שיטה נטולת אנזימים לבידוד והתרחבות של אדיפוז האנושית-תאי גזע נגזרים

פרוטוקול זה מספק דרך חסכונית פשוטה לבודד ASCs ללא שימוש באנזימים קשים או שלבי צנטריפוגה, אשר יכול לשנות את פנוטיפ התא והתנהגות. היעדר צעדים קשים מניב תאים פחות מניפולציות מאלה המבודדים באמצעות אנזימים וצנטריפוגות, ומצמצם את השאלות האם תצפיות ניסיוניות הן חפץ בשיטת הבידוד. שיטת explant זו יכולה ליצור ASCs רלוונטיים קליניים להיות הציג לתוך המטופל לטיפול במגוון רחב של מחלות או להרחיב בחיים להרשות לעצמם יישומי מחקר.

קשה להסביר את שיטת הטחון במילים. ההדגמה החזותית יכולה לשרת מדענים אחרים את הטרחה של למידה לפרק את הרקמה עצמם. ניתן להשתמש בשיטות הסבר דומות כדי לבודד אוכלוסיות אחרות של MSCs, כגון אלה מרקמות טבור.

כדי לטחון את דגימות רקמת abdominoplasty, ראשית להעביר את הרקמה למכסה של צלחת סטרילית 100 מילימטר. לאחר מכן השתמש במחט סטרילית כדי להחזיק חתיכת רקמה במקום ולהשתמש אזמל סטרילי לחתוך את הרקמה לחתיכות פחות ממילימטר אחד. מעבירים את הרקמה לצינור טרי ומנערים או מנערים את הדגימה חמש עד שש פעמים כדי להבטיח ערבוב של כל השכבות.

לאחר מכן, עם מרית סטרילית, להעביר 2.5 עד חמישה מיליליטר של רקמה ל 100 מילימטר גז ואקום פלזמה מטופלים צלחת רקמות. למדוד את נפח המדגם על ידי שפיכת לתוך צינור צנטריפוגה טרי. לאחר מכן, להוסיף נפח שווה ערך של מדיה תרבות רקמות לצלחת בעדינות מערבל את הצלחת כדי לערבב את התוכן.

הדגירה את הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס בחמישה אחוזים פחמן דו חמצני עד מספר מספיק של תאים נראים על בסיס הצלחת. לאחר מספר מספיק של תאים הם ציינו על הצלחת או לאחר שבעה ימים, המוקדם מביניהם, להסיר את כל החלקים הנותרים של רקמה. לאחר מכן, תרבו את ה- ASCs במדיה של תרבות הרקמות עד שהם מגיעים ל- 70%confluency או עד שהאשכולות יהפכו צפופים ובנקודה זו יש לעבור בין התאים.

יש לשטוף בעדינות את הצלחת עם תמיסת מלח 1X פוספט. כדי לנסות את התאים חסידים, שאפו את מלוחים מאגר פוספט, להוסיף מיליליטר אחד של טריפסין בתוספת 0.25% EDTA לכל צלחת דגירה ב 37 מעלות צלזיוס במשך חמש דקות. הוסף כמות קטנה של מדיה לצלחת כדי לבטל את הפעלת טריפסין.

ואז בעדינות pipette טריפסין התקשורת מהחלק העליון של הצלחת כלפי מטה, אוותר על כל התאים המחוברים חלש מהצלחת. כדי לזרוע את התאים, הוסף תחילה מדיה לצלחת. לאחר מכן, מוסיפים את התאים בצורה dropwise ולאחר מכן מערבלים את הצלחת כדי להבטיח חלוקה שווה על פני הצלחת.

לאחר שלושה קטעים, המשיכו לזרום ציטומטריה ומסיונות התברואה. לאחר שלושה קטעים, ASCs מבודדים מדגימות lipoaspirate ו abdominoplasty נמצאו יש מורפולוגיה MSC פנוטיפ, בדומה ASCs מבודדים בעקבות עיכול אנזימטי. בדומה ל- MSCs אחרים, מחשבי ה- ASCs המבודדים של explant שליליים עבור CD45 וחיוביים עבור CD73, CD90 ו- CD105.

בעת טחון הרקמה, שטח הפנים של כל חתיכה חייב להיות גדול מספיק עבור ASCs לנדוד מתוך הרקמה. אלה הם תאי גזע בסיסיים שניתן להשתמש בהם עבור מגוון רחב של יישומים. ניתן להשתמש ב- ASCs המבודדים עבור כל יישום במורד הזרם, ב- vivo או במבחנה.