מאפשר הערכה עצמאית של גירוד וכאב, ביצוע הזרקת הלחי מודל שימושי למחקר גירוד. כאשר מנסים לקבוע אם חומר מבחן הוא מalgogen ו/או המודל, מודל זה מספק מידע רב יותר מאשר מודל הזרקת הצוואר. מאמר זה מתאר שיטה מעשית לביצוע זריקת הלחי ולספירת התקפי גירוד או ניגוב, ומציג את כלי השירות של שיטה זו להערכת התנהגויות גירוד הנובעות מחומצה ליזובית (LPA).

<table><tbody><tr><td>קפסאיצין</td><td>סיגמא</td><td>M2028</td><td></td></tr><tr><td>דיפנהידרמין הידרוכלוריד</td><td>Wako</td><td>044-19772</td><td></td></tr><tr><td>היסטמין</td><td>סיגמא</td><td>H7125</td><td></td></tr><tr><td>iMovie</td><td>תפוח</td><td></td><td></td></tr><tr><td>חומצה ליזופוספטית</td><td>אוונטי ליפידים קוטביים</td><td>325465-93-8</td><td></td></tr><tr><td>Myjector</td><td>Terumo</td><td>ss-05M2913</td><td></td></tr><tr><td>מצלמת וידאו Tween-80</td><td>Sigma</td><td>P4780</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Panasonic</td><td>VX985M</td><td></td></tr></tbody></table>

הזרקת הלחי מודל עבור מדידה בו של כאב התנהגויות הקשורות בגירוד

Cheek Injection Model for Simultaneous Measurement of Pain and Itch-related Behaviors

גירוד הוגדר כ"תחושה עורית לא נעימה העוררת את הרצון לשרוט" על ידי רוטמן ב-1941. בדגמי העכבר, התקפי שריטות נספרים בדרך כלל כדי להעריך את הגירוד המושרה על ידי מתיריגנים. עם זאת, הדיווחים הקודמים הראו כי חומרים האלגברית גם לגרום התנהגויות גירוד במודל הזרקת צוואר העכבר, שהוא הבדיקה הנפוצה ביותר המשמשת עבור התנהגויות גירוד. ממצא זה מקשה על לימוד הגירוד בעכברים.  לעומת זאת, קפסאיצין, algogen נפוץ, התנהגויות גירוד מופחת בכמה ניסויים בהזרקה בצוואר. לכן, השפעת הכאב על התנהגויות גירוד נותרת בלתי ברורה. לכן יש לפתח שיטה שתחקור בו את תחושת הגירוד והכאב באמצעות בדיקות התנהגותיות. כאן, מודל הזרקת הלחי הוא הציג אשר ניתן להשתמש בו זמנית למדוד כאב-והתנהגויות הקשורות בגירוד. במודל זה, הפרוטוקגנים לגרום התנהגויות גירוד בעוד חומרים האלגברית לגרום לנגב התנהגויות. באמצעות מודל זה, חומצה ליזוהודית (LPA), מגשר גירוד שנמצא בחולים כולסטטיים עם גירוד, מוצג באופן בלעדי לגרום גירוד אבל לא כאב. עם זאת, בדגמי העכבר, LPA דווחו להיות שניהם מalgogen. חקירת ההשפעות של LPA במודל הזרקת הלחי העכבר הראה כי LPA רק המושרה גירוד, אבל לא ניגוב התנהגויות. הדבר מעיד על כך ש-LPA פועל כפרוטוגן בדומה לעכברים ולבני אדם, ומדגים את כלי העזר של מודל הזרקת הלחי למחקר בגירוד.

במודל הזרקת הצוואר, היסטמין המושרה התנהגויות גירוד חזק (איור 3). רכב (7% רצף 80 ב מלוחים) גם המושרה התנהגויות גירוד. דו ח קודם הראה כי הגירוד אבקת הנגרמת על ידי היסטמין הפקה של keratinocytes8. רצף 80 יכול לגרום גירוד על ידי מנגנונים דומים, בעוד קפסאיצין מופחת התנהגויות גירוד הרכב, בניגוד לדו ח הקודם4. ייתכן שההבדלים במתח העכבר יוכלו להסביר את התוצאות השונות. ממצאים אלה מצביעים על כך שהשפעת הכאב על התנהגויות גירוד היא מסובכת. לכן, המדידה בו של כאב והתנהגויות הקשורות בגירוד עשוי לאפשר ניתוח מדויק של הפרוריטוגנים וalgogens. במודל הזרקת הלחי, קפסאיצין לא לגרום התנהגויות גירוד רק המושרה מנגב התנהגויות, אשר נחשבים להיות קשורים כאב9,10,11 (איור 4). הזרקת קפסאיצין גם מוגברת התנהגויות טיפוח (נתונים לא מוצגים). בעקבות הזרקה לתוך הלחי, היסטמין בעיקר הנגרמת התנהגויות גירוד עם התנהגויות מנגב חלש. היישום של האנטי היסטמין מגיב, diphenhydramine, גירוד מעכבות. תוצאה זו מצביעה על כך התנהגויות גירוד המושרה נגרמת על ידי פעולה של היסטמין על קולטני היסטמין. כאן, כדוגמה, ההשפעות של LPA במודל הזרקת הלחי מוצגים (איור 5). LPA הוא מגשר גירוד שנמצא בחולים כולסטטיים עם גירוד. עם זאת, בדגמי העכבר, lpa דווחה כפרוריטוגן וכalgogen12,13,14,15. לכן, ההשפעות של LPA נחקרו במודל הזרקת הלחי ותוצאות הראו כי LPA המושרה גירוד, אבל לא ניגוב התנהגויות. הדבר מעיד על כך ש-LPA הוא מתחמת, אך לא מalgogen, בעכברים הדומים לשפעותיו בבני אדם.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig3.jpg"> איור 3: ההשפעות של היסטמין ו קפסאיצין במודל הזרקת הצוואר. (א) התנהגויות גירוד הנגרמת על ידי הזרקת הרכב (7% רצף 80 ב מלוחים, לפתוח מרובע), היסטמין (50 μg/10 μl לכל אתר, מעגלים מלאים) או קפסאיצין ( 10 μg/10 μL לכל אתר, משולש פתוח; 40 μg/10 μL לכל אתר, משולש מלא) לתוך הצוואר העריכו כל 5 דקות בסך הכל 30 דקות. (ב) ניתוח כמותי של התנהגויות גירוד במהלך 30 דקות תקופה בלוח a. ∗ ∗P &amp;Lt; 0.01 על ידי אנובה ואחריו bonferroni תיקון. נתונים מוצגים כממוצע ± SEM (n = 6-8). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig4.jpg"> איור 4: ההשפעות של הפרוטיטוגן ו algogen במודל הזרקת הלחי. ניגוב (A) ו גירוד (ב) התנהגויות הנגרמת על ידי הזרקה של הרכב (7% רצף 80 ב מלוחים, לפתוח מרובע), היסטמין (50 Μg/10 μl לכל אתר, מעגלים מלאים) או קפסאיצין (40 Μg/10 μl לכל אתר, מלא משולש) לתוך הלחי הימנית של עכברים היו העריכו כל 5 דקות סך של 30 דקות. הקבוצה המוצגת כעיגולים פתוחים טופלה עם 10 μl של 2% (w/v) הידרוכלוריד מלח דיפנהידרמין (dhhcl) percutaneously 30 דקות לפני הזרקת היסטמין (50 μg/10 μl לכל אתר). DHHCl הומס בתמיסת מלח. ניתוח כמותי של התנהגויות הניגוב (C) וגרד (ד) במהלך התקופה השלושים דקות בחלוניות A ו-B; n = 8 בעלי חיים לכל קבוצה. ∗P &lt; 0.05, ∗ ∗P &lt; 0.01 על ידי ANOVA ואחריו תיקון bonferroni. נתונים מוצגים כממוצע ± SEM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58943/58943fig5.jpg"> איור 5: lpa מעוררת גירוד, אך לא ניגוב התנהגויות במודל הזרקת הלחי. שריטות (A) וניגוב (ב) התנהגויות הנגרמת על ידי הזרקה של הרכב (מלוחים, ריבועים פתוחים) או lpa (100 Nmol/10 μl לכל אתר, מעגלים מלאים) לתוך הלחי הימנית של עכברים העריכו כל 5 דקות בסכום כולל של 30 דקות. ניתוח כמותי של מגרד (C) ומנגב (ד) התנהגויות במהלך התקופה 30 דקות בחלוניות A ו-B; n = 17 עבור הרכב ו-n = 20 עבור LPA. ∗P &lt; 0.05, ∗ ∗P &lt; 0.01 על ידי מבחן t של וולש. נתונים מוצגים כממוצע ± SEM. דמות זו השתנתה מקיטקה ואח '5. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/58943fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Movie 1" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie1.jpg"> סרט 1: הסרט הדגמת איך לגלח את הלחי של העכבר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_1.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון וידאו זה. (לחץ לחיצה ימנית להורדה).</a>
<img alt="Movie 2" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie2.jpg"> סרט 2: הסרט להדגים את הזריקה לתוך הלחי של העכבר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_2.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון וידאו זה. (לחץ לחיצה ימנית להורדה).</a>
<img alt="Movie 3" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie3.jpg"> סרט 3: הסרט להפגין התנהגות אופיינית ניגוב. הסרט מוצג במהירות של 25%. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_3.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון וידאו זה. (לחץ לחיצה ימנית להורדה).</a>
<img alt="Movie 4" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie4.jpg"> סרט 4: סרט של התנהגות שריטות אופייני. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_4.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון וידאו זה. (לחץ לחיצה ימנית להורדה).</a>
<img alt="Movie 5" src="/files/ftp_upload/58943/58943movie5.jpg"> סרט 5: הסרט של התנהגות אופיינית לטפח. הסרט מוצג במהירות של 25%. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58943/Yamanoi_re-Rev._Movie_5.mp4" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בסרטון וידאו זה. (לחץ לחיצה ימנית להורדה).</a>

בדרך כלל, מודל הזרקת הצוואר של העכבר משמש להערכת התנהגויות שריטות הנובעות מהפרוריטוגן. עם זאת, המודל מספק מידע רק על גירוד, לא כאב. כאן, מודל הזרקת הלחי הוא הציג בעכברים אשר ניתן להשתמש בו זמנית למדוד כאב והתנהגויות הקשורות בגירוד.

Itch was defined as &#34;an unpleasant cutaneous sensation that provokes a desire to scratch&#34;&#160;by Rothman in 1941. In mouse models, scratch bouts ...

הנתונים שלנו מצביעים על כך שאלגוגנים מפחיתים התנהגויות גירוד, אך ההשפעה של קפסאיצין על התנהגויות גירוד עדיין אינה ברורה. לכן מדידה בו זמנית של כל כמות של כאב חשובים. השיטה המסורתית מספקת מידע רק לתחושות גירוד או כאב, אך מודל הזרקת הלחי מספק מידע על גירוד וכאב, בנפרד ובו זמנית.הזרקת הלחי יכולה להיות קשה בהתחלה, כפי שנדרש תרגול כדי להפלות את התנהגויות גירוד, ניגוב, וטיפוח. הדגמת וידאו של ההזרקה וניתוח התנהגותי יכול להיות מועיל עבור שליטה בטכניקות. לניסוי הזרקת לחיים, ביום שלפני ההערכה, לגלח את הפרווה על הלחי של כל עכבר עם קוצץ שיער, ולהוות מצלמת וידאו עם קצב פריימים של 30 עד 60 לשנייה על חצובה, בטמפרטורה, לחות, וסביבה מבוקרת קול.מניחים ארבעה כלובים מתחת למצלמה בכיוון המצוין, ומ מניחים מסכים בין כלוב כדי למנוע מהעכברים לראות זה את זה. יום אחד לאחר הגילוח, מניחים עכבר אחד בכלוב הקלטה למשך שעה כדי להתאקלם בבעלי החיים לתנאי ההקלטה. אם יש להשתמש בטיפול אקטואלי, יש למרוח אותו בשלב זה.בעוד בעלי החיים מסתגלים, לטעון את חומר הבדיקה של עניין לתוך מזרק אחד 0.5 מיליליטר מצויד מחט 29 או 30 מד לכל עכבר. בתום תקופת ההתאקלמות, התחל את הקלטת הווידאו לפני ההזרקה. ואז להזריק פתרון 10 microliter של חומר הבדיקה תוך אדמדם לתוך הלחי המגולח של החיה ערה.ואז להחזיר את העכברים מוזרק לכלובים שלהם ולהמשיך את הקלטת וידאו במשך 30 דקות. בסוף הניסוי, לטעון את הווידאו לתוך תוכנה מתאימה לעריכת וידאו. לספור בכל פעם עכבר מרים רגל אחורית לכיוון הלחי ושריטות מספר פעמים על אחד או כמה שניות לפני לשים את רגלם כמו התקף שריטה אחד.עכברים משתמשים בפלג יחיד לנגב, ושני הרגליים הקדמיות לטיפוח, אך רק התנהגויות ניגוב נספרות כהתנהגויות הקשורות לכאב. לניסוי הזרקת צוואר, יום אחד לפני הניסוי, לגלח את הפרווה על העורף של כל צוואר של עכבר עם קוצץ שיער. יום אחד לאחר הגילוח, להתאקלם את העכברים בכלובי ההקלטה במשך שעה אחת לפני הזרקת 10 microliters של חומר הבדיקה של עניין intradermally לתוך הצוואר המגולח, בתנאים ערים.החזירו את החיות המוזרקות לכלובי ההקלטה שלהן והקליטו את התנהגויות העכבר במשך 30 דקות. ואז לספור את התקפי גירוד על הצוואר וכל פנים ניגוב התנהגויות כפי שהוכח רק. במודל הזרקת הצוואר, היסטמין גורם התנהגויות גירוד חזקות, בעוד הרכב גורם גירוד קל.במודל הזרקת הלחי, קפסאיצין אינו גורם להתנהגויות גירוד, אלא גורם להתנהגויות ניגוב, שנחשבות קשורות לכאב. לאחר הזרקה לתוך הלחי, היסטמין בעיקר גורם התנהגויות גירוד עם התנהגויות ניגוב חלש. היישום של ריאגנט אנטי היסטמין מעכב גירוד, מה שמרמז כי התנהגויות גירוד הנגרמות על ידי היסטמין נגרמות על ידי התגובה של היסטמין על קולטני היסטמין.בניסוי זה, היישום של מתווך גירוד המושרה גירוד, אבל לא ניגוב התנהגויות, המציין כי המתווך נבדק פועל כמו pruritogen, אבל לא אלגוגן בעכברים, בדומה להשפעותיו בבני אדם. שיטה זו מאפשרת לתחושות גירוד וכאב להיות נבדלות בקלות ובבהירות עם הליך אחד. ניתוח התנהגות מפורט יכול להיעשות על ידי התמקדות או גירוד או תחושת כאב.התנהגויות גירוד וכאב תואמות תגובות שונות. גם טכניקות אלה אינן קשות. הזרקת הלחי והליך התצפית עשויים לאפשר לקבוצה שונים מעמיתי האימון שלנו לשלוט.אנו מעריכים את הצגת מודל הזרקת הלחי על ידי פרופסור לה-מוטה באוניברסיטת ייל.

cheek-injection-model-for-simultaneous-measurement-pain-itch-related

Research

JoVE Journal

Neuroscience

מדעי המוח

אלגוריתמים להערכת סף הכאב חום מכני בעור מודלק בניסוי של נבדקי המחקר האנושי מוצגים. שתי בדיקות פרדיגמות כאב באופן עצמאי לבחון עיבוד nociceptive ידי שני הגדולים היקפי סיב עצב שמשדר כאב אוכלוסיות, כלומר לא myelinated סיבי C ו-A קטן myelinated דלתא סיבים.

קביעת חום סף כאב מכני של העור מודלק בבני אדם

הארכה במשך הארוחה מייצגת התנהגות nociceptive orofacial מכרסמים דומים להתנהגות השמירה של בני אדם עם כאב orofacial. אכילה היא התנהגות שאינה דורשת הכשרה או מניפולציה בבעלי חיים, דורשת השתתפות קליפת המוח, ואינה מתחרה בהתנהגויות אחרות המושרות באופן ניסיוני, ומבדילה את ההסתעפות הזו מרפלקס חלופי או ממדידות אופרנטיות.

משך הארוחה כמדד לתגובות הנוצ'ית האורופציאליות במכרסמים

אוסטיאוארתריטיס (OA), או מחלת מפרקים ניוונית, הוא מצב מתישה הקשורים כאב נשאר רק מבוקרת חלקית משככי כאבים זמינים. במודלים של בעלי חיים מפותחים כדי לשפר את ההבנה שלנו של מנגנוני הכאב הקשורות OA. כאן אנו מתארים את המתודולוגיה מודל monoiodoacetate כאב OA בתוך העכבר.

מודל Monoiodoacetate של אוסטיאוארתריטיס כאב העכבר

תוך הזרקה של recombinase תלויה רקומביננטי adeno-הקשורים וירוס (rAAV) ניתן להשתמש כדי לטפל בכל סוג התא גנטית שכותרתה בחוט השדרה. כאן נתאר כיצד מגלי נוירונים ב הצופר הגבי של חוט השדרה המותני. טכניקה זו מאפשרת פונקציונלי חקירתו של המשנה נוירון מניפולציה.

הביטוי Adeno-הקשורים Transgene וירוס בתיווך בנוירונים מבחינה גנטית מוגדרים של חוט השדרה

יש פיתח מדד עורר של כאבי מפרקים ואנו יחד זה עם שיטה סטנדרטית למדידת ספונטנית קוץ מאתר מודלים שונים של דלקת מפרקים כימית המושרה. אמצעים אלה הם רגישים לשחזור עבור סוגים שונים של כאבי פרקים.

אמצעי ספונטנית עורר הכאב במודלים מאתר של כאבי ברכיים Monoarticular

בתנאי כאן הוא פרוטוקול המפרט צעדים כדי ליצור מודל חיה של כאב כרונית שלאחר איסכמיה (CPIP). זהו מודל מוכר היטב מחקה את האדם מורכבים האזור תסמונת הכאב סוג-I. היפרארגישויות מכני ותרמי הם הערכה נוספת, כמו גם קפסאיצין המושרה nocifensive תנהגויות נצפתה במודל עכברוש CPIP.

כרונית לאחר איסכמיה כאב מודל עבור מורכבות אזור תסמונת כאב הסוג-אני בחולדות

מחקר זה מתאר את השיטה של הזרקה תוך-מפרקית של מונו-יודואצטט בחולדות ודן בהתנהגויות הקשורות לכאב כתוצאה מכך ובשינויים היסטופתולוגיים, המספקים סימוכין ליישומים עתידיים.

מודל כאב אוסטאוארתריטיס המושרה על ידי הזרקה תוך-מפרקית של מונו-יודואצטט בחולדות

הבדיקה המכנית למניעת קונפליקטים משמשת כקריאה לא רפלקסיבית של רגישות לכאב בעכברים, שבה ניתן להשתמש כדי להבין טוב יותר תגובות רגשיות-מוטיבציוניות במגוון מודלים של כאב עכברים.

בדיקת הימנעות מקונפליקט מכני למדידת התנהגות כאב בעכברים

פרוטוקול זה מתאר את ההערכה של רגישות יתר מכנית במודל חולדה של כאב אורופציאלי נוירופתי באמצעות מכשיר הערכת כאב אורופציאלי מבוסס אופרנט.

הערכה של רגישות יתר מכנית הנגרמת על ידי פגיעה עצבית בחולדות באמצעות בדיקת כאב אופרנטית אורופציאלית

כאן, אנו מציגים מודל כאב דלקתי שונה עם הזרקת קרגינן שתי כפות אחוריות כדי להעריך את אפקט משכך הכאבים.

מודל כאב דלקתי שונה כדי ללמוד את אפקט משכך כאבים בעכברים

למדו את מודל הזרקת הלחי בעכברים למדידה בו-זמנית של כאב וגירוד. שיטה זו מאפשרת הבחנה ברורה בין התנהגויות הקשורות לכאב ולגירוד במחקר נוירולוגי.

הזרקת הלחי מודל עבור מדידה בו של כאב התנהגויות הקשורות בגירוד

גלה סרטונים נוספים