Name: מערכת אינדוקציה מקובצים באשכולות הפיוניות על ידי סוכר פתרון טבילה טיפול בשתילי תודרנית לבנה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-15T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 32 s
Description: למד אינדוקציה של פיונות באשכולות בזרעי Arabidopsis thaliana באמצעות מדיום סוכר. שיטה זו מאפשרת תצפית בכלורופלסטים ומיקרוטובולים בתאי שמירה במיקרוסקופיית לייזר קונפוקלית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

אנו מודים על פרופסור Seiichiro Hasezawa בשל תמיכתו סוג העבודה שלנו. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מן האגודה יפן KAKENHgrant של קידום המדע (JSPS) מספרים 17K 19380, 18 H. 05492, מקרן מענק לפרויקטים מחקר מדעי בסיסי Sumitomo להעניק מספר 160146, ואת קרן Canon תוצרת הארץ מערכת ניסויית זו פותחה תחת התמיכה הכספית של המספר JSPS KAKENHgrant 26891006 ק. א אנו מודים רובי לואיס, MSc, מקבוצת Edanz (www.edanzediting.com/ac) עבור עריכת טיוטה של כתב היד.

1. הכנת 3% סוכרוז המכילה 1/2 Murashige-Skoog בינוני פתרון
<ol><li>להוסיף 1.1 גרם של מלחי בינוני Murashige-Skoog ו- 15 גר' סוכרוז גביע.</li>
	<li>מוסיפים 490 מ ל מים מזוקקים ומערבבים היטב בעזרת בר מערבבים.</li>
	<li>להתאים את ה-pH ל 5.8 באמצעות קו.</li>
	<li>לדלל עד 500 מ"ל מים מזוקקים ולהעביר את הפתרון לתוך בקבוק בינוני.</li>
	<li>לחטא את הפתרון על-ידי autoclaving (121 מעלות צלזיוס, 20 דקות). אם לא משתמשים מיד, פתרון זה נשמרות ב 4 ° C לאחר עיקור.</li>
</ol>2. אינדוקציה של הפיוניות באשכולות מאת המכילים סוכרוז טיפול טבילה פתרון בינוני
<ol><li>לחטא את הזרעים.<ol>
<li>להכין את הפתרון עיקור על-ידי הוספת µL 500 של 5% כלור פעיל פתרון NaClO µL 1 של 10% טריטון X-100 ל 500 µL במים סטריליים.</li>
		<li>מקום ca. 50 הטרנסגניים זרעים לבנה א נושא סמן פלורסנט כגון CT-GFP11 -GFP-TUB612 לתוך צינור 1.5-mL.</li>
		<li>להוסיף 1 מ"ל של 70% אתנול פתרון, לערבב היטב על ידי היפוך חמש פעמים. יוצאים 1 דקות.</li>
		<li>הזרעים ישקעו לתחתית הצינור. על ספסל נקי, בעדינות להסיר האתנול 70% שימוש של micropipette, וכן להוסיף 1 מ"ל של עיקור פתרון. מערבבים היטב בעזרת היפוך חמש פעמים ולהשאיר למשך 5 דקות.</li>
		<li>לשטוף את הזרעים. עדיין עובד בתנאים aseptic על ספסל נקי, בעדינות להסיר הפתרון באמצעות של micropipette, וכן להוסיף 1 מ"ל של מים סטריליים. חזור על שלב זה חמש פעמים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להוסיף 1.5 מ של סטיריליים 3% סוכרוז המכילה 1/2 Murashige-Skoog בינוני פתרון כל טוב של צלחת 24-טוב על ספסל נקי.</li>
	<li>להוסיף שני זרעים סטיריליים כל טוב. סרט הדבקה המכסה על צלחת 24-ובכן באמצעות שתי שכבות של מצלמות-מיקרוסקופים.</li>
	<li>להעביר את הצלחת. ובכן 24 סדרה קאמרית הצמיחה ב 23.5 ° C עם מחזור בהירה-כהה 12-h/12-ה באמצעות 100 µmol מ'−2 s− 1 לבן אור, תקופת דגירה של 14 ימים.</li>
</ol>3. מיקרוסקופיים התבוננות הפיוניות באשכולות
<ol><li>מקום 30 µL של 3% המכילים סוכרוז 1/2 Murashige-Skoog בינוני פתרון מהבאר של צלחת 24-ובכן במרכז זכוכית (גודל: 76 × 26 מ מ, עובי: 1.0-1.2 מ מ).</li>
	<li>להסיר cotyledon של שתיל בת 14 יום באמצעות מספריים ויבתר. לצוף על cotyledon עם הצד תצפית כלפי מעלה על המסירה פתרון.</li>
	<li>הכינו את הדגימה cotyledon על פי השיטה הקודמת שלנו13. בעיקרו של דבר, במקום 30 µL של הפתרון על המרכז של כיסוי זכוכית (גודל: 18 × 18 מ מ, עובי: 0.12-0.17 מ מ). הפוך את הזכוכית המכסה ומניחים אותו על cotyledon בעדינות. . תנגב את מאגר עודף באמצעות רקמה נטולת מוך.</li>
	<li>להגדיר טיפוס על הבמה של מיקרוסקופ לייזר קונפוקלי ובחר באשכולות תאי המשמר להשגחה באמצעות תאורה שדה בהיר.</li>
	<li>לרכוש תמונות קונאפוקלית של מבנים תאיים fluorescently עם תוויות ברורות על פי הוראות היצרן מיקרוסקופ.</li>
</ol>

<ol><li>Raschke, K., Fellows, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stomatal+movement+in+Zea+mays%3A+shuttle+of+potassium+and+chloride+between+guard+cells+and+subsidiary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Planta%22%5BJournal%5D)">Stomatal movement in Zea mays: shuttle of potassium and chloride between guard cells and subsidiary cells.</a> Planta. 101 (4), 296-316 (1971).</li>
<li>Higaki, T., Hashimoto-Sugimoto, M., Akita, K., Iba, K., Hasezawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+and+environmental+responses+of+PATROL1+in+Arabidopsis+subsidiary+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+and+Cell+Physiology%22%5BJournal%5D)">Dynamics and environmental responses of PATROL1 in Arabidopsis subsidiary cells.</a> Plant and Cell Physiology. 55 (4), 773-780 (2013).</li>
<li>Bergmann, D. C., Sack, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stomatal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">Stomatal development.</a> Annual Review of Plant Biology. 58, 163-181 (2007).</li>
<li>Pillitteri, L. J., Torii, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+stomatal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Plant+Biology%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of stomatal development.</a> Annual Review of Plant Biology. 63, 591-614 (2012).</li>
<li>Sakai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chemical+compound+bubblin+induces+stomatal+mispatterning+in+Arabidopsis+by+disrupting+the+intrinsic+polarity+of+stomatal+lineage+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The chemical compound bubblin induces stomatal mispatterning in Arabidopsis by disrupting the intrinsic polarity of stomatal lineage cells.</a> Development. 144 (3), 499-506 (2017).</li>
<li>Akita, K., Hasezawa, S., Higaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+of+plant+stomatal+one-cell-spacing+rule+by+sugar+solution+immersion%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+One%22%5BJournal%5D)">Breaking of plant stomatal one-cell-spacing rule by sugar solution immersion.</a> PLOS One. 8 (9), 72456(2013).</li>
<li>Chen, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Arabidopsis+callose+synthase+gene+GSL8+is+required+for+cytokinesis+and+cell+patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiology%22%5BJournal%5D)">The Arabidopsis callose synthase gene GSL8 is required for cytokinesis and cell patterning.</a> Plant Physiology. 150 (1), 105-113 (2009).</li>
<li>Guseman, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysregulation+of+cell-to-cell+connectivity+and+stomatal+patterning+by+loss-of-function+mutation+in+Arabidopsis+chorus+%28glucan+synthase-like+8%29%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Dysregulation of cell-to-cell connectivity and stomatal patterning by loss-of-function mutation in Arabidopsis chorus (glucan synthase-like 8).</a> Development. 137 (10), 1731-1741 (2010).</li>
<li>Akita, K., Hasezawa, S., Higaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+microtubules+and+fusicoccin+response+in+clustered+stomatal+guard+cells+induced+by+sucrose+solution+immersion%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Signaling+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Cortical microtubules and fusicoccin response in clustered stomatal guard cells induced by sucrose solution immersion.</a> Plant Signaling and Behavior. 13 (4), 1454815(2018).</li>
<li>Akita, K., Hasezawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sugar+solution+induces+clustered+lips%5BTitle%5D)+AND+%22Cytologia%22%5BJournal%5D)">Sugar solution induces clustered lips.</a> Cytologia. 79 (2), 125-126 (2014).</li>
<li>Holzinger, A., Buchner, O., Lütz, C., Hanson, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-sensitive+formation+of+chloroplast+protrusions+and+stromules+in+mesophyll+cells+of+Arabidopsis+thaliana%5BTitle%5D)+AND+%22Protoplasma%22%5BJournal%5D)">Temperature-sensitive formation of chloroplast protrusions and stromules in mesophyll cells of Arabidopsis thaliana.</a> Protoplasma. 230 (1-2), 23-30 (2007).</li>
<li>Abe, T., Hashimoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+microtubule+dynamics+by+expression+of+modified+%CE%B1-tubulin+protein+causes+right-handed+helical+growth+in+transgenic+Arabidopsis+plants%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Journal%22%5BJournal%5D)">Altered microtubule dynamics by expression of modified α-tubulin protein causes right-handed helical growth in transgenic Arabidopsis plants.</a> The Plant Journal. 43 (2), 191-204 (2005).</li>
<li>Higaki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+plant+cell+surface+dynamics+with+variable-angle+epifluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of plant cell surface dynamics with variable-angle epifluorescence microscopy.</a> Journal of Visualized Experiments. (106), 53437(2015).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

הוצגו פרוטוקולים עבור אינדוקציה של הפיוניות באשכולות בשתילי לבנה א על ידי טיפול טבילה עם פתרון בינוני המכילים סוכרוז. כמוצג להלן, שיטה זו היא פשוטה מאוד ולא דורש שום מיומנות מיוחדת אבל יכול לגרום ביעילות הפיוניות באשכולות. יותר מ- 45% תאי המשמר מקובצים עם 3% סוכרוז המכילות בינוני פתרון (כלומר ערכים של יותר מ- 20 תצפיות עצמאיות)6. יתר על כן, מערכת ניסויית זו ניתן ישירות להחיל שורות הטרנסגניים או מוטציה כמוצג לקווים הטרנסגניים CT-GFP (איור 1) או GFP-TUB6 (<stro...

סטומה רפואית הצמח הוא איבר חיוני עבור חילוף הגזים על פוטוסינתזה ועל דיות, תנועה stomatal מושגת על ידי שינויים משמעותיים בתאי המשמר דרך ספיגת מונחה יון ושחרור של מים. תחת מיקרוסקופ, ניתן להבחין דפוס הפצה במרווחים של הפיוניות של משטחי העלים והגבעולים. הפיזור במרווחים של הפיוניות נחשב כדי לעזור stomatal, תנועה מוסדר על ידי חילופי יון ומים בין תאי המשמר גובלות תאים אפידרמיס1,2. מערכות אינדוקציה ניסיוני הפיוניות באשכולות שימושיים חוקרים את החשיבות של ההתפלגות במרווחים של הפיוניות.
בעבר דווח כי קיבוץ באשכולות המרחבי של הפיוניות יכולה להיגרם על ידי שינוי גנטי של גנים מרכזיים משמר תא בידול3,4 או טיפול עם תרכובת כימית5. אנחנו גם דיווח כי טיפול טבילה עם פתרון בינוני בתוספת סוכרים כולל סוכרוז, גלוקוז, פרוקטוז גרם stomatal קיבוץ באשכולות בפסיגי הזרע של תודרנית לבנה שתילים6. Callose מופחת בקירות התא החדש הפרדת meristemoids תאים אפידרמיס נצפתה האפידרמיס cotyledon שטופלו סוכרוז, רומז כי סוכרוז פתרון טבילה טיפול משפיעה באופן שלילי על דופן התא, המונע את בריחת ו פעולה חוץ רחמי של ג'ין מפתח מוצרים עבור השומר תאית התמיינות (למשל גורמי שעתוק) לכיוון סמוכים עוריות תאים6. מנגנון דומה הוצע ממחקרים על gsl8/chor מוטציות7,8. מערכת הניסוי שלנו עבור אינדוקציה לשחזור של הפיוניות באשכולות באמצעות פתרון בינוני המכילים סוכרוז הוא די קל וזול. זה יכול לשמש גם כדי לחקור מבנים תאיים כגון organelles, את שלד התא בתאי המשמר באשכולות כאשר חל על קווים הטרנסגניים לבטא פלורסנט סמני את תווית מבנים תאיים9, 10.

<table><tbody><tr><td>צלחת 24 בארות</td><td>סומיטומו בקליט</td><td>MS-0824R</td><td></td></tr><tr><td>488 ננומטר לייזר</td><td>פורוקאווה דנקו</td><td>HPU-50101-PFS2</td><td></td></tr><tr><td>488 ננומטר לייזר</td><td>אולימפוס</td><td>ספיר 488-20/O</td><td></td></tr><tr><td>510 ננומטר מסנן מעבר ארוך</td><td>אולימפוס</td><td>BA510IF</td><td></td></tr><tr><td>524 - 546 ננומטר מסנן מעבר פס</td><td>Semrock</td><td>FF01-535/22-25</td><td></td></tr><tr><td>530 ננומטר מעבר קצר מסנן</td><td>אולימפוס</td><td>BA530RIF</td><td></td></tr><tr><td>561 ננומטר לייזר</td><td>CVI Melles Griot</td><td>85-YCA-025-040</td><td></td></tr><tr><td>604 - 644 ננומטר מסנן מעבר פס</td><td>Semrock</td><td>FF01-624/40-25</td><td></td></tr><tr><td>ראש סריקת לייזר קונפוקלי</td><td>Yokogawa</td><td>CSU10</td><td></td></tr><tr><td>ראש סריקת לייזר קונפוקלי</td><td>אולימפוס</td><td>FV300</td><td></td></tr><tr><td>מצלמת CCD מקוררת</td><td>פוטומטריה</td><td>תוכנת רכישת תמונות CoolSNAP HQ2</td><td></td></tr><tr><td></td><td>מכשירים מולקולריים</td><td>MetaMorph גרסה 7.8.2.0</td><td></td></tr><tr><td>תוכנה לרכישת תמונות</td><td>Olympus</td><td>FLUOVIEW v5.0</td><td></td></tr><tr><td>שמן טבילה</td><td>שמן טבילה אולימפוס</td><td>Type-F</td><td>ne = 1.518 (23 מעלות)</td></tr><tr><td>מיקרוסקופ הפוך</td><td>אולימפוס</td><td>IX-70</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ הפוך</td><td>אולימפוס</td><td>IX-71</td><td></td></tr><tr><td>תערובת מלח צמחי Murashige ו-Skoog</td><td>FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation</td><td>392-00591</td><td>Murashige T and Skoog F (1962) מדיום מתוקן לצמיחה מהירה ובדיקות ביולוגיות עם תרביות רקמת טבק. פיזיולוגיה פלנטרום 15(3), 473-497.</td></tr><tr><td>עדשת אובייקטיב&nbsp;</td><td>אולימפוס</td><td>UPlanApo 100x / 1.35 NA קשתית שמן 1.35</td><td>NA = 1.35</td></tr><tr><td>עדשת אובייקטיבי&nbsp;</td><td>אולימפוס</td><td>UPlanAPO 40x / 0.85 NA</td><td>NA = 0.85</td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation</td><td>196-00015</td><td></td></tr></tbody></table>

מערכת אינדוקציה מקובצים באשכולות הפיוניות על ידי סוכר פתרון טבילה טיפול בשתילי תודרנית לבנה

An Induction System for Clustered Stomata by Sugar Solution Immersion Treatment in Arabidopsis thaliana Seedlings

התנועה stomatal שמתווכת חילוף הגזים צמח, אשר חיוני פוטוסינתזה ועל דיות. פתיחה וסגירה stomatal מוכשרות על ידי עלייה משמעותית או להקטין את נפח התאים משמר, בהתאמה. בגלל הסעה של יונים, מים מתרחשת בין משמר תאים גדול יותר התאים באפידרמיס הסמוכים במהלך התנועה stomatal, התפלגות במרווחים של הפיוניות הצמח נחשב של התפלגות אופטימלית עבור התנועה stomatal. מערכות ניסיוני perturbing התבנית במרווחים של הפיוניות שימושיים לבחון את המשמעות של התבנית המרווח. זוהו מספר גנים מרכזיים המשויכת להתפלגות stomatal במרווחים, הפיוניות clustered יכולה להיגרם השפעול על ידי שינוי גנים אלה. לחלופין, הפיוניות clustered יכולה גם להיגרם על ידי טיפולים אקסוגני ללא שינוי גנטי. במאמר זה נתאר מערכת אינדוקציה פשוטה עבור הפיוניות באשכולות בשתילי תודרנית לבנה על ידי טיפול טבילה עם פתרון בינוני המכילים סוכרוז. השיטה שלנו היא קלה, ישירות החלים על קווים הטרנסגניים או מוטציה. מהכלורופלסט גדול מוצגים כמו סימן היכר התא הביולוגי של סוכרוז-induced תאי המשמר באשכולות. בנוסף, תמונת הנציגה מיקרוסקופיים קונאפוקלית של microtubules קורטיקלית מוצג בתור דוגמה של התבוננות תאיים תאי המשמר באשכולות. בכיוון רדיאלי microtubules קורטיקלית נשמרת בתאי המשמר באשכולות כמו תאי המשמר במרווחים בתנאי בקרה.

. הנה, הוצגו הפרוטוקול עבור שיטה פשוטה של גרימת קיבוץ באשכולות stomatal המכילים סוכרוז פתרון בינוני ב לבנה א שתילים. תאי המשמר באשכולות גדלו ב פתרון בינוני המכילים סוכרוז (איור 1B) יש מהכלורופלסט גדול יותר מאשר תאי המשמר גדל בתנאי בקרה ללא סוכרוז (איור 1א'). ההגדלה של מהכלורופלסט אושר עם CT-GFP11, סמן משתית כלורופלסט, כלורופיל autofluorescence (<strong class="xfig...

המטרה של פרוטוקול זה היא כדי להדגים כיצד לגרום הפיוניות באשכולות בפסיגי הזרע של שתילים תודרנית לבנה על ידי טיפול טבילה עם פתרון בינוני המכילים סוכר וכיצד להתבונן מבנים תאיים כגון מהכלורופלסט microtubules בתאי המשמר באשכולות באמצעות קונאפוקלית לייזר מיקרוסקופ.

Stomatal movement mediates plant gas exchange, which is essential for photosynthesis and transpiration. Stomatal opening and closing are accomplished by a ...

שיטה זו ענתה על שאלת מפתח של ביולוגיה התפתחותית של הצמח. כלומר, מה החשיבות של הפצה מרחבית של stomata? מערכת אינדוקציה שלנו עבור stomata מקובצים באמצעות פתרון סוכרוז הוא די קל וישים ישירות קווים מהופנטים או מוטציה של ערבידופסיס thaliana.כדי להתחיל, להוסיף 1.1 גרם של מלחים בינוניים Murashige-Skoog ו 15 גרם של סוכרוז לסק. מוסיפים 490 מיליליטר של מים מזוקקים לבקבוק ומערבבים עם בר הערבוב. השתמש אשלגן הידרוקסידי כדי להתאים את ה- pH ל 5.8.לאחר מכן לדלל את הפתרון עם 500 מיליליטר של מים מזוקקים ולהעביר את הפתרון מדולל לבקבוק בינוני. לאחר מכן, תסגור אוטומטית את הפתרון. הכן את פתרון הסטריליזציה בהתאם לפרוטוקול הטקסט.לאחר מכן, עובדים בתנאים אספטיים, מניחים כ -50 זרעי A.thaliana מהוססים הנושאים סמן פלואורסצנטי לתוך צינור 1.5 מיליליטר. לאחר מכן מוסיפים מיליליטר אחד של 70% אתנול לצינור ומערבבים על ידי היפוך הצינור חמש פעמים. לאחר מתן הזרעים לשקוע לתחתית הצינור, בעדינות להסיר את האתנול עם micropipette.מוסיפים מיליליטר אחד של פתרון עיקור לזרעים והפוך את הצינור חמש פעמים כדי לערבב. בעדינות להסיר את פתרון עיקור מן הזרעים עם micropipette. לאחר מכן מוסיפים מיליליטר אחד של מים סטריליים.הוסף 1.5 מיליליטר של פתרון Murashige-Skoog לכל באר של צלחת 24 באר. לאחר מכן מוסיפים שני זרעים מעוקרים לכל באר. באמצעות שתי שכבות של פרפילם, תדביק את המכסה לצלחת.לאחר מכן, להעביר את הצלחת לתא צמיחה כדי דגירה במשך 14 ימים. ראשית, להעביר 30 microliters של פתרון Murashige-Skoog מצלחת 24 באר למרכז מגלשת זכוכית. באמצעות ניתוח מספריים, הסר את הקוטילדון משנייה בת 14 יום.לצוף הקוטילדון עם צד התצפית פונה כלפי מעלה על טיפת פתרון Murashige-Skoog. הכן את הקוטילדון על פי השיטות שתוארו בעבר בכתב העת של ניסויים חזותיים. שים את הדגימה על הבמה של מיקרוסקופ לייזר קונפוקלי.לבסוף, השתמש בתאורה של שדה בהיר כדי לבחור תאי מגן מקובצים באשכולות לתצפית. בפרוטוקול זה, אשכולות stomatal היה המושרה שתילים A.thaliana. תאי השמירה המקובצים באשכולות הגדלים בסוקרט המכילים מדיום בעל כלורופלסטים גדולים יותר מאשר תאי שמירה הגדלים בתנאים נטולי סוכרוז.הגדלה של כלורופלסטים אושרה עם סמן כלורופלסט סטרומה ושפעת אוטומטית כלורופיל, מה שמרמז כי טיפול סוכרוז הביא הצטברות תבואה עמילן בכלורופלסטים. בנוסף, תצפית קונפוקאלית של אמבט GFP-6 גילתה כי המיקרוטובולים קליפת המוח היו מכוונים באופן רדיאלי בתאים שטופלו בסוקורוז, בדיוק כמו בתאי השמירה נטולי סוכרוז. למעשה גילינו את השיטה הזו בטעות.לאחר הממצא, בדקנו את התגובה הסביבתית של stomata מקובצים. אנחנו מאמינים שהמערכת שלנו יכולה לעזור לבחון את המשמעות של התפלגות הסטומטה.

an-induction-system-for-clustered-stomata-sugar-solution-immersion

Research

JoVE Journal

Environment

סביבה

אנו מציגים את ההליך כדי להרכיב assay זרע מצעי מעיל (SCBA) מזרעי thaliana ארבידופסיס. SCBA הוצג להיות כלי רב עוצמה כדי לחקור מבחינה גנטית ובמבחנה כיצד נביטת זרעי פקדי האנדוספרם בזרעים רדומים ובתגובה לאותות אור. SCBA הוא בעיקרון ישים בכל מצב שבו האנדוספרם חשוד להשפיע על צמיחה עוברית.

מעיל זרע מצעים Assay לחקור גנטי<em&gt; במבחנה</em&gt; כיצד נביטת זרעי בקרת האנדוספרם ב<em&gt; Thaliana ארבידופסיס</em

איתות 2 + Ca מסדירה תהליכים ביולוגיים מגוונים בצמחים. כאן אנו מציגים גישות לניטור לחץ אביוטי המושרה Ca מרחב ובזמן 2 + אותות בתאי ארבידופסיס ורקמות באמצעות Ca 2 + אינדיקטורים מקודד גנטי Aequorin או Case12.

מדידת מרחב ובזמן Ca 2 + אותות בצמחים ארבידופסיס

מערכת השראת השורש הרוחבי (LRIS) מאפשרת אינדוקציה סינכרונית של שורשים לרוחב ומוצגת עבור Arabidopsis thaliana ותירס.

מערכת עין מתנהל שורש לרוחב ב<em&gt; ארבידופסיס</em&gt; ותירס

מאמר זה מתאר את השיטות לסינון גני השליטה חדירה plasmodesmal ומכאן שיפוע אוקסין במהלך התגובה טרופית. זה כולל מדידת מידת התגובה הטרופית ב hypocotyl   של ארבידופסיס thaliana ובדיקת חדירות plasmodesmal ידי טעינת חומצה 8-hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonic (HPTS) ולבסוף הערכת רמת callose.

אסטרטגיה כדי לאמת את התפקיד של Gating Plasmodesmal בתיווך Callose במענה חוג

פרוטוקול זה מתאר שיטת התבוננות מופרה ב תודרנית באמצעות סיווג ביצית ואחריו את הבדיקה של היווצרות תבנית העובר תחת מיקרוסקופ.

שיטת אפיון מופרה ב תודרנית

מכונת העמסה עדינה של כוח מגע בנויה ממברשות שיער אנושיות, זרועות רובוטיות ובקר. מברשות השיער מונעים על ידי זרועות רובוטיות המותקנות במחשב ולנוע מעת לעת כדי להחיל כוח מגע על צמחים. החוזק של נגיעות שיער מונחה מכונה דומה לזה של נגיעות שהוחלו ידנית.

שמירת עבודה והמשך המגע הכוח איתות פרוטוקול המסך מוטציה למחקר של Thigmomorphogenesis של צמח המודל Arabidopsis thaliana

כאן, אנו מתארים את הדור, יישום של קבוצת הטרנסגניים תודרנית לבנה קווי המאפשרת ביטוי inducible, רקמות ספציפיות את meristems הראשי שלוש, את meristem apical לירות, meristem apical את שורש ו את cambium.

Inducible, תאים ייחודיים לסוג ביטוי תודרנית לבנה בתיווך דרך LhGR טרנס-הפעלה

אנו מספקים שיטה לזיהוי מודולים של דיות שקרנים על ידי הקרנת בקנה מידה גדול של ספריה מורכבת.

זיהוי של הרגולטורים הרומן של דיות צמח על ידי הקרנת הדמיה תרמית בקנה מידה גדול בהליוציץ השנתי

פרוטוקול הכניסה למיקרוסקופיה של הכוח האטומי מציע את האפשרות לנתח את תפקיד התכונות הפיזיקליות של דופן התא של תא מסוים ברקמה או באיבר במהלך גדילה רגילה או מוגבלת (כלומר, תחת גירעון מים).

מיקרוסקופיית כוח אטומי לחקר התכונות הפיזיקליות של תאי אפידרמיס של שורשי ערבידופסיס חיים

מאמר זה מתאר שתי שיטות פנוטיפ ללא שימוש בקליפות אפידרמיס כדי לאפיין את הגנים השולטים בהתפתחות הסטומטלית. השיטה הראשונה מדגימה כיצד לנתח פנוטיפ סטומטלי באמצעות אפידרמיס צמחי מוכתם O כחול טולוידין. השיטה השנייה מתארת כיצד לזהות ליגנדות סטומטיות ולנטר את פעילותן הביולוגית.

זיהוי הגנים המעורבים בהתפתחות סטומאטלית באמצעות ניקוד פנוטיפ אפידרמלי

כאן, אנו מציגים שיטה פשוטה לתצפית ישירה ומדידה אוטומטית של תגובות סטומאטליות לפלישת חיידקים ב - Arabidopsis thaliana. שיטה זו ממנפת מכשיר הדמיה סטומטלי נייד, יחד עם צינור ניתוח תמונה המיועד לתמונות עלים שצולמו על ידי המכשיר.

תצפית ישירה ומדידה אוטומטית של תגובות סטומאטליות למזרקי Pseudomonas PV . עגבניה DC3000 ב Arabidopsis thaliana

למד אינדוקציה של פיונות באשכולות בזרעי Arabidopsis thaliana באמצעות מדיום סוכר. שיטה זו מאפשרת תצפית בכלורופלסטים ומיקרוטובולים בתאי שמירה במיקרוסקופיית לייזר קונפוקלית.

מערכת אינדוקציה מקובצים באשכולות הפיוניות על ידי סוכר פתרון טבילה טיפול בשתילי תודרנית לבנה

גלה סרטונים נוספים