אמצעי ספונטנית עורר הכאב במודלים מאתר של כאבי ברכיים Monoarticular
February 22nd, 2019
יש פיתח מדד עורר של כאבי מפרקים ואנו יחד זה עם שיטה סטנדרטית למדידת ספונטנית קוץ מאתר מודלים שונים של דלקת מפרקים כימית המושרה. אמצעים אלה הם רגישים לשחזור עבור סוגים שונים של כאבי פרקים.
מדידת הכאב במודלים פרה-קליניים של דלקת פרקים היא קשה, אך היא חיונית להערכת טיפולים רגנרטיביים ומדכאי כאבים. הפרוטוקול שלנו רגיש ובלתי ניתן לשחזור למדידת התנהגויות כאב מעוררות וספונטניות. וזה פשוט וזול יחסית.
דלקת פרקים היא התורמת הגדולה ביותר לנכות, וכאב הוא הגורם העיקרי לנכות. הטיפול בדלקת פרקים אינו מספיק כרגע. מודלים פרה-קליניים הם חלק חשוב בפיתוח הטיפול.
הדגימו את ההליך הזה יהיו כריסטופר דורמן, טכנאי, וסנדרה פריזל, מדענית צוות מהמעבדה שלי. כדי למנוע את המחט מלהיות מוכנס עמוק מדי ולצאת מהמפרק האחורי, לכסות מחט נקודה 5 אינץ ' עם נדן של צינורות פוליאתילן עד רק 2.5 מילימטרים של המחט לבוט מתוך נדן. לאחר מכן, לגלח את הפרווה מן הברך של העכבר הרדמה להיות מוזרק, ולעקר את העור החשוף עם קרצוף יוד povidone.
ואז להכניס את המחט נדן לתוך המפרק בקו האמצע דרך גיד patellar רק נחות לקצה התחתון של פתלה, ולהזריק את החומר של עניין. לפני הערכת כאבי המפרקים המעוררים, השתמש ברמה 4 של אורך כדי לתרגל החלת שבעה מאות כוחות גרם בסנטימטר בריבוע של לחץ עקבי ומוצק. המכשיר יהיה לפלוח 4 צפצופים כאשר רמת הלחץ המתאימה מוחלת.
כאשר הלחץ המתאים יכול להיות מיושם באופן אמין, לקשקש את העכבר בצוואר עם האצבע המורה והאגודל בחוזקה מספיק כדי למנוע תנועה מזדמנים. ולהשתמש באצבעות הרביעית והחמישית כדי לרסן את הזנב. העכבר צריך להיות מסוגל לעשות דיסקרטי, תנועות קצרות עם מאמץ וכאשר מגורה, אבל לא צריך להיות מסוגל לנוע בחופשיות או ברציפות.
לנהל דפיקות לב מוצקות חוזרות ונשנות בו זמנית לצדדים הצדדיים והמתיאליים של כל ברך עם האגודל והאצבע המורה של היד החופשית בערך בקו המפרקים פעם בשנייה למשך דקה אחת. ויש לי משקיף לספור את מספר הפעמים החיה מזמרת ונלחם כדי להימלט האיפוק במהלך תקופת יישום לחץ זו 1 דקה. סכום הנשיכות והקולות נחשב לציון הכאב המעורר.
פתח את תוכנת נשיאת המשקל הדינמית המתקדמת ובחר עכברים כסוג החיישן. לפני כל ניסוי, בחר כיול מלא"תחת תפריט הכיול. והזן אפס"עבור ערך הטרה.
ואת המשקל של כרית קצף, לוח סיבים בצפיפות בינונית, פלסטיק, ומים כמשקל הכיול. בחר הבאו tareולכסות את כרית החיישן עם כרית קצף, לוח סיבים בצפיפות בינונית, פלסטיק של מים. כאשר כל החומרים הונחו על משטח החיישן, בחר תצוגה מקדימה של רווח"והתאם את משקל הכיול עד שיופץ באופן שווה על פני החיישנים הבודדים.
כאשר הערך של מחוון הכיול הוא מעל תשעים וחמש, בחר הגדרת רווח"כדי לייצר ממוצע מנורמל עבור החיישנים הבודדים ולאשר את שלמות החיישנים. לאחר מכן, בחר הבא" ושמור את קובץ הכיול בתיקיית הכיול. בחר חדש" והזן את שמות הפרוייקט ובעלי החיים עבור העכבר הראשון שנבדק.
בחר עיון"ופתח את קובץ הכיול שנוצר עבור הפרוייקט. לאחר מכן, בחר הבא"לאשר כי לאפשר לכידת וידאו"נבחר, ובחר אישור "הבא, לשקול את החיה. בחר לכידה" והתעד את המשקל בתוכנה.
לאחר בחירת אישור"מקם את העכבר בתא במשך 5 דקות. ובחר להשיק "התוכנה תתעד את פעילות החיה, ללכוד וידאו, ולסנכרן עם נתוני החיישן, באופן אוטומטי לחלק את הווידאו לתוך מקטעים הניתנים לניתוח ולא ניתן לניתוח. בסוף תקופת ההקדמה, בחר ניקוד קל"והגדרת השהיה עצמאית"ובחר מהר קדימה" כדי לעבור למקטע הראשון הניתן לניתוח.
אם לא מזוהה אזור יציב, החזק את הסמן מעל אזור זה והקש על מקש הקיצור המתאים המתאים לחלק הגוף הנכון. תוכנת נשיאת המשקל הדינמית המתקדמת תחשב באופן אוטומטי את אחוז הזמן המנותח שהושקע, ואת אחוז משקל הגוף המוצב על כל אחד מ-4 הגפיים. לאחר מכן בחר תוצאות "ייצוא" וכן"כדי לייצא את 5 שורות הסיכום הראשונות של נתונים לתוכנית הגיליון האלקטרוני המתאימה.
עבור כל בעל חיים נוסף באותה קבוצה, בחר חדש והזן שם ייחודי של בעל חיים מבלי לשנות את שם הפרויקט. ואז ללכוד את הפעילות של כל חיה בתא כפי שהוכח רק. ציוני כאב מעוררים לטיפול דלקתי חריף-a-גן-דלקת פרקים המושרה, דלקת כרונית מלאה f-roy-nes להוסיף-jav-ent דלקת פרקים המושרה, כרונית לא דלקתית קול-ag-in-in-דלקתית המושרה עלייה מעל אלה שנצפו עבור בעלי חיים נאיביים לא מוזרקים עבור כל שלושת סוגי כאבי פרקים.
נקבות, אך לא זכרים עם כאבי מפרקים ניווניים כרוניים, מדגימות הפחתות דומות בצעדי נשיאת משקל דינמיים מראש בהשוואה לעכברים נאיביים בכאבי מפרקים דלקתיים חריפים וכרוניים. זכרים עם כאבי פרקים דלקתיים חריפים מעבירים משקל רב יותר ל-4 הגפיים מאשר לבעלי חיים תמימים. משקל הנושא את 4 הגפיים עולה בעכברים נקביים בהשוואה לבעלי חיים נאיביים, אך לא אצל זכרים עם כאבי מפרקים ניווניים כרוניים.
הן אצל זכרים והן אצל נקבות עם כאבי פרקים ניווניים כרוניים, אין הבדל בזמן על הגפיים האחוריות השמאליות בהשוואה לבעלי חיים תמימים. ונקבות עם כאבי פרקים ניווניים כרוניים מבלים יותר זמן על האיבר האחורי הימני הלא דלקתי בהשוואה לעכברים לא מוזרקים. לבסוף, עכברים זכרים עם כאבי פרקים דלקתיים חריפים, ונקבות עם כאבי פרקים ניווניים כרוניים, מבלים זמן רב יותר באופן משמעותי על 4 הגפיים שלהם מאשר בעלי חיים תמימים.
זיהוי נכון של אחורי כפות הרגליים של החיה ביחס לגוף שלה חשוב מאוד. תתמקד ב אחורי החיה ולא בראשה. בשיטה זו, אנו מסוגלים לבחון את הרגשיות של משככי כאבים בין-פרקיים חדשים.
סקירה כללית
מחקר זה מציג פרוטוקול רגיש וניתן לשחזור למדידת כאב מושהה וספונטני במודלים מוריניים של דלקת פרקים הנגרמת כימית. המתודולוגיה היא חיונית להערכת טיפולים בדלקת פרקים, שהיא גורם מוביל לנכות.
רכיבי מחקר מרכזיים
תחום המדע
- נוירולוגיה
- מדידת כאב
- מחקר דלקת פרקים
רקע
- דלקת פרקים היא תורמת עיקרית לנכות, כאשר הכאב הוא גורם משמעותי.
- הטיפולים הנוכחיים לדלקת פרקים אינם מספקים, מה שמחייב מודלים פרה-קליניים טובים יותר.
- מדידת הכאב במודלים אלו חיונית לפיתוח טיפולים יעילים.
- מחקר זה נועד לשפר את מתודולוגיות הערכת הכאב במודלים מוריניים.
מטרת המחקר
- לפתח שיטה אמינה להערכת כאב מושהה וספונטני במודלי דלקת פרקים.
- להקל על הערכת טיפולים רגנרטיביים ומשככי כאבים.
- לספק גישה סטנדרטית למחקר עתידי במדידת כאב בדלקת פרקים.
שיטות שנעשה בהן שימוש
- שימוש במחט חשופה להזרקות מפרקיות בעכברים מורדמים.
- יישום לחץ עקבי כדי להעריך תגובות כאב מושהה.
- שימוש בתוכנת נשיאת משקל דינמית מתקדמת למדידת התנהגויות כאב ספונטניות.
- הקלטה וניתוח של קולות וניסיונות בריחה כמדדים לכאב.
תוצאות עיקריות
- ציוני הכאב המושהה עלו במודלי דלקת פרקים שונים בהשוואה לעכברים תמימים.
- הבדלים בנשיאת משקל נצפו בין עכברים זכרים ונקבות עם כאב מפרקים ניווניים כרוניים.
- נקבות עם כאב כרוני הראו יותר זמן על הגפה הלא מושפעת בהשוואה לעכברים תמימים.
- המתודולוגיה מבדילה ביעילות בין סוגים שונים של כאב מפרקים בעכברים.
מסקנות
- הפרוטוקול שפותח הוא כלי חשוב להערכת כאב במחקר דלקת פרקים.
- הוא מאפשר הערכה של משככי כאב חדשים ואסטרטגיות טיפול.
- מחקרים נוספים יכולים לבנות על המתודולוגיה הזו כדי לשפר את פיתוח הטיפול בדלקת פרקים.
שאלות נפוצות
Executive Industry Relevance
Quantitative assessment of pain in murine monoarticular knee models addresses a critical gap in preclinical arthritis research, enabling robust evaluation of both disease-modifying and analgesic candidates. These reproducible measures of evoked and spontaneous pain support predictive confidence in translational pain endpoints and facilitate risk-adjusted advancement of novel therapeutics. Standardized pain phenotyping at this stage enhances portfolio triage and informs go/no-go decisions for arthritis drug development.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of pain mechanisms and functional target validation in arthritis models.
- Supports biological de-risking by distinguishing between inflammatory and degenerative pain phenotypes.
- Provides quantitative endpoints for hypothesis-driven evaluation of candidate interventions.
Screening & Assay Development
- Establishes validated, reproducible pain assays for compound screening in murine models.
- Facilitates standardization of evoked and spontaneous pain measurements across studies.
- Generates quantitative outputs suitable for cross-comparison of analgesic and disease-modifying agents.
Translational & Preclinical Research
- Aligns preclinical pain endpoints with clinically relevant functional outcomes.
- Enables continuity from discovery through preclinical validation of arthritis therapeutics.
- Supports risk-adjusted advancement decisions based on robust pain phenotyping.
Pipeline & Workflow Integration
These pain measurement protocols integrate into the discovery-to-preclinical continuum, providing standardized endpoints for both early target validation and late-stage efficacy studies.
- Discovery Biology: Quantitative pain scoring supports mechanistic hypothesis testing and pathway clarification in arthritis models.
- Screening: Assay reproducibility and sensitivity enable reliable evaluation of candidate compounds.
- Analytics: Automated software outputs facilitate objective comparison of pain responses across experimental groups.
- Translational Research: Functional pain measures bridge preclinical findings to clinical pain endpoints.
- Enterprise Reuse: Protocols are adaptable for diverse arthritis models and analgesic screening campaigns.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in pain research.
- Operational Value: Delivers standardized, scalable, and reproducible pain assessment workflows.
- Strategic Value: Informs go/no-go decisions and enhances capital efficiency in arthritis portfolios.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization and advancement of pain-modifying therapeutics.
Implementation Considerations
- Requires expertise in murine handling and pain behavior assessment.
- Needs access to calibrated force application devices and dynamic weight bearing software.
- Demands cross-team standardization of scoring and data analysis protocols.
- Adaptable to various arthritis models but may require protocol optimization for specific phenotypes.
- Dependent on accurate limb identification and consistent experimental conditions.
