הזרקה ישירה של וקטור Lentiviral מדגיש מספר מסלולים מוטוריים בחוט השדרה עכברוש

וקטורים ויראליים יכולים להכניס חומר גנטי לתאים כדי לפצות על גנים פגומים, כדי לווסת חלבוני צמיחה חשובים, או לייצר סמנים שיכולים לעקוב אחר מעגלים עצביים. החדרת וקטורים ויראליים למערכת העצבים היא מאתגרת בשל מחסומים ביולוגיים innate. הזרקה ישירה לרקמת חוט השדרה עוקפת את המחסומים הללו, ומאפשרת גישה לגופי תאים או סינפסות.

מיקוד נכון של רמות עמוד השדרה L1 עד L4 יכול להיות קשה. חשוב להשתמש בציוני דרך כדי לאמת את היעד ולזכור כי מקטעים אלה קו לחוליות T11 כדי T13. ביום ההליך, חבר את המזרק למשאבת המיקרו והצב את המיקרו-משאבה במיקרומניפולטור עם סולם ורנייה יותר.

השתמש במזרק עם מחט גמישה כדי לטעון בזהירות צבע צבעוני לתוך אחד מחטי הזכוכית ולהכניס את מחט הזכוכית לתוך המזרק. לאחר מכן לאשר כי המחט הוא זרע כראוי לתוך הכביסה, כי מכסה מזרק הוא דפק על חזק, כי מחט מזרק פלדה הוארך כשלושה רבעים של אורך מחט הזכוכית. לפני תחילת ההליך, להפשיר לפחות microliter אחד, בתוספת נפח קטן של וירוס נוסף לכל זריקה מאחסון מקפיא, ולאשר חוסר תגובה של קמצוץ הבוהן בחולדה הרדמה.

לגלח לאורך קו האמצע הגבי מן הירכיים אל הזווית הנחותה של עצם השכם של החיה, מושך את העור מתוח עבור גילוח קל ומדויק יותר, ולחטא את העור החשוף עם רציף 5% יוד ו 70% קרצוף אתנול. החל משחה עיניים על שתי העיניים. לאחר מכן מניחים את החיה על מטלית סטרילית ומ מניחים גזה מתחת לשלפוחית השתן כדי לאסוף כל שתן.

כדי לזהות את האתר של חתך העור, לחץ על האצבעות בעדינות בצלע האחרונה כדי לאתר את חוליית L1. באמצעות חוליה זו כציון דרך והחזקת העור מתוח על ידי התפשטות עדינה תוך לחיצה בחוזקה עם האזמל, להשתמש מספר 10 להב כירורגי לעשות חתך עור שלושה עד ארבעה סנטימטרים מסתיים רק נחות L1 לחשוף את השריר. השתמש מדפים ומספריים כדי להרגיש את התהליכים ספין.

בצע חתכים rostral קטן כדי לאפשר מקום לתפוס בבטחה על תהליך עליון עם מטלשי שן עכברוש. ולעשות שני חתכים ארוכים ועמוקים קרוב ככל האפשר לתהליכים. לאחר הבטחת השרירים הצליריים במקום, לנקות את השריר סביב התהליכים כדי לקבוע את צורת הראש שלהם.

לאחר מכן לדמיין את הצורות של ראשי התהליכים ספין על מנת לזהות את האתר laminectomy. T11 ותהליכי T12 ו T13 מצטרפים יהיו האתר של כריתת למין. לאחר אזור היעד זוהה כראוי, בעדינות להפיץ את החוליות כדי לחשוף את הרצועות הבין חולייתיות, ולהשתמש rongeurs לקחת ביסים קטנים של התהליכים ספיני ואת ההיבט הגבי של החוליות.

לנקות את העצם מן קו האמצע, כך כלי הדם קו האמצע ניתן לראות, משאיר חלון החושף בבירור את רקמת חוט השדרה והוא ללא פסולת. ואז להדק מטלטולים מייצבים לתהליכים ספיניים rostral ו caudal לחלון כריתת למין כדי לאבטח את החיה במחזיק עמוד השדרה. ולהרים את הבטן של החיה כדי לשלול את ההשפעה של תנועות נשימה.

כדי לטעון את הנגיף לתוך המזרק, פיפטה כחמישה מיקרוליטרים של המניה המופשרת על פיסת Parafilm, ולמקם את מחטי הזכוכית כך הקצה הוא בתוך הטיפה. השתמש במשאבת מיקרו כדי למשוך עד ארבעה microliters של וירוס בקצב של 20 כדי 100 nanoliters לשנייה, ולהגדיר את הבקר להזריק לפני שחרור כמות קטנה של וירוס מן קצה המחט כדי להבטיח כי הוא לא חסום. לנגב כל וירוס עודף עם לנגב במעבדה ולמקם את micromanipulators כך סולם vernier גלוי.

מניחים את המחט במרכז חוט השדרה, ולהשתמש בסולם vernier על micromanipulator לכוון את המחט באופן אלחוטי 0.8 מילימטרים. לאחר מכן הורידו את המחט לאקורד עמוד השדרה עד שהוא מוסט פנימה, אך לא מנקב, את הדורה, ולהשתמש בתנועה מתפתלת מהירה כדי לנקב את הדורה עם המחט עד שטיפ המחט שקע לעומק של 1.5 מילימטרים. ברגע המחט היא במקום, לתכנת את המזרק כדי לספק את הנגיף בקצב של 400 nanoliters לדקה, ולאשר כי הנגיף נכנס אקורד עמוד השדרה על ידי התבוננות ההתקדמות של חזית הצבע.

לאחר סיום ההזרקה, אפשר למחט לנוח בחוט השדרה במשך שתיים עד חמש דקות כדי להקל על דיפוזיה של הנגיף, לפני משיכת המחט לאט למיקום באתר ההזרקה הבא. לאחר הזריקה האחרונה, הסר את החיה ממחזיק עמוד השדרה כדי לאפשר הסרה של כל המכשירים המשמשים להפצת השרירים הדחחיים. לאחר מכן סגור את השריר עם תפר קטגוט כרומי 4.0 ולהדק את העור עם פצע תשעה מילימטר קליפים.

ארבעה שבועות לאחר זריקה מוצלחת, ביטוי GFP משמעותי נצפתה בנוירונים בתוך החומר האפור של חוט השדרה החזי בצד, ipsilateral להזרקה. בעניין הלבן, ביטוי GFP נצפתה האקסונים בכבל ipsilateral, במיוחד באזורים האופייניים האקסונים propriospinal. הגדלה גבוהה יותר של נוירוני החומר האפור חושפת דוגמה לביטוי אות טיפוסי בגופי תאים עצביים ודנדריטים.

ביטוי GFP בנוירונים ניתן לראות גם בגרעין גזע המוח, כגון בתוך היווצרות הרשתית פונטין. הגורמים העיקריים להליך מוצלח של הזרקת חוט השדרה הם מיקוד חולייתי נכון והבטחת כניסת הנגיף לרקמה אם מבוצעת פגיעה בחוט השדרה לפני הליך זה, ניתן להשתמש בהזרקה ישירה כדי לעקוב אחר נוירונים המ לחדש את הקשרים סביב הפציעה.