Name: בידוד והעברה המאמצת של מלח גבוהה מטופלים אנטיגן תאים דנדריטים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-03-05T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: למד בידוד תאים דנדריטיים CD11c חיוביים מטחול עכברים באמצעות מיון תאים מגנטי והעברה מאמצת לעכברים נאיביים. שיטה זו מאפשרת חקר תפקידם הפיזיולוגי במחלות יתר לחץ דם ומחלות לב וכלי דם.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי איגוד הלב האמריקאי מעניק POST290900 N.R.B., 17SDG33670829 L.X., מכוני הבריאות הלאומיים להעניק K01HL130497 משום מקום

אוניברסיטת ואנדרבילט אכפת לי חיה המוסדית והוועדה שימוש אישרו ההליכים המתוארים במסמך זה. עכברים הם שוכנו, דאגו לפי המדריך על טיפוח ועל שימוש של חיות מעבדה (Press Academies הלאומית. 2010 המתוקן).
1. בידוד של טחולים של עכברים
<ol><li>הכן 1640 RPMI: 10% FBS, 0.10 מ"מ HEPES, פירובט נתרן 1 מ מ, 50 מיקרומטר β-mercaptoethanol ו- 1% פניצילין/סטרפטומיצין.</li>
	<li>המתת חסד בשבוע 10-12-C57bl/6 בן זכר עכברים באמצעות אינהלציה2 CO. לרסס את החזה ואת הצדדים של העכבר עם 70% אתנול. בצד שמאל, פתח היטב את העור ואת חלל הצפק לחשוף את הטחול.</li>
	<li>באמצעות מלקחיים קטנים, בזהירות להזיז את המעיים והכבד לצד השמאלי של העכבר, ושימוש מספריים בסדר בעדינות לסלק את הטחול. הערה: שלב זה חייב להיעשות בזהירות רבה כפי נזק מערכת העיכול יכול לגרום לזיהום.</li>
	<li>מקום הטחול נכרת כל צינור חרוטי שכותרתו 15 מ"ל המכיל 3 מ"ל של RPMI 1640 בינוני.</li>
</ol>2. דור של תא בודד המתלים מ טחולים
הערה: הטחול יכול להיות חלופה מועדפת להשעיה תא בודד על ידי שילוב של דיסוציאציה מכני פלוס עיכול אנזימטי.
<ol><li>להכין את הפתרון עיכול הטחול על-ידי הוספת collagenase D (1 מ"ג/מ"ל; 0.29 U/מ ג lyophilized) והכנתי DNase (0.1 mg/mL) כדי RPMI 1640 בינוני (ראה שלב 1.1)</li>
	<li>להשתמש מלקחיים להעביר הטחול לתוך צינור C (הצינור דיסוציאציה) המכיל 3 מ"ל של הטחול עיכול פתרון.</li>
	<li>
לבצע את הדיסוציאציה מכני באמצעות מהמגן חצי אוטומטית בהתאם להוראות היצרן.
	<ol>
<li>מקם את הצינור C על גבי חצי אוטומטיות מהמגן, המבטיח כי הצינור C ממוקמת בחוזקה על זרוע מסתובבת. ברגע הצינור C מושם, ליחצו על כפתור התחל מהמגן חצי אוטומטי כדי להפעיל את פרוטוקול הטחול 04.01 60 s. הערה: דיסוציאציה מכני יכול להתבצע גם על ידי הצבת מסנן μm 40 על גבי צינור חרוטי 50 מ ל וגריסה בעדינות הטחול דרך המסנן. לאחר שחיקה הטחול, דרך לשטוף את המסנן מיקרומטר 40 עם 10 מ"ל של מדיה RPMI.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאחר דיסוציאציה מכני, ניתוק ברכבת התחתית מהמגן ולבצע עיכול אנזימטי. דגירה בדגימות למשך 15 דקות ב 37 ° C תחת סיבוב רציף (20 סל ד).</li>
	<li>להעביר את הפתרון על-ידי pipetting לתוך צינור חרוטי 50 מ ל לאחר שהסתנן דרך מסננת 40 מיקרומטר. לשטוף את מסננת מיקרומטר 40 עם 10 מ"ל של PBS של Dulbecco (dPBS). Centrifuge התאים ב x 300 גר' 10 דקות ב 4 º C.</li>
	<li>לאחר צנטריפוגה, וארוקן את תגובת שיקוע לחלוטין ולשטוף בגדר מאת resuspending ב- 10 מ"ל של dPBS. צנטריפוגה ב x 300 גר' 10 דקות ב 4 º C.</li>
</ol>3. בידוד של CD11c+ DCs מהשעיה הטחול תא בודד
<ol><li>Resuspend בגדר תא ב 5 מ של dPBS וספור את מספר התאים באמצעות hemocytometer trypan כחול הדרה.</li>
	<li>גלולה התאים על ידי צריך שתוציאו ב 300 x g, 10 דקות ב 4 º C.</li>
	<li>וארוקן את תגובת שיקוע לחלוטין, resuspend צנפה ב 400 µL מגנטית מופעל מיון תא מאגר (מקינטוש).</li>
	<li>להוסיף 100 µL של גרגרי CD11c (ראה טבלה של חומרים) לכל עונה 1 פרק 108 תאים.</li>
	<li>מערבולת התליה תא דגירה 10 דקות במקרר-4 מעלות צלזיוס.</li>
	<li>להוסיף 10 מ ל מקינטוש המאגר כדי לשטוף את התאים. צנטריפוגה ב x 300 גר' 10 דקות ב 4 º C.</li>
	<li>וארוקן את תגובת שיקוע לחלוטין, resuspend ב µL 500 MACs המאגר.</li>
</ol>4. הפרדה מגנטית של CD11c+ DCs
הערה: הפרדה מגנטית מתבצעת באופן ידני באמצעות מפריד מגנטי (ראה טבלה של חומרים) לבוש עם עמודות LS. ניתן גם לעשות הפרדה מגנטית באופן אוטומטי עם הפרדה מגנטית אוטומטית. (ראה טבלה של חומרים).
<ol><li>מקם את העמודה? האם השדה המגנטי של מקינטוש ומפריד צינור חרוטי 15 מ"ל בכל עמודה כדי לאסוף את הזרימה דרך.</li>
	<li>יש לשטוף את העמודה LS עם 3 מ"ל של המאגר.</li>
	<li>מקום התליה תא אל כל עמודה LS ולאסוף את הזרימה דרך המכיל תאים ללא תווית.</li>
	<li>לשטוף את העמודה LS עם 3 מ"ל של מאגר MACs איסוף התאים ללא תווית לעבור דרך. לשטוף את העמודה LS 2 פעמים נוספות.</li>
	<li>הסר את העמודה LS במפריד מגנטי. להוסיף 5 מ של מקינטוש מאגר כל עמודה, מיד לשטוף את התאים דיסקות שכותרתו מאת בחוזקה צולל העמודה LS לתוך צינור חרוטי נקי 15 מ"ל. הערה: חשוב לבצע עם בידוד כפול של תאים CD11c כדי לקבל השעיה תא טוהר גבוהה. לכן, חזור על שלבים 3.1 עד 4.5. וצור הפניה איור 4 לתקנים טוהר. שלב זה משפר את הטוהר של CD11c+ תאים 90 עד 95 אחוז.</li>
	<li>
לקבוע CD11c+ DC מספר על hemocytometer באמצעות trypan blue הדרה. לדלל את הדגימה תא ב- 1:1 לדילול בפתרון trypan blue 0.4%. הערה: תאים Non-קיימא להיות מוכתם כחול, בעוד התאים קיימא יישאר וללא רבב.<ol>
<li>כדי לעשות זאת, בזהירות למלא את hemocytometer של µL 10 של דילול דגימת תאים, תקופת דגירה של 1 דקה.</li>
		<li>ספירת תאים 4 ריבועים של 1 x 1 מ מ2 בחדר נטען כדי לקבוע את המספר הנייד קיימא.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. בטיפול חוץ גופית גבוה מלח CD11c+ DCs
<ol><li>להכין DC תרבות בינוני על-ידי הוספת 10% FBS, 0.1 מ מ HEPES, פירובט נתרן 1 מ מ, 50 מיקרומטר β-mercaptoethanol ו 1% פניצילין/סטרפטומיצין 500 mL 1640 RPMI.</li>
	<li>הכינו 10 x DC תא מלח גבוהה תרבות המדיה (400 מ מ) על ידי שוקל 1.17 גר' NaCl והצבתו לתוך צינור בז סטרילי 50 מ. להוסיף 50 מ של סטרילי DC תא תרבות המדיה (להכין בשלב 5.1) 50 מ ל בז שפופרת של מערבולת עד NaCl בתמיסה.</li>
	<li>מיד לסנן גבוהה מלח DC תרבות התקשורת באמצעות ואקום סינון דרך מסנן μm 0.2 בשכונה התרבות תאים.</li>
	<li>Centrifuge כל השעיה תא מ טחולים ב x 300 גר' 10 דקות ב- 4ºC. Resuspend כל גלולה תא בתקשורת תרבות DC-ריכוז של עונה 1 פרק 106 תאים/מ ל....</li>
	<li>פיפטה 900 μL (כ 1 x 106 תאים) של ההשעיה DC בחלק תחתון שטוח 24-ובכן בז צלחת. להוסיף 100 µL של התקשורת תרבות DC מלח גבוהה מכל קידוח עבור ריכוז נתרן הסופי של 190 מילימטר. לתייג את הצלחת, מקומו 37 ° C humified CO2 החממה במשך 48 שעות.</li>
</ol>6. המאמצת בהעברת מלח גבוהה מטופלים CD11c+ DCs
<ol><li>לאחר גירוי במבחנה במשך 48 שעות, הסר הצלחת מ 37 ° C humified CO2 מיכלים.</li>
	<li>Pipette תא תרבות התקשורת למעלה ולמטה resuspend CD11c+ DCs-פיפטה כל CD11c+ DC ההשעיה לתוך מקביל הנקרא צינור 1.6 מ ל. חזור על שלב זה עבור כל אדם טוב מצופה.</li>
	<li>Centrifuge בכל CD11c+ DC ההשעיה ב x 300 גר' 10 דקות ב 4 º C. וארוקן את תגובת שיקוע. Resuspend בגדר DC עם 100 µL של dPBS סטרילי.</li>
	<li>. ההשעיה צייר DC לתוך מזרק 1 מ"ל מצויד עם מחט ½ אינץ ' 27 G</li>
	<li>מקום תמים זכר 10 בת שבוע C57bl/6 העכברים מתחת לגיל 2% איזופלוריין כדי להשיג מטוס כירורגי יציב. בדוק את רמת ההרדמה עם חוסר רפלקס פדלים. ברגע מטוס כירורגי יציב מושגת, לאט ובזהירות להציג את המחט לתוך המרחב רטרו-מסלולית בזווית של 30 מעלות. הערה: השיקוע של המחט 27 G צריך להיות כלפי מטה, מן העין, כדי למנוע נזק עינית.</li>
	<li>לאט לאט בצורה חלקה להזריק את CD11c+ DC ההשעיה (כ 1 x 106 תאים). לאחר הזריקה תושלם, הסר בזהירות את המחט עבור שטח רטרו-מסלולית להיות בהכרה כדי לא לגרום נזק לעין. הערה: לאחר הזריקה צריך להיות מעט או ללא דימום. העברה המאמצת של CD11c+ Dc ניתן גם לבצע באמצעות שיטה עירוי של הזרקה (למשל וריד הזנב). העכברים שליטה לקבל CD11c+ בקרי תחום שלא היו תרבותי בתקשורת מלח רגיל.</li>
	<li>להסיר את העכברים קונוס האף ונטר אותם במשך כ 30 דקות במהלך ההתאוששות מן ההרדמה.</li>
</ol>7. הכנת יום 14 במינון נמוך אנגיוטנסין II (140 ng/ק"ג/דקה)
<ol><li>להכין מאגר אנגיוטנסין II על-ידי הוספת μL 500 של 5 M NaCl 300 μL של חומצה אצטית. Satis קוונטית (QS) עד 30 מ של יונים H20.</li>
	<li>להמיס אנגיוטנסין II לפתרון מניות 5 מ"ג/מ"ל עם אנגיוטנסין II מאגר. אנגיוטנסין II הפתרון מניות עם המאגר הנוסף כדי להשיג ריכוז סופי כזה minipump osmotic יעביר אנגיוטנסין II בקצב של 140 ng/kg/min לפי משקל הגוף של כל עכבר מדולל. הערה: חיוני אנגיוטנסין II (מ ג) = (עכבר משקל (g) x 0.2 מ ג / יום x 14 ימים) / 1,000 מוכן אנגיוטנסין II (מ ג) = (חיוני אנגיוטנסין II x 260 µL) / משאבה קצב (0.25 μL) אנגיוטנסין II מניות נפח (μL) = מוכן אנגיוטנסין II / מלאי ריכוז (5 מ"ג/מ"ל) x 1,000 לדלל נפח (μL) = 270 - אנגיוטנסין II מניות נפח</li>
	<li>להוסיף אנגיוטנסין II מניות נפח שתדללו (אנגיוטנסין II מאגר) מבוסס על אמצעי האחסון שחושבו בצעד 7.2.</li>
	<li>ברדס תרבות תא סטרילי, פתח osmotic minipump.</li>
	<li>הוספת מדולל אנגיוטנסין II פתרון ולהוציא אוויר במזרק, המחט. את המחט שסופקו לתוך החלק התחתון של minipump osmotic ולהזריק לאט אנגיוטנסין II פתרון תוך לאט ובזהירות בכדי לבטל את המחט של שלפוחית השתן.</li>
	<li>הכנס את הראש osmotic minipump לתוך שלפוחית השתן osmotic באופן מלא, תשומת לב לא בשביל שיהיה להם אוויר לתוך שלפוחית השתן.</li>
</ol>8. ההשתלה של 14 יום במינון נמוך אנגיוטנסין II Osmotic Minipumps
<ol><li>עשרה ימים לאחר העברתם המאמצת של CD11c+ DCs, המקום עכברים בתוך תא איזופלוריין ליזום הרדמה, ולאחר מכן להעביר עכברים האף חרוט ברציפות לקבל 2% איזופלוריין להשיג ולשמור על מטוס כירורגי המתאים.</li>
	<li>הסר את הפרווה לאורך הצד הגבי של הצוואר עם קוצץ כדי להכין אתר כירורגי. לנקות את האזור מגולח עם אתנול 70% ואחריו betadine 7.5% לפני תחילת הניתוח.</li>
	<li>ליצור חתך קטן (כ 1.5 ס מ) של העור. הכנס ועוצרי דימום לתוך החתך כדי ליצור כיס תת עורית עבור הצבת osmotic minipump.</li>
	<li>הוסף את minipump לתוך הכיס תת עורית. קרוב לעור פצע עם תפרי ניתוח 2-3 ולהחיל יישום אחר של 7.5% betadine על הפצע, סיכות כדי למנוע זיהום.</li>
	<li>לפקח על העכברים למשך 30-60 דקות במהלך ההתאוששות מן ההרדמה לפני שחזר אותם לכלובים. הערה: עכברים צריך להיות במעקב עד 3-4 ימים לאחר השרשת osmotic minipump.</li>
</ol>9. בידוד של טחולים של עכברים הנמען עבור ניתוח Cytometric תזרים
<ol><li>לאחר 14 ימי במינון נמוך אנגיוטנסין II אינפוזיה, לבודד טחולים של עכברים שקיבלו במבחנה מלח גבוהה מטופלים DCs בהעברה המאמצת. בצע את השלבים מדויק המפורטים לעיל (שלבים 1 ו-2).</li>
</ol>10. צביעת משטח
<ol><li>
העברת splenocytes כי הם resuspended ב- 1 x PBS לתוך פוליסטירן FACS צינור צנטריפוגה ב x 350 גרם במשך 8 דקות ב 4 º C. האחות תגובת שיקוע לאחר צנטריפוגה. לשטוף פעמיים עם 1 מ"ל של מאגר MACs, צנטריפוגה (x 350 גרם, 8 דקות, 4 ° C).
	<ol>
<li>לחלק את splenocytes באותה מידה צינורות שונים פוליסטירן FACS מבוסס על מספר פאנלים cytometric הזרימה הרצויה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>כדי לבצע ההכתמה של הכדאיות תא חי/מת, לשטוף את התאים עם 1 x PBS, צנטריפוגה (x 350 גרם, 8 דקות, 4 ° C). Resuspend ב מ 1 ל 1 x PBS ולהוסיף 1 µL של התא-הכדאיות כתם (ראה טבלת חומרים). תקופת דגירה של 15 דקות ב 4 ° C (במקרר או על קרח) מכוסה בנייר כסף כדי להגן מפני אור.</li>
	<li>במהלך הדגירה של הכתם הכדאיות תא, להכין את הקוקטייל של נוגדנים פני התא מכתים בתוך אמצעי אחסון המתאים MACS המאגר.</li>
	<li>רוחצים את התאים עם 1 מ"ל MACS מאגר, צנטריפוגה (350 x g, 8 דקות, 4 ° C), את resuspend כל גלולה תא עם 100 µL של הנוגדן קוקטייל. דגירה מוגנים מפני האור למשך 30 דקות ב 4 º C. הערה: כל נוגדן cytometry זרימה הוא ייחודי, זה שימושי מאוד, מומלץ לקבוע את כמות אופטימלית נוגדנים הדרושים על-ידי ביצוע עיקול טיטור מנה עבור כל נוגדן ספציפי.</li>
	<li>רוחצים את התאים פעמיים עם 1 מ"ל MACS המאגר את resuspend את splenocytes בסכום המתאים MACS מאגר לניתוח cytometric זרימה.</li>
</ol>

<ol><li>Kearney, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+hypertension%3A+analysis+of+worldwide+data%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global burden of hypertension: analysis of worldwide data.</a> Lancet. 365, 217-223 (2005).</li>
<li>Murray, C. J., Lopez, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+the+global+burden+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Measuring the global burden of disease.</a> N Engl J Med. 369, 448-457 (2013).</li>
<li>Lev-Ran, A., Porta, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salt+and+hypertension%3A+a+phylogenetic+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%2Fmetabolism+research+and+reviews%22%5BJournal%5D)">Salt and hypertension: a phylogenetic perspective.</a> Diabetes/metabolism research and reviews. 21, 118-131 (2005).</li>
<li>Frisoli, T. M., Schmieder, R. E., Grodzicki, T., Messerli, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salt+and+hypertension%3A+is+salt+dietary+reduction+worth+the+effort%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+medicine%22%5BJournal%5D)">Salt and hypertension: is salt dietary reduction worth the effort.</a> The American journal of medicine. 125, 433-439 (2012).</li>
<li>He, F. J., Li, J., Macgregor, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+longer-term+modest+salt+reduction+on+blood+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Cochrane+Database+Syst+Rev%22%5BJournal%5D)">Effect of longer-term modest salt reduction on blood pressure.</a> Cochrane Database Syst Rev. 4, 004937(2013).</li>
<li>Weinberger, M. H., Miller, J. Z., Luft, F. C., Grim, C. E., Fineberg, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definitions+and+characteristics+of+sodium+sensitivity+and+blood+pressure+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Definitions and characteristics of sodium sensitivity and blood pressure resistance.</a> Hypertension. 8, 127-134 (1986).</li>
<li>Morimoto, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sodium+sensitivity+and+cardiovascular+events+in+patients+with+essential+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Sodium sensitivity and cardiovascular events in patients with essential hypertension.</a> Lancet. 350, 1734-1737 (1997).</li>
<li>Weinberger, M. H., Fineberg, N. S., Fineberg, S. E., Weinberger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Salt+sensitivity%2C+pulse+pressure%2C+and+death+in+normal+and+hypertensive+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Salt sensitivity, pulse pressure, and death in normal and hypertensive humans.</a> Hypertension. 37, 429-432 (2001).</li>
<li>Barbaro, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+Cell+Amiloride-Sensitive+Channels+Mediate+Sodium-Induced+Inflammation+and+Hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Dendritic Cell Amiloride-Sensitive Channels Mediate Sodium-Induced Inflammation and Hypertension.</a> Cell Rep. 21, 1009-1020 (2017).</li>
<li>Kirabo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+paradigm+of+sodium+regulation+in+inflammation+and+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Regulatory%2C+integrative+and+comparative+physiology%22%5BJournal%5D)">A new paradigm of sodium regulation in inflammation and hypertension.</a> American journal of physiology. Regulatory, integrative and comparative physiology. 313, 706-710 (2017).</li>
<li>Machnik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophages+regulate+salt-dependent+volume+and+blood+pressure+by+a+vascular+endothelial+growth+factor-C-dependent+buffering+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Macrophages regulate salt-dependent volume and blood pressure by a vascular endothelial growth factor-C-dependent buffering mechanism.</a> Nat Med. 15, 545-552 (2009).</li>
<li>Kopp, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((23Na+magnetic+resonance+imaging-determined+tissue+sodium+in+healthy+subjects+and+hypertensive+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">23Na magnetic resonance imaging-determined tissue sodium in healthy subjects and hypertensive patients.</a> Hypertension. 61, 635-640 (2013).</li>
<li>Dixon, K. B., Davies, S. S., Kirabo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+and+isolevuglandins+in+immunity%2C+inflammation%2C+and+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Heart+and+circulatory+physiology%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells and isolevuglandins in immunity, inflammation, and hypertension.</a> American journal of physiology. Heart and circulatory physiology. 312, 368-374 (2017).</li>
<li>Kirabo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DC+isoketal-modified+proteins+activate+T+cells+and+promote+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">DC isoketal-modified proteins activate T cells and promote hypertension.</a> J Clin Invest. 124, 4642-4656 (2014).</li>
<li>McMaster, W. G., Kirabo, A., Madhur, M. S., Harrison, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation%2C+immunity%2C+and+hypertensive+end-organ+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Inflammation, immunity, and hypertensive end-organ damage.</a> Circ Res. 116, 1022-1033 (2015).</li>
<li>Harrison, D. G., Vinh, A., Lob, H., Madhur, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+adaptive+immune+system+in+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Role of the adaptive immune system in hypertension.</a> Curr Opin Pharmacol. 10, 203-207 (2010).</li>
<li>Madhur, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin+17+promotes+angiotensin+II-induced+hypertension+and+vascular+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Interleukin 17 promotes angiotensin II-induced hypertension and vascular dysfunction.</a> Hypertension. 55, 500-507 (2010).</li>
<li>Harrison, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation%2C+immunity%2C+and+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Inflammation, immunity, and hypertension.</a> Hypertension. 57, 132-140 (2011).</li>
<li>Crowley, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stimulation+of+lymphocyte+responses+by+angiotensin+II+promotes+kidney+injury+in+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+physiology.+Renal+physiology%22%5BJournal%5D)">Stimulation of lymphocyte responses by angiotensin II promotes kidney injury in hypertension.</a> American journal of physiology. Renal physiology. 295, 515-524 (2008).</li>
<li>Zhang, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+role+for+type+1+angiotensin+receptors+on+T+lymphocytes+to+limit+target+organ+damage+in+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">A novel role for type 1 angiotensin receptors on T lymphocytes to limit target organ damage in hypertension.</a> Circ Res. 110, 1604-1617 (2012).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

בפרוטוקול הנוכחי, לנו יש אופטימיזציה הליכים כדי לבודד CD11c+ DCs מ טחולים של עכברים, adoptively להעביר אותם לתוך תמים חיות ללמוד את התפקיד של בקרי קבוצת מחשבים במלח-induced יתר לחץ דם. פרוטוקול זה ניתן להתאים לבודד ולהעביר adoptively קבוצות משנה אחרים תא החיסון כולל מקרופאגים, ומונוציטים מסתגלת תאים חיסוניים כולל לימפוציטים T ו- B. לנו יש אופטימיזציה תהליך העיכול הטחול להשגת הישרדות cell נאותה ויציבות של סמני פני ביטוי DC. יתר על כן, לנו יש אופטימיזציה הפרוטוקול לגירוי במבחנה של מאתר Dc עם נתרן גבוהות להישרדות...

עודף מלח תזונה הוא גורם סיכון עיקרי עבור יתר לחץ דם. 1 , 2 American Heart Association ממליץ 2,300 מיליגרם (מ ג) של צריכת נתרן (Na+) ליום, לכל היותר פחות מ-10% מאוכלוסיית ארה ב מתבונן המלצה זו. 3 , 4 צנוע הפחתות צריכת Na+ להוריד את לחץ הדם, לצמצם את המקרים החדשים השנתי של מחלת לב כלילית, קו בארה ב 20%. 5 בעיה רצינית עם עודף צריכת מלח הוא כי 50% מהאוכלוסיה עם יתר לחץ דם תערוכות מלח-רגישות, כהגדרתו העלאה של 10 מ מ כספית בלחץ הדם בעקבות Na+ טעינה או ירידה דומה בלחץ הדם לאחר Na+ ההגבלה ו diuresis. 6 מלח-רגישות גם מתרחשת ב- 25% של אנשים normotensive, חזאי עצמאית של מוות ושל אירועי לב וכלי דם. 7 , 8 מנגנוני חישה מלח יתר לחץ דם המערבים את הכליה. ובכן נחקרו; אולם, מחקרים שנעשו לאחרונה מראים כי תאי המערכת החיסונית יכולה לחוש Na+. 9 , 10
ממצאים אחרונים מעידים כי השינויים במיוחד כליות נה+ טיפול יכול לגרום להצטברות של Na+ interstitium ולקדם דלקת. 11 , 12 מעבדה שלנו ואחרים הראו כי תאים של שני מולדת, מסתגלת המערכת החיסונית לתרום החרפה של יתר לחץ דם. 9 , 13 , 14 , 15 שונים לחץ דם גבוהה לגירויים, כולל אנגיוטנסין II, נוראדרנלין, כי מלח מקרופאגים, ומונוציטים ו- T לימפוציטים לחדור את הכליות ואת להערכת ולקידום השמירה Na+ , vasoconstriction, לחץ דם העלאת ונזק סוף-איברים. 9 , 16 , 17 , 18 , 19 , 20 במחקרים קודמים, מצאנו כי DCs להצטבר isolevuglandin (IsoLG)-חלבון adducts בתגובה לגירויים שונים עם יתר לחץ דם, לרבות אנגיוטנסין II ו- DOCA-מלח יתר לחץ דם. 14 IsoLGs מוצרים מאוד תגובתי של השומנים peroxidation במהירות, covalently adduct כדי lysines על חלבונים, הצטברות שלהם קשורה DC הפעלה. 14 הקמנו לאחרונה כי מוגברות Na+ הוא גירוי חזק עבור IsoLG-חלבון adduct-צורה מאתר Dc-9 Na+ כניסתו DCs מתווך באמצעות מובילי רגיש amiloride. נה+ ואז חילופי לקבלת סידן (Ca2 +) דרך בכל הארץ, ד2 + מחליף נה+. Ca2 + מפעיל קינאז C (PKC) אשר מפעיל את אוקסידאז nadph ל המוביל סופראוקסיד מוגברת (O2· -), IsoLG-חלבון adduct גיבוש. 9 ההעברה המאמצת של מלח החשופים DCs הפריימים יתר לחץ דם בתגובה מנה תת pressor של אנגיוטנסין II. 9
זיהוי של CD11c+ DCs רקמות הוגבלה בעבר אימונוהיסטוכימיה, RT-PCR, בידוד של בקרי קבוצת מחשבים הוגבלה לתא מיון לפי cytometry זרימה. למרות cytometry זרימה מיון תא היא שיטה חזקה הבידוד של תאים חיסוניים, שזה יקר, זמן רב, מה שמוביל תשואה נמוכה של התאים קיימא. לכן, אנו יש אופטימיזציה פרוטוקול צעד אחר צעד עיכול רקמת, גירוי במבחנה של העברה המאמצת של CD11c+ DCs ללמוד ביתר לחץ דם.

<table><tbody><tr><td>APC/Cy7 נגד עכבר CD11c</td><td>Biolegend</td><td>117324</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS מאגר ריצה&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-221</td><td></td></tr><tr><td>CD11c MicroBeads Ultrapure&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-108-338</td><td></td></tr><tr><td>קולגנאז D</td><td>Roche</td><td>11088866001</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td></td></tr><tr><td>DPBS ללא סידן ומגנזיום</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>FcR חוסם ריאגנט</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>&nbsp; 130-092-575</td><td></td></tr><tr><td>FITC נגד עכבר CD45</td><td>Biolegend</td><td>103108</td><td></td></tr><tr><td>שפופרת GentleMACS C</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-334</td><td></td></tr><tr><td>מכשיר דיסוציאטור GentleMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td>פרוטוקול שימוש: טחול 04.01</td></tr><tr><td>LIVE/DEAD ערכת כתמי תאים מתים סגולה ניתנת לתיקון</td><td>Invitrogen</td><td>L34964</td><td></td></tr><tr><td>LS עמודות</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>מפריד QuadroMACs&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 בינוני&nbsp;</td><td>ג'יבקו</td><td>11835-030</td><td></td></tr></tbody></table>

בידוד והעברה המאמצת של מלח גבוהה מטופלים אנטיגן תאים דנדריטים

Isolation and Adoptive Transfer of High Salt Treated Antigen-presenting Dendritic Cells

עודף צריכת המלח תזונתיים תורמת דלקת ואת ממלא תפקיד חיוני בהתפתחות של יתר לחץ דם. קודם לכן מצאנו כי אנטיגן תאים דנדריטים (Dc) יכול לחוש נתרן גבוהות חוץ-תאית, המוביל את ההפעלה של אוקסידאז nadph ל היווצרות של isolevuglandin (IsoLG)-חלבון adducts. אלה IsoLG-חלבון adducts מגיבים עם עצמי-חלבונים ולקדם אוטואימונית כמו המדינה ויתר לחץ דם. יש שפותחה ואנו ממוטב המדינה-of-the-art שיטות ללמוד הפונקציה DC ביתר לחץ דם. כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט לבידוד, ב- חוץ גופית הטיפול עם נתרן גבוהות, והעברה המאמצת של הטחול מאתר CD11c+ תאים לתוך עכברים הנמען ללמוד את תפקידם של יתר לחץ דם.

איור 1 מייצג תיאור סכמטי של השלבים המתוארים לעיל. טחולים מאתר מבודד מסודרים עבור CD11c+ Dc לתא מגנטי ומיון מצופה מדיה מלח רגיל (NS; 150 mmol NaCl) או מדיה מלח גבוהה (HS; 190 mmol NaCl) עבור ה 48 CD11c+ DCs הם מכן הועבר adoptively על ידי רטרו-מסלולית הזרקה לעכברים הנמען תמים. עשרה ימים מאוחר יותר, עכברים מושתלים עם osmotic minipumps במינון נמוך אנגיוטנסין II (140 ng/kg/min) אינפוזיה למשך 14 ימים. במהלך העירוי ל-14 יום של אנגיוטנסין II, לח...

כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי לבודד תאים דנדריטים טחולים מאתר על ידי מיון מגנטי תא עוקבות המאמצת העברת לתוך תמים עכברים. המודל של תאים דנדריטים מופעל מלח גבוהה נבחר להסביר את ההליכים צעד אחר צעד של cytometry זרימה והעברת המאמצת.

Excess dietary salt intake contributes to inflammation and plays a vital role in the development of hypertension. We previously found that ...

שיטה זו יכולה לענות על שאלות מפתח בתחומים של יתר לחץ דם ומחלות לב וכלי דם כולל המחקר של תאים דנדריטיים חיוביים CD11c וכיצד הם potentiate את התפקיד של פגיעה יתר לחץ דם. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא הבידוד של תאים דנדריטיים חיוביים CD11c מאיברים מוצקים ואת המחקר של תפקידם הפיזיולוגי במצבי מחלה שונים. אז תהליך זה יכול להיות מיושם על סוגי תאים חיסוניים מרובים, כולל לימפוציטים B, לימפוציטים T, מונוציטים, מקרופאגים.הדמיה של הטכניקה היא קריטית להבנת בידוד תאים דנדריטיים, במיוחד תהליך ההעברה המאמץ לעכברים נמען. כדי להתחיל, לרסס את החזה ואת הצדדים של העכבר המתת דם עם 70% אתנול. בצד שמאל, בזהירות לפתוח את העור ואת חלל צפי כדי לחשוף את הטחול.באמצעות מדפים קטנים, בזהירות להזיז את המעיים והכבד לצד שמאל של העכבר. לאחר מכן השתמש במספריים קטנים כדי למלמל בעדינות את הטחול. מניחים כל טחול excised לתוך צינור C שכותרתו המכיל שלושה מיליליטר של RPMI 1640 בינוני.ראשית להוסיף קולגנס D ו DNase מוכן RPMI 1640 בינוני להכין את פתרון עיכול הטחול. מניחים את צינור C על homogenizer אוטומטי למחצה ולהבטיח כי הצינור ממוקם בחוזקה על הזרוע המסתובבת. לחץ על לחצן ההפעלה של homogenizer כדי להפעיל את פרוטוקול הטחול 04.01 למשך 60 שניות.לאחר מכן, לנתק את הצינור מן homogenizer ולהדגר את הדגימות ב 37 מעלות צלזיוס תחת רציף ב 20 סל"ד במשך 15 דקות. לאחר מכן, השתמש פיפטה כדי להעביר את הפתרון לתוך צינור חרוט 50 מיליליטר לאחר סינון זה דרך מסננת 40 מיקרומטר. לשטוף את מסננת עם 10 מיליליטר של dPBS.צנטריפוגה התאים ב 300 פעמים g וב 4 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות. ואז לשאפת את supernatant לחלוטין לשטוף את גלולה על ידי השעיה מחדש אותו 10 מיליליטר של dPBS. צנטריפוגה ההשעיה ב 300 פעמים g וב 4 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות.להשעות מחדש את גלולת התא בחמישה מיליליטר של dPBS. השתמש בהמוציטומטר ובהדרה כחולה של Trypan כדי לספור את מספר התאים. הצנטריפוגה הבאה ב 300 פעמים g וב ארבע מעלות צלזיוס במשך 10 דקות כדי גלולה את התאים.שאפו את העל-טבעי לחלוטין והשעו מחדש את גלולת הכדור ב-400 מיליליטר של חיץ מיון תאים המופעל מגנטית. לאחר מכן הוסיפו 100 מיליליטר של חיידקים CD11c לכל 100 מיליון תאים. מערבולת ההשעיה התא דגירה במשך 10 דקות במקרר בארבע מעלות צלזיוס.לאחר מכן, להוסיף 10 מיליליטר של מאגר MACs לשטוף את התאים צנטריפוגה ב 300 פעמים g ו ב 4 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות. שאף את העל-טבעי לחלוטין והשהה מחדש את התאים ב- 500 מיליליטר של מאגר MACs. מניחים את עמודת ה- LS בשדה המגנטי של מפריד המג וממקמים צינור חרוט 15 מיליליטר מתחת לכל עמודה כדי לאסוף את הזרימה.לאחר מכן, שטפו את העמודות בשלושה מיליליטר של חיץ. מקם את ההשעיה של התא על כל עמודה ואסוף את הזרימה שדרבה מכיל תאים ללא תווית. לשטוף את העמודים עם שלושה מיליליטר של מאגר MACs ולאסוף את התאים ללא תריס העוברים.לשטוף את עמודות LS פעמיים נוספות באמצעות שלושה מיליליטר של מאגר MACs לכל לשטוף. לאחר מכן, הסר את עמודות LS מהמפריד המגנטי. הוסף חמישה מיליליטר של מאגר MACs לכל עמודה ומיד לצלול כל עמודה לתוך צינור חרוט 15 מיליליטר ברור כדי לשטוף את התאים המסומנים מגנטית.השתמש בהמוציטומטר ובהדרה כחולה של Trypan כדי לקבוע את מספר ה- DC החיובי של CD11c כמתואר בפרוטוקול הטקסט. לאחר מכן לדלל את דגימת התא בדילול אחד לאחד ב 0.4%פתרון כחול טריפאן. תחילה, הכן את כדורי התא במדיה של תרבות DC כמתואר בפרוטוקול הטקסט.פיפטה 900 מיקרוליטרים של ההשעיה DC לתוך צלחת בז תחתונה שטוחה 24 באר. הוסף 100 microliters של מדיה תרבות DC מלח גבוה לכל באר, עבור ריכוז נתרן סופי של 190 מילימולר. סמן את הצלחת והצב אותה באינקובטור פחמן דו חמצני לח ב-37 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות.לאחר 48 שעות מוציאים את הצלחת מהחמה. פיפטה מדיה תרבות התא באר אחת למעלה ולמטה כדי להשעות מחדש את תקליטורי ה- DCs החיוביים של CD11c. העבר את כל ההשעיה הזו בצינור 1.6 מיליליטר תואם.חזור על זה עבור כל באר בודדת כי היה מצופה. צנטריפוגה כל הצינורות ב 300 פעמים g וב 4 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות. שאפו את העל-טבעי והשעו מחדש את גלולת DC עם 100 מיקרוליטרים של dPBS סטרילי.לאחר מכן, צייר את פתרון DC מאחד הצינורות למזרק מיליליטר אחד, מצויד במחט 27 מד חצי אינץ '. הנח את הזכר הנאיבי בן 10 שבועות C57-black-6 עכבר תחת 2%isoflurane כדי להשיג מישור כירורגי יציב. בדוק את רמת ההרדמה עם חוסר רפלקס דוושה.לאחר מישור כירורגי יציב מושגת, לאט ובזהירות להציג את המחט לתוך החלל רטרו מסלולית בזווית של כ 30 מעלות. מזריקים לאט ובחלקה את מתלי DC החיוביים CD11c. לאחר השלמת ההזרקה, הסר בזהירות את המחט לחלל רטרו-מסלולית, הקפד לא לפגוע בעין.לאחר מכן להסיר את העכברים מן חרוט האף לפקח עליהם במשך כ 30 דקות במהלך ההתאוששות מן ההרדמה. ניתוח לחץ דם טיפוסי מוצג כאן בעקבות העברה מאמצת של DCs ומשאבות מיני osmotic שהושתלו עבור עירוי אנגיוטנסין II במינון נמוך. יש לציין כי זה מינון נמוך של אנגיוטנסין II הוא מינון מדכא שאינו מגביר את לחץ הדם בעכבר נורמלי.עכברים המקבלים תקליטורים חיוביים CD11c שטופלו במלח שומרים על לחץ דם תקין במהלך העירוי, בעוד שהעכברים המקבלים תקליטורים חיוביים בעלי מלח גבוה מציגים עלייה בלחץ הדם הסיסטולי. ניתוח ציטומטריית זרימה מבוצע לאחר מכן תוך שימוש באסטרטגיית gating המוצגת כאן כדי לקבוע את הטוהר של התאים החיוביים המבודדים CD11c. העשרה מוגברת של התאים החיוביים CD11c נתפסת בהשוואה הטחול הכולל.ריכוזי CD11c Microbead שונים מנוצלים לפתרון בעיות בפרוטוקול היצרן. הפרד מגנטי של טחול באמצעות 100 microliters של Microbeads מניב כ 65% של תאים חיוביים CD11c, תוך שימוש 200 microliters מניבה 55%ושימוש 300 microliters מניבה 50% חוסם FcR כלול יחד עם 100 מיקרוליטרים של Microbeads. בעקבות ההפרדה המגנטית, המצור של FcR מניב כ 65%CD11c תאים חיוביים.כמה טחול לאחר מכן דגירה עם 100 microliters של Microbeads ומופרדים מגנטית דרך עמוד LS. התאים המופרדים דגירה עם 100 microliters נוספים של CD11c ומופרדים שוב באמצעות עמודת LS. תהליך בידוד כפול זה הניב תאים חיוביים של 92%CD11c.בעת ניסיון הליך זה, חשוב לאשר את טוהר התאים המבודדים על ידי ציטומטריית זרימה. לאחר בידוד מגנטי של תאים דנדריטיים הם יכולים להיות מתורבתים כדי לקבוע את מצב ההפעלה שלהם על ידי טכניקות מולקולריות כולל פרוטומיקה וריווח תא יחיד. מאז התפתחותו, כעת ניתן ללמוד את הפונקציה ואת התפקיד הספציפי של תאים דנדריטיים ביתר לחץ דם.החוקרים חוקרים כעת את האנטיגנים הספציפיים ביתר לחץ דם.

isolation-adoptive-transfer-high-salt-treated-antigen-presenting

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

אימונולוגיה וזיהומים

וידאו זה מדגים את נוהל המבדילים תאים דנדריטים מיאלואידית ממח העצם העכבר. בידוד של השוקה העכבר הירך, ועיבוד של מח העצם הם הפגינו. תמונות הוכחת מורפולוגיה תא לפני ואחרי בידול, דמויות המתארות פנוטיפ התא IL-12 בייצור התבגרות הבאות באמצעות CPG מוצגים.

התרבות של תאים דנדריטים מיאלואידית מ מבשרי מח עצם

שיטה חדשה DC עצמאית לזירוז והרחבה של אנטיגן ספציפי לערמונית בתאי T מתואר. HLA-A2 איג תאים מלאכותיים הצגת מבוסס Antigen (aAPC) נטענים עם HLA-A2 פפטידים מוגבלת ביעילות להרחיב CTL הספציפיות אנטיגן מגוונים. טכנולוגיה זו מחזיקה פוטנציאל גדול עבור חיסוני CTL מבוססי המאמצת.

HLA-איג בהתבסס Antigen תאים מלאכותיים הצגת עבור יעיל לשעבר vivo הרחבת CTL האדם

סרטון זה מדגים שיטה להמרת תאים דנדריטיים (DCs) ל-DCs סובלרוגניים (TolDCs) באמצעות סוכן תרופתי אימונומודולטורי. המרה זו מאושרת על ידי הערכת הפונקציה TolDC באמצעות ההשפעה החיסונית שלהם על תאי CD4+ T.

השפעת סוכן פרמקולוגי אימונומודולטורי על האינטראקציה בין תאים דנדריטיים ותאי T CD4+

סרטון זה מדגים הליך להעברה מאומצת של תאים דנדריטיים מציגי אנטיגן (DCs) המטופלים במלח גבוה לעכברים. תאים דנדריטיים מסוג Murine CD11c+ (DCs) נחשפים למדיום המכיל כמויות גבוהות של נתרן, ויוצרים בתאים איזולבוגלנדין (IsoLG)-חלבון adducts. אדדוקטים אלה משמשים ניאואנטיגנים ומוצגים על פני השטח של DCs. התאים המטופלים במלח מוזרקים לעכברים באמצעות העברת תאים מאומצת.

שיטה לטיפול במלח גבוה בתאים דנדריטיים והעברתם המאומצת לעכברים

השיטה הנפוצה ביותר להפקת כמויות גדולות של תאים דנדריטים אוטולוגי (DCS) לשימוש באימונותרפיה גידול מתוארת. השיטה משתמשת IL-4 ו-GM-CSF להבדיל מDCs מונוציטים. את DCs הבוסר הוא גירוי לבוגרת ולאחר מכן נטען עם אנטיגנים לפני שהם מוזרקים חזרה לחולה.

הכנת תאים דנדריטים גידול Antigen טעון בוגרים לחיסוניים

פרוטוקול זה מפרט שיטה לבודד תאי המציגים אנטיגנים מבלוטת התימוס אנושית דרך שלבים שונים של עיכול אנזימטי של הרקמה ואחריו צנטריפוגה צפיפות של ההשעיה התא בודדת ומיון לבסוף מגנטי ו / או FACS של אוכלוסיות התאים של עניין.

בידוד של תאי מיאלואידית דנדריטים ותאי האפיתל מקורנית האדם

תת-קבוצות תאים דנדריטיות נפרדות קיימות כאוכלוסיות נדירות באיברי לימפה, ולכן הן מאתגרות לבידוד במספרים ובטוהר מספיקים לניסויים אימונולוגיים. כאן אנו מתארים שיטת יעילות גבוהה ותפוקה גבוהה לבידוד של כל תת-הקבוצות העיקריות הידועות כיום של תאים דנדריטיים של טחול עכבר.

שיטת תשואה יעילה גבוהה עבור בידוד של תת תא העכבר דנדריטים

נגזר מונוציט DC (MoDC) יכול לחוש כמויות זעירות של מולקולות הקשורות סכנה, ולכן טענתי בקלות. אנו מספקים פרוטוקול מפורט בידודו של MoDC של דם וגידולים שלהם הפעלה עם מכלולים חיסוניים תוך הדגשת מפתח הזהירות הנחשבות על-מנת למנוע הפעלה מוקדמת שלהם.

בידוד פרוטוקול של העכבר נגזר מונוציט תאים דנדריטים והפעלה שלהם עוקבות במבחנה עם מכלולים חיסוניים הגידול

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לפתח, איפיון תאים דנדריטים tolerogenic (TolDCs), להעריך את השירות immunotherapeutic שלהם.

פיתוח ואפיון פונקציונאלי של תאים דנדריטים מאתר Tolerogenic

כאן אנו מציגים פרוטוקול עבור בvivo הגדלת הרגולטורים של הבטן הרגולציה האינדוקציה תא T. בפרוטוקול זה, תאים דנדריטים מהונדסים מקומית לייצר ריכוזים גבוהים של ויטמין D הפעיל (1, 25-דיהידרוטסטוסטרון ויטמין D או 1, 25 [הו]2ד) ו ויטמין פעיל (חומצה RETINOIC או RA) דה נובו.

ב Vivo הגדלת האינדוקציה תא T הרגולציה התקינה של הבטן

כאן, אנו מתארים תנאי תרבית חוץ גופית , בידוד וייצור מוגבר של שלפוחיות חוץ-תאיות (EVs) מ-Echinococcus granulosus. הרכבים החשמליים הקטנים התאפיינו בפיזור אור דינמי ובמיקרוסקופ אלקטרונים שידור. הספיגה על ידי תאים דנדריטיים שמקורם במח העצם והאפנון הפנוטיפי שלהם נחקרו באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית וציטומטריית זרימה.

בידוד וספיגת תאים דנדריטיים של שלפוחיות חוץ-תאיות קטנות מ-Echinococcus granulosus

למד בידוד תאים דנדריטיים CD11c חיוביים מטחול עכברים באמצעות מיון תאים מגנטי והעברה מאמצת לעכברים נאיביים. שיטה זו מאפשרת חקר תפקידם הפיזיולוגי במחלות יתר לחץ דם ומחלות לב וכלי דם.

בידוד והעברה המאמצת של מלח גבוהה מטופלים אנטיגן תאים דנדריטים

גלה סרטונים נוספים