מטופל-נגזר אורתוטופית מודלים של תאים האדם Urothelial קרצינומה של סרטן המעי הגס ואת הגידול גרורות ספונטנית

מודלים נדרשים באופן עקבי כדי לחקות גרורות סרטן באמצעות האינטראקציה עם בלוטות הלימפה. בחולים עם סרטן המעי הגס וסרטן התא urothelial של שלפוחית השתן. המודלים הקסנוגרפיים האורגזמיים שלנו המתוארים במאמר זה יכולים לעזור לענות על שאלות ביולוגיות חשובות אלה ולבדוק טיפולים חדשים ביעילות ובאופן רלוונטי מבחינה קלינית.

גידולי קסנוגרפט אורתוטופיים שלנו המיוצרים בעכברים דומים לגידול של המטופלים. בנוכחות תאים סטרומה בלוטות הלימפה שני המודלים יש השתלת גידול גבוהה יותר שיעורי גרורות איברים רחוקים ומיקומים המחקים דפוסים גרורתיים אנושיים. כמו כן, לשני המודלים של בעלי חיים יש אפס תמותה הקשורה לפרוצדורה.

לאחר הסרת גידולים שמקורם בחולה מעכברים שעברו המתת דם, השתמש במספריים כירורגיים מעוקרים כדי לטחון חתיכות גידול חיוביות לוציפראז קטנות ככל האפשר בצלחת פטרי מתחת למכסה המנוע לזרימת למינאר. מעבירים את חלקי הגידול לצינור חרוט סטרילי של 50 מ"ל. כדי להכין פתרון תקציר, להוסיף 10 מ"ל של קולגנאז סוג 4, 80 microliters של hyaluronidase ו 160 microliters של סוג deoxyribonuclease 1 עד 40 מ"ל של HBSS ומערבבים על ידי היפוך.

הוסף 35-40 מ"ל של פתרון העיכול לגידול טחון ותדוגר ב 37 מעלות צלזיוס עם סיבוב מתמשך במשך 2 שעות עם רעידות נמרצות תקופתיות. כדי להסיר פסולת לאחר העיכול, לסנן את הגידול מתעכל דרך מסננת תאים סטרילית 100 מיקרומטר ואחריו סינון דרך מסננת תא 40 מיקרומטר חוסך את הזרימה דרך צינור 50 מ"ל בכל פעם והשליך את הפסולת. כדי לשטוף תאים חופשיים, להוסיף 20 מ"ל של HBSS לזרימה דרך צנטריפוגה ב 329 פעמים כבידה במשך 5 דקות.

שאף את supernatant ולתלות את גלולה ב 30 מ"ל של HBSS. להעביר 100, 000 תאים סרטניים לצינור חרוט סטרילי 15 מ"ל ולהוסיף 300, 000 תאי HK טריים שהוכנו בעבר. צנטריפוגה התאים ב 329 פעמים כבידה במשך 5 דקות ולהשליך את העל טבעי על ידי שאיפה.

השתמשו שוב בתאים במדיום RPMI מלא והמשיכו על הקרח עד שהם מוכנים לשימוש. כדי להכין את החיה להזרקת תא UCC להשתמש קרם להסרת שיער לגלח את הגב התחתון של עכבר 6-8 שבוע נקבה NOD-SCID. כדי לנהל תאי UCC לשלפוחית השתן, הגדר תחילה מכונת אלקטרו-קוטר מונופולארית בהספק של 4 וואט.

לאחר הרדמה של העכבר, מניחים אותו במצב עלוב עם חוטם שלו בקונוס אף isoflurane וגב חשוף מקורקע בחוזקה על אלקטרודה מפוזרת. לשמן אנגיוקטטר 24 מד עם ג'לי סיכה ולאחר מכן להכניס את אנגיוקטטר בעדינות אך בחוזקה דרך השופכה העכבר. אם קטטר מתכופף על הכניסה, הכנס חוט מדריך באמצע הדרך לקטטר כדי לספק יציבות.

לאחר מכן, הכנס במלואו את חוט הליבה הישרה 0.64 מילימטר קבוע 1 מילימטר מעבר לקצה האנגיוקטר. החזק את הסיכה המונופולרית לחוט המדריך לשנייה אחת המאפשרת גירוי חשמלי של רירית שלפוחית השתן. צרף אנגיוקטר טרי, סטרילי מזרק 1 מ"ל לקור לנעול ולצייר עד 200 microliters של תאים UCC מוכן בשלבים קודמים.

הסר חוט מדריך אנגיוקטרן מן השופכה ולאחר מכן להכניס אנגיוקטר עם מזרק של תאים מחוברים אליו. להזריק 50 microliters של התאים לשלפוחית השתן של העכבר כדי לאפשר לתאים לדבוק בקיר שלפוחית השתן, לחכות כמה שניות לפני הסרת אנגיוקטר. לבסוף, להסיר את העכבר מן חרוט האף isoflurane כרית ההקרקעה ולצפות בו במשך 1 שעה לאחר הליך סימנים של מצוקה.

כדי ליצור מודל עכבר CRC, למקם עכבר NOD-SCID זכר הרדמה 6-8 שבוע בת בת במצב סופי תחת מיקרוסקופ ניתוח הבטחת האף אל חרוט האף isoflurane ואת הגפיים הקדמיות עם סרט ליציבות. מניחים עצם קטן כגון קטע גזה קטן מתחת לבסיס הזנב ומרים את פי הטבעת כדי לשפר את יכולת הקרביים והזווית. השתמש מטליות משומן קהה משומן כדי להפוך את התעלה אנאלי ולחשוף את רירית אנאלי פיסטלי רקטלי ולהסיר צואה.

חבר מחט נשלפת סטרילית 30 מד מזרק זכוכית 50 microliter. לצייר 10 microliters של גידול ותאי HK ההשעיה התא מוכן בשלבים קודמים לתוך המזרק. הזרק את 10 microliters לתוך תת-מסיסת רקטלית דיסטלית 1-2 מילימטרים מעל התעלה האנאלית הקפדה לא לעבור לחלל האגן.

לבסוף, להסיר את העכבר מן חרוט האף isoflurane ולצפות בו במשך שעה אחת לאחר הליך סימנים של מצוקה. כדי לפקח מדי שבוע על הגידול העיקרי, הכבד והנטל גרורתי ריאות בכל מודל העכבר, הראשון, לשקול את העכבר. להזריק 150 מ"ג/ק"ג לוסיפרין תוך-צפי ולחכות 5 דקות עבור המצע להסתובב בגוף.

מניחים את העכבר הרדמה במערכת הדמיה bioluminescent עם האף קבוע חרוט האף לוודא כי האזור של עניין, שהוא הצד הגחון של החיה פונה המצלמה עבור כל תמונה. עכבר תמונה במיקום על-חושי מדי שבוע עבור פעילות לוציפראז. לאחר חיתוך וכתמים של רקמות מבודדות משובצות פרפין, התבוננו בהן באמצעות מיקרוסקופ רב עוצמה.

במודל העכבר UCC, 83.3 אחוז מבעלי החיים יצרו גידולים ראשוניים והוצג גידול ראשוני תלוי זמן המבוסס על מדידות ביולומינציה שבועיות. במודל העכבר CRC, 96.9% מהעכברים גידלו גידולים ראשוניים. בהתאם לגידול החולה, צמיחת גידול העכבר הייתה תקופת השהיה שונה, אשר משקף את ההבדל במאפיינים הקליניים של המטופלים.

הן במודלים תוך-וריים והן במודלים פנים-רקטליים, הזרקת תאי הגידול יצרה גידולים ראשוניים אורתוטופיים. יתר על כן, 33.3% ו-53.1% מהעכברים החדירים תאי UCC ותאי CRC עם תאי HK, בהתאמה, פיתחו גרורות איברים מרוחקות. היסטופטולוגיה של קסנוגרפטים במודל UCC הושוותה קרצינומה של שלפוחית השתן החולה העיקרי.

תוצאות הכתמים של קסנוגרפטים היו דומות לאלה בביופסיות הכירורגיות המקוריות, המאשרות מורפולוגיה דומה של רקמות. נוגדן Ki67, סמן התפשטות תאים אנושיים, מראה כתמים גרעיניים חיוביים המצביעים על תאים סרטניים אנושיים מתרבים מאוד, הגדלים במהירות. באופן דומה, במודל CRC, כתמי H&E מצביעים על הדמיון בין ארכיטקטורה בין קסנוגרפטים לגידולים של מטופלים.

כתמי נוגדנים נגד cytokeratin 20 הראו גם דפוס גידול דומה בשני המודלים CRC. המפתח להליכים אלה הוא לטפל בבעלי החיים בעדינות, אך בתקיפות. תרגול עם יד יציבה היא הדרך הטובה ביותר לבצע טכניקות אלה בבטחה ולהשיג את התוצאות הטובות ביותר.

לאחר מודלים אלה נעשים, צורות שונות מרובות של טיפולים בסרטן ניתן לבדוק, כולל שילובים של תרופות נוכחיות, כמו גם טיפולים שפותחו לאחרונה לפני ניסויים קליניים בחולים. חשוב לזכור כי הטיפול הן בתאים סרטניים והן במחטים צריך להתבצע על ידי כוח אדם מנוסה לבטיחותם, כמו גם כדי להשיג תוצאות אופטימליות.