Name: איסוף ששונה דם מן הוורידים הזנב של עכברים שאינם מרדימים עם מערכת איסוף הדם ואקום, זכוכית מגדלת מוכספת (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-02-02T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: למד שיטה לאיסוף דם חוזר מווריד הזנב בעכברים באמצעות מערכת שאיבה בוואקום וזכוכית מגדלת. השיטה פשוטה ללמידה, מגבירה שיעורי הצלחה ומפחיתה פציעות בבעלי החיים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי המענק למדע הטבע של הוביי, סין [מענק מס 2018CFB761].

1. גידול
<ol><li>השתמש עכברים קונמינג 12 בן שבועיים. הערה: השתמשנו עכברים (n = 40, 20 גברים, g 37-46, מתכוון 42.38 ± 2.39 g) מהמכללה ניסיוני חיות מרכז טונגג'י הרפואה.</li>
	<li>בית העכברים בתנאים סטנדרטיים עם גישה חופשית מזון ומים לשתיה. לשמור על שני עכברים בכלוב2 ס מ 530 עם גילוח עץ מצעים.</li>
	<li>לשמור על טמפרטורת חדר בין 21-23 מעלותצלזיוס.</li>
	<li>להאכיל עכברים עם דיאטה דלת מלח רגיל (0.3% NaCl) לאורך כל תקופת המחקר.</li>
</ol>2. איסוף דגימת דם
<ol><li>הכנת הציוד הבא: שפופרת ריק (1 מ"ל), המחט פרפר, זכוכית מגדלת מוכספת, פלסטיק מחזיק הרחקה. למקם אותם על משטח סטרילי (איור 1).</li>
	<li>הכנס עכבר בעל הרחקה פלסטיק ולשטוף את זנבו במים חמים (20-30 °C). נגב את הזנב עם כדורי צמר גפן ספוג אתנול 70% כדי להרחיב את הווריד. בחר את וריד הזנב ימינה או שמאלה עבור לקיחת דמים. לאחוז בעדינות את החלק התחתון של הזנב, לשמור על הזנב ישר במהלך איסוף דגימת דם.</li>
	<li>לאסוף את הדם. אם השוואה בין שיטות, לאסוף דם בשתי קבוצות: "ניסיוני" באמצעות ההליך פיתחנו, המובאת להלן, וקבוצת "קונבנציונאלי" באמצעות שיטה המקובלת, גם שיובאו להלן.<ol>
<li>אוסף ניסיוני:<ol>
<li>ללבוש של זכוכית מגדלת מוכספת כדי לשפר את הצפייה עבור ניקוב של הווריד של הזנב. הכנס קצה המחט פרפר 22 גרם לאחד הוורידים הזנב לרוחב עמדה בערך חצי המרחק רחוק מהקצה של הזנב-אנג'ל כ 10°, נע לכיוון הבסיס של הזנב לדוגמאות מרובים.</li>
			<li>הכנס הסוף גומי של המחט פרפר לתוך הצינור אוסף דם ואקום כדי לאסוף את הדם (איור 2). הערה: אם הדם יפסיק לזרום החוצה במהלך איסוף דם, הזווית המחט צריך להיות במהירות מותאם. כדי למנוע קרישת דם במחט, והאחר לנקב צריך לבחור אם הדם יפסיק לזרום החוצה לאחר 15 s.</li>
		</ol>
</li>
		<li>השיטה המקובלת:<ol>
<li>את המחט מחובר מזרק לתוך אחד העורקים לרוחב כשליש המרחק רחוק מהקצה של הזנב.</li>
			<li>כאשר הדם מופיע ב- hub, למשוך בחזרה על הבוכנה לאט כדי לאסוף את הדם (איור 3)7. הערה: להבהיר עוד יותר את ההשפעות של ניסיון בדרגות שונות עם איסוף דם, המתחיל והמומחה נבחרו כדי לאסוף דגימות דם תוך שימוש בשיטות ניסיוני, המקובלת בו זמנית.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאחר איסוף דם, הסר את המחט ולחץ על נקודת חדירה כדי לעצור את הדימום. לאחר מכן, שחרר את לחצן העכבר ממחזיק הרחקה פלסטיק וחוזרים העכבר בכלוב. הערה: בעבר דווח כי עד ל-10% של דם סה כ נפח ניתן בבטחה להסיר בעל חיים בריא-שבוע 2 מרווחי8, µL כל כך על 175 של דם נאסף בכל פעם על פי עקרונות אתיים.</li>
	<li>השתמש צינורות עם EDTA לאסוף פלזמה ולהשתמש צינורות ללא תרופות נגד קרישת דם כדי לאסוף את הנסיוב. בעדינות היפוך ברכבת התחתית מספר פעמים ולשים אותם על קרח אנכית.</li>
	<li>Centrifuge את צינורות אוסף דגימת דם צנטריפוגה בקירור ב 1000 g x 10 דקות להפריד בין פלזמה וסרום. הערה: איסוף דם מוצלחת מוגדרת קבלת נפח של 175 µL בכל פעם. דקירות לא יותר משלושה שכדאי לנסות, אוסף דם שנכשלו מוגדר נפח הדם הכולל של µL פחות מ-175 לאחר הניקוב השלישי. משך דגימת מוגדר מעת הניקוב וריד הזנב להסרת של המחט לאחר איסוף דם.</li>
	<li>לאסוף דם פעמיים במרווחי זמן של שבועיים8.</li>
</ol>3. ניתוח סטטיסטי
<ol><li>השתמש בתוכנה סטטיסטית זמינים מסחרית לניתוח. הצגת נתונים כמו הערך הממוצע ± סטיית תקן, שימוש p < 0.05 החיתוך עבור מובהקות סטטיסטית.</li>
</ol>

<ol><li>Grouzmann, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sampling+methodology+is+crucial+for+precise+measurement+of+plasma+catecholamines+concentrations+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Blood sampling methodology is crucial for precise measurement of plasma catecholamines concentrations in mice.</a> European Journal of Physiology. 447 (2), 254-258 (2003).</li>
<li>Heimann, M., Roth, D. R., Ledieu, D., Pfister, R., Classen, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sublingual+and+submandibular+blood+collection+in+mice%3A+a+comparison+of+effects+on+body+weight%2C+food+consumption+and+tissue+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Sublingual and submandibular blood collection in mice: a comparison of effects on body weight, food consumption and tissue damage.</a> Lab Animal. 44 (4), 352-358 (2010).</li>
<li>Heimann, M., Kasermann, H. P., Pfister, R., Roth, D. R., Burki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+collection+from+the+sublingual+vein+in+mice+and+hamsters%3A+a+suitable+alternative+to+retrobulbar+technique+that+provides+large+volumes+and+minimizes+tissue+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Blood collection from the sublingual vein in mice and hamsters: a suitable alternative to retrobulbar technique that provides large volumes and minimizes tissue damage.</a> Lab Animal. 43 (3), 255-260 (2009).</li>
<li>Hoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+blood+collection+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Methods of blood collection in the mouse.</a> Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).</li>
<li>Zou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+Blood+Collection+from+Tail+Vein+of+Non-Anesthetized+Rats+with+a+Vacuum+Blood+Collection+System%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System.</a> Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).</li>
<li>Kilkenny, C., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+bioscience+research+reporting%3A+ARRIVE-ing+at+a+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution.</a> Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).</li>
<li>Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+sample+collection+in+small+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Pharmacotherapeutics%22%5BJournal%5D)">Blood sample collection in small laboratory animals.</a> Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).</li>
<li>Diehl, K. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood%2C+including+routes+and+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Toxicology%22%5BJournal%5D)">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).</li>
<li>Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+butterfly+needles+to+draw+blood+is+independently+associated+with+marked+reduction+in+hemolysis+compared+to+intravenous+catheter%5BTitle%5D)+AND+%22Academic+Emergency+Medicine%22%5BJournal%5D)">Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter.</a> Academic Emergency Medicine. 20 (11), 1151-1155 (2013).</li>
<li>Eder, J. M., Cutter, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+device+for+collecting+cord+blood%5BTitle%5D)+AND+%22Obstetrics+and+Gynecology%22%5BJournal%5D)">A new device for collecting cord blood.</a> Obstetrics and Gynecology. 86 (5), 850-852 (1995).</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

המחקר הנוכחי מתאר בשיטת איסוף דם קל-כדי-ללמוד בעכברים עדיפה של טכניקות קונבנציונלי. ראשית, השיטה ניתן לשליטה בקלות עם אחוזי הצלחה גבוהים. שנית, הוא מבוסס על העיקרון לחץ שלילי ואקום ומאפשר לרישום רציף של דם עם סיכון מופחת של חשיפה ישירה דם, אשר גם מפחית את הסיכוי לזיהום וזיהום המוליזה9. שלישית, שיטה זו היא ריאלי עבור הדגימה תכופים של דם עם אמצעי אחסון נאותים של עכברים על פני תקופה קצרה של זמן למטרות מחקר שונים. יתר על כן, ההליך גורמת רק מינימלי לפציעה עכברים ולאחר איסוף דם יכול להתבצע ללא השימוש בהרדמה; לפיכך, ניתן להימנע השפעת תגובת המתח ואת חומרי הרדמה על דגימות דם.
תקחי את הזנב הוא מיקום מעולה עבור לקיחת דמים לפי פרוטוקול שאושרו7. עם זאת, זה לא תמיד קל להשיג נפח מספיק דם מן הוורידים זנב דק עם זרימות דם נמוך. במקרה זה, העור הוא בדרך כלל לפתוח וריד, הוא חודר אזמל מנתחים, או סוף הזנב יוסר במהירות על ידי סכין גילוח.
פרוטוקול זה נועד לשפר את המתודולוגיה של איסוף דם של עכברים באמצעות מערכת איסוף דם ואקום, המחייב של דם ואקום מדגם אוסף שפופרת פרפר, ומחט מוכספת זכוכית מגדלת. מערכת זו דגימה דם ואקום משמש בדרך כלל לאיסוף דגימות דם מחולים יומי הקליני10. עם העזרה של מוכספת ' זכוכית מגדלת ', נקודת חדירה מושלמת של וריד הזנב קל לאיתור. כאשר קצה מחט מוכנס לתוך הווריד של הזנב, דם יזרום באופן אוטומטי לתוך שפופרת הואקום בלחץ שלילי. לאחר נסיגתה המחט מן הווריד של הזנב, דם חסום הקטטר יזרום לתוך שפופרת הואקום איסוף בשל הוואקום.
העצות הבאות חשובים עבור יישום מוצלח של השיטה. קודם כל, משקל הגוף של כל עכבר צריך להיות 40 g או גבוה יותר כדי להקטין את הקושי ניקב וקבלת מספיק דם. שנית, במקרה של איסוף דם שנכשלו, ניסויים צריך לנסות למשוך את המחט לאט עד הדם ממשיך לזרום החוצה. שלישית, זה חיוני כדי להרחיב את הזנב למנוע כל תנועה במהלך לקיחת דמים. אוחז את המחט בעדינות יכול לעזור לשמור את מחט בווריד כמו המהלכים זנב העכבר. רביעית, אם הדם יפסיק לזרום החוצה במהלך איסוף דם, צריך להיות מותאם הזווית המחט מבעוד. כדי למנוע קרישת דם במחט, והאחר לנקב צריך לבחור אם הדם יפסיק לזרום החוצה לאחר 15 s. בסופו של דבר, שיתוף הפעולה של שני אופרטורים מומלץ תוך שימוש בטכניקה זו כדי לאסוף דם של עכברים.
בקיצור, השיטה אוסף דם ואקום המאומץ עבור שימוש בעכברים הוא בטוח, ריאלי וקל להתאמן. שיטה זו מאפשרת בתדירות דגימה של דם עם כמויות דם נאותה של עכברים שאינם מרדימים.

בדיקת דם מעורב בניסויים בבעלי חיים היא טכניקה מחקר בסיסי. ישנם כמה טכניקות זמינים עבור איסוף דם של עכברים, כולל הזנב חיתוכים, ניקב הלב, מקלעת רטרו-מסלולית, ומוחלף, וריד סימטרית, ו הנבוב. באופן אידיאלי, צריך לאסוף דם בצורה פולשנית, עם השפעה מינימלית על בריאותו של בעל החיים. עם זאת, הטכניקות הנפוצות ביותר לעתים קרובות ממיטים לחץ על בעלי חיים, יכול להשפיע על תוצאות מחקר1. דם מהאוסף מקלעת רטרו-מסלולית ניתן להשיג מספיק נפח דם של עכברים2. עם זאת, הוא יכול לגרום נזק לרקמות חמור, אינו מאפשר קבלת הדם שוב ושוב ב מרווחי זמן קצר3.
הווריד סימטרית הוא מיקום מעולה עבור איסוף דם, הגורם פגיעה מינימלית על עכברים. עם זאת, הורידים הזנב של עכברים דק, זה לפעמים קשה להשיג מספיק דם דרך הטכניקה לנקב קונבנציונלי. במקרים מסוימים, דקירות חוזרות נדרשים להשיג את נפח הדם הרצויה. הרדמה מומלץ בדרך כלל גם כדי להקל על לקיחת דמים מן הורידים הזנב של עכברים.  יתר על כן, האזמל, שוליים ישרים גילוח או מספריים חדות עשוי להיות נחוץ כדי להסיר את הקצוות של זנבות כדי להשיג את דגימות הדם הנדרשת4. בעבר דיווחנו איסוף דם מוצלחת מן הורידים הזנב של חולדות שאינם מרדימים על ידי מערכת איסוף דגימת דם ואקום, אשר הפחיתה את הסיכון לזיהום דם, נמנע הצורך דקירות חוזרות5. המחקר מדווח שיטה דומה של איסוף הדם בעכברים שאינם מרדימים.

<table><tbody><tr><td>מחט כפולה</td><td>שנחאי קאנג נונג מכשיר רפואי ושות', בע"מ, סין</td><td>20163151718</td><td>22 גרם (0.7 מ"מ x 25 מ"מ)</td></tr> <tr><td>מגדיל משקפיים</td><td>Vergroberung</td><td></td><td>1.5x</td></tr><tr><td>דיאטת מלח רגילה לעכברים</td><td></td><td></td><td>עכברים קיבלו דיאטת מלח רגילה (0.3% NaCl) לאורך כל המחקר.</td></tr><tr><td>מחזיק פלסטיק</td><td>שנחאי קאנג נונג מכשיר רפואי ושות', בע"מ, סין</td><td></td><td>35-45 גרם חולדה הודר</td></tr><tr><td>תוכנת SPSS לניתוח סטטיסטי</td><td>SPSS Inc, שיקגו; גרסת ארה"ב</td><td>17.0.</td><td></td></tr><tr><td>מזרק</td><td>שאנדונג wego מוצרי פולימר רפואי ושות' בע"מ, סין</td><td>20160911A</td><td>1 מ"ל (גודל מחט תואם: 0.45 ופעמים; 16RW LB)</td></tr> <tr><td>מערכת איסוף דם ואקום</td><td>Wuhan Zhi Yuan, מדע וטכנולוגיה רפואית ושות', בע"מ, סין</td><td>20171222</td><td>1 מ"ל (&Phi; 12.4 ופעמים; L75)</td></tr></tbody></table>

איסוף ששונה דם מן הוורידים הזנב של עכברים שאינם מרדימים עם מערכת איסוף הדם ואקום, זכוכית מגדלת מוכספת

Modified Blood Collection from Tail Veins of Non-anesthetized Mice with a Vacuum Blood Collection System and Eyeglass Magnifier

איסוף דגימת דם הוא בסיס ניסיוני מחקר בבעלי חיים. זה חשוב כדי להשיג דגימות דם נאותה למטרות מחקר שונים. הורידים הזנב של עכברים קטנים, זה לפעמים קשה להשיג את נפח הדם הנדרשת על ידי שיטות לנקב קונבנציונלי. מחקר זה בוחן את העליונות של אוסף דגימת דם חוזרות ונשנות מן הורידים הזנב של עכברים באמצעות שימוש דם ואקום אוסף מערכת ומנקה מגדלת (קבוצת הניסוי) לעומת שיטות דגימה דם קונבנציונאלי (קבוצה קונבנציונלי) , המבוצעת על ידי למתחילים ולמתקדמים, בהתאמה. עם העזרה של מוכספת ' זכוכית מגדלת ', טיפ המחט פרפר מוכנס לתוך וריד הזנב העכבר כל קבוצת הניסוי. כאשר הווריד הוא שחדר בהצלחה, דגימת דם נאסף בצינור אוסף אבק על ידי החדרת בסוף גומי מחט הפרפר לתוך הצינור אוסף דם ואקום. הבוכנה משמש לאחר מכן לאסוף דם ללא העזרה של זכוכית מגדלת מוכספת בקבוצה קונבנציונלי. אחוזי ההצלחה של איסוף דגימת דם על ידי למתחילים ולמתקדמים הוצגו 70% לעומת 100% (p < 0.01) קבוצה ניסיונית, 35% לעומת 85% (p < 0.01) בקבוצה קונבנציונלי. הן למתחילים והן מומחים, ניקוב הזמנים הנדרשים להשגת דגימת דם הנדרשים היו נמוכים משמעותית בקבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצת קונבנציונאלי (2.40 ± 0.75 לעומת 2.90 ± 0.31, 0.05 < p; 1.15 ± 0.37 לעומת 1.55 ± 0.76, p < 0.05). לסיכום, שיטת דגימה דם הציג ריאלי ופשוט לאימון ומאפשר תכופים דגימה של דם נאותה כרכים של עכברים שאינם מרדימים.

מסת הגוף דם אוסף כרכים על הדגימה המשכים של שתי הקבוצות דגימות דם נאספו מ- 20 עכברים (10 אנשים) פעמיים במרווחים שבועיים בכל קבוצה. מסת הגוף אכזרי של עכברים היה דומה בין הקבוצות ניסיוני, המקובלת למתחילים מומחים, בהתאמה (42.40 g ± g 1.42 ג ' יגה לעומת 42.65 g ± 1.14 g, 0.05 &gt; p; 42.55 g ± g 2.91 לעומת 43.20 g ± 2.69 g, 0.05 &gt; p). אמצעי אחסון הדם שנאספו משך דגימת היו דומים בין שתי הקבוצות במומחים (184.25 µL ± 11.95 µL לעומת 171.75 µL ± 25.61 µL, 0.05 &gt; p; 1.85 min ± 0.68 דקות לעומת 2.17 min ± מין 0.80, 0.05 &gt; p). עם זאת, אחסון הדם שנאספו גבוה ומשכי דגימה קצרה יותר נראו ב קבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצת קונבנציונלי ' ב מתחילים (172.00 µL ± 15.17 µL לעומת 148.50 µL ± 30.22 µL, p &lt; 0.01; 3.11 min ± 0.44 דקות לעומת ± 4.08 דקות דקות 0.61, p &lt; 0.01). בהשוואה ללמתחילים, מומחים שנאסף כרכים דם גבוהה והראה דגימה נמוכים זמני באמצעות שיטות ניסיוני, המקובלת (184.25 µL µL ± 11.95 לעומת 172.00 µL ± 15.17 µL, p &lt; 0.01; 171.75 µL µL ± 25.61 לעומת 148.50 µL ± 30.22 µL, p &lt; 0.05; 1.85 min ± 0.68 מין לעומת מינימום 3.11 ± 0.44 דקות, p &lt; 0.01; 2.17 ± דקות דקות 0.80 לעומת ± 4.08 דקות דקות 0.61, p &lt; 0.05) (טבלה 1).
שיעורי הצלחה והשעות ניקוב של שתי הקבוצות השוואת שיעורי הצלחה בין למתחילים ולמתקדמים היה 70% (14/20) לעומת 100% (20/20) (p &lt; 0.01) בתוך קבוצת הניסוי ו- 35% (7/20) לעומת 85% (17/20) (p &lt; 0.01) בקבוצה קונבנציונלי. שיעור הצלחה גבוה יותר היו גם אצל קבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצת קונבנציונלי ' ב מתחילים [70% (14/20) לעומת 35% (7/20), p &lt; 0.05]. הן למתחילים והן מומחים, מספר דקירות היה נמוך באופן משמעותי בקבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצת קונבנציונאלי (2.40 ± 0.75 לעומת 2.90 ± 0.31, 0.05 &lt; p; 1.15 ± 0.37 לעומת 1.55 ± 0.76, p &lt; 0.05). בהשוואה ללמתחילים, פעמים חדירה נמוך יותר עבור מומחים נצפו בשיטות ניסיוני, המקובלת. (1.15 ± 0.37 לעומת 2.40 ± 0.75, p &lt; 0.01; 1.55 ± 0.76 לעומת 2.90 ± 0.31, p &lt; 0.01) (טבלה 1).
<img alt="הגדרת אלקטרופורזה עם מאגרים ותא; שיטת הפרדת DNA; סידור מכשירי מעבדה." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59136/59136fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> איור 1: ציוד. מוצגות 1 מ"ל דם ואקום אוסף צינורות 22 גרם פרפר (משמאל), עם זכוכית מגדלת מוכספת (באמצע), ו מחט בעל הרחקה פלסטיק (מימין). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59136/59136fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="הגדרת הליך כירורגי, ניסוי נתיחת בעלי חיים, חוקר באמצעות אזמל ומזרק." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59136/59136fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> איור 2: איסוף דם מוצלחת בקבוצה ניסיוני. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59136/59136fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="הזרקת מזרק לדגימת רקמה, ניסוי מעבדה, תקריב, שיטת מחקר רפואי." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59136/59136fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> איור 3: איסוף דם מוצלחת בקבוצה קונבנציונאלי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59136/59136fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="2">קבוצת הניסוי</td>
			<td colspan="2">קבוצה קונבנציונלי</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>למתחילים</td>
			<td>מומחה</td>
			<td>למתחילים</td>
			<td>מומחה</td>
		</tr>
<tr>
<td>מסת הגוף (g)</td>
			<td>42.4±1.42</td>
			<td>42.55±2.91</td>
			<td>42.65±1.14</td>
			<td>43.20±2.69</td>
		</tr>
<tr>
<td>נפח הדם שנאספו (µL)</td>
			<td>172.00±15.17</td>
			<td>184.25±11.95#
</td>
			<td>148.50±30.22*
</td>
			<td>171.75±25.61#
</td>
		</tr>
<tr>
<td>משך דגימת (שלי)</td>
			<td>3.11±0.44</td>
			<td>1.85±0.68#
</td>
			<td>4.08±0.61*
</td>
			<td>2.17±0.80#
</td>
		</tr>
<tr>
<td>דם אוסף פעמים</td>
			<td>20</td>
			<td>20</td>
			<td>20</td>
			<td>20</td>
		</tr>
<tr>
<td>המספר הממוצע של דקירות</td>
			<td>2.40±0.75</td>
			<td>1.15±0.37#
</td>
			<td>2.90±0.31*
</td>
			<td>1.55±0.76# *
</td>
		</tr>
<tr>
<td>ניקוב בפעם אחת</td>
			<td>3</td>
			<td>17</td>
			<td>0</td>
			<td>12</td>
		</tr>
<tr>
<td>שתי פעמים לנקב</td>
			<td>6</td>
			<td>3</td>
			<td>2</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>שלוש פעמים לנקב</td>
			<td>5</td>
			<td>0</td>
			<td>5</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td>נכשל</td>
			<td>6</td>
			<td>0</td>
			<td>13</td>
			<td>3</td>
		</tr>
<tr>
<td>אחוזי הצלחה</td>
			<td>70%</td>
			<td>100%#
</td>
			<td>35%*
</td>
			<td>85%#
</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1: השוואה של תוצאות בין קבוצות הניסוי, המקובלת. * p &lt; 0.05, * * p &lt; 0.01, השיטה הניסיונית לעומת השיטה המקובלת. #p &lt; 0.05, ##p &lt; 0.01, המתחיל לעומת מומחה...

מחקר זה דוחות דיגום הדם של וריד הזנב בעכברים באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום עם זכוכית מגדלת מוכספת. השיטה שלנו קל לתרגל, ניתן להשתמש עבור לקיחת דמים חוזרים בעכברים.

Blood sample collection is the basis of experimental animal research. It is of importance to obtain adequate blood samples for various research purposes. ...

מחקר זה מדווח על דגימת דם מווריד הזנב בעכברים באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום עם משקפיים מגדלת. השיטה שלנו קלה לתרגול ויתשמש לדגימת דם חוזרת בעכברים. עכבר ממוקם לתוך מחזיק מרסן פלסטיק בהתחלה.הזנב מנוקה ונמחק עם 70% אתנול. לאחר מכן המפעיל לובש את זכוכית מגדלת המשקפיים כדי לשפר את הצפייה של זנב העכבר. קצה מחט פרפר מוכנס לאחר מכן לתוך אחד מורידי הזנב האודם, והדם נאסף לתוך צינור איסוף הוואקום דרך קצה הגומי של מחט הפרפר.לבסוף המחט מוסרת ותהליך איסוף הדם הסתיים. וריד זנב הוא מיקום מועדף לדגימת דם. שיטת דגימת דם זו קשורה לפגיעה מינימלית בעכברים, אולם וריד הזנב של העכברים דק מאוד כך שלפעמים קשה לנקב, כאן אנו מתארים שיטת דגימת דם פשוטה של וריד הזנב בעכברי בדיקת מעבדה באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום.שיטה זו היא פשוטה ויעילה ו ניתן להשתמש בה כדי להשיג דם נדרש שוב ושוב בעכברים. ההליך יוכח על ידי שני חברים במעבדה שלנו, שיאויאן ליו ו-Wusong Zou כדי להתחיל, אנו מניחים מחזיק ריסון פלסטיק, שפופרות ואקום עם פקק גומי, ומחט מחודדת כפולה, ומגדל משקפיים על משטח סטרילי. לאחר מכן, מניחים עכבר לתוך מחזיק מרסן פלסטיק.כפות הרגליים הקדמיות והבדיעבדות של העכבר צריכות להיות במצב נוח. כדי להשיג דגימת דם, לשטוף את הזנב עם מים חמים 20 עד 30 מעלות צלזיוס, לנגב את הזנב עם 70% אתנול כדורי כותנה רוויים כדי להרחיב את וריד. בחר את וריד הזנב הימני או השמאלי לדגימת דם.לתפוס חלק נמוך יותר של הזנב בעדינות ולשמור על הזנב ישר במהלך איסוף דגימת דם. ללבוש את המשקפיים זכוכית מגדלת כדי לשפר את הצפייה כדי להקל על לנקב את וריד הזנב. הכנס את קצה מחט הפרפר 22 מד לתוך אחד ורידים זנב מצדדים סביב חצי דיסטלי מקץ הזנב בזווית של כ 10 מעלות, נע לכיוון הבסיס של הזנב עבור דגימות מרובות.לאסוף דם לתוך צינור איסוף ואקום על ידי החדרת קצה הגומי של מחט הפרפר לתוך צינור איסוף הדם ואקום. הזנב של עכברים יכול לשמש עבור אוספי דם מספר, לעתים קרובות ככל הנדרש, על פי הפרוטוקול שאושר. זה לא תמיד קל להשיג מספיק נפח הדם מן וריד זנב זרימת הדם הדק והנמוך של עכברים עם השיטה המסורתית.השיטה שלנו היא פשוטה ויעילה ו ניתן להשתמש בה כדי להשיג נפח דם הולם שוב ושוב בעכברים. הוא דיווח כי עד 10% מנפח הדם הכולל ניתן להסיר בבטחה מבעל חיים בריא במרווחי זמן של שבועיים, ולכן כ 175 דגימת דם microliters של עכברים נאסף בכל פעם בהתאם למנהלי האתיקה. שתיים, חיוני להאריך את הזנב כדי למנוע את תנועתו בתהליך של דגימת דם.על מנת למנוע קרישת דם במחט, יש לבחור תנוחת דקירה אחרת אם הדם מפסיק לזרום החוצה במשך 15 שניות. איסוף דם מוצלח הוגדר כהשגת 175 מיקרוליטרים דם בכל פעם. זמני הדקירה המקסימליים נקבעו לשלושה מבחנים.אם נפח הדם הכולל היה נמוך יותר מ-175 מיקרוליטרים לאחר הדקירה השלישית, הוא הוגדר כאוסף דם כושל. כאשר נפח מדגם נאות נאסף, למשוך את המחט מן הוריד בקצרה להפעיל לחץ על אתר הכניסה כדי לעצור את הדימום. כדי לאסוף פלזמה, להשתמש צינורות המכילים EDTA, נוגד קרישה, בעדינות להפוך את הצינור מספר פעמים כדי לערבב נוגד קרישה עם הדם ולמקום את הדגימות על קרח אנכית.לסובב צינורות איסוף דגימת דם שלמים בצנטריפוגה בקירור במשך 10 דקות. לחלץ את הפלזמה, דואג לא להפריע שכבות תאי הדם האדומים והלבנים. כדי לאסוף סרין, השתמש צינורות ללא נוגד קרישה.ניתן להשתמש בשני סוגי הדגימות באופן מיידי או לאחסן אותן בפחות מ-80 מעלות צלזיוס למשך שנה. מחקר זה נועד לחקור את העליונות של איסוף דגימת דם חוזרת ונשנית מווריד הזנב של עכברים באמצעות מערכת איסוף דם ואקום משקפיים מגדלת. קבוצת ניסוי בהשוואה לשיטת דגימת הדם הקונבנציונלית.קבוצה קונבנציונלית, על ידי מתחילים ומומחים בהתאמה, נפח הדם שנאסף ומשך הדגימה היו דומים בין שתי קבוצות עבור מומחים, עם זאת, נפח דם שנאסף מוגבר ומשך דגימה קצר יותר נראו בקבוצת הניסוי לעומת הקבוצה הקונבנציונלית למתחילים. שיעור הצלחה גבוה יותר נראה גם בקבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצה הקונבנציונלית למתחילים. שיטת דגימת דם זו קלה לשליטה ויש לה שיעור הצלחה גבוה.ניתן להפחית את מספר הדקירה שנכשלה בהשוואה לזה של שימוש בשיטה מסורתית. יתר על כן הליך זה רק גורם לפגיעה מינימלית בעכברים, זה רק סרט הזנב של העכברים ללא צורך בהרדמה, כי ההשפעה של תגובת מתח בהרדמה על דגימת הדם ניתן להימנע.

modified-blood-collection-from-tail-veins-non-anesthetized-mice-with

Research

JoVE Journal

Behavior

התנהגות

בסרטון זה אנו מדגימים הליך חיתוך זנב במודל עכבר לאיסוף דם היקפי. הדם שנאסף נתון לאחר מכן לצנטריפוגה לפלזמה נפרדת, אשר יכולה לשמש לניסויים נוספים.

הליך חיתוך זנב עכבר לאיסוף דם היקפי ובידוד פלזמה

דגימות דם שימושיות להערכת סמנים ביולוגיים של מצבים פיזיולוגיים או מחלה in vivo. כאן אנו מתארים את המתודולוגיה לדגימת דם מווריד הזנב הצדדי בחולדה. שיטה זו מספקת דגימות מהירות עם מינימום כאב ופולשניות.

דגימת דם מוריד הזנב לרוחב של העכברוש

כאן, אנו מתארים שיטה פשוטה הזנב וריד דם הדגימה בחולדות שאינם מרדימים באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום. שיטה זו מפחיתה את הסיכון בחשיפה ישירה דם ומפשטת לקיחת דגימות מרובים venipuncture יחיד.

חזר על איסוף דם של וריד הזנב של חולדות שאינם מרדימים עם מערכת איסוף דם ואקום

כאן אנו מציגים פרוטוקול דגימה דם הזנב-טיפ לאיסוף הדגימה תכופים בעכברים ערככם. שיטה זו שימושית עבור להערכת דפוסי הפרשת הורמון מחלמן פועמת, יכול להיות מותאם ניתוח גורמים אחרים במחזור.

תכופות לקיחת דמים קצה הזנב בעכברים להערכה של הפרשת הורמון מחלמן פועמת

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לקחת דגימות דם. מווריד התת-קלאובי של...

איסוף דם באמצעות ניקוב ורידים תת-מותני בעכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול המציע חלופות איסוף דם מהירות, קלות ואמינות עבור מודל החולדות. אנו מתארים שלוש שיטות שונות לדגימת דם בהתאם להקשר: ניקוב וריד הזנב בהרדמה או בעל חיים בהכרה, וניקור ורידים בפין הגבי בהרדמה.

וריד זנב שונה וניקוב ורידים פין לדגימת דם במודל החולדה

הפרוטוקול מראה איסוף חוזר של נוזל המוח השדרה ודם מחולדות אפילפטיות, המבוצע במקביל לניטור וידאו-אלקטרואנצפלוגרם רציף (EEG). אלה חיוניים לחקר קשרים אפשריים בין שינויים במולקולות שונות של נוזל הגוף לבין פעילות התקפים.

דגימת נוזל מוחי ודם מווריד זנב לטרלי בחולדות במהלך רישומי EEG

הפרוטוקול מדגים שיטה לאיסוף דם מוורידי פורטל ווריד נבוב נחות מעכברים ברצף כדי להעריך את הייצור והספיגה של מטבוליטים מיקרוביאליים במעי.

איסוף דם רציף מווריד נבוי נחות ואחריו וריד פורטל להערכת מטבוליטים מיקרוביאליים במעיים בעכברים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לטכניקת איסוף דם אופטימלית בנבדקים עכברים באמצעות ניקור ורידים בפנים באמצעות lancet. אנו משתמשים בטכניקה זו לצד הערכה ציטומטרית של זרימה ציטומטרית כדי לאפיין פנוטיפים תאיים של זנים טרנסגניים, קונגניים ומדווחים. הוא מתאים גם לניתוח ציטוקינים בסרום ולמחקרי סוכרת.

ניקור ורידים בפנים לאיסוף דם עכברים

אנו מציגים פרוטוקול לאיסוף בו-זמני של נתוני EEG/fMRI, והקלטת אותות שעון MR מסונכרנת. אנו מדגימים שיטה זו באמצעות פרדיגמה ייחודית לפיה הנבדקים מקבלים הוראות 'כפפה קרה' במהלך הסריקה, ונתוני EEG/fMRI נרשמים יחד עם מדידות טמפרטורת היד הן לפני ואחרי אינדוקציה היפנוטית.

שיטה לאיסוף נתוני fMRI/EEG בו זמנית במהלך הצעת תשומת לב ממוקדת לתחושה תרמית דיפרנציאלית

למד שיטה לאיסוף דם חוזר מווריד הזנב בעכברים באמצעות מערכת שאיבה בוואקום וזכוכית מגדלת. השיטה פשוטה ללמידה, מגבירה שיעורי הצלחה ומפחיתה פציעות בבעלי החיים.

איסוף ששונה דם מן הוורידים הזנב של עכברים שאינם מרדימים עם מערכת איסוף הדם ואקום, זכוכית מגדלת מוכספת

גלה סרטונים נוספים