שתיים, כלי סגר דגם העכבר של איסכמיה מוחית-פגיעה reperfusion

מודל העכבר הזה של איסכמיה מוחית דו-כלי יכול לחקור את הפתופיזיולוגיה של שבץ. מודל זה יגרום נפח אוטם יציב של רוב המוח חודר תאים חיסוניים במוח איסכמי ואת הגירעון ההתנהגותי לאחר איסכמיה מוחית-reperfusion. במודל זה, אוטם נגרם באזורים קליפת המוח ושיעור התמותה נמוך.

בגלל מודל הרפיה MCAO קשירה דורש craniotomy לחשוף את הגודל של MCA דיסטלי, הגודל ניתן לאשר בקלות, ואת הבדיקה אם זרימת הדם MCAO דיסטלי הוא שיבש במהלך ההליך הוא פשוט. לספק לעכברים גישה חופשית למים ומזון עד הניתוח. אוטול את הכלים הכירורגיים, ולהשתמש 70% אתנול כדי לחטא את שולחן הניתוח וציוד.

לאחר הרדמה של עכבר בן שמונה עד 12 שבועות, ודא שאין לו רפלקס דוושה כאשר הוא נבדק באמצעות קמצוץ בוהן מוצק. השתמש משחה וטרינר כדי למנוע יובש בעיניים בזמן העכבר נמצא תחת הרדמה. כדי לפקח על לחץ הדם, תחילה להסיר את השיער, ולאחר מכן להשתמש במערכת לחץ דם לא פולשנית מערכת ניטור פיזיולוגית כדי לפקח על טמפרטורה רקטליים וגזי דם עורקיים.

להזריק את העכבר תת עורית עם אנטיביוטיקה מניעתית. לאחר מכן, מניחים את העכבר במצב supine על כרית החימום. כדי לחשוף את העור, השתמש קוצץ חשמלי לגלח את הפרווה על אזור הצוואר הגחוני באזור שבין העין הימנית לאוזן ימין.

לנקות את הפרווה מהגוף של החיה עם קרם epilating, ולחטא את האתר הכירורגי עם 70% אתנול. ואז לחתוך חתך קו אמצע באורך סנטימטר אחד בצוואר באמצעות מספריים איריס. עם מלקעי הקשתית, בזהירות לנתח את העורק הראשי נפוץ ללא עצבי vagus מבלי לגרום לפציעה פיזית, ולהשתמש 5-0 תפרים משי כדי לבודד את העורק.

לאחר מכן, השתמש מספריים איריס לעשות חתך 0.3 ס"מ בקרקפת במרכז בין העין הימנית לאוזן ימין. בעזרת מיקרו מספריים, חותכים את שריר הטמפורליס כדי לחשוף את עצם הזיגומטית והסקוומוסאלית. מניחים את העכבר מתחת למיקרוסקופ ניתוח סטריאו, ולהשתמש במקדח מיקרו כדי ליצור חור שני מיליליטר ישירות מעל עורק המוח הדיסטלי באמצע בצד ימין.

השתמש בתפר 10-0 כדי לייגד את תא המטען של MCA דיסטל בצד ימין, ולהשתמש קליפ מפרצת לא טראומטית כדי occlude CCA בצד ימין. לאחר משך הזמן הרצוי של איזמיה, להסיר את קליפ התפר והמפרצת כדי לשחזר את זרימת הדם MCA ו CCA. השתמש קליפ תפר כדי לאטום את חתך העור על הראש ולאטום את החתכים בעור צוואר הרחם עם דבק כירורגי.

להזריק buprenorphine תת עורית להקלה על הכאב. לשמור על טמפרטורת הגוף של החיה ב 36.5 פלוס או מינוס 0.5 מעלות צלזיוס על כרית החימום, ולא להשאיר ללא השגחה או להחזיר אותו לחברה של בעלי חיים אחרים עד שהוא התאושש לחלוטין מן ההרדמה. לבסוף, מניחים את העכבר לתוך כלוב autoclave, כך שהוא יכול לגשת בחופשיות מים ומזון לאחר שהוא התאושש לחלוטין.

השתמש מספריים איריס לעשות חתך בעור של הראש של העכבר הרדמה ערוף כדי לחשוף את הגולגולת. לאחר מכן השתמש במספריים הפעלה כדי לחתוך את הקדמי של העצם הקדמית, ועם מספריים איריס, לחתוך את הגולגולת לאורך התפר sagittal. בעזרת רונגור עצם, דחפו הצידה את העצם הקדמית והקודקודית, וחשפו את המוח.

הסר את המוח, והצב אותו במטריצת מוח של עכבר. השתמשו בסכיני גילוח כדי להשיג פרוסות קורונול של שני מיליליטר, והצבו אותן בצינורות של 50 מיליליטר מלאים בחמישה מיליליטר של 2%TTC. בעת שימוש במטריצת מוח העכבר כדי להשיג פרוסות coronal, גודל החיתוך צריך להיות זהה במוחות שונים.

גודל החיתוך משפיע על גודל פרוסות המוח, אשר משפיעות גם על חישוב גודל אוטם. הכתם את פרוסות המוח ב-2%TTC וב-PBS 1X למשך 10 דקות ב-37 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן שטף פעמיים ב-10% פורמלין. לתקן את פרוסות המוח ב 10% פורמלין בטמפרטורת החדר במשך 24 שעות.

לאחר ייבוש פרוסות המוח על נייר הרקמה כדי לספוג עודפי פורמלין, מסדרים אותם על מגלשת פלסטיק נקייה, ומכווןים אותם מ rostral כדי caudal, ולכסות אותם עם עוד שקופית פלסטיק נקי. סרוק את השקופית באמצעות סורק. הפוך את השקופית וסרוק את הצד ההפוך.

השתמש בתוכנת ImageJ כדי לחשב את אזור האוטם של כל מקטע, על-ידי פתיחת קובץ התמונה תחילה והגדרת קנה המידה של התמונה. לאחר מכן השתמש בבחירה ביד חופשית כדי לבחור את האזור האוטם, ולהשתמש באזורים של מנהל ההשקעות של הריבית כדי למדוד את תחום העניין. לבסוף, סכם את אזורי האוטם עבור כל מקטע והכפל את התוצאה בעובי המקטע כדי להעריך את נפח האוטם הכולל ולאחר מכן השלם ניתוח סטטיסטי כמתואר בכתב היד.

עלייה משך איזכמיה במהלך הליך זה MCAO reperfusion הפיק דרגות שונות של נפח אוטם הנגרמת על ידי איזכמיה ואובדן עצבי בקליפת המוח של אזור MCA הנכון. יתר על כן, האיזכמיה הפחיתה את פעילות לוקומוטור של החיה ב 48 שעות לאחר ההתרשות MCAO. לאחר איסכמיה מוחית-reperfusion, חלק גדול של תאים חיסוניים היקפיים חדרו את חצי הכדור ipsilateral של המוח האיסכמי.

בנוסף, כאשר מודל זה של שתי חללית occlusion הושווה עם מודל MCAO, נפחי אוטם שלהם לא היו שונים באופן משמעותי. יש להשתמש בזהירות במקדחת המיקרו בעת יצירת חור בגולגולת. עם פעולה בלתי הולמת, קל לגרום לדימום מ MCA.

MCA לא צריך להיפגע, ואת הדימום יש להימנע לפני ואחרי הליך הקשירה. העורקה MCA ואת מצב ההשלכות ניתן לבדוק על ידי דופלר לייזר. שיטה זו יכולה לאשר את מצב זרימת הדם של MCA.