שיטה להשגת תבנית הנשימה בעכברים מרחבי הדרך

פרוטוקול זה יכול לשמש למדידת דפוסי נשימה בעכברים. חשוב לציין, זה יכול למזער את ההשפעה של התנהגויות פעילות זנים מהונדסים גנטית שיכולים לבלבל תוצאות. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא אינה פולשנית והיא אינה דורשת שימוש בריסון הרדמה או מעורר מתח.

התחל בכך שתוודא שכל הצינורות והצינורות מחוברים לתא plethysmograph הברומטרי ועל ידי חיבור צינור זרימת גז וצינור זרימה ואקום ישירות לתא הפלוריזמוגרפיה הברומטרי. כדי לכייל את הזרימה הנמוכה לתוך התא, להגדיר את הזרימה לתוך ומחוץ לתא לאפס ולהסיר את צינור הזרימה לתוך התא. כבה את הוואקום והזן אפס לתא היחידה הנמוכה כדי לתעד את זרימת האפס בהגדרת מגבר 7700 של תוכנת plethysmograph הברומטרית.

לאחר מכן חבר מחדש את צינור הזרימה והפעיל את זרימת הוואקום כדי לכייל את הזרימה הגבוהה ולאפשר לגז חנקן מאוזן של 20.93% חמצן לזרום דרך תא הפלתיסמוגרפיה הברומטרי ממערבב הגזים. לאחר מכן, המר את ערך הזרימה הנמדד מד הזרימה מליטרים לדקה למיליליטרים לשנייה ולחץ על תא היחידה הגבוהה כדי להזין את הערך במיליליטרים לשנייה. לחץ פעמיים על קל גבוה, שנה את השעה לשלוש שניות ולחץ על מדידה.

לאחר מכן השאירו את לשונית הגדרת המגבר 7700 פתוחה כדי לכייל את המנתחים המטבוליים לתוכנה הברומטרית plethysmography. כדי לכייל את המנתח המטבולי, בתוכנית מערבל הגז, הגדר את מערבל הגז ל-20.93% חמצן ו-79.07% חנקן. ועל מנתח חילוף החומרים, להגדיר את רמת כיול החמצן ל 20.93%ואת דו תחמוצת הפחמן ל 0%להפוך את החוגה בחזרה לדגום לאחר הערכים המתאימים הוזנו על מנתחי הגז כדי להגדיר את החמצן הגבוה ואת אחוז פחמן דו חמצני נמוך.

לחץ על הכרטיסייה ABCD 4 של התוכנה plethysmography barometric והזן 20.93 תחת יחידה גבוהה של קו C2 לחמצן. תחת cal גבוה, שנה את השעה לשלוש שניות ולחץ על מדידה. הזן אפס תחת cal נמוך של קו C3 עבור פחמן דו חמצני.

לאחר מכן שנה את השעה לשלוש שניות ולחץ על מדידה תחת cal נמוך. בתוכנית מערבל הגז, שנה את ערך החמצן ל-10% ואת ערך הפחמן הדו-חמצני ל-5% והמתן מספר דקות עד שזרימת הגז תסתגל לערכים אלה. במנתחים המטבוליים, סובב את ידיות ההתאמה כדי לכייל את הפחמן הדו-חמצני ל- 5% כדי לסובב את החוגה חזרה לדגימה לאחר כיול הערכים.

לאחר בדיקה כי קריאות המנתח יציבות, לחץ על יחידה גבוהה תחת C3 והזן חמישה עבור פחמן דו חמצני. לאחר מכן שנה את ה- cal הגבוה לשלוש שניות ולחץ על מדידה. לחץ על יחידה נמוכה תחת האפשרות C2 והזן 10 עבור חמצן ולחץ על cal נמוך, קלט שלוש שניות ולחץ על מדידה.

להחזיר את מערבל הגז ל-20.93% חמצן ו-79.07% חנקן ולחכות מספר דקות עד שהתא יתאים לערכים אלה. הפעל באופן שגרתי כיול נוסף עם מיכלי גז מוסמכים כדי לאשר שמערבב הזרימה ומנתחי החמצן-פחמן הדו-חמצני פועלים כראוי. כאשר המנתחים המטבוליים מכוילים, בדוק מחדש את מדי הזרימה המחוברים לתא plethysmograph הברומטרי והתאם את זרימת האוויר לתוך החדר ומחוצאו לתעריפים המתאימים לניסוי.

לאחר החלת כל ההגדרות על תוכנת plethysmography הברומטרית, לחץ על סגור בכרטיסיה רכישה. עבור plethysmography ברומטרי ללא מעצורים, להקליט את המשקל ואת טמפרטורת הגוף הראשונית של העכבר לפני החזרת העכבר לכלוב הבית שלה.

המתן 10 דקות כדי לאסוף את נתוני החמצן והפחמן הדו-חמצני מהתא הריק לפני שתכניס את העכבר לתא. במהלך השעה הראשונה, לתעד את ההתנהגות של החיה לרשום הערות מפורטות הכוללות את הערכים הספציפיים של פנימה ויצוא של התא. בסוף המגורים בתא, לצפות קטעים של נשימה שקטה במשך 60 הדקות הבאות לוקח מדידות טמפרטורת הגוף כל 10 דקות בעת שימוש במכשיר מושתל.

יש לדאוג להכיר התנהגויות עכבר כלליות, כך שניתן יהיה לזהות כראוי מקרים של נשימה רגועה ללא רחרוח, טיפוח או חקירה. בסוף הניסוי, להחזיר את העכבר לכלוב שלה ביסודיות לנקות ולנגב את הציוד. לניתוח חילוף חומרים, פתחו את הפאנל המטבולי בתוכנה וקנו את הממוצע של 10 הדקות הראשונות של רמות החמצן והפחמן הדו-חמצני מהרגע שבו התא היה ריק.

הצג את לוח הזרימה של תוכנת plethysmography barometric ולחץ באמצעות לחצן העכבר הימני על נתח תכונה כדי להגדיר פרמטרים מתאימים. עבור דפוס של ניתוח נשימה, לאשר את הזמנים עבור 15 שניות של נשימה שקטה באמצעות הערות על התנהגות בעלי חיים, כמו גם מעקב לוח הזרימה. לאחר מכן הזן את פעמים תחת דו-שיח ניתוח מבנה פתוח מהלשונית ניתוח מבנה נתונים ולחץ על מצב תצוגת ניתוח מבנה טקסט כדי להציג רק את מקטעי העניין הספציפיים של 15 שניות.

כדי לנתח דום נשימה ונשימה מוגברת, בקובץ הסקירה הפתוח, צא ממצב תצוגת המנתח ולחץ על הגדרת הגדרת P3 והגדרת גרף כדי לבחור תצוגת עמוד כסוג וחמש כמספר החלוניות. הזן מינוס שתיים בתיבה המסומנים כנמוכה ושתיים בתיבה המסומנים כ'גבוהה' עבור מידות הזרימה במיליליטרים לשנייה והחל את השינויים. לאחר מכן גללו לסימני 30 הדקות בלוח מעקבי הזרימה וספור ידנית את דום הנשימה ונשימות מוגברות במשך 30 עד 60 דקות לאחר שהעכבר הונח בתא.

עבור ניתוח זה, תקופות של נשימה מושעה שנמשך זמן רב יותר או שווה ל 0.5 שניות מעידים על דום נשימה. נשימות מוגברות מסומנות על ידי עלייה חדה במעקב הנשימה מעל 1.25 מיליליטר לשנייה ואחריו ירידה חדה מתחת למינוס 0.75 מיליליטר לשנייה. מעקב זרימה מייצג זה של נשימה שקטה בעכבר בן 22 חודשים אופייני לתבנית שבה הנשימה עולה בקנה אחד עם התנהגויות נשימה פעילות.

דפוס נשימה זה הוא מקטע פעיל יותר שבמהלכו העכברים חקרו את הרחת התא ו/או טיפוחו והוא אינו אידיאלי לסוג אוסף הנשימה המשמש למתודולוגיה זו. הפרמטר שנבחר להערכת דפוס אפשרי של הבדלי נשימה בין שתי נקודות הזמן היה תדירות הנשימה, נפח הגאות והשפל, אוורור דקה, יחס זמן השראה לנפח גאות ושפל ויחס דו תחמוצת הפחמן. ניתוח נוסף בוצע עם כל אחד מארבעת מקטעי הבסיס של 15 שניות לתדירות, נפח גאות ושפל, אוורור דקות, יחס זמן השראה לנפח גאות ושפל ויחס פחמן דו-חמצני של אוורור דקה.

לא נמצאו הבדלים משמעותיים בין אף אחת מנקודות הזמן ולא נמצאו הבדלים השונות בין כל אחד מארבעת מקטעי הזמן עבור כל תבנית של מדידת נשימה. כימות מספר דום נשימה ונשימות מוגברות שנצפו עבור כל בעל חיים במהלך דקות 30 עד 60 של פרוטוקול plethysmography ברומטרי ללא מעצורים גילה כי בעלי חיים בגילאי הראו מספר גבוה של דום נשימה ואת נוכחותם של נשימות מוגברות בתוך טווח של 30 דקות. חוקרים יכולים גם להשתמש באתגרי גז כגון היפוקסיה או היפרקפניה כדי לתעד כל שינוי בדפוס הנשימה הנובע מהתערבות או טיפול.

טכניקה זו מספקת אמצעי לאפיון דפוסי נשימה במכרסמים קטנים וזנים מהונדסים גנטית של בעלי חיים שעשויים להפגין הבדלים התנהגותיים מובהקים.