Name: פרוטוקול נמוכים של ניתוח טביעת רגל ותלייה תיבת הבדיקה עבור עכברים חלה הלחץ איפוק כרונית (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-23T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: למדו פרוטוקול ניתוח טביעת רגל בעכברים לזיהוי הפרעות תנועה לאחר עומס לחץ. שיטה זו מאפשרת הערכת פנוטיפים מוטוריים בעלות נמוכה במודלים של מחלות נוירולוגיות.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי KAKENHI JSPS (יפן האגודה לקידום המדע ע) (מענק הסיוע עבור C מחקר מדעי), להעניק מספר 18K 07373 (בחיי) וה סובסידיות עבור אוניברסיטאות פרטיות.

כל הניסויים נערכו בצורה הומאנית. מוסדיים חיות ניסוי הוועדה של jichi ב רפואי האוניברסיטה אישרה את המחקר. המחקר נערך לפי תקנה המוסדי חיות ניסוי, מנחה בסיסי עבור נכונה התנהגות של חיות ניסוי ופעילויות הקשורות מוסדות מחקר אקדמיים תחת הסמכות השיפוטית של MEXT של יפן. עכברים בשימוש פרוטוקול זה היה כפי שתוארה לעיל21.
1. תלוי תיבת הבדיקה
<ol><li>להקליט את המשקל של כל עכבר. לסמן את הזנב על ידי עט סימון על הפליה בודדים (למשל., קו כפול קווים, קווים משולשת). הערה: עקומות גדילה משמשים עבור אינדקס של בריאות כללית22.</li>
	<li>הצב והעכברים ניסיוני חדר לפחות 30 דקות לפני המבחן ההתנהגותי. הגדר את תיבת תלויה, אשר מורכב של תיבה ברורה (25 x 25 x 40 ס מ3) עם מכסה רשת rotatable העליונה (איור 1). ניתן לסובב את מכסה רשת לאורך בר מרכזי כך העליון היפוך 180 מעלות.</li>
	<li>לשים עכבר במרכז המכסה רשת. . תנמיך את מכסה רשת למעלה בצד בזהירות</li>
	<li>למדוד ההשהיה סתיו (תלוי זמן) של העכבר מ המכסה רשת. הערה: אם העכבר לא נופל בתוך 5 דקות, להקליט ההשהיה כמו 5 דקות.</li>
	<li>להחזיר את העכבר על הכלוב הביתה. נקה תיבת לתלייה עם אתנול 70% לאחר כל בדיקה.</li>
</ol>2. ניתוח טביעת רגל
הערה: בעקבות התיבה תלוי מבחן, לבצע ניתוח טביעת רגל.
<ol><li>
להגדיר את המסלול (איור 2 א).<ol>
<li>חותכים פיסת נייר לבן (29.7 ס מ x 42 סנטימטרים x 0.09 מ מ) longitudinally לתוך שלוש אורך רוחב שווה. הגדר נייר לבן (9.9 ס"מ x 42 ס מ) על השולחן.</li>
		<li>תניח את הקופסא המטרה כהה בקצה הדיסטלי של הנייר. . שים את השני תיבות (כ אורך זהה לזה של הנייר) עם הקירות משני צידי המסלול, מניעת הבריחה של עכברים.</li>
		<li>לשים דיו שחור, דיו אדום לתוך צלחות פטרי נפרדות (35 מ מ קוטר).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
אימון. הערה: לבצע את האימון עצמו רק בגיל ארבעה שבועות של גיל.<ol>
<li>לשים עכבר בקצה הפרוקסימלית של העיתון (עם הפנים הראש לכיוון תיבת המטרה). תן העכבר הליכה מהסוף proximal לתיבה המטרה. הסר את העכבר מהתיבה המטרה. אם העכבר מפסיק על הנייר, דחף בעדינות את העכבר אל תיבת המטרה על ידי האצבע.</li>
		<li>החזק את העכבר על ידי האוחז את עורפה בין האגודל לאצבע כדי להגביל את התנועה של forelimbs. לאחר מכן, לאחוז הגב והזנב בין הכדור של האגודל האצבעות האחרות כדי להגביל את התנועה של hindlimbs. הערה: אחזקות לא מספקת של עכבר תוצאות שהכלים של דיו על הבגדים.</li>
		<li>לטבול את החלק התחתון של forelimbs בדיו אדומה, את החלק התחתון של hindlimbs בדיו שחור. מיד לשים את העכבר בקצה הפרוקסימלית של העיתון (עם הפנים הראש לכיוון תיבת המטרה). תן העכבר הליכה מהסוף proximal לתיבה המטרה. אם העכבר מפסיק על הנייר, דחף בעדינות את העכבר אל תיבת המטרה על ידי האצבע.</li>
		<li>הסר את העכבר מהתיבה המטרה. ללכת הפעלת מבחן.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
מבחן הפעלה.
	<ol>
<li>בעקבות התרגול, להגדיר את המסלול ותחפש עם יצירה חדשה לחתוך נייר לבן.</li>
		<li>החזק את העכבר על ידי האוחז את עורפה בין האגודל לאצבע כדי להגביל את התנועה של forelimbs. לאחר מכן, לאחוז הגב והזנב בין הכדור של האגודל האצבעות האחרות כדי להגביל את התנועה של hindlimbs.</li>
		<li>לטבול את החלק התחתון של forelimbs בדיו אדומה, את החלק התחתון של hindlimbs בדיו שחור. מיד לשים את העכבר על קצה הפרוקסימלית של הנייר. תן העכבר הליכה מהסוף proximal לתיבה המטרה. הערה: כי עכברים מעדיף בחושך, הליכה הופך וקולה העכבר מתקרב תיבת המטרה כהה. אם העכבר מפסיק על הנייר, דחף בעדינות את העכבר אל תיבת המטרה על ידי האצבע. אז, אם לא עקבות אמין לבדיקה (ראה שלב 2.4. ניתוח של עקבות עבור פרטים) כי העכבר הפסיק, שנית את הפעלת מבחן.</li>
		<li>להחזיר את העכבר לכלוב הביתה מהתיבה המטרה. נקה תיבת המטרה עם אתנול 70% לאחר כל מפגש הבדיקה. מילה נהדרת בעיתון מודפס-רגל.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
ניתוח של עקבות
	<ol>
<li>להשיג שלוש מדידות של כל פרמטר (סטרייד פיאנו אורכים של forelimbs ורוחב בסיס hindlimbs, קבלה, הינד, חפיפה בין forelimb לבין hindlimb, איור 2B) עם סרגל מעיתון מודפס-רגל. הערה: כי עקבות קצות לקרע, לעתים קרובות להציג וריאציות גדולים עקב עצירה או רץ, בחר את החלק עם דפוס בהליכה יציבה של טביעות. החלק האמצעי של נייר מודפס הרגל יהיה בדרך כלל מתאימים לניתוח.<ol>
<li>אורך צעד, למדוד את המרחקים בין חלקי הכפה (למשל, כרית כף הרגל או הבוהן) אותו.</li>
			<li>עבור רוחב הבסיס הקדמי, למתוח קו ברור בין עקבות קבלה ברציפות ימינה (או שמאלה). לאחר מכן, למדוד את האורך של קו אנכי מהמקלדת של טביעת הקדמי (ימינה או שמאלה) אל קו הנמתח בין העקבות ימינה (או שמאלה).</li>
			<li>עבור רוחב בסיס האחוריות, למתוח קו ברור בין עקבות האחוריות ברציפות ימינה (או שמאלה). לאחר מכן, למדוד את האורך של קו אנכי מהמקלדת של טביעת האחוריות (ימינה או שמאלה) אל קו הנמתח בין העקבות ימינה (או שמאלה).</li>
			<li>עבור חפיפה, למדוד את המרחק בין קבינה קדמית רפידות של שמאל (או ימין) טביעות הרגליים האחוריות.</li>
		</ol>
</li>
		<li>ממוצע של שלוש מדידות עבור כל אדם. השתמש הממוצע בודדים של כל פרמטר עבור ניתוח סטטיסטי.<ol>
<li>לשימוש האורך פסיעה, הממוצע של הממוצעים בודדים של הצעדים ימינה ושמאלה.</li>
			<li>לשימוש האסימטריה של אורך צעד, הערך המוחלט של ההבדל בין ממוצעים בודדים של האיבר השמאלי אורך צעד נכון האיבר.</li>
			<li>ניתוח סטטיסטי של הפרמטרים האחרים (רוחב בסיס קדמי, רוחב הבסיס האחוריות ו חפיפה), להשתמש הממוצע בודדים ישירות.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. איפוק מתח טעינה
<ol><li>
הכנה של צינורות איפוק.
	<ol>
<li>לעשות חורים 16 (כ 2 מ מ קוטר) צינור חרוטי 50 מ ל (30 מ"מ בקוטר x 115 מ מ אורך) לאורך סימני סולם (5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 מ"ל) ואת הישבן של כל סולם לסמן על-ידי התרגיל מרובע (איור 3). תעשה חור על קצה הצינור חרוט 50 מ ל (כ 5 מ מ קוטר) עבור הנשימה שתורידו הטיפ. לעשות בו חור (כ 4 מ"מ קוטר) שבתחתית מכסה הצינורית להעביר את הזנב של עכברים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
מתח טעינה
	<ol>
<li>הצב והעכברים בחדר ניסיוני.</li>
		<li>להחזיק עכבר על ידי האוחז את עורפה בין האגודל לאצבע. הזן את העכבר לתוך הצינור איפוק מהראש. עוברים את הזנב דרך החור הכיפה. לסגור את הפקק. הערה: להגביל את תנועת forelimb, כי עכברים דוחים הזנת את הצינור על ידי forelimbs.</li>
		<li>שמור את העכבר סגור כבר שעתיים על שולחן בטמפרטורת החדר. להסיר את העכבר מהצינור איפוק ולחזור אל הכלוב הביתה. הערה: הצינורות איפוק חוזר לאחר שטיפה ויבש.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. ניסיוני לוח זמנים (איור 4):
<ol><li>לבצע התליה תיבת בדיקה וניתוח טביעת הרגל באותו היום רוב בגיל 4 שבועות (ראו שלב 1. מבחן תיבת לתלייה, שלב 2. ניתוח טביעת רגל לפרטים) כמידה בסיסית על עכברים כל לפני הקיבוץ 'קבוצת לחץ', 'קבוצה ללא מתח'. הערה: בערך 8-10 עכברים בתוך 2-3 המלטות עשוי להיות מתאים לשימוש בניסוי. ניתוח טביעת רגל רוב בגיל 4 שבועות מורכב הפעלות הבדיקה והדרכה.</li>
	<li>לחלק באופן אקראי העכברים 'קבוצה לחץ', 'קבוצה ללא מתח'. הערה: כאשר העכברים משמשים המורכב מספר המלטות, לחלק את הארנבונים מאותה באופן שווה בשתי הקבוצות. מספר בכל קבוצה מורכבת בערך 4-5 עכברים.</li>
	<li>להחיל את הלחץ איפוק לקבוצה' סטרס' שש פעמים במשך שבועיים (ראה שלב 3. איפוק מתח טעינה לפרטים). הערה: 6 פעמים איפוק מוחלים כל שבועיים, ואחריו תלייה תיבת ניתוח, בדיקה של טביעת הרגל של גיל 6-12 שבועות. אל תחיל את הלחץ איפוק ביום הבדיקה של התליה תיבת בדיקה וניתוח טביעת רגל.</li>
	<li>לבצע התליה תיבת הבדיקה המושב בדיקת של ניתוח טביעת הרגל באותו יום בשעה 6, 8, 10, ו בגיל 12 שבועות.</li>
</ol>

<ol><li>Warner, T. T. Movement disorders. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWarner%2C+TT+%22Practical+Guide+to+Neurogenetics%22">Practical Guide to Neurogenetics</a>. , Elsevier Health Sciences. (2008).</li>
<li>Brashear, A., DeLeon, D., Bressman, S. B., Thyagarajan, D., Farlow, M. R., Dobyns, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid-onset+dystonia-parkinsonism+in+a+second+family%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Rapid-onset dystonia-parkinsonism in a second family.</a> Neurology. 48 (4), 1066-1069 (1997).</li>
<li>Linazasoro, G., Indakoetxea, B., Ruiz, J., Van Blercom, N., Lasa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Possible+sporadic+rapid-onset+dystonia-parkinsonism%5BTitle%5D)+AND+%22Movement+Disorders%22%5BJournal%5D)">Possible sporadic rapid-onset dystonia-parkinsonism.</a> Movement Disorders. 17 (3), 608-609 (2002).</li>
<li>Svetel, M., Ozelius, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid-onset+dystonia-parkinsonism%3A+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Rapid-onset dystonia-parkinsonism: case report.</a> Journal of Neurology. 257 (3), 472-474 (2010).</li>
<li>Vrinten, D. H., Hamers, F. F. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%22CatWalk%22+automated+quantitative+gait+analysis+as+a+novel+method+to+assess+mechanical+allodynia+in+the+rat%3B+a+comparison+with+von+Frey+testing%5BTitle%5D)+AND+%22PAIN%22%5BJournal%5D)">"CatWalk" automated quantitative gait analysis as a novel method to assess mechanical allodynia in the rat; a comparison with von Frey testing.</a> PAIN. 102 (1), 203-209 (2003).</li>
<li>Berryman, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DigigaitTM+quantitation+of+gait+dynamics+in+rat+rheumatoid+arthritis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Musculoskeletal+and+Neuronal+Interactions%22%5BJournal%5D)">DigigaitTM quantitation of gait dynamics in rat rheumatoid arthritis model.</a> Journal of Musculoskeletal and Neuronal Interactions. 9 (2), 89-98 (2009).</li>
<li>Beare, J. E., Morehouse, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gait+analysis+in+normal+and+spinal+contused+mice+using+the+TreadScan+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Gait analysis in normal and spinal contused mice using the TreadScan system.</a> Journal of Neurotrauma. 26 (11), 2045-2056 (2009).</li>
<li>Rushton, R., Steinberg, H., Tinson, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+a+single+experience+on+subsequent+reactions+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Effects of a single experience on subsequent reactions to drugs.</a> British Journal of Pharmacology and Chemotherapy. 20, 99-105 (1963).</li>
<li>Lee, C. C., Peters, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotoxicity+and+behavioral+effects+of+thiram+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Environmental+health+perspectives%22%5BJournal%5D)">Neurotoxicity and behavioral effects of thiram in rats.</a> Environmental health perspectives. 17, 35-43 (1976).</li>
<li>van der Zee, C. E., Schuurman, T., Traber, J., Gispen, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+administration+of+nimodipine+accelerates+functional+recovery+following+peripheral+nerve+damage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">Oral administration of nimodipine accelerates functional recovery following peripheral nerve damage in the rat.</a> Neuroscience Letters. 83 (1-2), 143-148 (1987).</li>
<li>Leroy, T., Stroobants, S., Aerts, J. -M., D'Hooge, R., Berckmans, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automatic+analysis+of+altered+gait+in+arylsulphatase+A-deficient+mice+in+the+open+field%5BTitle%5D)+AND+%22Behavior+Research+Methods%22%5BJournal%5D)">Automatic analysis of altered gait in arylsulphatase A-deficient mice in the open field.</a> Behavior Research Methods. 41 (3), 787-794 (2009).</li>
<li>Sango, K., McDonald, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+lacking+both+subunits+of+lysosomal+beta-hexosaminidase+display+gangliosidosis+and+mucopolysaccharidosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genetics%22%5BJournal%5D)">Mice lacking both subunits of lysosomal beta-hexosaminidase display gangliosidosis and mucopolysaccharidosis.</a> Nature Genetics. 14 (3), 348-352 (1996).</li>
<li>Deacon, R. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+the+Strength+of+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Measuring the Strength of Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (76), e2610(2013).</li>
<li>Djamshidian, A., Lees, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Can+stress+trigger+Parkinson%27s+disease%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurology%2C+Neurosurgey%2C+and+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Can stress trigger Parkinson's disease?</a> Journal of Neurology, Neurosurgey, and Psychiatry. 85 (8), 879-882 (2014).</li>
<li>Brashear, A., Dobyns, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+phenotypic+spectrum+of+rapid-onset+dystonia-parkinsonism+%28RDP%29+and+mutations+in+the+ATP1A3%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">The phenotypic spectrum of rapid-onset dystonia-parkinsonism (RDP) and mutations in the ATP1A3.</a> Brain. 130 (Pt 3), 828-835 (2007).</li>
<li>Kirshenbaum, G. S., Saltzman, K., Rose, B., Petersen, J., Vilsen, B., Roder, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+neuronal+Na%2B%2CK%2B-ATPase+activity+in+Atp1a3+heterozygous+mice+increases+susceptibility+to+depression-like+endophenotypes+by+chronic+variable+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%2C+Brain+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Decreased neuronal Na+,K+-ATPase activity in Atp1a3 heterozygous mice increases susceptibility to depression-like endophenotypes by chronic variable stress.</a> Genes, Brain and Behavior. 10 (5), 542-550 (2011).</li>
<li>DeAndrade, M. P., Yokoi, F., van Groen, T., Lingrel, J. B., Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Atp1a3+mutant+mice+as+a+model+of+rapid-onset+dystonia+with+parkinsonism%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Characterization of Atp1a3 mutant mice as a model of rapid-onset dystonia with parkinsonism.</a> Behavioral Brain Research. 216 (2), 659-665 (2011).</li>
<li>Sugimoto, H., Ikeda, K., Kawakami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterozygous+mice+deficient+in+Atp1a3+exhibit+motor+deficits+by+chronic+restraint+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Heterozygous mice deficient in Atp1a3 exhibit motor deficits by chronic restraint stress.</a> Behavioral Brain Research. 272, 100-110 (2014).</li>
<li>Zimprich, A., Garrett, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+reliable+non-invasive+test+for+stress+responsivity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A robust and reliable non-invasive test for stress responsivity in mice.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, 125(2014).</li>
<li>Buynitsky, T., Mostofsky, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restraint+stress+in+biobehavioral+research%3A+recent+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">Restraint stress in biobehavioral research: recent developments.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 33 (7), 1089-1098 (2009).</li>
<li>Ikeda, K., Satake, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+inhibitory+neurotransmission+in+the+cerebellar+cortex+of+Atp1a3-deficient+heterozygous+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Enhanced inhibitory neurotransmission in the cerebellar cortex of Atp1a3-deficient heterozygous mice.</a> The Journal of Physiology. 591 (13), 3433-3449 (2013).</li>
<li>Crawley, J. N. Motor functions. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrawley%2C+JN+%22What%27s+Wrong+with+My+Mouse%3F%22">What's Wrong with My Mouse?</a>. , John Wiley & Sons. (2007).</li>
<li>R Core Team. R: A language and environment for statistical computing. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.R-project.org/">https://www.R-project.org/</a> (2014).</li>
<li>Wils, H., Kleinberger, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TDP-43+transgenic+mice+develop+spastic+paralysis+and+neuronal+inclusions+characteristic+of+ALS+and+frontotemporal+lobar+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">TDP-43 transgenic mice develop spastic paralysis and neuronal inclusions characteristic of ALS and frontotemporal lobar degeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (8), 3858-3863 (2010).</li>
<li>Eilam, R., Peter, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+loss+of+dopaminergic+nigro-striatal+neurons+in+brains+of+Atm-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Selective loss of dopaminergic nigro-striatal neurons in brains of Atm-deficient mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 95 (21), 12653-12656 (1998).</li>
<li>Lin, C. -H., Tallaksen-Greene, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurological+abnormalities+in+a+knock-in+mouse+model+of+Huntington%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Neurological abnormalities in a knock-in mouse model of Huntington's disease.</a> Human Molecular Genetics. 10 (2), 137-144 (2001).</li>
<li>Dang, M. T., Yokoi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+characterization+of+Dyt1+%CE%94GAG+knock-in+mouse+as+a+model+for+early-onset+dystonia%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Generation and characterization of Dyt1 ΔGAG knock-in mouse as a model for early-onset dystonia.</a> Experimental Neurology. 196 (2), 452-463 (2005).</li>
<li>Glynn, D., Drew, C. J., Reim, K., Brose, N., Morton, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+ataxia+in+complexin+I+knockout+mice+masks+a+complex+phenotype+that+includes+exploratory+and+habituation+deficits%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Profound ataxia in complexin I knockout mice masks a complex phenotype that includes exploratory and habituation deficits.</a> Human Molecular Genetics. 14 (16), 2369-2385 (2005).</li>
<li>Becker, E. B. E., Oliver, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+point+mutation+in+TRPC3+causes+abnormal+Purkinje+cell+development+and+cerebellar+ataxia+in+moonwalker+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">A point mutation in TRPC3 causes abnormal Purkinje cell development and cerebellar ataxia in moonwalker mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (16), 6706-6711 (2009).</li>
<li>Heck, D. H., Zhao, Y., Roy, S., LeDoux, M. S., Reiter, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cerebellar+function+in+Ube3a-deficient+mice+reveals+novel+genotype-specific+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Analysis of cerebellar function in Ube3a-deficient mice reveals novel genotype-specific behaviors.</a> Human Molecular Genetics. 17 (14), 2181-2189 (2008).</li>
<li>Kirshenbaum, G. S., Dawson, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternating+hemiplegia+of+childhood-related+neural+and+behavioural+phenotypes+in+Na%2B%2CK%2B-ATPase+%CE%B13+missense+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Alternating hemiplegia of childhood-related neural and behavioural phenotypes in Na+,K+-ATPase α3 missense mutant mice.</a> PLoS ONE. 8 (3), e60141(2013).</li>
<li>Klein, A., Wessolleck, J., Papazoglou, A., Metz, G. A., Nikkhah, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Walking+pattern+analysis+after+unilateral+6-OHDA+lesion+and+transplantation+of+foetal+dopaminergic+progenitor+cells+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioral+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Walking pattern analysis after unilateral 6-OHDA lesion and transplantation of foetal dopaminergic progenitor cells in rats.</a> Behavioral Brain Research. 199 (2), 317-325 (2009).</li>
<li>Geldenhuys, W. J., Guseman, T. L., Pienaar, I. S., Dluzen, D. E., Young, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+biomechanical+analysis+of+gait+changes+in+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22PeerJ%22%5BJournal%5D)">A novel biomechanical analysis of gait changes in the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> PeerJ. 3 (Pt 7), e1175(2015).</li>
<li>Cecchi, M., Khoshbouei, H., Morilak, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulatory+effects+of+norepinephrine%2C+acting+on+alpha1+receptors+in+the+central+nucleus+of+the+amygdala%2C+on+behavioral+and+neuroendocrine+responses+to+acute+immobilization+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Modulatory effects of norepinephrine, acting on alpha1 receptors in the central nucleus of the amygdala, on behavioral and neuroendocrine responses to acute immobilization stress.</a> Neuropharmacology. 43 (7), 1139-1147 (2002).</li>
<li>Chu, X., Zhou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((24-hour-restraint+stress+induces+long-term+depressive-likephenotypes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">24-hour-restraint stress induces long-term depressive-likephenotypes in mice.</a> Scientific Reports. 6, 32935(2016).</li>
<li>Freeman, M. L., Sheridan, B. S., Bonneau, R. H., Hendricks, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychological+Stress+Compromises+CD8%2B+T+cell+control+of+latent+herpes+simplex+virus+type+1+infections%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Psychological Stress Compromises CD8+ T cell control of latent herpes simplex virus type 1 infections.</a> The Journal of Immunology. 179 (1), 322-328 (2007).</li>
<li>Lauretti, E., Di Meco, A., Merali, S., Praticò, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+behavioral+stress+exaggerates+motor+deficit+and+neuroinflammation+in+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Chronic behavioral stress exaggerates motor deficit and neuroinflammation in the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Translational Psychiatry. 6, e733(2016).</li>
<li>Quartermain, D., Stone, E. A., Charbonneau, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+stress+disrupts+risk+assessment+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+and+Behavior%22%5BJournal%5D)">Acute stress disrupts risk assessment behavior in mice.</a> Physiology and Behavior. 59 (4-5), 937-940 (1996).</li>
<li>Bannon, D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBannon%2C+D+%22The+Behavioural+effects+of+stress+and+aluminum+toxicity+on+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+Parkinsonism-dementia+complex%22">The Behavioural effects of stress and aluminum toxicity on a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis Parkinsonism-dementia complex</a>. , 1-186 (2015).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

ניתוח טביעת רגל ואת תיבת תלוי לבדוק מבחנים התנהגותיים פשוט וזול בתפקוד המוטורי של עכברים. הפנוטיפים neurobehavioral במספר דגמים העכבר זוהו בהצלחה על ידי בדיקות אלה. לדוגמה, קוצר אורך צעד נוירודגנרטיביות24, אורך מוגברת של פסיעה סימטרית תסמונת אטקסיה טלנגיאקטזיה25, אורך מוגברת של חפיפה של מחלת הנטינגטון26 ופוקאלית27, ו בסיס מורחב28,אטקסיה29, אנגלמן תסמונת<sup class="xref...

הפרעות תנועה מוגדרים הפרעות של מערכת העצבים מראה של עודף או במחסור של תנועות רצוניות או אוטומטית1. בפרט, הפרעה בהליכה מתועדת בתדירות גבוהה בקרב חולים עם התנועה הפרעות2,3,4. לכן, והרצתי ניתוח הוא מבחן ההתנהגות מתאימים עבור האימות של מודלים חייתיים של הפרעות תנועה. בעכברים, הילוך אוטומטי ניתוחים בוצעו להליכה-מהירות טבעית5 ו במהירויות מתכוונן על-ידי הליכון6,7. ניתוחים אלה מספקים תוצאות כמותיות של דהירה באופן אוטומטי. שיטה חלופית לזהות הפרעה בהליכה זה נקרא ניתוח טביעת רגל. לאחר תיוג שהסוליות של כפות הרגליים עם דיו, עכברים ללכת על נייר, העקבות מנותחים. בתחילה, וזלין, אבקת פחם שימשו כדי להמחיש את טביעת רגל8ולאחר מכן הוחלפו דיו על נייר פוליגרף9 ומפתח הצילומי על נייר הצילום10. שיטה זולה יותר פחות רעיל באמצעות דיו ונייר מכל השיטות האחרות נשאר עד היום11. ניתוח טביעת רגל הוא פחות יקר לעומת ניתוח אוטומטיות5,6,7 , יהיה שימושי כדי להעריך את הפרעות תנועה במודלים של העכבר של החוקרים ללא קרנות מחקר שופע .
התליה תיבת הבדיקה הוא סוג של ארבע בדיקות תלוי של האיבר, באמצעות תיל מהכלוב המכסה12 , חוט רשת שינוי מסך13. התיבה תהיה מכשירים עם מכסה רשת rotatable בראש תיבת לאורך סרגל מרכז. בנוסף ניתוח הילוך, הבדיקה ניתן בזול ובקלות לבצע. לכן, ערכנו התליה תיבת הבדיקה להעריך כוח אחיזה ושיווי משקל, בנוסף לניתוח טביעת רגל של פרוטוקול זה.
מתח גורם הסימפטומים של התנועה הפרעות14,15. חסרונות המנוע לעתים קרובות שנגזרות לחצים כרוניים מספר גם כאשר אין פנוטיפ המוטורית הספונטנית נצפית במודלים העכבר התנועה הפרעת16,17,18. איפוק הוא אחת השיטות הנפוצות עבור מתח טעינה בעכברים, כי החיה אינה פיזית הנפגעת19 , עלות פחות לעומת שיטות אחרות כגון הלם חשמלי עם מכשיר ייעודי והכריח פועל עם שימוש של הליכון. הריסון על ידי צינור, אשר מבוצע על ידי כליאת עכבר צינור חרוטי מחזיק 50 מ ל, היא קלה יותר מאשר שיטות אחרות כגון חוט רשת שינוי מסננת האיבר בדוחק, עטיפה של חיה עם גזה (שנסקרה20). בנייר זה, אנו מסכמים את הפרוטוקולים של טביעת הרגל ניתוח ואת תיבת תלוי מבחן לאחר ריסון על ידי צינור. פרוטוקול זה יעזור לנו להשתמש בעכבר מודלים של הפרעות תנועה ללא פנוטיפ מנוע ספונטנית.

<table><tbody><tr><td>קופסה תלויה</td><td>O הארה & ושות'.</td><td>http://ohara-time.co.jp/products/wire-hanging-test/</td><td></td></tr> <tr><td>עט סימון</td><td>ZEBRA</td><td>MO-120-MC-BK</td><td></td></tr><tr><td>תיבת שער</td><td>O' הארה & ושות'.</td><td>http://ohara-time.co.jp/products/balanced-beam-test/</td> <td>אביזר למכשירים של תיבות בדיקת קרן מאוזנת</td></tr><tr><td></td><td>O' הארה & ושות'.</td><td>-</td><td>קיר צדדי של המסלול</td></tr><tr><td>דיו שחור</td><td>דיו שחור שין-אסאהי-דיו</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>אדום</td><td>Maruyamakogyo</td><td>BC-6</td><td></td></tr><tr><td>צלחות פטרי חד פעמיות</td><td>351008</td><td></td><td>צלחות פטרי (קוטר 35 מ"מ)</td></tr><tr><td>Askul Multipaper סופר לבן J מונוכרום A3</td><td>Askul</td><td>701-712</td><td>נייר לבן (29.7 ס"מ x 42 ס"מ x 0.09 מ"מ)</td></tr> <tr><td>50 מ"ל צינור חרוטי</td><td>קורנינג</td><td></td><td></td></tr><tr><td>430829 מקדחה מרובעת</td><td>KAKURI Corporation</td><td>DIY FACTORY (K32-0313)</td><td></td></tr></tbody></table>

פרוטוקול נמוכים של ניתוח טביעת רגל ותלייה תיבת הבדיקה עבור עכברים חלה הלחץ איפוק כרונית

Low-cost Protocol of Footprint Analysis and Hanging Box Test for Mice Applied the Chronic Restraint Stress

הפרעה בהליכה לעתים קרובות נצפית בחולים עם הפרעות תנועה דגמים העכבר משמש לטיפול בהפרעות תנועה, והרצתי ניתוח הוא מבחן התנהגותי חשוב כדי לקבוע אם העכברים לחקות את הסימפטומים של המטופלים. חסרונות המנוע הם לעיתים קרובות המושרה על ידי מתח כאשר אין פנוטיפ המוטורית הספונטנית נצפית במודלים העכבר. לכן, והרצתי ניתוח ואחריו מתח הטעינה יהיה שיטה רגישה להערכת של פנוטיפ מנוע במודלים של העכבר. עם זאת, החוקרים מול הדרישה של מכשירים יקרים כדי לקבל תוצאות כמותיות באופן אוטומטי והרצתי ניתוח הליכה. עבור מתח, מתח טעינה על ידי שיטות פשוטות ללא מנגנוני יקר הדרושים עבור הלם חשמלי והכריחו פועל הוא רצוי. לכן, אנו מציגים את פרוטוקול נמוכים ופשוט המורכב ניתוח טביעת רגל עם נייר ודיו, תלוי תיבת הבדיקה להעריך המוטורית, מתח טעינה המוגדר על-ידי ריסון עם צינור חרוטי. הגירעונות מנוע של עכברים אותרו בהצלחה על ידי פרוטוקול זה.

העכברים זכר משפחתית ולא משפחתית הטרוזיגוטיים של Atp1a3 (Atp1a3+ −) כי הם המודל העכבר עבור התחלה מהירה פוקאלית parkinsonism פראי-סוג הארנבונים מאותה שימשו ב פרוטוקול זה. Atp1a3+ − הראה נמוך באופן משמעותי פסיעה אורכים של forelimb ו- hindlimb יותר מאלה של סוג בר-גיל (5A איור , איור 5B, לפתוח מעגל וכיכר) 4 שבועות. 'לחוץ' Atp1a3+ − הראה נמוך באופן משמעותי פסיעה אורכ...

פרוטוקול נמוכים המורכב ניתוח טביעת רגל ותלייה תיבת הבדיקה לאחר ריסון מתח הוא שימושי עבור הערכת הפרעות תנועה של העכבר מודל.

Gait disturbance is frequently observed in patients with movement disorders. In mouse models used for movement disorders, gait analysis is important ...

הפרוטוקול שלנו באמצעות ניתוח הליכה הוא מאוד שימושי בקביעה אם מנועי העכבר של הפרעות תנועה לחקות את הסימפטום של המטופל עם הפרעה הליכה. לכן, ניתוח הליכה במבחן טעינת הלחץ יכול להתבצע בקלות, וללא ציוד יקר, כדי לזהות פנוטיפים מוטוריים מסוימים בעכברים, ללא השפעות ספונטניות. לפני התחלת הבדיקה ההתנהגותית, רשום את המשקל של כל עכבר ולהשתמש בעט סימון כדי לסמן כל זנב.כאשר כל בעלי החיים נשקל וסומנו, הנח את העכברים בחדר הניסויים במשך 30 דקות לפחות, והגדיר ברור, 25 על 25 על 40 ס"מ תלוי תיבת, עם מכסה רשת מסתובב, על ספסל המעבדה. כאשר העכברים התאקלמו, מניחים עכבר אחד במרכז מכסה רשת, ומסובבים בזהירות את המכסה במהופך. לאחר מכן, למדוד את השהיית הנפילה של העכבר ממכסה רשת, לפני החזרת העכבר לכלוב הבית שלה.כאשר כל העכברים נבדקו, מניחים פיסת נייר לבן באורך 9.9 על 42 ס"מ על ספסל המעבדה, וממקמים קופסת שער כהה בקצה הדיסטלי של הנייר. מניחים תיבות אחרות, בערך באותו אורך כמו הנייר, משני צידי המסלול כדי למנוע בריחה. ומוסיפים דיו שחור ואדום כדי להפריד 35 מיליליטר מנות פטרי.כדי לאמן את העכברים לניתוח, מניחים עכבר בקצה הפרוקסימלי של הנייר, מול תיבת המטרה, ולתת לעכבר ללכת מהסוף הפרוקסימלי של הנייר לתיבת המטרה. כאשר העכבר מגיע לקופסה, בעדינות לקשקש את החיה, תוחב את הגב והזנב בין הכדור של האגודל והאצבעות האחרות, כדי להגב

low-cost-protocol-footprint-analysis-hanging-box-test-for-mice

Research

JoVE Journal

Behavior

התנהגות

המבחן זנב ההשעיה הוא תוקף של הליך ניסיוני כדי להעריך את היעילות של טיפולים תרופתיים נגד דיכאון בעכברים. עכברים מושעים על ידי הזנבות שלהם במשך שש דקות להימלט הקשורות התנהגויות מוערכים. אנו מתארים הליכים המשמשים בביצוע הבדיקה ההשעיה הזנב.

השעיה זנב מבחן

בסרטון זה, אנו מתארים את הליך בדיקת טביעת הרגל וניתוח קשור כדי להעריך הליכה וקואורדינציה מוטורית בעכברים.

הערכת הליכה לפי ניתוח טביעת רגל: שיטה לבדיקת קואורדינציה מוטורית בעכברים

פרוטוקול המתח הקל הכרוני הבלתי צפוי (UCMS) הוא שיטה מתוקפת לחקר שינויים התנהגותיים ופיזיולוגיים הקשורים למתח כרוני ותסמיני דיכאון. שמונה שבועות של הטלת פרוטוקול UCMS גורמים לשינויים התנהגותיים ולתוצאות בריאותיות גרועות במכרסמים משני המינים.

פרוטוקול מתח מתון כרוני בלתי צפוי לתסמיני דיכאון ייזום, שינויים התנהגותיים ותוצאות בריאותיות שליליות במכרסמים

סוללה מבחן התנהגותי מקיף של מיומנויות מוטוריות, רוח — לרבות אינטראקציה חברתית, דיכאון וחרדה – קוגניציה מיועד המבדק חוזרות ונשנות של שינויים התנהגותיים הקשורים ניוון מוחיים הקשורים בעכברים.

סוללה בדיקה התנהגותית להערכה חוזרת ונשנית של מיומנויות מוטוריות, מצב רוח, קוגניציה בעכברים

מאמר זה מספק פרוטוקול פשוט ומתוקננת עבור השראה של התנהגות כמו דיכאון בעכברים כרוניים מקיבוע באמצעות הרסן. בנוסף, התנהגות וטכניקות פיסיולוגיים כדי לוודא אינדוקציה של דיכאון מוסברים.

פרוטוקול מאמץ משתק כרוני לגרימת התנהגות של דיכאון כמו עכברים

מאמר זה מתאר טכניקת טיפול בעכברים, טכניקת הטיפול בתלת-ממד, המאפשרת טיפול שגרתי על ידי הפחתת התנהגויות דמויות חרדה ומציגה פרטים על שתי טכניקות קשורות קיימות (טיפול במנהרה וזנב).

טכניקות טיפול להפחתת מתח בעכברים

מבחן בטיחות האיום החברתי מאפשר הערכה סימולטנית של התפתחות הימנעות חברתית כמדד ללמידה מותנית מרתיעה ויכולת אפליה בין איום חברתי לבטיחות, שתיהן משמשות לזיהוי פרטים רגישים ללחץ ועמידים ללחץ בתוך קבוצה אחת של עכברים זכרים מובסים חברתית כרונית.

מבחן בטיחות איום חברתי חושף פנוטיפים הקשורים ללחץ פסיכו-סוציאלי

על ידי שילוב ארבעה גורמי לחץ חברתיים יומיומיים, המחקר הנוכחי מתאר מודל לחץ חברתי משולב מרובה (MISS) להפרעות פסיכיאטריות בעכברי C57BL/6J נקבות. לאחר עשרה ימים של חשיפה חוזרת ונשנית ל-MISS, העכברים פיתחו פנוטיפים דמויי דיכאון וחרדה, ובכך סיפקו מודל טבעי מבוסס אטיולוגיה לחקר הפרעות פסיכיאטריות אצל נבדקים.

מודל מתח חברתי משולב מרובה להפרעות פסיכיאטריות בעכברי C57BL/6J נקבות

מאמר זה מכסה את ההליכים לגרימת תגובות לחץ באמצעות מתח ריסון פיזי בעכברים וחולדות. נדונים שיקולים נוספים שיש להקפיד עליהם בעת בחירה ושימוש במתח ריסון במודלים של מכרסמים.

ריסון לגרימת סטרס אצל עכברים וחולדות

סרטון זה מציג את הפרדיגמה תושב-הפולש בחולדות. בדיקה זו היא שיטה סטנדרטית למדידת תוקפנות מעליבה, התנהגות הגנתית ואלימות בסביבה טבעית למחצה. השימוש בפרדיגמה לניסויי לחץ חברתי מוסברת גם כן.

פרדיגמה התושב-פורץ: מבחן סטנדרטי לתוקפנות, אלימות ולחץ חברתי

למדו פרוטוקול ניתוח טביעת רגל בעכברים לזיהוי הפרעות תנועה לאחר עומס לחץ. שיטה זו מאפשרת הערכת פנוטיפים מוטוריים בעלות נמוכה במודלים של מחלות נוירולוגיות.

פרוטוקול נמוכים של ניתוח טביעת רגל ותלייה תיבת הבדיקה עבור עכברים חלה הלחץ איפוק כרונית

גלה סרטונים נוספים