Name: עצם תלת-ממדי מטריצה חוץ-תאית מודל אוסטאוסרקומה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-12T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: למדו כיצד להכין מודל מטריצה חוץ-תאית מעצם מופרדת מתאים לחקר אוסטאוסרקומה. השיטה מאפשרת לחקור הטרוגניות מורפולוגית ורגישות לתרופות בגידולי עצם שונים.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

המחברים ערך התמיכה של צ'ן Liuying זאו ארוך וסיוע הניהולית שלה לסיוע טכני מעולה שלו במהלך בניית עצם מטריצה חוץ-תאית פיגומים. מחקר זה נתמך על ידי מענקים הלאומי מדעי הטבע קרן של סין (31871413).

טיפול בבעלי חיים ושימוש מתנהלים על פי מוסדות לאומיים של בריאות המדריך על טיפוח ועל שימוש של חיות מעבדה (NIH הפרסום NO.80-23, תוקן בשנת 1996) לאחר אישור מהאוניברסיטה חיה אתיקה הוועדה של סאן יאט-סן.
1. עצם ההכנה
<ol><li>להשיג 4 כדי 6 בת עכברים BALB/c (ללא דרישה ספציפית סקס). המתת חסד של עכבר גילוח ורחיצה כירורגית מאת נקע בצוואר הרחם, לחתוך את שוקית טריים, שוקה, עצם הירך של hindlimb בעזרת מספריים כירורגיים סטרילי. לקלף את רקמת האפיתל, ואז להסיר כמה של הרקמות הרכות ככל האפשר באמצעות פינצטה ומספריים.</li>
	<li>יש לשטוף את עצמות הרגל בתמיסת פוספט buffered סטרילי 10 מ מ (PBS) פעמיים כדי להסיר דם בקערה 6 ס מ. לטבול את העצמות 75% אתנול למשך 3 דקות ולאחר מכן לשטוף עם PBS פעמיים. העצמות נקי ניתן לאחסן שפופרת צנטרפוגה סטרילי 50 מ עם סטרילי PBS ב-80 מעלות צלזיוס במשך חודשים עד הנדרש. הערה: PBS המשמשים את כל השלבים הבאים יש 10 מ מ פו43−.</li>
</ol>2. עצם העלמות המינרלים ו- decellularization
<ol><li>להפשיר שהעצמות בטמפרטורת החדר ולאחר מכן לקפוא שוב ב- 80 ° C עבור ה 1 נושא העצמות יותר מ 2-3 מחזורים ההקפאה-הפשרה לפירוק פירוק ואת הרקמה תא.</li>
	<li>דגירה עצמות שפופרת צנטרפוגה סטרילי 50 מ עם 0.5 HCl N ללילה בטמפרטורת החדר על נדנדה מטרף פלטפורמה או מסלולית ברעידות עדין נדנדה/כדי להבטיח כיסוי מלא, אפילו של עצמות. הערה: ודא העצמות שקועים לחלוטין בזמן תנועה של החומצה אל תתפשר בתהליך. הנפח של HCl פתרון צריך להיות פי 10 יותר כמו זה של העצמות.</li>
	<li>לאחר decalcification, decant הפתרון HCl לחלוטין, שוטפים תחת מים עבור 1 h זורמים. לאחר מכן, לשטוף את העצמות פעמיים למשך 15 דקות לכל לשטוף עם מים מזוקקים על נדנדה פלטפורמה או מסלולית מטרף. הערה: הקפד להסיר לחלוטין את הפתרון או את המים בין שוטף, ואחרי כביסה הסופי עם מים מזוקקים.</li>
	<li>תמצית ליפידים בעצמות demineralized בתערובת 1:1 של מתנול, כלורופורם בשפופרת צנטרפוגה 50 מ ל, עטוף בנייר כסף לשעה בטמפרטורת החדר10.</li>
	<li>לאחר מכן, להעביר העצמות לתוך צינור נוסף של מתנול עטוף בנייר כסף עבור 30 דקות להסיר לחלוטין את מתנול ולשטוף עם מים פעמיים למשך 15 דקות ברעידות בעדינות מזוקקים. Decant הסופי שטיפת מים והמשך בשלבים הבאים בתנאי סטרילי. הערה: במהלך השלב החילוץ, אור יש להמנע כדי למנוע ריקבון כלורופורם. התערובת ניתן לאחסן במיכל עמידים אור או שפופרת צנטרפוגה עטוף בנייר כסף. לבצע כל טיפול ולשטוף את השלבים תחת סיבוב צנוע או נדנדה בתנועה.</li>
	<li>לשטוף את העצמות בצלחת 6 ס מ עם PBS סטרילי למשך 3 דקות, ולאחר מכן להעביר את העצמות לתוך שפופרת צנטרפוגה 50 מ ל חדש. להוסיף 40 מ"ל סטרילי 0.05% טריפסין-EDTA (TE) לתוך הצינור, דגירה עבור 23 ש ח בחודש חממה2 CO בגיל 37 ° C18עצמות.</li>
	<li>לבטל את הפתרון טה ולשטוף פעמיים עם PBS סטרילית בתוספת 90 אמפיצילין μg/mL ו- 90 kanamycin μg/mL. לאחר decanting הסופי לשטוף PBS לחלוטין, לחדש עם PBS סטרילית 40 מ. לשטוף ביסודיות עבור 24 שעות בטמפרטורת החדר עם נדנדה עדין או טלטול עבור להשרות לאנטיביוטיקה. הערה: כל מגניב סטרילי בשימוש זה, השלבים הבאים מכיל אמפיצילין μg/mL 90 90 kanamycin μg/mL. לילה לשטוף תחת סיבוב או נדנדה בתנועה מבוצעות עבור תקופות ארוכות טבילה יסודית עם אנטיביוטיקה כדי להשיג עיקור יעיל של הנקבובית רווחים.</li>
	<li>הסר את PBS, להעביר את העצמות לתוך שפופרת צנטרפוגה מ"ל מלא עם PBS סטרילי. מוכנה demineralized, decellularized העצמות נקראים עצם מטריצה חוץ-תאית (טוב), ניתן לאחסן ב 4 מעלות צלזיוס למשך 2 חודשים עד הנדרש.</li>
</ol>3. תא זריעה ותרבות
<ol><li>להוציא את טוב מן המקרר 4 ° C, לטבול אותו ב- 75% אתנול עבור s 30 ולאחר מכן לשטוף עם PBS פעמיים. להעביר את טוב לצלחת תרבות נקי. ובכן 6 תאים. להוסיף 2 מ"ל בינוני תרבות שלמה (של Dulbecco שונה בינוני/F12 של הנשר (DF12) המכילה 5% סרום שור עוברית, אמפיצילין μg/mL 90, 90 kanamycin μg/mL). דגירה של טוב לילה ב חממה2 CO ב 37 º C.</li>
	<li>להשיג את שורות תאים אנושיים OS (MNNG/בחורות ו- MG-63). להשעות כ 1.0 x 10 תאים5 מערכת ההפעלה עם PBS 100 μL המכיל פנול אדום כמו מחוון. הערה: כדאי לעקוב ולבחון שכבתיים תאים בתוך המודל טוב תלת מימדי, MNNG/בחורות ו- MG-63 נגועים וקטור lentiviral לבטא mCherry פלורסנט, חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP).</li>
	<li>לאחר טוב מלא טבולים המדיום, להזריק תאי מערכת ההפעלה לתוך טוב מן epiphysis הפרוקסימלית או דיסטלי כאשר המחט מגיע את חלל מדולרי של טוב. דגירה דגם OS-טוב למשך תקופה מינימלית של 2 h ב- 5% humidified האווירה2 CO ב 37 ° C כדי להבטיח התאים מוזרק בחוזקה לדבוק טוב. הערה: לחמם בכל אמצעי התקשורת המשמשים תרבית תאים. החממה משמש תרבית תאים יש humidified של 5% CO2 האווירה ב 37 º C.</li>
	<li>להוסיף 1 מ"ל בינוני תרבות שלמה המשקולת על מעיל לחלוטין את פני השטח של התרבות טוב לילה ב חממה2 CO ב 37 º C.</li>
	<li>בעדינות העברת הדגם OS-טוב לתוך באר חדשה של 6-ובכן צלחת עם פינצטה סטרילי, בינוני תרבות טריים refeed 1 מ"ל. תרבות המודל למשך 14 ימים חממה2 CO ב 37 מעלות צלזיוס, לרענן את המדיום תרבות לפי מצב התפשטות תאים OS.</li>
	<li>תמשיך לפקח על מצב צבע ותא בינוני תחת המיקרוסקופ פלורסצנטיות הפוך במהלך תהליך התרבות. כאשר מערכת ההפעלה שהתאים יתרחבו לצלחת, בעדינות להעביר את המודל OS-טוב לשני חדש עם פינצטה סטרילי. הערה: המדיום תרבות הוא אדום בוהק ב- pH 7.4, אשר יהיה ערך ה-pH האופטימלי עבור תרבית תאים יונקים ביותר. אם המדיום יהפוך צהוב כתום או אפילו, לרענן באופן מיידי של המדיום כדי לשמור על סביבה בריאה עבור מערכת ההפעלה תאים.</li>
	<li>להעביר את המודל OS-טוב לתוך באר חדשה עם מלקחיים ולשטוף בעדינות עם PBS להסיר את המדיום תרבות. לאחר מכן, להעביר לתוך שפופרת צנטרפוגה 15 מ"ל, לתקן עם 10% buffered פורמלין לזיהוי היסטולוגית.</li>
</ol>

<ol><li>Longhi, A., Errani, C., De Paolis, M., Mercuri, M., Bacci, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primary+bone+osteosarcoma+in+the+pediatric+age%3A+State+of+the+art%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+Reviews%22%5BJournal%5D)">Primary bone osteosarcoma in the pediatric age: State of the art.</a> Cancer Treatment Reviews. 32, 423-436 (2006).</li>
<li>Mohseny, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma+originates+from+mesenchymal+stem+cells+in+consequence+of+aneuploidization+and+genomic+loss+of+Cdkn2%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma originates from mesenchymal stem cells in consequence of aneuploidization and genomic loss of Cdkn2.</a> Journal of Pathology. 219, 294-305 (2009).</li>
<li>Mutsaers, A. J., Walkley, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cells+of+origin+in+osteosarcoma%3A+mesenchymal+stem+cells+or+osteoblast+committed+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Cells of origin in osteosarcoma: mesenchymal stem cells or osteoblast committed cells.</a> Bone. 62, 56-63 (2014).</li>
<li>Sato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+tumors+can+derive+from+Ng2%2FCspg4-Expressing+pericytes+with+%CE%B2-Catenin+modulating+the+neoplastic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal tumors can derive from Ng2/Cspg4-Expressing pericytes with β-Catenin modulating the neoplastic phenotype.</a> Cell Reports. 16, 917-927 (2016).</li>
<li>Patane, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MET+overexpression+turns+human+primary+osteoblasts+into+osteosarcomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">MET overexpression turns human primary osteoblasts into osteosarcomas.</a> Cancer Research. 66, 4750-4757 (2006).</li>
<li>Poos, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+heterogeneity+of+osteosarcoma+-+shift+from+single+candidates+to+functional+modules%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Genomic heterogeneity of osteosarcoma - shift from single candidates to functional modules.</a> PLoS One. 10, 123082(2015).</li>
<li>Martin, J. W., Squire, J. A., Zielenska, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genetics+of+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Sarcoma%22%5BJournal%5D)">The genetics of osteosarcoma.</a> Sarcoma. 2012, 1-11 (2012).</li>
<li>Alfranca, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+microenvironment+signals+in+osteosarcoma+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%22%5BJournal%5D)">Bone microenvironment signals in osteosarcoma development.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 72, 3097-3113 (2015).</li>
<li>Alford, A. I., Kozloff, K. M., Hankenson, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+networks+in+bone+remodeling%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Biochemistry+%26+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix networks in bone remodeling.</a> The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 65, 20-31 (2015).</li>
<li>Sawkins, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogels+derived+from+demineralized+and+decellularized+bone+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Hydrogels derived from demineralized and decellularized bone extracellular matrix.</a> Acta Biomaterialia. 9, 7865-7873 (2013).</li>
<li>Alom, N., Peto, H., Kirkham, G. R., Shakesheff, K. M., Bone White, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+extracellular+matrix+hydrogel+enhances+osteogenic+differentiation+of+C2C12+myoblasts+and+mouse+primary+calvarial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+B-Applied+Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Bone extracellular matrix hydrogel enhances osteogenic differentiation of C2C12 myoblasts and mouse primary calvarial cells.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part B-Applied Biomaterials. 106, 900-908 (2018).</li>
<li>Datta, N., Holtorf, H. L., Sikavitsas, V. I., Jansen, J. A., Mikos, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+bone+extracellular+matrix+synthesized+in+vitro+on+the+osteoblastic+differentiation+of+marrow+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Effect of bone extracellular matrix synthesized in vitro on the osteoblastic differentiation of marrow stromal cells.</a> Biomaterials. 26, 971-977 (2005).</li>
<li>Rubio, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+environment+is+essential+for+osteosarcoma+development+from+transformed+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Bone environment is essential for osteosarcoma development from transformed mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 32, 1136-1148 (2014).</li>
<li>Sadr, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+the+biological+performance+of+synthetic+polymeric+materials+by+decoration+with+engineered%2C+decellularized+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Enhancing the biological performance of synthetic polymeric materials by decoration with engineered, decellularized extracellular matrix.</a> Biomaterials. 33, 5085-5093 (2012).</li>
<li>Gautschi, O. P., Frey, S. P., Zellweger, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+morphogenetic+proteins+in+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Anz+Journal+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Bone morphogenetic proteins in clinical applications.</a> Anz Journal of Surgery. 77, 626-631 (2007).</li>
<li>Rochet, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modification+of+gene+expression+induced+in+human+osteogenic+and+osteosarcoma+cells+by+culture+on+a+biphasic+calcium+phosphate+bone+substitute%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Modification of gene expression induced in human osteogenic and osteosarcoma cells by culture on a biphasic calcium phosphate bone substitute.</a> Bone. 32, 602-610 (2003).</li>
<li>Spang, M. T., Christman, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+hydrogel+therapies%3A+in+vivo+applications+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix hydrogel therapies: in vivo applications and development.</a> Acta Biomaterialia. 68, 1-14 (2018).</li>
<li>Schenke-Layland, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+decellularization+of+xenogeneic+tissue+on+extracellular+matrix+integrity+for+tissue+engineering+of+heart+valves%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Structural+Biology%22%5BJournal%5D)">Impact of decellularization of xenogeneic tissue on extracellular matrix integrity for tissue engineering of heart valves.</a> Journal of Structural Biology. 143, 201-208 (2003).</li>
<li>Klein, M. J., Siegal, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma%3A+anatomic+and+histologic+variants%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Clinical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma: anatomic and histologic variants.</a> American Journal of Clinical Pathology. 125, 555-581 (2006).</li>
<li>Lipinski, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+evolution+and+the+limits+of+predictability+in+precision+cancer+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Cancer%22%5BJournal%5D)">Cancer evolution and the limits of predictability in precision cancer medicine.</a> Trends in Cancer. 2, 49-63 (2016).</li>
<li>McGranahan, N., Swanton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+heterogeneity+and+tumor+evolution%3A+past%2C+present%2C+and+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Clonal heterogeneity and tumor evolution: past, present, and the future.</a> Cell. 168, 613-628 (2017).</li>
<li>Brown, H. K., Schiavone, K., Gouin, F., Heymann, M., Heymann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+bone+sarcomas+and+new+therapeutic+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Calcified+Tissue+International%22%5BJournal%5D)">Biology of bone sarcomas and new therapeutic developments.</a> Calcified Tissue International. 102, 174-195 (2018).</li>
<li>Abarrategi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteosarcoma%3A+cells-of-origin%2C+cancer+stem+cells%2C+and+targeted+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+International%22%5BJournal%5D)">Osteosarcoma: cells-of-origin, cancer stem cells, and targeted therapies.</a> Stem Cells International. 2016, 1-13 (2016).</li>
<li>Tsukamoto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cells+promote+tumor+engraftment+and+metastatic+colonization+in+rat+osteosarcoma+model%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cells promote tumor engraftment and metastatic colonization in rat osteosarcoma model.</a> International Journal of Oncology. 40, 163-169 (2012).</li>
<li>Rodriguez, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aerosol+gemcitabine%3A+preclinical+safety+and+in+vivo+antitumor+activity+in+osteosarcoma-bearing+dogs%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Aerosol+Medicine+and+Pulmonary+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Aerosol gemcitabine: preclinical safety and in vivo antitumor activity in osteosarcoma-bearing dogs.</a> Journal of Aerosol Medicine and Pulmonary Drug Delivery. 23, 197-206 (2010).</li>
<li>Rodriguez, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+canine+osteosarcoma+as+a+model+to+assess+efficacy+of+novel+therapies%3A+Can+old+dogs+teach+us+new+tricks%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Experimental+Medicine+and+Biology%22%5BJournal%5D)">Using canine osteosarcoma as a model to assess efficacy of novel therapies: Can old dogs teach us new tricks.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 804, 237-256 (2014).</li>
<li>Mohseny, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+osteosarcoma+zebrafish+model+implicates+Mmp-19+and+Ets-1+as+well+as+reduced+host+immune+response+in+angiogenesis+and+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">An osteosarcoma zebrafish model implicates Mmp-19 and Ets-1 as well as reduced host immune response in angiogenesis and migration.</a> Journal of Pathology. 227, 245-253 (2012).</li>
<li>Saalfrank, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+porcine+model+of+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogenesis%22%5BJournal%5D)">A porcine model of osteosarcoma.</a> Oncogenesis. 5, 210(2016).</li>
<li>Zhang, Y., Pan, Y., Xie, C., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MiR-34a+exerts+as+a+key+regulator+in+the+dedifferentiation+of+osteosarcoma+via+PAI-1%E2%80%93Sox2+axis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+%26+Disease%22%5BJournal%5D)">MiR-34a exerts as a key regulator in the dedifferentiation of osteosarcoma via PAI-1–Sox2 axis.</a> Cell Death & Disease. 9, (2018).</li>
<li>Hashimoto, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+decellularized+bone%2Fbone+marrow+produced+by+high-hydrostatic+pressurization+on+the+osteogenic+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The effect of decellularized bone/bone marrow produced by high-hydrostatic pressurization on the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells.</a> Biomaterials. 32, 7060-7067 (2011).</li>
<li>Benders, K. E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+scaffolds+for+cartilage+and+bone+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration.</a> Trends in Biotechnology. 31, 169-176 (2013).</li>
<li>Grayson, W. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+initial+seeding+density+and+fluid+perfusion+rate+on+formation+of+tissue-engineered+bone%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering+Part+A%22%5BJournal%5D)">Effects of initial seeding density and fluid perfusion rate on formation of tissue-engineered bone.</a> Tissue Engineering Part A. 14, 1809-1820 (2008).</li>
<li>Mikulic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+angiogenesis+and+outcome+in+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Hematology+and+Oncology%22%5BJournal%5D)">Tumor angiogenesis and outcome in osteosarcoma.</a> Pediatric Hematology and Oncology. 21, 611-619 (2004).</li>
<li>Ren, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculogenic+mimicry%3A+a+new+prognostic+sign+of+human+osteosarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Pathology%22%5BJournal%5D)">Vasculogenic mimicry: a new prognostic sign of human osteosarcoma.</a> Human Pathology. 45, 2120-2129 (2014).</li>
<li>Bonuccelli, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+mesenchymal+stem+cells+in+osteosarcoma+and+metabolic+reprogramming+of+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">Role of mesenchymal stem cells in osteosarcoma and metabolic reprogramming of tumor cells.</a> Oncotarget. 5, 7575-7588 (2014).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי יש להם אינטרסים כלכליים אין מתחרים.

באופן כללי, OS ניתן לסווג כמו osteoblastic, chondroblastic, ﬁbroblastic תת בהתאם רכיב היסטולוגית הדומיננטי שלו. הפרוגנוזה שלה תלויה לא רק פרמטרים היסטולוגית אלא גם באתר שלה אנטומיים. זה עלול להתרחש בתוך העצמות (בתיבה אורתופדיים או תא intracortical), על המשטחים של עצמות, ובעוד אתרים extraosseous19. הופעתה והטרוגניות של מערכת ההפעלה יכולה להיות הובהר כמו ההטיה של אירועים oncogenic דחיפה microenvironmental נאותה, ואחריו הגוברת פיתוח והעברה ל איברים רחוקים20,<sup cla...

אוסטאוסרקומה (OS) מתרחשת בדרך כלל באופן פעיל גדל באזורים, metaphysis של עצמות ארוכות, במהלך גיל ההתבגרות. יותר מ- 80% מהאתרים מושפעות OS יש העדפה metaphysis של שוקה הפרוקסימלית ואת הזרוע proximal, כמו גם עצם הירך דיסטלי והן צינתור, המתאים למיקום של לוחית הצמיחה1. מערכת ההפעלה כוללת תת תא מרובים עם מאפיינים mesenchymal והמגוון ניכר ב כיתה ותכונות היסטולוגית. עדויות תומכות גזע mesenchymal (MSCs), מבשרי מחויבת תאי העצם, pericytes של התאים של מקור2,3,4,5. תאים אלה ניתן לצבור שינויים גנטיים או epigenetic, להצמיח OS תחת השפעת מסוימים אותות microenvironmental של העצם. מנגנונים הן פנימי והן חיצוני התוצאה אי יציבות גנומית והטרוגניות של מערכת ההפעלה, עם פנוטיפים מורפולוגי ומחקרים קליניים מרובים6,7. עבור טיפולים בפעוט או הקרנה של תרופות חדשות, מודלים חדשניים צריך להיווצר אל מול הטרוגניות או הפרעות קליניות אחרות.
מערכת ההפעלה היא גידול מוצק אינטרה-osseous ממאירים. המורכבות ואת הפעילות של המקיפים אלמנטים microenvironment להיוועץ ההבדלים פנוטיפי ו פונקציונלי על תאים OS במקומות שונים של הגידול. מטריצה חוץ-תאית עצם (טוב) מספק לפיגום הביוכימי מבניים עבור התצהיר מינרלים ו עצם שיפוץ. החלק האורגני של מטריצה חוץ-תאית (ECM) מורכבת בעיקר סוג אני הקולגן מופרש על ידי תאי השושלת osteoblastic, בעוד חלק mineralized שלה מורכב סידן פוספט בצורה של היידרוקסיאפטיט8. התפקיד דינמי של רשתות ה-ECM לווסת אדהזיה תא, בידול, צולבות לדבר ורקמות לתפקד תחזוקה9.
Demineralized hydrogels טוב, ECM שימשו בהצלחה בתרבות תא ולשפר תא התפשטות10,11. ECM דמוי עצם מסונתז יכול לווסת את גודל מאגר, גורל החלטות והתקדמות שושלת היוחסין של MSCs12,13,14. יתר על כן, תוצאות ראיות חשיבותו הקלינית לספק פעילות osteogenic על ידי עירור תהליכים תאיים במהלך עצם היווצרות והתחדשות15,16,17.
במאמר זה, הקבוצה שלנו יוצר מודל שונה עם חלופה חיובית לתרבות לטווח ארוך תלת מימדי. תאים OS מוזרק טוב הרקמה-derived מציגים פנוטיפ heterogeneously mesenchymal בקלות לעומת תרבויות מימדי פלסטיק. טוב נגזר מן הרקמה הומולוגי בייעודי לאתר הצג יתרונה דרמטי כמו להיות נישה מקורית עבור מערכת ההפעלה תאים במבחנה , יש פוטנציאל אדיר במחקר תיאורטית וקלינית OS. הפלטפורמה טוב מאופיין פשוטה אך יעילה למחקר במבחנה , יורחב ב דוגמנות סרטן מרובים.

<table><tbody><tr><td>צינור צנטריפוגה 15 מ"ל</td><td>גריינר</td><td>188271</td><td></td></tr><tr><td>צינור צנטריפוגה 50 מ"ל</td><td>גריינר</td><td>227270</td><td></td></tr><tr><td>צלחת תרבית תאים 6 ס"מ</td><td>גריינר</td><td>628160</td><td></td></tr><tr><td>צלחת 6 בארות</td><td>גריינר</td><td>657160</td><td></td></tr><tr><td>אמפיצילין</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>A9393</td><td></td></tr><tr><td>C57-BL/6J עכבר</td><td>המעבדה האוניברסיטאית סאן יאט-סן חממת מרכז בעלי חיים</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 SHEL</td><td>LAB</td><td>SCO5A</td><td></td></tr><tr><td>נתרן פוספט דו-בסיסי</td><td>מפעל ריאגנט כימי גואנגג'ואו</td><td>BE14-GR-500G</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>סיגמא-אולדריץ'</td><td>D0547</td><td></td></tr><tr><td>סרום בקר עוברי</td><td>Hyclone</td><td>SH30084.03</td><td></td></tr><tr><td>המוציטומטר</td><td>BLAU</td><td>717805</td><td></td></tr><tr><td>Kanamycin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PHR1487</td><td></td></tr><tr><td>MG-63</td><td>האקדמיה הסינית למדעים, בנק התאים של שנחאי</td><td>קו תאי אוסטאוסרקומה אנושית</td>MNNG/HOS האקדמיה הסינית למדעים, בנק התאים של שנחאי קו תאי אוסטאוסרקומה אנושית פנול אדום סיגמא-אולדריץ' P4633 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>תמיסה של פנול אדום משמשת כאינדיקטור pH: צבעו מציג מעבר הדרגתי מצהוב לאדום בטווח ה-pH 6.6 עד 8.0.</td></tr><tr><td>אשלגן כלורי</td><td>סנגון ביוטק</td><td>A100395</td><td></td></tr><tr><td>אשלגן פוספט מונוביסיק</td><td>סנגון ביוטק</td><td>A501211</td><td></td></tr><tr><td>נתרן כלורי</td><td>סנגון ביוטק</td><td>A501218</td><td></td></tr></tbody></table>

עצם תלת-ממדי מטריצה חוץ-תאית מודל אוסטאוסרקומה

Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

אוסטאוסרקומה (OS) היא הנפוצה ביותר של סרטן העצמות העיקרי אגרסיבי ביותר. הוא מאופיין עם שינויים אנטומיים היסטולוגיים יחד עם האבחון או prognostic בקשיים. מערכת ההפעלה כוללת תאים סרטניים genotypically ו phenotypically הטרוגנית. עצם microenvironment רכיבים הם הוכיחו לחשבון עבור התקדמות הגידול הטרוגניות ומחלות. מטריצה חוץ-תאית עצם (טוב) שומר על מטריצות microstructural ומרכיבים ביוכימיים של יליד מטריצה חוץ-תאית. הגומחה רקמות ספציפיות מספק לפיגום חיובית ולטווח תא OS זריעה והתפשטות. מאמר זה מספק פרוטוקול עבור הכנת מודל טוב והן ביישום נסיוני נוסף. מערכת ההפעלה התאים יכולים לגדול, להבדיל לתוך עקבית עם המורכבות histopathological של דגימות קליניות OS מרובים פנוטיפים. המודל מאפשר גם ויזואליזציה של מורפולוגיות מגוונות והקשר שלהן עם שינויים גנטיים, מנגנוני הרגולציה המשמש כבסיס. כמו הומולוגי ל OS אנושי, מודל טוב-OS זה יכול להתפתח והחיל פתולוגיה, מחקר קליני של מערכת ההפעלה.

לאחר העלמות המינרלים, decellularization, טוב נראה שקוף עם חוסן ויותר אחיזה לעומת עצם העכבר מקורית. משקע שריר קטן ואת הרווח של חלל מדולרי ניתן בבירור לראות (איור 1א', ב'). כדי לקבוע את decellularization יעיל של טוב, טוב נעוץ פרפין לאחר קיבוע, ואז חתוכים למקטעים μm 3-5 עבור hematoxylin-אאוזין (H &amp; E) מכתים. הסרת יסודית של גרעין התא מוצג על ידי שדה בהיר הדמיה. טבעי נקבובי המבנה של קולגן רשת הסידור מתוחזקות היטב, טוב decellularized (איור 1<stron...

המודל מטריצה חוץ-תאית (טוב) עצם אוסטאוסרקומה (OS) הוא מבוסס היטב שמוצג כאן. זה יכול לשמש בדומה לפיגום מתאימים מחקה הגידול העיקרי לצמיחה במבחנה , מתן מודל אידיאלי ללמוד את הטרוגניות היסטולוגית ו cytogenic של מערכת ההפעלה.

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

שיטה זו מספקת אסטרטגיה יעילה להכנת פיגומים תפקודיים למחקר גידול בעצמות. Decellularized מטריצת העצם extracelullar, הראה serocompatibility משתנה להישרדות ופעילויות של תאים osteosarcoma. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שתרבות התאים אוסטאוסרקומה במטריצה המופקת מעצם מראה מורפולוגיה הטרוגנית מאוד דומה להיסטופתולוגיה קלינית של אוסטאוסרקומה.השיטה מספקת מודל אידיאלי לחקירת ההתפתחות, התקדמות הרגישויות לתרופות של גידולים בעצמות, כגון אוסטאוסרקומה, סרקומה יואינג, וגידולים ממאירים אחרים גרורות לעצם. כדי להתחיל, להשיג ארבעה עד שישה שבועות BALB / c עכברים, לאחר המתת דם עכבר באמצעות מספריים כירורגיים סטריליים, לחתוך שוקית טרייה, השוקה, ועצם הירך מאיבר אחורי. בעזרת פינצטה, לקלף את רקמת האפיתל, ולאחר מכן להסיר כמה שיותר של הרקמה הרכה ככל האפשר.לשטוף את עצמות הרגל עם פתרון PBS סטרילי 10 mM פעמיים כדי להסיר דם בצלחת שישה סנטימטרים. טובל את העצמות בצלחת עם 75% אתנול במשך שלוש דקות ולאחר מכן לשטוף עם PBS פעמיים. אחסן את העצמות הנקיות בצינור צנטריפוגה סטרילי של 50 מיליליטר עם צינור PBS סטרילי ב-80 מעלות צלזיוס.להפשיר את העצמות הקפואות בטמפרטורת החדר ולאחר מכן להקפיא שוב ב 80 מעלות צלזיוס במשך שעה אחת. חשוף את העצמות ליותר משני מחזורי הפשרת הקפאה עבור תותבת תאים ופירוק רקמות. לאחר מכן, מניחים את העצמות בצינור צנטריפוגה סטרילי 50 מיליליטר מלא 0.5 HCl נורמלי דגירה לילה בטמפרטורת החדר על שייקר מסלולית עם רעידות עדינות כדי להבטיח כיסוי מלא ואפילו של העצמות.לאחר דקלציציה, decant תווי חומצה הידרוכלורית לחלוטין לשטוף את העצמות תחת מים זורמים במשך שעה אחת. לאחר מכן, השתמש במים מזוקקים כדי לשטוף את העצמות פעמיים במשך 15 דקות לכל לשטוף על שייקר מסלולית. לגמרי decant הפתרון.כדי לחלץ את השומנים בעצמות demineralized, מניחים את העצמות בצינור צנטריפוגה 50 מיליליטר עם תערובת 1:1 של מתנול וכלורופורם. לעטוף את הצינור עם נייר אלומיניום, כדי למנוע אור למניעת פירוק כלורופורם. ולשים את הצינור על שייקר מסלולי במשך שעה אחת.לאחר מכן, השתמש פינצטה כדי להעביר את העצמות לתוך צינור אחר של מתנול עם נייר כסף במשך 30 דקות. מוציאים את מתנול לחלוטין, ולשטוף עם מים מזוקקים פעמיים במשך 15 דקות על שייקר מסלולית. דקאנט סופי לשטוף מים ולהמשיך במצב סטרילי.שוטפים את העצמות בצלחת של שישה סנטימטרים עם PBS סטרילי במשך שלוש דקות. הוסף 40 מיליליטר של פתרון סטרילי 0.05%TE לתוך צינור צנטריפוגה 50 מיליליטר ועצמות אינקובט במשך 23 שעות באינקובטור פחמן דו חמצני ב 37 מעלות צלזיוס. השלך את פתרון TE, ולשטוף פעמיים עם PBS סטרילי בתוספת 90 גרם / מ"ל אמפיצילין ו 90 g / mL kanamycin במשך 15 דקות כל אחד על שייקר מסלולית.לאחר decanting לשטוף הסופי לחלוטין, לחדש שוב עם 40 מיליליטר של PBS סטרילי עם אנטיביוטיקה. יש לשטוף היטב במשך 24 שעות בטמפרטורת החדר עם טלטולים עדינים כדי להשיג עיקור יעיל של חללים נקבוביים. לאחר מכן, להעביר את העצמות לתוך צינור צנטריפוגה 50 מיליליטר מלא PBS סטרילי עם אנטיביוטיקה.מטריצת עצם חוץ תאית מוכנה ניתן לאחסן בארבע מעלות צלזיוס במשך חודשיים. לטבול BEM ב 75% אתנול בצלחת בעדינות ללחוץ את המנה ביד במשך 30 שניות. ואז לשטוף עם PBS במשך 30 שניות, פעמיים.העבר את BEM על צלחת תרבות תאים נקייה של שש בארות. מוסיפים שני מיליליטר של תרבות שלמה בינונית לכל באר. דגירה BEM לילה באינקובטור פחמן דו חמצני ב 37 מעלות צלזיוס.השג קווי תאים של מערכת ההפעלה האנושית ב-100 מיקרוליטרים של PBS מחומם מראש המכיל מחוון פנול אדום. השתמש פיפטה כדי להשעות את תאי מערכת ההפעלה עם ריכוז משוער של 1 פעמים 10 עד 5. לאחר שה- BEM ספוג לחלוטין במדיום, מאפיפים פרוקסימליים או דיסטליים, לנקב את המחט לחלל המדולרי של BEM ולהזריק תאי מערכת הפעלה לתוך BEM.הדגירה את מודל OS-BEM למשך שעתיים לפחות באטמוספירה לחה של 5%פחמן דו-חמצני ב-37 מעלות צלזיוס כדי להבטיח שהתאים המוזרקים ידבקו בחוזקה ב- BEM. לאחר מכן, להוציא את הצלחת מהחמה. מוסיפים מדיום תרבות מיליליטר אחד על הצלחת, ולשמור אותו באינקובטור לילה כדי לצפות לחלוטין את פני השטח של תרבות BEM.העבר בעדינות את דגם ה- OS-BEM לתוך באר חדשה של צלחת שש בארות עם פינצטה סטרילית, והזן מחדש מדיום תרבות טרי מיליליטר אחד. תרבות המודל במשך 14 ימים באינקובטור. במהלך הדגירה בת 14 הימים, המשיכו לעקוב אחר צבע בינוני.אם המדיום הופך לכתום, או אפילו לצהוב, רענן מיד את המדיום על ידי השלכת מחצית מהמדיום הישן והוספת מדיום חדש לשמירה על סביבה בריאה לתאי מערכת ההפעלה. המשך לעקוב אחר מצב התא תחת מיקרוסקופ הפלואורסצנטי ההפוך. כאשר תאי מערכת ההפעלה מתרחבים לצלחת, מעבירים בעדינות את דגם ה- OS-BEM ל באר חדשה נוספת עם פינצטה סטרילית.לאחר תרבות של 14 יום, יש לשטוף בעדינות את דגם ה-OS-BEM באמצעות PBS כדי להסיר את מדיום התרבות. לאחר מכן העבר לצינור צנטריפוגה 15 מיליליטר ולהוסיף 10% פורמלין במאגר כדי לתקן לזיהוי היסטולוגי. לאחר demineralization ו decellularization, BEM נראה שקוף עם עמידות חזקה יותר ועקשנות לעומת עצם העכבר המקומי.שאריות שרירים קטנות בחלל חלל מדולרי ניתן לראות בבירור. הדמיה שדה בהיר של העצם המקורית ואת BEM decellularized, מראה הסרה יסודית של גרעיני התא. המבנה הנקבובי הטבעי בסידור רשת הקולגן מתוחזק היטב ב- BEM נטול קפאין.בנוסף, כתמים אימונוהיסטוכימיים עבור קולגן I וקולאגן הרביעי מראה את המרכיבים העיקריים של מטריצה חוץ תאית נשמרים שוקה העכבר לאחר דקלולריזציה. במהלך התרבות של 14 יום, הן periosteum והן אנדוסטיום הם הסתננו על ידי התרחבות של תאי מערכת ההפעלה. תאי מערכת ההפעלה על BEM decellularized להראות מורפולוגיה הטרוגנית מאוד דומה תכונות ציטופתולוגיות של קטע מערכת ההפעלה.ניתוח אימונוהיסטוכימי לאחר culturing במודל BEM במשך 14 ימים מראה יתרונות גדולים בתרבויות לטווח ארוך. כמו כן, תאי מערכת ההפעלה ותרבות BEM, גליצופרוטאין מטריצת עצם אקספרס מאוד, אשר ספציפי עבור מטריצה אוסטאואידית. מודל תלת מימדי זה של ויטרו שימש להדגים הטרוגניות פנוטיפית ומנגנון רגולטורי של דדיפרנטיות אוסטאוסרקומה עם הצלחה.

three-dimensional-bone-extracellular-matrix-model-for-osteosarcoma

Research

JoVE Journal

Cancer Research

מחקר סרטן

בשיטות סטנדרטיות תרבות תאים נלקחים מתוך הסביבה הפיזיולוגית שלהם וגדלו על משטח הפלסטיק של מנה. כדי לחקור את התנהגותם של תאים במח עצם אנושיים ראשוניים שיצרנו מערכת תרבות 3-D בו תאים גדלים בתנאים משחזרים microenvironment יליד הרקמות.

דגם תרבות רקמות תלת ממדי למחקר עיקרי עצם אדם מח וממאיר שלו

תאי סרטן מוטבעים בג'ל קולגן ולאחר מכן נדחקים בג'ל פיברין תאי כדי ליצור מערכת תרבית תלת מימדית שבה ניתן לנטר את הפולשניות והיווצרות גידולי לווין.

תלת ממדי Assay תרבות לחקור הפולשנות תאים סרטניים היווצרות גידולים בלוויין

הזרקה ישירה של נגזר סרטן שלפוחית חוץ-תאית (EVs) שמוביל התכנות של מח העצם תמיכה התקדמות הגידול; עם זאת, אילו תאים לתווך את האפקט הזה לא ברור. במסמך זה, אנו מתארים פרוטוקול צעד אחר צעד כדי לחקור בתיווך EV הגידול-mesenchymal תאי גזע (MSC) אינטראקציות ויוו, חשיפת תפקיד מכריע עבור EV משכילים MSCs ב גרורות.

דגם פרה העכבר של אוסטאוסרקומה כדי להגדיר את התקשורת חוץ-תאית שלפוחית בתיווך בין גידול בתאי גזע Mesenchymal

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לדור של pluripotent המושרה בתאי גזע (iPSCs) מ תסמונת לי-פראומני, היא תורשתית (הסימולטור) החולה נגזר fibroblasts, הבידול של iPSCs באמצעות גזע mesenchymal (MSCs) תאי העצם, מידול vivo tumorigenesis באמצעות תאי העצם של החולה-derived הסימולטור.

מידול אוסטאוסרקומה באמצעות תאי גזע Pluripotent נגזר החולה המושרה תסמונת לי-פראומני, היא תורשתית

מודלים של גרורות בעצמות אינם מפתחים גרורות באופן אחיד או בשכיחות של 100%. הזרקה ישירה של תאי גידול תוך אוסאוסיים עלולה לגרום לתסחיף של הריאה. אנו מציגים את הטכניקה שלנו מידול גידולי עצם ראשוניים וגרורות עצם באמצעות השתלת גידול מוצק לתוך העצם, המוביל לקליטה וצמיחה הניתנים לשחזור.

מידול גידולי עצם ראשוניים וגרורות עצם עם השתלת גידול מוצק השתלת עצם לעצם

מאמר זה מפרט את השלבים הדרושים כדי לזרוע שורות תאי נוירובלסטומה על פיגומים תלת-ממדיים מבוססי קולגן שתוארו קודם לכן, לשמור על גדילת התאים למסגרת זמן שנקבעה מראש, ולאחזר פיגומים עבור מספר ניתוחים של צמיחת תאים והתנהגות תאים ויישומים במורד הזרם, הניתנים להתאמה כדי לספק מגוון מטרות ניסוי.

מודל ביומימטי תלת מימדי במבחנה של נוירובלסטומה באמצעות פיגומים מבוססי קולגן

הפרוטוקול הנוכחי מתאר הזרקת תאי intratibia osteosarcoma כדי ליצור מודלים עכבר הנושאים אוסטאוסרקומה אורתוטופית ונגעים גרורות ריאתיות.

הזרקת תאי אוסטאוסרקומה אינטראטיביאלית להפקת אוסטאוסרקומה אורתוטופית ומודלים של עכבר גרורות ריאות

כאן אנו מתארים מערכת מיקרופיזיולוגית קלה ליישום, מתוקננת, המשקפת את המורכבות של מבנה ה-in vivo של מח העצם האנושי, ומספקת מודל רלוונטי לחקר עדין של מגוון רחב של אירועים נורמליים ופתולוגיים.

מודל תלת-ממדי של מח עצם אנושי לחקר הדינמיקה והאינטראקציות בין תאים מקומיים בהקשרים פיזיולוגיים או גידוליים

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את השיטה לביסוס מודל עכבר קסנוגרפט (PDX) הנגזר ממטופל באמצעות רקמת אוסטאוסרקומה אנושית.

הקמת מודל עכבר Xenograft שמקורו במטופל עם רקמות אוסטאוסרקומה אנושיות

אנו מציעים פרוטוקול להערכת התחדשות עצם ברמות היררכיות שונות. גישה רב-מודלית זו מאפשרת ניתוח מבני בקני מידה שונים לאורך זמן, תוך התמודדות יעילה עם אתגרים בהכנת הדגימה. הוא גם מספק תהליך עבודה אמין להערכת יעילות הביוחומרים בקידום התחדשות העצם.

גישה רב-מודלית להערכת התחדשות עצם וביצועי פיגומים

פרוטוקול זה מתאר את ייצור מבני העצם התלת-ממדיים באמצעות אוסטאוציטים אנושיים המוטמעים בהידרוג'לים של ג'לטין מתקרילט (GelMA) בתוספת מטריצה חוץ-תאית מפורקת תאים. השיטה זולה, ניתנת להרחבה ותואמת לציוד מעבדה בסיסי, ומספקת פלטפורמה תרגומית לחקר תהליכי מחלות שריר-שלד.

פלטפורמת תרביות עצם תלת-ממדית המשתמשת באוסטאוציטים אנושיים ובמטריצה חוץ-תאית מנותקת למידול מחלות שריר-שלד

למדו כיצד להכין מודל מטריצה חוץ-תאית מעצם מופרדת מתאים לחקר אוסטאוסרקומה. השיטה מאפשרת לחקור הטרוגניות מורפולוגית ורגישות לתרופות בגידולי עצם שונים.

עצם תלת-ממדי מטריצה חוץ-תאית מודל אוסטאוסרקומה

גלה סרטונים נוספים