מערכת אינדוקציה מקובצים באשכולות הפיוניות על ידי סוכר פתרון טבילה טיפול בשתילי תודרנית לבנה

שיטה זו ענתה על שאלת מפתח של ביולוגיה התפתחותית של הצמח. כלומר, מה החשיבות של הפצה מרחבית של stomata? מערכת אינדוקציה שלנו עבור stomata מקובצים באמצעות פתרון סוכרוז הוא די קל וישים ישירות קווים מהופנטים או מוטציה של ערבידופסיס thaliana.

כדי להתחיל, להוסיף 1.1 גרם של מלחים בינוניים Murashige-Skoog ו 15 גרם של סוכרוז לסק. מוסיפים 490 מיליליטר של מים מזוקקים לבקבוק ומערבבים עם בר הערבוב. השתמש אשלגן הידרוקסידי כדי להתאים את ה- pH ל 5.8.

לאחר מכן לדלל את הפתרון עם 500 מיליליטר של מים מזוקקים ולהעביר את הפתרון מדולל לבקבוק בינוני. לאחר מכן, תסגור אוטומטית את הפתרון. הכן את פתרון הסטריליזציה בהתאם לפרוטוקול הטקסט.

לאחר מכן, עובדים בתנאים אספטיים, מניחים כ -50 זרעי A.thaliana מהוססים הנושאים סמן פלואורסצנטי לתוך צינור 1.5 מיליליטר. לאחר מכן מוסיפים מיליליטר אחד של 70% אתנול לצינור ומערבבים על ידי היפוך הצינור חמש פעמים. לאחר מתן הזרעים לשקוע לתחתית הצינור, בעדינות להסיר את האתנול עם micropipette.

מוסיפים מיליליטר אחד של פתרון עיקור לזרעים והפוך את הצינור חמש פעמים כדי לערבב. בעדינות להסיר את פתרון עיקור מן הזרעים עם micropipette. לאחר מכן מוסיפים מיליליטר אחד של מים סטריליים.

הוסף 1.5 מיליליטר של פתרון Murashige-Skoog לכל באר של צלחת 24 באר. לאחר מכן מוסיפים שני זרעים מעוקרים לכל באר. באמצעות שתי שכבות של פרפילם, תדביק את המכסה לצלחת.

לאחר מכן, להעביר את הצלחת לתא צמיחה כדי דגירה במשך 14 ימים. ראשית, להעביר 30 microliters של פתרון Murashige-Skoog מצלחת 24 באר למרכז מגלשת זכוכית. באמצעות ניתוח מספריים, הסר את הקוטילדון משנייה בת 14 יום.

לצוף הקוטילדון עם צד התצפית פונה כלפי מעלה על טיפת פתרון Murashige-Skoog. הכן את הקוטילדון על פי השיטות שתוארו בעבר בכתב העת של ניסויים חזותיים. שים את הדגימה על הבמה של מיקרוסקופ לייזר קונפוקלי.

לבסוף, השתמש בתאורה של שדה בהיר כדי לבחור תאי מגן מקובצים באשכולות לתצפית. בפרוטוקול זה, אשכולות stomatal היה המושרה שתילים A.thaliana. תאי השמירה המקובצים באשכולות הגדלים בסוקרט המכילים מדיום בעל כלורופלסטים גדולים יותר מאשר תאי שמירה הגדלים בתנאים נטולי סוכרוז.

הגדלה של כלורופלסטים אושרה עם סמן כלורופלסט סטרומה ושפעת אוטומטית כלורופיל, מה שמרמז כי טיפול סוכרוז הביא הצטברות תבואה עמילן בכלורופלסטים. בנוסף, תצפית קונפוקאלית של אמבט GFP-6 גילתה כי המיקרוטובולים קליפת המוח היו מכוונים באופן רדיאלי בתאים שטופלו בסוקורוז, בדיוק כמו בתאי השמירה נטולי סוכרוז. למעשה גילינו את השיטה הזו בטעות.

לאחר הממצא, בדקנו את התגובה הסביבתית של stomata מקובצים. אנחנו מאמינים שהמערכת שלנו יכולה לעזור לבחון את המשמעות של התפלגות הסטומטה.