נוהל הפעלה רגיל של מעקב וירוס של אוכלוסיית העטלף בטייוואן

Lyssavirus הוא פתוגנים ללא טיקים בגן החיות. כדי להעריך את נוכחותו של ליסאבירוס באוכלוסיות עטלפים טייוואני, יזמנו תוכנית מעקב. והוא זיהה בהצלחה ארבעה ליסאבירוסים מ-2016 עד 2018.

פרוטוקול זה הוא היכרות שלב אחר שלב עם מעקב vi-al Lyssavirus בטייוואן. אנו מקווים שזה יהיה שימושי למחקרים המעוניינים במעקב vi-al Lyssavirus. חשוב לחבר את סמל החבית המיקס הנכון.

עטלף מת או גוסס מתאים יותר מאשר עטלף חי למעקב Lyssavirus. בהתאם לתקנות הבטיחות הביולוגית של המדינה בה ממוקמת המעבדה; בצע את ההליכים הבאים במעבדה מתאימה ברמת בטיחות ביולוגית. ולהבטיח כי החוקרים מוסמכים כיום ללבוש ציוד מגן אישי נאות.

על אוסף של עטלפים או פקות חלשים או חולים, יש אקולוג עטלף לזהות את מיני העטלפים על ידי המאפיינים המורפולוגיים של הדגימה. שלח דף מידע למעבדה, כולל אתר האיסוף, מינים, סימנים קליניים ונתונים רלוונטיים אחרים עם כל דגימת עטלף. לפני תחילת הנקרוסקופיה, בדקו את כל פתחי הדרך החיצוניים וצלמו את העטלפים תכונות חיצוניות, במיוחד את הראש, האוזניים והכנפיים להת בידול מינים.

כדי לאסוף דגימת ספוגית אוראלית מניחים את המחבט בהפוגה גחון על לוח ניתוח סטרילי ולתקן את הראש עם פינצטה. השתמש אזמל לחתוך את העור לאורך קו האמצע של אזור העגל;ולמשוך את העור לצדדים הצדדיים, כדי להפוך חתך בגולגולת לאורך קו האמצע של אזור העגל. פתח את הגולגולת עם פינצטה כדי לחשוף את רקמת המוח ולהשתמש פינצטה כדי להפריד בעדינות את רקמת המוח מן רקמת העצב מחובר.

חותכים את החתך של המוח, כולל גזע המוח והמוח הקטן, ולגעת קלות את פני השטח החתוכים של רקמת המוח עם מגלשות זכוכית כדי להפוך את רושם למריחה. לחץ על השקופית על רקמת העדשה כדי להסיר את הרקמה העודפת ולתקן את שקופיות רושם למריחה במינוס 20 מעלות צלזיוס אצטון במשך 30 דקות. ואז לתקן חתיכה קטנה של רקמת מוח טרי, בפורמלין, לבדיקה היסטופתולוגית.

ולמקום את שאר הרקמה ב emi-em 10 להפקת חומצת גרעין. לאחר מכן, חתוך את העור מהסעפת לפי הטבעת לאורך קו האמצע של הגוף, ולהשתמש פינצטה כדי להרים ולהפריד את העור ולה מדגיש את רקמות השריר; כדי לאפשר איסוף של בלוטות הרוק, הממוקם ליד עצם הלסת הלסת. מרים מעט את עצם החזה עם פינצטה, להשתמש באזמל כדי לחתוך את עצם החזה ואת דופן הבטן לאורך קו האמצע לחתוך את עצם הבריח.

השתמש במחטים כדי לתקן את כלובי הצלעות השמאלית והימין ללוח הניתוח, כדי לפתוח את חלל בית החזה. ולתקליט את הלגיונות הגולמיים ואת מידת השינוי שלאחר המוות. לאחר מכן השתמש פינצטה ואזמל כדי להסיר את רקמות הקרביים בהתאם לניתוח במורד הזרם המתוכנן.

כדי לבצע בדיקת נוגדנים פלואורסצנטיים ישירה בסוף ההתקבעות, ייבשו את מגלשות הרושם של ההכפשה ובחרו לפחות שני נוגדנים נוגדנים נגד כלבת פלורסצנטיים לניתוח. סנן נוגדן אחד על כל שקופית דרך מסננת מיקרומטר 0.45. ותדגר את המגלשות במשך 30 דקות ב-37 מעלות צלזיוס בתא לח.

בסוף הדגירה, לנקז את ההצתה עודף ולשטוף את השקופיות עם PBS. לאחר מכן השתמש באמצעי אחסון קטן של 10%glycerol כדי לטעון החלקות כיסוי על השקופיות ולדמיין את השקופיות באמצעות מיקרוסקופיה פלואורסצנטית. כאשר בדיקת הנוגדנים הפלואורסצנטיים או ניתוח RT-PCR מצביעים על חיוביות, הומוגניזציה של דגימת המוח ב-10%ההשעיה ב- emi-en 10 ומשביעה את הרקמות על ידי צנטריפוגה.

לחסן 200 microliters של סופר nat-en עם שלוש פעמים 10 לתאי נוירובלסטומה העכבר השישי ומיליליטר אחד של emi-en 10 במשך שעה אחת ב 37 מעלות צלזיוס ו 1% פחמן דו חמצני. ולהעביר את ההשעיה של תא הומוגני המוח לבקבוק בריבוע 25 ס"מ, המכיל שישה מיליליטר של emi-en טרי 10. במיליליטר אחד של השעיית תא הומוגני במוח לתוך מגלשת זכוכית מצופה טפלון ארבע בארות, עם קוטר של שישה מילימטרים ולמקום את השקופית ב 37 מעלות צלזיוס ו 1% פחמן דו חמצני במשך שלושה עד ארבעה ימים.

לאחר קיבעון עם 100% אצטון, להכתים את השקופיות עם אותם שני נוגדנים פלואורסצנטיים אצנוגדנים נגד כלבת המשמשים לבדיקת נוגדנים פלואורסצנטיים. ולהמחיש את השקופיות על ידי מיקרוסקופיה פלואורסצנטי כדי לקבוע את מספר התכלילים intracida-plas-מיקרופון. לאחר נסיונות ותת-culturing את תרבות התאים מחוסנים על פי פרוטוקולים סטנדרטיים, להחזיר את התרבות הקרה לאנקובטור תרבות התא עוד שלושה עד ארבעה ימים עם ספירה חוזרת של מספר התאים הנגועים כפי שהודגם רק עד 100% להדביק הוא הגיע.

מינואר 2014 עד מאי 2017 נאספו 332 גומי עטלפים מ-13 מינים למעקב. בניתוח מייצג זה של שני מקרי עטלף חיוביים, הרושם המוחי נבדק שלילי באמצעות בדיקת הנוגדנים הפלואורסצנטיים עם אחד הנוגדנים המסחריים, המתאימים נגד כלבת, בעוד RT-PCR המעסיק כל אחת משתי קבוצות פריימר שונות, הניב תוצאות חיוביות. סובייקטיביות של רצף אמפלי-קון שהושג לשאילתת פיצוץ במסד הנתונים של בנק Gen גילתה כי הרצף דומה ל-Lyssaviruses עם זהויות של פחות מ-79% התומכות בזהויות של ה-Lyssaviruses שזוהו.

שני ליסאבירוס בודדו לאחר מכן בהצלחה משני המוחות כפי שאושרו על ידי בדיקת נוגדנים פלואורסצנטיים וריווח. הצעד העיקרי לקביעת החיוביות של Lyssavirus הם בדיקת הנוגדנים הפלואורסצנטיים וניתוח RT-החייאה. מומלץ מאוד להשתמש בשני נוגדנים נגד כלבת או יותר בערכות פריימר.

בנוסף ל-Lyssavirus ניתן ל לפקח על פתוגנים אחרים של עטלפים לא-ical בגן החיות בשיטות אבחון סגורות. לאחר מכן ניתן להשתמש בנתונים כדי ליידע את הציבור על הימנעות ממגע עם עטלפים. ככל שנוכל לחקור יותר את בת לסבירוס, כך נוכל להבין יותר את התפתחותה ואת השפעתה על בריאות הציבור.