Name: זיהוי נוגדן Anti-aquaporin-4 G בנסיוב אדם על ידי Assay מבוססת-תא (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-05T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 45 s
Description: למדו לזהות נוגדן Anti-aquaporin-4 IgG בדם באמצעות שיטת מבחן מבוססת-תא. שיטה זו מציעה רגישות וספציפיות גבוהות לאבחון הפרעות ספקטרום נוירומיאליטיס אופטיקה.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים מודים על התמיכה של מענקים מן הלאומי למדע קרן של סין (מספר 31600820), בריאות, ועדת תכנון משפחה של ג'ילין המחוז (לא 2016Q036), ו המדע טכנולוגיה תכנון הפרוייקט של ג'ילין (מס ' 20180520110JH).

פרוצדורה זו אושרה על ידי ועדת האתיקה של אוניברסיטת בית החולים הראשון של ג'ילין ובוצע על נושאים כ-1,500.
1. החולה הרשמה ואוסף דגימת דם
<ol><li>להחיל את הגילוי מעבדה של סרום שאנטי-AQP4 IgG לחולים clinic עם צ'יף תלונות ותסמינים המפורטים להלן. לבצע בדיקות גופניות כמו גם. לדלקת בעצה הראייה: חולים סובלים עם גירעונות חזותיים, כגון אובדן של שדות חזותיים וצמצום של חדות הראייה. דלקת חוט השדרה חריפה: חולים יכול להציג עם שיתוק, גירעונות החושים חוסר תפקוד אוטונומי. תסמונת postrema אזור: חולים ייתכן הסימפטומים של שיהוקים בלתי מוסברים, בחילות או הקאות. תסמונת גזע המוח חריפה: נגעים גזע המוח עלול לגרום תסמינים שונים וסימנים פיזית בהתאם למיקום של נגעים. Narcolepsy סימפטומטי או תסמונת קלינית diencephalic חריפה עם נגעים MRI diencephalic NMOSD טיפוסי. תסמונת מוחית סימפטומטי עם נגעים במוח NMOSD טיפוסי. הערה: על-פי הקריטריונים לאבחון קונצנזוס בינלאומי עבור NMOSD5, אבחנה של NMOSD יכול להתבצע אם המטופל סרום אנטי-AQP4 IgG חיובי ויש לפחות אחד מהמאפיינים הקליניים הליבה שהוזכרו לעיל. עם זאת, לא מומלץ בדיקה של אנטי-AQP4 IgG בחולים עם לדלקת בעצה הראייה בלבד.</li>
	<li>
איסוף דגימת דם הערה: חולים אין צורך להיות בצום.<ol>
<li>לצייר 2-3 מ"ל של דם ורידי בשפופרת איסוף דם ואקום 4 מ"ל.</li>
		<li>לאפשר את הנסיוב להיקרש למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר (RT). הערה: קרישת ממושך יכול להגביר רמות בסרום עקב דליפה של טסיות דם.</li>
		<li>צנטריפוגה ב 2100 x g עבור 5 דק להעביר בזהירות את הנסיוב צינור חדש.</li>
		<li>לנתח את הנסיוב מיד או aliquot ולאחסן ב-20 או-80 מעלות צלזיוס. הערה: אחסון ב-20 ° C נמצא עבור אחסון של חודשים, בעוד-80 ° C הוא עבור אחסון של שנים.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. זיהוי נוגדנים anti-AQP4
התראה: ערכת בשימוש ריאגנטים ודוגמאות החולה צריך להיחשב חומרים זיהומיות. ריאגנטים המכילות אזיד הנתרן בערכה רעילים. תרשים זרימה של הפרוטוקול מסופק באיור1.
<ol><li>
הכנה
	<ol>
<li>להביא את הקיט RT לפני השימוש. הערה: אחסן את הקיט ב 2-8 ° c</li>
		<li>להכין לפחות 200 מ של PBS שטיפת מאגר המכיל 0.2% Tween 20. שופכים 100 מ של שטיפת מאגר לתוך גביע 500 מ"ל.</li>
		<li>שתדללו הנסיוב דגימות x 10 עם שטיפת מאגר. הכינו את הפקדים חיוביים ושליליים על פי ההוראות של המפיץ.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
לדוגמה דגירה
	<ol>
<li>להוסיף 30 µL של דגימות מראש מדולל, בקרה חיובית או שלילית שליטה שדות תגובה של המגש ריאגנט (איור 2). הערה: להימנע בועות אוויר.</li>
		<li>הסר את מכסה מגן בשקופיות ביו-שבב. הערה: אל תגעו את biochips כדי למנוע את הניתוק וזיהום של תאים קבוע. החזק את השקופית side-by-side לפני הסרת המכסה.</li>
		<li>להחיל את השקופית ביו-שבב על המגש ריאגנט (איור 2). מתחיל אינקובציה של 30 דקות ב- RT. הערה: כל המדגם צריך להיות droplet בודדים מחובר ביו-שבב התואם ללא ערבוב עם טיפות אחרות.</li>
		<li>לשטוף בעדינות את השקופית ביו-שבב פעם אחת עם מאגר לשטוף. לטבול את השקופית ביו-שבב לתוך 500 מ"ל. הספל מלא עם 100 מ של שטיפת המאגר עבור פחות 5 דק. המקום הספל על מטרף במידת האפשר.</li>
		<li>להוציא את השקופית ביו-שבב מתוך המאגר לשטוף. בזהירות לנגב המאגר לשארי שטיפת מחוץ השדות התגובה עם מגבת נייר. לחשוף את השקופית ביו-שבב באוויר הפתוח למשך 1-2 דקות מתמוססות המאגר לשארי שטיפת על המגרש התגובה. הערה: לא לייבש את השדות התגובה. אל תגעו biochips על מגבת נייר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
נוגדנים משניים דגירה
	<ol>
<li>להכין את הפתרון נוגדן משני לפי ההוראות של המפיץ.</li>
		<li>להוסיף 25 µL של פלורסנט נוגדן משני השדות התגובה של מגש ריאגנט נקי.</li>
		<li>השקופית ביו-שבב חלות על המגש ריאגנט נטען עם נוגדנים משניים. תקופת דגירה של 30 דקות ב- RT.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
הרכבה
	<ol>
<li>שופכים המאגר שטיפת בשימוש, להוסיף 100 מ של מאגר טריים לשטוף הספל. לחזור על השטיפה כפי שתואר בשלבים 2.2.4 ו 2.2.5.</li>
		<li>להוסיף בזהירות בינוני ההטבעה השדות התגובה בשקופית ביו-שבב (טיפה אחת לכל שדה התגובה). חותם את השקופית ביו-שבב עם חתיכה אחת של כיסוי זכוכית. להימנע בועות אוויר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
זיהוי קרינה פלואורסצנטית
	<ol>
<li>הפעל את נורה פלואורסצנטית של מיקרוסקופ וחום מראש עבור 15 דק ' בחירה ' 488 ננומטר מסנן.</li>
		<li>תוכנת הצילום פתוח. צלם תמונות מאזורים transfected והן untransfected של כל השדות התגובה עם רמות הגדלה שונות. ראשית, תמונה אחת עם 4 x הגדלה לקבלת סקירה ולאחר מכן לצלם תמונות נוספות עם 10 x ו- 20 x הגדלה. הערה: פרוטוקול מפורט מוצג בטבלה 1. פרשנות של התוצאות נדון במקטע תוצאות נציג.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. אבחון של חולים
<ol><li>אם החולה אינו סרום אנטי-AQP4 IgG חיובי מראה מאפיין קליני אחד לפחות של הליבה של NMOSD (ראה סעיף לדיון), לאבחן את החולה NMSOD5. עם זאת, אם החולה אינו אנטי-AQP4 IgG שלילי, אבחנה של NMOSD אין אפשרות שלא לכלול.</li>
</ol>

<ol><li>Zekeridou, A., Lennon, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 autoimmunity.</a> Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 2 (4), 110(2015).</li>
<li>Ho, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crystal+structure+of+human+aquaporin+4+at+1.8+A+and+its+mechanism+of+conductance%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Crystal structure of human aquaporin 4 at 1.8 A and its mechanism of conductance.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (18), 7437-7442 (2009).</li>
<li>Takeshita, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+neuromyelitis+optica-IgG+at+the+blood-brain+barrier+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22in+vitro.Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Effects of neuromyelitis optica-IgG at the blood-brain barrier in vitro.</a> in vitro.Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (1), 311(2016).</li>
<li>Sato, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinction+between+MOG+antibody-positive+and+AQP4+antibody-positive+NMO+spectrum+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Distinction between MOG antibody-positive and AQP4 antibody-positive NMO spectrum disorders.</a> Neurology. 82 (6), 474-481 (2014).</li>
<li>Wingerchuk, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+consensus+diagnostic+criteria+for+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">International consensus diagnostic criteria for neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Neurology. 85 (2), 177-189 (2015).</li>
<li>Ruiz-Gaviria, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specificity+and+sensitivity+of+aquaporin+4+antibody+detection+tests+in+patients+with+neuromyelitis+optica%3A+A+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+and+Related+Disorders%22%5BJournal%5D)">Specificity and sensitivity of aquaporin 4 antibody detection tests in patients with neuromyelitis optica: A meta-analysis.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 4 (4), 345-349 (2015).</li>
<li>Waters, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicentre+comparison+of+a+diagnostic+assay%3A+aquaporin-4+antibodies+in+neuromyelitis+optica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%2C+Neurosurgery%2C+and+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Multicentre comparison of a diagnostic assay: aquaporin-4 antibodies in neuromyelitis optica.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 87 (9), 1005-1015 (2016).</li>
<li>Fryer, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AQP4+autoantibody+assay+performance+in+clinical+laboratory+service%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">AQP4 autoantibody assay performance in clinical laboratory service.</a> Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 1 (1), 11(2014).</li>
<li>Long, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+antibody+in+neuromyelitis+optica%3A+re-testing+study+in+a+large+population+from+China%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 antibody in neuromyelitis optica: re-testing study in a large population from China.</a> The International Journal of Neuroscience. 127 (9), 790-799 (2017).</li>
<li>Pisani, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+autoantibodies+in+Neuromyelitis+Optica%3A+AQP4+isoform-dependent+sensitivity+and+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 autoantibodies in Neuromyelitis Optica: AQP4 isoform-dependent sensitivity and specificity.</a> PloS One. 8 (11), 79185(2013).</li>
<li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+antibody+testing%3A+direct+comparison+of+M1-AQP4-DNA-transfected+cells+with+leaky+scanning+versus+M23-AQP4-DNA-transfected+cells+as+antigenic+substrate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 antibody testing: direct comparison of M1-AQP4-DNA-transfected cells with leaky scanning versus M23-AQP4-DNA-transfected cells as antigenic substrate.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 129(2014).</li>
<li>Juryńczyk, M., Craner, M., Palace, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overlapping+CNS+inflammatory+diseases%3A+differentiating+features+of+NMO+and+MS%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%2C+Neurosurgery%2C+and+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Overlapping CNS inflammatory diseases: differentiating features of NMO and MS.</a> Journal of Neurology, Neurosurgery, and Psychiatry. 86 (1), 20-25 (2015).</li>
<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Features+of+Patients+with+Multiple+Sclerosis+and+Neuromyelitis+Optica+Spectrum+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Clinical Features of Patients with Multiple Sclerosis and Neuromyelitis Optica Spectrum Disorders.</a> Chinese Medical Journal. 129 (17), 2079-2084 (2016).</li>
<li>Majed, M., Fryer, J. P., McKeon, A., Lennon, V. A., Pittock, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+utility+of+testing+AQP4-IgG+in+CSF%3A+Guidance+for+physicians%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Clinical utility of testing AQP4-IgG in CSF: Guidance for physicians.</a> Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 3 (3), 231(2016).</li>
<li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebrospinal+fluid+antibodies+to+aquaporin-4+in+neuromyelitis+optica+and+related+disorders%3A+frequency%2C+origin%2C+and+diagnostic+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Cerebrospinal fluid antibodies to aquaporin-4 in neuromyelitis optica and related disorders: frequency, origin, and diagnostic relevance.</a> Journal of Neuroinflammation. 7, 52(2010).</li>
<li>Asgari, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+the+leptomeningeal+blood+barrier+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Disruption of the leptomeningeal blood barrier in neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (4), 343(2017).</li>
<li>Kim, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MRI+characteristics+of+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder%3A+an+international+update%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">MRI characteristics of neuromyelitis optica spectrum disorder: an international update.</a> Neurology. 84 (11), 1165-1173 (2015).</li>
<li>Jarius, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MOG+encephalomyelitis%3A+international+recommendations+on+diagnosis+and+antibody+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">MOG encephalomyelitis: international recommendations on diagnosis and antibody testing.</a> Journal of Neuroinflammation. 15 (1), 134(2018).</li>
<li>Narayan, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MOG+antibody+disease%3A+A+review+of+MOG+antibody+seropositive+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+and+Related+Disorders%22%5BJournal%5D)">MOG antibody disease: A review of MOG antibody seropositive neuromyelitis optica spectrum disorder.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 25, 66-72 (2018).</li>
<li>Ogawa, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MOG+antibody-positive%2C+benign%2C+unilateral%2C+cerebral+cortical+encephalitis+with+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">MOG antibody-positive, benign, unilateral, cerebral cortical encephalitis with epilepsy.</a> Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 322(2017).</li>
<li>Valentino, P., Marnetto, F., Granieri, L., Capobianco, M., Bertolotto, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+antibody+titration+in+NMO+patients+treated+with+rituximab%3A+A+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology+Neuroimmunology+%26+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 antibody titration in NMO patients treated with rituximab: A retrospective study.</a> Neurology Neuroimmunology & Neuroinflammation. 4 (2), 317(2016).</li>
<li>Kessler, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-aquaporin-4+titer+is+not+predictive+of+disease+course+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder%3A+A+multicenter+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis+and+Related+Disorders%22%5BJournal%5D)">Anti-aquaporin-4 titer is not predictive of disease course in neuromyelitis optica spectrum disorder: A multicenter cohort study.</a> Multiple Sclerosis and Related Disorders. 17, 198-201 (2017).</li>
<li>Mealy, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin-4+serostatus+does+not+predict+response+to+immunotherapy+in+neuromyelitis+optica+spectrum+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Multiple+Sclerosis%22%5BJournal%5D)">Aquaporin-4 serostatus does not predict response to immunotherapy in neuromyelitis optica spectrum disorders.</a> Multiple Sclerosis. , (2017).</li>
<li>Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+aquaporin-4+antibodies+in+Chinese+patients+with+neuromyelitis+optica%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The role of aquaporin-4 antibodies in Chinese patients with neuromyelitis optica.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 20 (1), 94-98 (2013).</li>
<li>Kitley, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prognostic+factors+and+disease+course+in+aquaporin-4+antibody-positive+patients+with+neuromyelitis+optica+spectrum+disorder+from+the+United+Kingdom+and+Japan%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Prognostic factors and disease course in aquaporin-4 antibody-positive patients with neuromyelitis optica spectrum disorder from the United Kingdom and Japan.</a> Brain. 135 (6), 1834-1849 (2012).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

תארנו שיטה נגישים נרחב לזהות anti-AQP4 IgG בנסיוב אדם. Anti-AQP4 אג קשורה קשר הדוק NMOSD, הקמת שיטת זיהוי אמין anti-AQP4 IgG חיונית לאבחון קליני של NMOSD. ראשית, anti-AQP4 IgG הוא ספציפי NMOSD. טרשת נפוצה היא גם מחלה בתיווך החיסונית של מערכת העצבים המרכזית ומניות קווי דמיון רבים עם NMOSD12. עם זאת, anti-AQP4 IgG הוא רק חיובי NMOSD13. שנית, anti-AQP4 IgG נפוצה בקרב חולי NMOSD. בערך שני שליש מהחולים NMOSD הם סרום אנטי-AQP4 IgG חיובי4. שלישית, הקריטריונ...

אג AQP4 סרום הוא סמן אבחון הליבה עבור neuromyelitis אופטיקה ספקטרום הפרעות (NMOSD)1. וזמינותו מבוססת-תא (כקבוצת) היא שיטה לזיהוי IgG נגד שימוש נרחב-AQP4 עם רגישות גבוהה. . הנה, עבור כקבוצת פרוטוקול מפורט הוא הציג.
AQP4, חלבון ערוץ מים, יש שש יחידות משתרע על-פני קרום ונקבוביות שני תחומים לוליינית סביב אחד מימית2. Anti-AQP4 אג מעורב בפתוגנזה של NMOSD באמצעות קשירה המטרה שלו, AQP4, הנמצא בעיקר על endfeet של האסטרוציטים3. הוכח כי אנטי-AQP4 IgG הוא חיובי כ שני שלישים של חולים NMOSD4. האחרונה הבינלאומי הקריטריונים לאבחון NMOSD, אנטי-AQP4 IgG נחשב להיות סמן אבחון הליבה5. בהקשר זה, חשוב מאוד ליצור פרוטוקול אמין כדי לזהות בנסיוב אדם אנטי-AQP4 IgG וכדי להקל על אבחנה קלינית של NMOSD.
כיום, שיטות שונות של זיהוי IgG anti-AQP4 הינם זמינים, כגון כקבוצת, המבוסס על רקמות assay, מקושרים-אנזים immunosorbent assay לזרום cytometry6,7. כקבוצת מעסיקה EU90 תאים, אשר הם transfected עם AQP4 האנושי, כדי ללכוד אנטי-AQP4 IgG. IgG שנתפסו anti-AQP4 זוהה על ידי נוגדנים משניים פלורסנט, לאחר מכן דמיינו ידי מיקרוסקופ. לצבירת ראיות הראו כי כקבוצת הוא רגיש וספציפי יותר מאשר אחרים אנטי-AQP4 IgG זיהוי שיטות6,7. על פי מטא אנליזה, רגישות וסגוליות של כקבוצת הוכחו להיות 76% ו- 99%, אשר היו גבוהים יותר מאשר מבוסס-רקמות, מבחני מקושרים-אנזים immunosorbent6. יתר על כן, השוואה multicenter של מבחני אבחון של אנטי-AQP4 IgG היה מתנהל7. סך של 193 לימוד הנושאים מ 15 מרכזי אבחון אירופה היו נרשם7. ארבע שיטות שונות נוצלו לזהות סרום אנטי-AQP4 IgG7. הוכח כי כקבוצת היה רגיש וספציפי יותר מאשר אחרים שיטות7. כפי AQP4 מבוטאת שני איזופורמים הגדולות (AQP4-M1 ו- AQP4-M23), אנטי-AQP4 IgG ללכוד תא transfected עם AQP4-M1 או AQP4-M23. אולם, איזה סוג של תא לכידה היא במחלוקת יותר שרידים. חקירה אחד תמך AQP4-M1 מבוסס כקבוצת8, בעוד אחרים הראו כי AQP4-M23 מבוסס כקבוצת הוא7,טוב יותר9,10. עם זאת, AQP4-M23 מבוססי כקבוצת תניב תוצאות חיוביות כוזבות עקב IgG לא ספציפי האיגוד8. Jarius ואח. 11 דיווחו כי היה הבדל משמעותי בשיעורי זיהוי IgG anti-AQP4 בין AQP4-M1 ו- CBAs AQP4-M23 מבוססי.
בסיכום, סרום אנטי-AQP4 IgG הוא סמן הליבה עבור NMOSD. כקבוצת יש ירידה לפרטים ורגישות גבוהה יותר מאשר שיטות זיהוי IgG אחרות אנטי-AQP4. זה נשאר שנוי במחלוקת אם AQP4-M1 או AQP4-M23-מבוסס - כקבוצת עדיף. במאמר זה, עבור כקבוצת AQP4-M1 מבוססי פרוטוקול מפורט מתואר, אשר ניתן להחיל על אבחנה קלינית ולימודים של NMOSD.

<table><tbody><tr><td>Anti-aquaporin-4 IIFT</td><td>Euroimmun</td><td>FA 1128-2005-50</td><td>מכיל שקופיות שבב ביולוגיות מצופות בתאי AQP4-M1 EU 90 שהועברו ואינם מועברים, IgG אנטי אנושי עם תווית פלואורסצאין, נוגדן נגד AQP4 כבקרה חיובית, דגימת נוגדנים שלילית, מלח ל-PBS pH 7.2, Tween 20 ומדיום הטבעה.</td></tr><tr><td>CellSens Dimension</td><td>OLYMPUS</td><td>N/A</td><td>תוכנת צילום</td></tr><tr><td>ג'ל & צינור מפעיל קרישים</td><td>שפר 623040202 רפואי</td><td></td><td>מחברה סינית מקומית</td></tr></tbody></table>

זיהוי נוגדן anti-aquaporin-4 g בנסיוב אדם על ידי assay מבוססת-תא

Human Serum Anti-aquaporin-4 Immunoglobulin G Detection by Cell-based Assay

נוגדן אנטי-aquaporin-4 (AQP4) G (IgG) הוא סמן אבחון הליבה עבור הפרעות הספקטרום אופטיקה neuromyelitis (NMOSD). הבדיקה מבוססת-תא (כקבוצת) היא שיטה בשימוש נרחב כדי לזהות anti-AQP4 IgG בסרום אדם עם רגישות גבוהה. בקצרה, סרום אנטי-AQP4 IgG הוא נלכד על ידי תא AQP4 transfected נעוצות על ביו-שבב אז זוהה על ידי נוגדנים משניים מתויג fluorescein. קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ הוא מנוצל כדי להמחיש את פלורסצנטיות, עוצמת קרינה פלואורסצנטית מוערך על-ידי קלינאים מנוסים לפחות שני. אבחנה סופית של NMOSD יכול להתבצע מבוסס על השילוב של אנטי-AQP4 IgG תוצאות איתור, הביטויים הקליניים ואת הממצאים neuroradiological. על פי מחקרים קודמים, כקבוצת הוא רגיש יותר ספציפית יותר שיטות זיהוי IgG אחרות אנטי-AQP4, ניתן להחיל אותה אבחנה קלינית והן מחקרים של NMOSD. השיטה יש מגבלות; לדוגמה, עדיין מידה בינלאומי כדי להעריך סרום אנטי-AQP4 IgG titers לוקה בחסר. . הנה, פרוטוקול מפורט לגילוי בנסיוב אדם אנטי-AQP4 IgG באמצעות כקבוצת מתואר.

באמצעות ההליך המתואר כאן, anti-AQP4 ספציפיים IgG בסרום הוא לזיהוי. במהלך ההליך, נוספו דגימות מראש מדולל פקד חיובי, שלילי פקד לשדה התגובה, המכילים אזורים transfected ו untransfected (איור 2). זריחה של הפקד שלילי באזור transfected הצביעו בעיקר על הכריכה לא ספציפי של נוגדנים משניים לתאי transfected biochips (איור 3). זריחה homogeneously חלש היה גלוי (איור 3). עבור הפקד חיובית, נוגדן anti-AQP4 נוסף לשדה ...

Assay מבוססת תא היא שיטה בשימוש נרחב כדי לזהות סרום אנטי-aquaporin-4 אימונוגלובולין G... יכול להיות מיושם בשיטה זו אבחנה קלינית, מחקרים מדעיים של הפרעות ספקטרום אופטי neuromyelitis.

זיהוי נוגדן Anti-aquaporin-4 G בנסיוב אדם על ידי Assay מבוססת-תא

Anti-aquaporin-4 (AQP4) immunoglobulin G (IgG) is the core diagnostic biomarker for neuromyelitis optica spectrum disorders (NMOSD). The cell-based assay ...

על פי קריטריוני האבחון הבינלאומיים האחרונים להפרעות ספקטרום נוירומייליטיס אופטיקה, אנטי AQP4 IgG נחשב סמן ביולוגי אבחון הליבה. זיהוי IgG נגד AQP4 על ידי בדיקה מבוססת תאים יכול להקל על אבחון קליני. לכן, בדיקה מבוססת תאים היא רגישה וספ ספציפית יותר משיטות זיהוי אחרות.וזה יכול להיות מיושם הן על אבחון קליני והן על המחקרים המדעיים. ראשית, הביאו את דגימות הסרום של המטופל, את מגלשת הביוצ'פ, את אבקת ה-PBS ואת ה-TWEEN 20 ערכת ההתמדה המבוססת על תאים בקירור לטמפרטורת החדר. לאחר מכן, להכין יותר מ 200 מיליליטר של מאגר לשטוף PBS המכיל 0.2 אחוז TWEEN 20 עבור כל שקופית biochip.השתמש במאגר הכביסה כדי לבצע דילול טורי של פי 10 מכל דגימת סרום. הכן פקדים חיוביים ושליליים בהתאם להוראות היצרן. הוסף 30 מיקרוליטרים של דילול סדרתי של המדגם, השליטה החיובית והבקרה השלילית, לחמישה שדות תגובה בודדים במגש ריאגנט.החזק את החלקת הביוצ'יק על ידי השקופיות שלה ולהסיר את כיסוי המגן שלה מבלי לגעת בשדות התגובה שלה. מניחים את השקופית על גבי מגש הריג'נט ו דגירה ההתקנה בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות. יש לשטוף בעדינות את מגלשת הביו-שבב עם חיץ הכביסה.ואז לטבול אותו בתוך מקור 500 מיליליטר מלא 100 מיליליטר של חיץ לשטוף, ולהשאיר אותו בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. מוציאים את מגלשת השבבים ממאגר הכביסה. השתמש במגבת נייר כדי למחוק בזהירות כל חיץ שנותר מחוץ לשדות התגובה.תן להחליק אוויר יבש למשך שעה עד שתי דקות. בחדר החשוך, הוסיפו 25 מיקרוליטרים של נוגדנים משניים פלואורסצנטיים לכל שדה תגובה של מגש ריאגנט. מניחים את השקופית על גבי מגש הריג'נט ו דגירה ההתקנה בטמפרטורת החדר במשך 30 דקות.יש לשטוף בעדינות את מגלשת הביו-שבב עם חיץ הכביסה. ואז לטבול אותו בתוך מקור 500 מיליליטר מלא 100 מיליליטר של חיץ לשטוף טרי, ולהשאיר אותו בטמפרטורת החדר במשך 10 דקות. מוציאים את מגלשת השבבים ממאגר הכביסה.השתמש במגבת נייר כדי למחוק בזהירות כל חיץ שנותר מחוץ לשדות התגובה. תן להחליק אוויר יבש למשך שעה עד שתי דקות. בזהירות להוסיף טיפה אחת של המדיום הטבעה לכל שדה תגובה על שקופית biochip.לבסוף, לאטום את החלקת biochip עם כיסוי תוך הימנעות בועות אוויר ולהמשיך עם הדמיה. עוצמת הפלואורסצנטיות החלשה של השליטה השלילית שנצפתה באזור הנגוע מצביעה על הכריכה הלא ספציפית של הנוגדן המשני. ההשוואה בין התעצמויות הפלואורסצנטיות שזוהו של השליטה החיובית באזורים הנגועים והבלתי נגועים מצביעה על הכריכה הספציפית של האנטי-AQP4 IgG ל- AQP4M1 בתאים הנגועים.הסרום השלילי נגד AQP4 IgG מראה דפוסי קשירה דומים לשליטה השלילית באזורים נגועים ולא נגועים. הנסיוב החיובי מראה דפוסי קשירה הדומים לשליטה החיובית באזורים נגועים ולא נגועים. דגימות נחשבות אנטי AQP4 IgG חיובי כאשר פלואורסצנטיות מגדילה הטרוגנית באזור הנגוע.עוצמת הפלואורסצנטיות מתואמת לטיטר אנטי AQP4 IgG בסרום. דגימות נחשבות כנראה חיוביות כאשר רק מספר קטן של תאים באזור המהורהר מראים שפעת פלואורסצנטיות הניתנת לגילוי. יש להתייחס לדגימה כשלילית נגד AQP4 IgG כאשר עוצמתה באזור הנגוע חזקה רק באופן הומוגני מאשר באזור הלא נגוע.הימנעות בועות אוויר הוא חיוני וקשה. כדי למנוע בועות אוויר, תחילה להשתמש פיפטה כדי למנוע בועות אוויר טיפות. שנית, בעת החלת שקופית הביו-שבב על מגש הריג'נט, תחילה תן לצד אחד של השקופית לגעת ב טיפות ולאחר מכן החלק את השקופית לאט.בנוסף, אל תיגע בשדות התגובה לאורך כל הניסוי.

human-serum-anti-aquaporin-4-immunoglobulin-g-detection-cell-based

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

סרטון זה מדגים את האינטראקציה ההידרופובית המבוססת על כרומטוגרפיה נוזלית של צימוד נוגדנים-תרופות. באמצעות עמודת כרומטוגרפיה מבוססת ליגנד בוטיל (butyl ligand), הצמידות בין נוגדנים לתרופות מאופיינות באמצעות אינטראקציות הידרופוביות עם הליגנד.

אינטראקציה הידרופובית תלוית בוטיל כרומטוגרפיה נוזלית: טכניקה לאפיון הצמדות נוגדנים-תרופות בהתבסס על אינטראקציות הידרופוביות

סרטון זה מתאר טכניקת בדיקה חיסונית באמצעות חרוזים מגנטיים פלואורסצנטיים או מיקרוספרות בשילוב עם אנטיגנים שונים כדי לזהות בו זמנית איזוטיפים שונים של נוגדנים בדגימת סרום. הבדיקה מועילה בהבנת המרת סרוקונפורמציה במהלך זיהום או לאחר חיסון.

Multianalyte Immunobead Assay: טכניקת Immunoassay מבוססת זרימה לזיהוי בו-זמני של תת-סוגים מרובים של נוגדנים בדגימת סרום אנושי

הסרטון מדגים בדיקה מבוססת תאים לזיהוי אימונוגלובולין G נגד אקוופורין-4 באמצעות שבב ביולוגי המכיל תאים לא נגועים ותאים נגועים המבטאים אקוופורין-4. שיטה זו יש יישומים באבחון הפרעות ספקטרום neuromyelitis optica, אושר על ידי פלואורסצנטיות ירוקה חזקה על השבב.

בדיקה לזיהוי סרום אנטי אקוופורין-4 אימונוגלובולין G

הסרטון מדגים אימונואסייה מבוססת נייר, הכוללת דיסקיות תאית מתפקדות אמין המקושרות זו לזו עם גלוטראלדהיד. אימוביליזציה קוולנטית של נוגדני לכידה ספציפיים ל- IgG-Fc, ואחריה הכנסת אימונוגלובולין G ונוגדני זיהוי מצומדים של פרוקסידאז חזרת, גורמת לשינוי צבע המאשר את נוכחותו של אימונוגלובולין G.

בדיקה חיסונית מבוססת נייר לזיהוי אימונוגלובולין G

במהלך השנים האחרונות, מבחני מבוססי תאים חיים כבר השתמשו בהצלחה כדי לזהות נוגדנים כנגד פני השטח ואנטיגנים קונפורמציה. כאן, אנו מתארים שיטה באמצעות זרימת cytometry תפוקה גבוהה המאפשר הניתוח של קבוצות גדולות של חולים. זיהוי של נוגדני רומן ישפר את האבחון וטיפול בהפרעות חיסונית בתיווך.

Assay המבוסס תא זרימת cytometry תפוקה גבוהה לזיהוי נוגדנים לN-מתיל-D-aspartate קולטן דופמין או-2 קולטן בסרום אדם

כאן אנו מתארים שני מבחני למדידת הפעלת משלימים הנגרמת על ידי נוגדנים כנגד תאי דם אדומים. היתרון הגדול על פני מבחני הנוכחיים הוא מטבעם כמוני וקל לפרש.

שיטות כמותיות לאיתור של הפעלת משלים-Induced נוגדן בתאי דם אדומים

מאמר זה מתאר שיטה microarray חלבון עבור פרופיל החיסונית ההורמונאלית, התגובות פאנל 7-ה-plex של מאוד מטוהרים Clostridium difficile אנטיגנים של sera אנושי. ניתן להאריך את הפרוטוקול מצפני תגובות נוגדנים ספציפיים בהכנות של ורידי polyclonal.

שיטת Microarray לקביעת סרולוגית לזיהום Clostridium difficile נוגדן התגובות הבאות אנטיגן ספציפי

כאן אנו מציגים שיטה cytometry זרימה מבוססת תא לזהות נוגדנים נטרול או גורמים אחרים להפריע קליטת סלולר הנובעים מהשימוש בתחליפי האנזים במטריצה אנושי, כגון לנוזל חוט השדרה (CSF) או בנסיוב אדם.

זיהוי נוגדנים המנטרלים את קליטת סלולר הנובעים מהשימוש בתחליפי האנזים עם Assay מבוססת-תא

שיטת BSelex כדי לזהות ולשחזר נוגדנים ספציפיים אנטיגן ספציפי של הדם היקפיים היקפי תאים מונמונומנט משלבת הזרימה cy, לנסות עם תא בודד PCR ו שיבוט.

שיטת הקרנה של תא בודד לבחירת ושחזור של נוגדנים עם הצורך הרצוי מתוך זיכרון אנושי מועשר B אוכלוסיות תאים

אנו מציגים פרוטוקול לשימוש מיקרוarray חלבון שנבנה על ידי הדפסת אנטיגנים שפעת על ניטרוצלולוזה מצופה שקופיות בו סרום בדיקה עבור נוגדנים מרובים isotypes נגד מעל 250 אנטיגנים מפני זנים וירוסים שונים, ובכך המאפשר מדידה של רוחב של נוגדנים סרום ברחבי תת וירוס.

שימוש של מיקרוarray אנטיגן שפעת כדי למדוד את היקף של נוגדנים סרום ברחבי תת וירוס

למדו לזהות נוגדן Anti-aquaporin-4 IgG בדם באמצעות שיטת מבחן מבוססת-תא. שיטה זו מציעה רגישות וספציפיות גבוהות לאבחון הפרעות ספקטרום נוירומיאליטיס אופטיקה.

זיהוי נוגדן Anti-aquaporin-4 G בנסיוב אדם על ידי Assay מבוססת-תא

גלה סרטונים נוספים