מדידה רגישה מאוד של חדירות הפקאוליות בעכברים עם פלואורואסעין איזוטיקריאט-פוליסוכרוז 70

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האנפרולוגיה על התפקיד של חדרות גלומרולרית במחלת כליות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי עליות קטנות וחולפות של חבירה גלומרולרית מזוהים באמצעות מעקב עופרת פלואורסצנטי שכותרתו. לאחר ההרדמה, מניחים קטטר שתן בעכבר הנשי.

מקם את העכבר בהפוגה הגבית. הדק את הבטן התחתונה ולמצוא את אוסטיום השופכה. להשיג את החלק הפלסטי של קטטר של אנגיוקטטר 22 G ולשמן אותו עם ג'ל קסילוקאין.

השתמש באצבע המורה השמאלית כדי למקם מתח זהיר על הבטן התחתונה ולהציג את הקטטר שלושה מילימטרים לתוך אוסטיום השופכה תוך מקביל לציר השופכה הדיסטלי. להפוך את החלק העליון של אנגיוקטר 180 מעלות על ידי שמירה על הקצה בתוך אוסטיום השופכה ושמירה על הציר של השופכה. לאחר מכן, להציג את קטטר שבעה מילימטר עוד יותר לתוך העכבר, כך שהוא ממוקם בתוך שלפוחית השתן.

מניחים צינור חום 1.5 מיליליטר מעל החלק העליון של אנגיוקטר כדי לאסוף את השתן. החל מיליליטר אחד של 0.9% נתרן כלורי תת עורית כדי לשפר את ייצור השתן. לגלח את הצוואר של העכבר ולמקום אותו בהפוגה עם הראש לכיוון המנתח.

היפר להאריך את ראש העכבר עם קלטת. לחטא את הצוואר עם 70% isopropanol. באמצעות פינצטה וזוג מספריים לעשות חתך בעור חמישה מילימטר מתחת לקו הלסת.

חותכים את העור כ סנטימטר אחד לכיוון עצם החזה עד אמצע עצם החזה הוא הגיע. תשתמש בזוג מספריים. בזהירות לנתח את העור לצד ימין של הצוואר.

בצע חתך מלבני של העור מימין כדי לחשוף את הרקמה הרכה של הצוואר. היזהר לא לפגוע בווריד הצוואר. השתמש בזוג מספריים פינצטה כדי לתקן את מדפים העור עם שני מלחציים.

באמצעות קצה פינצטה בסדר, בזהירות לחשוף את וריד הצוואר על ידי הכנה בוטה. במידת הצורך, להסיר רקמה עם מספריים עדין. הימנע מפגיעה בענפי ורידים.

מניחים וסגרו קשירה עם חוט משי בחלק הדיסטלי של וריד הצוואר הנראה לעין שנמצא לכיוון ראש העכבר. לתקן את חוט המשי עם קלטת לשים מתח על הקשירה. זה מבטיח מתח קל על וריד הצוואר.

מכינים קשירה סביב החלק הפרוקסימלי של וריד הצוואר. לאחר מכן, למלא את הקטטר עם פתרון שיווי משקל והיתוך. תקן את הקטטר עם קלטת כך הקטטר מיישר את וריד הצוואר.

שליטה על בועות כדי למנוע תסחיף אוויר. הרם את וריד הצוואר עם פינצטה עדין באתר הכניסה. יש ליישר את הצינור במקביל לווריד הצוואר ולנקב את וריד הצוואר המכוון ללומן.

הכנס במשך כשני עד ארבעה מילימטרים המקבילים לציר של וריד הצוואר. הימנע מתנועות מהירות. סגור את הקשירה כדי לתקן את הקטטר.

בקרה על הידוק של הקשירה על ידי צפייה זהירה דרך המיקרוסקופ. שים דגימה לחה על אתר הניתוח. הנח את שרוול הזנב בתחתית זנב העכבר בזמן שהעכבר שוכב בשכיבה הגבית.

התחל את המידות וחזור עליהן עשר פעמים בכל נקודת זמן. אם מדידות לחץ הדם אינן נראות נכונות ונתונים כוזבים מיוצרים, התאימו את מיקום שרוול הזנב. לפני שלב שיווי המשקל, לשנות את צינור איסוף השתן ולהציב אותו על קרח.

מקפלים ספוגית ומכניסים אותה סביב קטטר כלי קטן כי הוא הציג לתוך וריד הצוואר. מניחים מלחציים מעל ספוגית כדי לבטל את זרימת הדם מדרדר או את חילוף האוויר. חבר מחט 27 G עם מזרק מיליליטר אחד מלא בולוס FITC עד סוף קטטר כלי קטן.

פתח את המהדק ולהחיל את בולוס FITC 100 מיקרוליטר. סגור שוב את המהדק וחבר את הקטטר הגדול יותר עם הקטטר הקטן יותר. פתח מחדש את המהדק והתחל את משאבת המזרק עם קצב זרימה של 0.008 מיליליטר לדקה.

ממשיכים את העירוי במשך 60 דקות. בשלב זה, התרופות היעילות על סלקטיביות סלקר גלומרולרי נחקר. שנה את נקודת הזמן של צורת צינור השתן אפס דקה לעוד צינור חום 1.5 מיליליטר.

שים ספוגית סביב קטטר כלי קטן ולנתק את קטטר גדול מן קטטר כלי קטן. מלאו את המזרק בתסמת השלב הניסיונית. מניחים אותו לתוך משאבת המזרק ולתת משאבת עירוי לרוץ כך קטטר גדול מלא בתתבת השלב הניסיוני.

חבר מחדש את הקטטרים תוך הימנעות מתסחיף אוויר ופתח מחדש את המהדק. הפעל את משאבת המזרק בקצב זרימה של 0.008 מיליליטר לדקה. המשך להפעיל את משאבת המזרק במשך 60 דקות ולאסוף את השתן בתוך צינור השתן לאחר מכן.

מניחים את צינור השתן על קרח. במחקר זה, סריקת פלואורסצנטיות של שתן עכבר מקומי מראה שיא ב 395 ננומטר. FITC polysucrose 70 בריכוז של 40 מיקרוגרם למיליליטר בשתן העכבר מציג פלואורסצנטיות מקסימלית ב 525 ננומטר.

שתן העכבר אינו מפריע למדידת הפלואורסצנטיות של FITC polysucrose 70. בכניסה של 525 ננומטר הגדלת ריכוזים של FITC polysucrose 70 מראה עוצמה פלואורסצנטיות מוגברת. שיטה זו מסוגלת גם לזהות הבדלים חנונית גלומרולרית.

העמודים הלבנים מייצגים את רמות הפוליוסוקורוז FITC 70 לפני תחילת הגירוי אנגיוטנסין II בשלב הניסוי. לאחר המינונים במשך 60 דקות, חדירות גלומרולרי גדל בהשוואה לקבוצת הביקורת. אנגיוטנסין II לשטוף את החדות גלומרולרית ירד.

ה- FITC polysucrose 70 רמות ירדו לאחר 60 דקות נוספות של גירוי אנגיוטנסין II או 60 דקות של סחף אנגיוטנסין II. העלייה חדירות גלומרולרי עקב אנגיוטנסין II יכול להיחסם על ידי חוסם קולטן אנגיוטנסין II. לחץ דם במעקב על ידי שיטת שרוול הזנב לא הראה הבדלים משמעותיים בין הקבוצה המטופלת שליטה אנגיוטנסין II.

בעת ניסיון הליך זה חשוב להימנע מטבוליזם אוויר בעת שינוי פתרונות עירוי.